小柴胡汤对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 观察小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成过程的作用.方法 培养黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系,以熊果苷为对照组,利用MTT法、多巴氧化法、NaOH法测定细胞活力,酪氨酸酶活性及黑素的含量.结果 小柴胡汤40 ug/ml以上的小柴胡汤水煎液可明显抑制黑素瘤细胞和共培养细胞活力(P＜0.01);小柴胡汤水煎液对黑素瘤细胞及共培养细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度药品组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);小柴胡汤对于黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性、黑素生成的抑制作用与其对于共培养细胞中黑素生成及酪氨酸酶活性的抑制作用无差别(P＞0.05),其功效优于阳性对照熊果苷组.结论 小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成有较强的抑制作用.     

复色2号方对鼠黑素瘤B16细胞酪氨酸酶的影响

目的:探讨复色2号方治疗白癜风的分子学作用机制。方法:采用MTT法测定复色2号方对B16细胞增值的影响,在酶标仪下测定并记录B16细胞增殖情况;采用酪氨酸酶多巴速率氧化法测定复色2号方对酪氨酸酶活性的影响;采用NaOH裂解法测定B16细胞黑素含量。结果:复色2号方药物浓度在1～1000g/L对黑素瘤B16细胞增殖无统计学意义(P0.05),但对酪氨酸酶活性和黑素合成有统计学意义(P0.05),呈浓度依赖性。结论:复色2号方对黑素瘤B16细胞增殖无影响,但对酪氨酸酶活性和黑素合成有较强的剂量相关性促进作用,可以达到治疗白癜风的目的。     

旱金莲提取物祛斑作用的实验研究

为研究旱金莲提取物对黑素瘤B16细胞的作用，建立鼠B16黑素瘤细胞培养体系，在添加旱金莲提取物后，测定黑素瘤细胞活力、酪氨酸酶活性以及黑素含量的变化，并与氢醌的实验结果进行比较。结果显示旱金莲提取物抑制人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成，具有药物浓度依赖性关系，对黑素细胞的活力影响较小。提示旱金莲提取物具有抑制黑素合成的功效，可作为美白剂进一步开发研究。     

小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响

目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响。方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现。     

酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及c-KIT、TRP-2蛋白表达的促进作用

目的:研究酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞干细胞因子受体(c-KIT)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响,探讨其影响B16黑素瘤细胞生物学活性的分子机制.方法:采用MTT法测定细胞增殖,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫组化法检测c-KIT和TRP-2蛋白的表达.结果:浓度为25μg/ml的酪醇作用后,B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成能力均增强(P<0.05),c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加9.50%(P<0.05)和9.16%(P<0.01);浓度为12.5μg/ml的胡椒碱对B16黑素瘤细胞增殖(P<0.05)、酪氨酸酶活性(P<0.01)、黑素合成(P<0.05)均有促进作用,c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加8.81%和10.58%(P<0.05).结论:酪醇和胡椒碱均能促进小鼠B16黑素瘤细胞的黑素合成,胡椒碱具有促进细胞增殖作用,其部分机制可能是通过上调酪氨酸酶活性和c-KIT、TRP-2蛋白表达而发挥作用.     

基于中药血清药物化学方法的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究

目的：利用中药血清药物化学的方法，初步确定逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及其作用机理。方法：通过建立逍遥散经口给药后大鼠血清色谱指纹图，确定大鼠血中移行成分的生药来源，并以血清色谱指纹图为指导，以血中移行成分来源生药为原料，定向富集制备逍遥散提取物；采用体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞株，以熊果苷为阳性对照药，用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法评价逍遥散提取物对细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响，探讨逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及作用机理。结果：逍遥散经口给药后大鼠血中发现了14个入血成分，其中4个为血中原型成分，10个为原型入血或代谢产物，分别来自于柴胡、当归、白芍、甘草、茯苓。定向制备的逍遥散提取物对B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成有明显的抑制作用，作用强度呈浓度依赖性。结论：逍遥散的血中移行成分具有抑制B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的作用，是逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础。     

验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的 研究验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨验方治疗黄褐斑的作用机制.方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定验方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,475nm比色法测定验方对黑素含量的影响.结果验方祛斑汤对体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖,降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用.结论该方能抑制黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一.     

马钱苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：探讨马钱苷对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞Hacat共培养模型黑素合成的影响。方法：将A375细胞和Hacat细胞构建共培养模型,以不同浓度马钱苷进行干预,通过MTY法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定共培养模型的细胞增殖率、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果：与阴性对照组相比,马钱苷10-mol／L、1016moL／L和10-7mol／L组对共培养细胞增殖率无显著性差异（P〉0．05）。马钱苷10-mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成及酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）。与阳性对照组相比,马钱苷10。moL／L组对共培养模型酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）,马钱苷10山mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成无显著差异（P〉0．05）。结论：马钱苷可能通过抑制酪氨酸酶活性减少共培养模型黑素合成。     

消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素合成的影响

目的观察消白合剂对人A375黑素瘤细胞生长、酪氨酸酶活性及黑素含量的影响。方法设消白合剂水提液体0．01、0．1、1、10g／L浓度实验组和空白对照组，体外观察对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶的活性以及黑素含量的调节作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定消白合剂对细胞增殖的影响，酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响，比色法（490nm）测定对黑素含量的影响。结果消白合剂在0．01～0．1g／L浓度范围内对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的合成有促进作用，而随着浓度的继续增高反而起抑制作用。结论消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素的合成具有双向调节作用，临床运用时应该考虑到药物的量的优化。     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

火棘果实提取物的美白作用

目的:研究火棘Pyracantha fortuneana(Maxim.)Li果实提取物的美白作用并观察其对大鼠腹腔肥大细胞释放组胺的影响,探讨可能的作用机制。方法:采用熊果苷为抑制酪氨酸酶活性的标准对照,以酪氨酸酶法探讨火棘果实提取物对酪氨酸酶活性及B16细胞黑色素合成的影响,评价火棘果实提取物的美白作用。利用高效液相库仑阵列电化学检测系统(HPLC-ECD)测定Compound 48/80刺激大鼠腹腔肥大细胞释放组胺,评价火棘果实提取物对肥大细胞释放组胺的影响。结果:火棘果实提取物对酪氨酸酶活性具有明显抑制作用,能显著减少小鼠B16细胞内黑色素的含量。此外,火棘果实提取物对Compound 48/80刺激大鼠腹腔肥大细胞释放组胺呈剂量依赖性抑制作用。结论:火棘果实提取物显著抑制酪氨酸酶活性和肥大细胞释放组胺,为火棘果实作为美白添加剂提供了实验依据。     

Inhibition of melanogenesis in murine B16/F10 melanoma cells by Ligusticum sinensis Oliv

Ligusticum sinensis Oliv. (LSO) is an herbal drug commonly used as a topical treatment of epidermal hyperdepigmentation in Chinese medicine. However, the mechanism underlying the depigmentation by LSO is still unclear. The purpose of this study was to investigate the effects of LSO on the process of melanogenesis and its possible underlying mechanism. Suppressed DOPA oxidase activity of mushroom tyrosinase was first noted when incubated with aqueous extracts of LSO, demonstrating the direct inhibitory effect of LSO on mushroom tyrosinase. Further experiments were carried out in murine B16/F10 melanoma cells and the effects of LSO extract on melanin formation, tyrosinase activity and tyrosinase gene expression were tested. Under conditions without affecting the viability of murine B16/F10 melanoma cells, LSO extract significantly reduced the cellular melanin content in a dose-dependent manner. The DOPA oxidase activity of tyrosinase in B16/F10 cells was dose-dependently inhibited by LSO treatment, possibly mediated by the suppressed tyrosinase mRNA expression in LSO-treated B16/F10 cells. In conclusion, the inhibitory effect of LSO on melanogenesis is likely associated with decreased DOPA oxidase activity of tyrosinase that is most likely the result of the down-regulation of tyrosinase mRNA expression.     

Tyrosinase Inhibitory Activity of Total Triterpenes and Poricoic Acid A Isolated from Poria cocos

Objective With the improvement of people’s living standards, people’s requests for beauty are increasing. Skin whitening and lightening have become the pursuit of many women, and whitening and removing freckles have become the focus of scientific research. At present, widely used whitening agents, such as kojic acid, vitamin C, and its derivatives, have shortcomings such as poor stability and retarded effect. Therefore, safer and more effective whitening products from herbs are urgently needed. To explore the possibility of triterpenes as whitening active substance, the effects of total triterpenes of Poria (TTP) and poricoic acid A (PAA) on mushroom tyrosinase activities and B16 cells were investigated, and their mechanisms on mushroom tyrosinase were also studied. Methods Using arbutin and nicotinamide as reference substances, we determinated the inhibitory effects of TTP and PAA on mushroom tyrosinase and tyrosinase in B16 cells and then studied the inhibitory mechanism on mushroom tyrosinase. Results TTP and PAA exhibited good inhibitory effects on the activities of monophenolase and diphenolase in mushroom tyrosinase, as well as a certain inhibitory effect on tyrosinase in B16 cells. Conclusion TTP and PAA are potential whitening active ingredients.     

滋补肝肾方含药血清对B16黑素细胞活性黑素含量及cAMP水平的影响

目的:通过对含滋补肝肾中药大鼠血清对黑素细胞(B16)活性、黑素含量和cAMP水平影响的研究,探讨滋补肝肾方治疗白癜风的机制。方法:体外培养小鼠B16细胞,于对数生长期加不同浓度含滋补肝肾中药的大鼠血清培养后,分别采用MTT法、NaOH法和放免法检测细胞活性、黑素含量和cAMP水平。结果:与空白对照组比较,滋补肝肾方含药血清各剂量组对B16增殖均没有明显促增殖活性;但20%含药血清可明显促进B16合成黑素量(P<0.05),并提高细胞内cAMP水平(P<0.05)。结论:滋补肝肾方可能通过提高黑素细胞cAMP的水平,从而促进B16细胞合成黑素的功能。     

A potent tyrosinase activator from Radix Polygoni multiflori and its melanogenesis stimulatory effect in B16 melanoma cells

Tyrosinase is a key enzyme in melanin biosynthesis. Activators of tyrosinase with stimulatory effects on melanogenesis are beneficial for the treatment of hypopigmentation diseases. In the present study, mushroom tyrosinase activity assay was performed to screen tyrosinase activators from traditional Chinese herbs. Four components from Radix Polygoni multiflori were tested. The most active compound, 2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-beta-D-glucoside (THSG), was found to be a significant tyrosinase activator. The maximal activation was 126% at a concentration of 75.0 microg/mL. The three anthraquinones slightly activated tyrosinase with effects in the range 7-31%. All the compounds were tested in B16 melanoma cells, the anthraquinones were found to inhibit cell proliferation at a concentration of 0.1-2.5 microg/mL, and THSG was found to be non-cytotoxic at a concentration of 0.1-12.5 microg/mL. THSG significantly increased the activity of murine tyrosinase and stimulated melanin biosynthesis in B16 melanoma cells. In conclusion, THSG is a potent tyrosinase activator and stimulator of melanogenesis with potential for the treatment of hypopigmentation disease.     

小鼠阳和汤血清对细胞的诱导分化作用

目的观察小鼠阳和汤血清对细胞的诱导分化作用.方法SRB法和乳酸脱氢酶释放法检测B16细胞活性;油红染色法检测3T3-L1前脂肪细胞的分化;NBT还原能力和细胞吞噬功能法检测HL-60细胞的分化;血红蛋白含量法检测K562细胞的分化;黑色素含量法检测B16细胞的分化.结果小鼠阳和汤血清能明显呈剂量依赖性抑制B16细胞生长,但不表现细胞毒作用;阳和汤血清能促进3T3-L1前脂肪细胞在分化液刺激下的油红染色,提高HL-60细胞的NBT还原能力和对辣根过氧化物酶的吞噬功能,增加K562细胞的血红蛋白含量,降低B16细胞的黑色素含量.结论小鼠阳和汤血清对3T3-L1前脂肪细胞、肿瘤细胞均有诱导分化和成熟作用,这可能是其抗肿瘤作用的主要机制.     

养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株黑素合成和酪氨酸酶的影响

 目的：研究养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成的影响及对细胞内酪氨酸酶的影响。 方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定养颜青娥丸对细胞增殖的影响；酶学方法研究养颜青娥丸对酪氨酸酶活性的作用；470 nm比色法测定合成黑素含量A值。结果：研究发现养颜青娥丸对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用，对合成黑素含量有降低作用；组方单味药中杜仲、沙苑子、制首乌对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用，对合成黑素含量有降低作用；补骨脂、核桃肉对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有促进作用，对合成黑素含量有增加作用。结论：养颜青娥丸对黄褐斑可能有一定的治疗作用，但治疗机制不能单纯用生化学、酶学改变来解释。