补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响

目的观察补益营卫方对衰老小鼠表皮角蛋白(Keratin,K)18的影响,探讨补益营卫方延缓皮肤衰老的机制。方法传代培养年轻小鼠与自然衰老小鼠表皮细胞,将衰老小鼠表皮细胞分为2组,一组常规培养,一组用含2.5%补益营卫方培养基培养。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测细胞K18蛋白、mRNA表达水平。结果与年轻组比较,老年组K18蛋白与mRNA表达水平显著升高(P<0.05);经2.5%药物干预后衰老表皮细胞中K18蛋白与mRNA表达水平较老年组降低(P<0.05)。结论补益营卫方通过抑制衰老皮肤表皮K18蛋白及mRNA表达而延缓皮肤衰老。     

补益营卫方对衰老表皮脂质代谢的影响

目的:研究补益营卫方对衰老表皮脂质代谢的影响,探讨其延缓皮肤衰老,改善表皮脂质稳态的可能机制。方法:消化分离出年轻小鼠与自然衰老小鼠表皮细胞并传代培养,其中衰老小鼠表皮细胞分为两组,一组常规培养,一组用含2.5%补益营卫方培养基培养。荧光定量RT-PCR检测各组细胞HMGCR、LASS4、APOE和APOD的mRNA表达。结果:与年轻组比较,老年组表皮细胞中HMGCR、LASS4、APOE和APOD mRNA表达水平显著升高(P0.05);经药物干预后,衰老表皮细胞中HMGCR、LASS4、APOE和APOD mRNA表达水平较老年组显著降低(P0.05)。结论:补益营卫方可能通过对衰老表皮脂质代谢相关基因HMGCR、LASS4、APOE和APOD mRNA等的影响,调节衰老表皮脂质代谢,起到延缓皮肤衰老、改善表皮脂质稳态的作用。     

补益营卫方对衰老表皮脂质屏障的影响

目的研究补益营卫方对衰老表皮脂质稳态的影响,探讨其延缓皮肤衰老,改善表皮脂质稳态的可能机制。方法消化分离年轻与自然衰老小鼠表皮细胞并传代培养,其中衰老小鼠表皮细胞分为两组,一组常规培养,一组用含2.5%补益营卫方的培养基培养。RT-PCR检测各组细胞SREBP2,FASN,SCD和LXR的mRNA表达。结果与年轻组比较,老年组表皮SREBP2,FASN,SCD和LXR mRNA表达水平显著升高(P0.05);经药物干预后,衰老表皮SREBP2,FASN,SCD和LXR mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论补益营卫方可能通过对衰老表皮脂质代谢相关基因SREBP2,FASN,SCD和LXR mRNA的影响,调节衰老表皮脂质代谢,起到延缓皮肤衰老的作用。     

补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白K19的影响研究

目的观察补益营卫方对衰老小鼠表皮角蛋白(Keratin,K)K19的影响,探讨补益营卫方延缓皮肤衰老的机制。方法以自然衰老小鼠为研究对象,制备冰冻切片,应用免疫荧光法观察补益营卫方对衰老皮肤表皮K19表达的影响。结果衰老小鼠皮肤表皮中K19的表达水平较年轻小鼠明显下调,两者之间有显著差异(P0.05)。应用补益营卫方高、中、低剂量组处理后,可显著提高K19在衰老表皮的表达,与老龄模型组比较有统计学差异(P0.05),中、低剂量组较高剂量组为高(P0.01)。结论补益营卫方通过促进衰老皮肤表皮K19的表达,起到延缓皮肤衰老作用。     

补益营卫方对衰老表皮干细胞整合素β1、P63的影响

目的研究补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞整合素β1、P63的影响,探讨其延缓皮肤衰老的可能机制。方法以10只3月龄SAMR1种小鼠作为年轻组;40只8月龄SAMP8种小鼠作为老年组和补益营卫方高、中、低剂量组,每组10只。药物组分别按高、中、低剂量灌胃饲养,老年组和年轻组灌胃生理盐水,连续6周。灌胃饲养结束前2周给小鼠腹腔注射BrdU,取背部皮肤冷冻切片。免疫荧光法检测各组表皮干细胞标志物整合素β1、P63的表达。结果与年轻组比较,老年组表皮整合素β1、P63的表达水平显著降低(P<0.05);经药物干预后,衰老表皮整合素β1、P63的表达水平均升高,其中高剂量组表皮干细胞数目显著增多(P<0.05)。结论补益营卫方可能通过影响整合素β1、P63的表达,延缓皮肤衰老。     

补益营卫方对衰老小鼠皮肤表皮角蛋白K5、K16表达的影响

目的探讨补益营卫方延缓皮肤衰老的可能作用机制。方法 C57BL/6种雌性小鼠3月龄10只设为年轻组,14月龄40只随机分为老龄组和补益营卫方高、中、低剂量组,每组10只。补益营卫方高、中、低剂量组每天分别按6、3、1.5 g/(kg·d)灌胃给药,连续6周。采用免疫荧光法检测各组小鼠皮肤表皮中角蛋白K5及K16的表达。结果与年轻组比较,老龄组小鼠皮肤表皮中角蛋白K16表达明显升高(P0.01);与老龄组比较,补益营卫方高、中、低剂量组小鼠皮肤表皮中角蛋白K16表达明显降低(P0.01)。补益营卫方中剂量组对K16的表达抑制作用最大,与补益营卫方低剂量组比较差异有统计学意义(P0.01),与补益营卫方高剂量组比较差异无统计学意义(P0.05)。各组小鼠皮肤表皮中角蛋白K5表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论补益营卫方可能通过抑制衰老皮肤表皮角蛋白K16的表达而起到延缓皮肤衰老的作用。     

补益营卫方对衰老皮肤表皮凋亡指数的影响

目的:观察补益营卫方对衰老小鼠皮肤表皮凋亡指数的影响,探讨补益营卫方延缓皮肤衰老的机制。方法:以自然衰老小鼠为研究对象,HE染色观察各组皮肤表皮形态学变化,应用TUNEL法和计算机图像分析系统对凋亡指数表达进行分析。结果:应用补益营卫方高、中、低剂量组处理后,可显著降低细胞凋亡,与老年组比较有统计学意义(P0.05)。三个剂量组之间,中剂量组对凋亡抑制作用最大,较其他组有明显差异(P0.01),低剂量组和高剂量组没有明显差异(P0.05)。结论:补益营卫方通过抑制皮肤表皮细胞的凋亡,降低细胞凋亡指数,起到延缓皮肤衰老作用。     

补益营卫方对衰老皮肤表皮整合素β1的影响研究

目的:观察补益营卫方对衰老小鼠表皮整合素β1的影响,探讨补益营卫方延缓皮肤衰老的机制。方法:以自然衰老小鼠为研究对象,制备冰冻切片,应用免疫荧光法观察补益营卫方对衰老皮肤表皮整合素β1表达的影响。结果:老龄组整合素β1的表达较年轻组明显下调(P0.05);应用补益营卫方高、中、低剂量组处理后,可显著提高整合素β1在衰老表皮的表达,与老龄组比较有统计学差异(P0.05),但高剂量组与中剂量组比较无统计学差异(P0.05)。结论:补益营卫方通过促进衰老皮肤表皮整合素β1的表达,起到延缓皮肤衰老作用。     

补益营卫方对衰老表皮干细胞增殖的影响

目的研究补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞增殖的影响,探讨其延缓皮肤衰老的可能机制。方法 10只3月龄SAMR1种小鼠作为年轻组,40只8月龄SAMP1种小鼠作为老年组和补益营卫方高、中、低剂量组,每组10只,药物组分别按高、中、低剂量灌胃饲养。老年组和年轻组生理盐水灌胃,连续6周。灌胃饲养结束前两周给小鼠腹腔注射BrdU,取背部皮肤冷冻切片。免疫荧光法检测各组表皮干细胞增殖标志物ki67的表达。原代C57BL/6小鼠表皮干细胞的分离及培养,MTT法选择5%加药浓度绘制生长曲线。MTT法检测表皮干细胞增殖率。结果与年轻组比较,老年组增殖标志物ki67的表达水平显著降低(P0.05);经药物干预后,衰老表皮干细胞增殖标志物ki67的表达水平均升高,其中中、高剂量组表皮干细胞数目显著增多(P0.05)。与年轻常规组比较,老年常规组原代培养的干细胞增殖率显著降低(P0.05);经药物干预后,衰老表皮干细胞增殖率显著升高(P0.05)。结论补益营卫方可能通过影响增殖标志物ki67的表达与干细胞增殖率,提高表皮干细胞的活性,增加表皮干细胞数量,延缓皮肤衰老。     

补益营卫对衰老小鼠皮肤组织bFGF表达的影响

目的:通过观察补益营卫对衰老皮肤胶原的影响,探讨补益营卫延缓皮肤衰老的深层次机制。方法:利用D-半乳糖120mg/(kg.d)皮下注射制造小鼠皮肤衰老模型。利用免疫组织化学方法和图像分析系统评价碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在衰老皮肤中的表达。结果:造模后bFGF表达水平显著降低,与正常组相比有统计学意义(P<0.05)。补益营卫后,高剂量组bFGF水平显著增加,与正常组、模型组、VE组、低剂量组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.001,P<0.05,P<0.05),中、低剂量组、VE组均使下降的bFGF基本回升至正常水平。结论:补益营卫能够延缓皮肤衰老。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。     

苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导EA.hy926细胞PI3K合成的影响

目的:研究苦荞麦总黄酮对于软脂酸诱导EA.hy926细胞PI3K合成的影响。方法:将体外培养的EA.hy926细胞分为正常组、模型组、苦荞麦总黄酮组及二甲双胍组。采用RT-PCR以及免疫细胞化学法分别测定各组细胞PI3K mRNA和蛋白的表达。结果:模型组细胞PI3K mRNA和蛋白表达与正常组相比明显下降(P0.01)。苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组细胞PI3K mRNA和蛋白表达与模型组相比明显增加(P0.01)。治疗组间无明显差异。结论:苦荞麦总黄酮对于软脂酸诱导下EA.hy926细胞PI3K合成具有明显促进作用。     

不同剂量补肝健腰方对大鼠腰椎间盘退变组织bFGF mRNA表达的影响

目的:观察不同剂量的补肝健腰方对大鼠腰椎间盘退变组织碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA表达的干预作用。方法:将130只雄性SD大鼠随机分为正常对照组20只、假手术组20只、造模组90只,采用椎间盘穿刺造模方法制备大鼠腰椎间盘退变模型,将造模成功的80只大鼠随机分为补肝健腰方低、中、高剂量组及模型组,每组各20只,分别采用补肝健腰方低剂量(含生药1.04 g)、中剂量(含生药2.08 g)、高剂量(含生药4.16 g)、0.9%氯化钠注射液灌胃,检测各组干预前及干预2、4、6周后椎间盘退变组织bFGF mRNA的表达,并进行对比分析。结果:1)假手术组与正常对照组比较,2组各时间点bFGF mRNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。2)模型组与正常对照组比较,2组各时间点bFGF mRNA的表达差异均具有统计学意义(P<0.05)。3)给药组与模型组比较,干预前及干预2周后各给药组与模型组bFGF mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);干预4、6周后各给药组的bFGF mRNA表达均较模型组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。4)各给药组组间比较,干预4、6周后中、高剂量组较低剂量组bFGF mRNA的表达均下降,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:不同剂量的补肝健腰方均能下调腰椎间盘退变模型大鼠椎间盘中bFGF mRNA的表达,中、高药物剂量组作用更加显著。     

基于PI3K/Akt通路观察五子衍宗方对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响

目的:探讨五子衍宗方(Wuzi Yanzong Fang,WYF)基于磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制研究。方法:以自然衰老大鼠为研究对象,将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WYF低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WYF低、中、高剂量组分别灌胃给药0.4,0.8,1.6 g·kg~(-1),青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。免疫荧光法检测Sertoli细胞数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),前髓细胞锌指蛋白(PLZF),干细胞因子(SCF)和骨形态蛋白4(BMP4)mRNA表达水平,免疫荧光法检测精原干细胞数量及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光法检测磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)的表达与定位。结果:与青年组比较,老龄模型组Sertoli细胞数量未见明显差异,而GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著降低,精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,PI3K,p-Akt蛋白表达降低(P0.01);与老龄模型组比较,WYF各剂量组GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著升高,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调,PI3K,p-Akt表达明显增多(P0.05,P0.01)。结论:WYF能够明显促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内PI3K/Akt信号通路有关。     

健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P0.05)。与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P0.05)。结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖。     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响

目的:观察补肾调冲方对雷公藤多苷片所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)雌性大鼠卵巢性激素水平和卵巢中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),促进凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)蛋白及mRNA表达的影响,探讨补肾调冲方的预防作用。方法:SD雌性大鼠42只,随机分为正常组,模型组,结合雌激素组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(estradiol,E_2),卵泡刺激素(follicule-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),孕酮(progesterone,P)水平。蛋白质免疫印迹(Western blot)法和逆转录-聚合酶链式方应(RT-PCR)法检测卵巢组织中Bcl-2,Bax蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH,LH含量明显升高,E_2的含量明显降低,卵巢组织中Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显降低,Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.01);补肾调冲方各给药组和结合雌激素组E_2的含量均高于模型组(P0.01),其中补肾调冲方低、中、高剂量和结合雌激素组E_2含量与正常组比较,差异无统计学意义。补肾调冲方各给药组和结合雌激素组FSH,LH的含量均低于模型组(P0.01);低、中、高剂量组和结合雌激素组FSH,LH含量与正常组比较,差异无统计学意义。各组与正常组P含量比较差异无统计学意义。补肾调冲方预防低、中、高剂量组和结合雌激素组Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显高于模型组(P0.01);Bax蛋白及mRNA的表达明显低于模型组(P0.01)。结论:补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,可以预防卵巢早衰的发生。其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,维持Bcl-2,Bax的平衡,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡的过度凋亡,改善卵巢的功能。     

三七含药血清对成纤维细胞功能及VEGF、TGF-β、CollagenⅠ表达的影响

目的:探讨三七含药血清对L929成纤维细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响。方法:将28只SPF级SD大鼠随机分为对照组及三七低、中、高剂量组,制备血清。体外培养小鼠成纤维细胞系L929,对照组给予生理盐水血清,低、中、高剂量组给予相应的三七含药血清干预。CCK-8法检测成纤维细胞增殖,划痕实验检测成纤维细胞迁移,RT-qPCR及Western Blot分别检测VEGF、TGF-β、CollagenⅠ的mRNA及蛋白表达。结果:与对照组比较,低剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比升高(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);中剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比提高(P<0.05),VEGF、TGF-β、CollagenⅠ蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);高剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比降低(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达下降(P<0.05)。与低剂量组比较,中剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比升高(P<0.05),VEGF、TGF-β、CollagenⅠ蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);高剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比降低(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达下降(P<0.05)。与中剂量组比较,高剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比降低(P<0.05),VEGF、TGF-β、CollagenⅠ蛋白及mRNA表达下降(P<0.05)。结论:中剂量三七含药血清可促进成纤维细胞增殖和迁移,并上调VEGF、TGF-β、CollagenⅠ的表达,且疗效优于低剂量,而高剂量则抑制成纤维细胞增殖、迁移及VEGF、TGF-β的表达,不利于创伤愈合。