双苓扶正抗癌制剂对HL-60细胞的体外实验研究

目的研究双苓扶正抗癌制剂体外对HL-60细胞的作用及其作用机制。方法运用MTT方法和流式细胞技术,检测HL-60细胞体外增殖、凋亡以及相关基因的表达。结果双苓扶正抗癌制剂(80~320 mg.L-1,48 h)可抑制HL-60细胞增殖及其增殖促进基因c-myc的表达,可诱导HL-60细胞凋亡并上调凋亡诱导基因bax的表达。结论双苓扶正抗癌制剂对HL-60细胞增殖及凋亡的影响涉及增殖促进基因c-myc和凋亡诱导基因bax。     

双苓扶正抗癌制剂对胃癌细胞端粒酶活性及p53蛋白表达的研究

目的:检测双苓扶正抗癌制剂对人胃癌细胞端粒酶活性及p53蛋白表达的影响,探讨该制剂的抗肿瘤作用机制。方法:应用TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性;应用免疫组织化学ABC法检测p53蛋白的表达。结果:对照组SGC-7901细胞端粒酶活性为阳性,双苓扶正抗癌制剂(160和320μg/ml)2个给药组其端粒酶活性皆为阴性;对照组SGC-7901细胞的p53蛋白阳性标记率为(41±13)%,双苓扶正抗癌制剂(160和320μg/ml)2个给药组其p53蛋白阳性标记率分别为(15±5)%、(13±6)%。结果显示,双苓扶正抗癌制剂可抑制SGC-7901细胞端粒酶活性及突变型p53蛋白的表达。结论:双苓扶正抗癌制剂抗肿瘤作用机制可能与其抑制端粒酶活性和下调突变型p53蛋白的表达有关。     

银杏外种皮多糖对人胃癌细胞凋亡及其凋亡诱导基因表达的影响

目的：研究银杏外种皮多糖对人胃癌细胞凋亡及其凋亡诱导基因表达的影响。方法：应用体外培养方法和流式细胞技术，检测人胃癌SGC-7901细胞的凋亡率及其凋亡诱导基因bax的阳性蛋白标记率。结果：银杏外种皮多糖40～160μg／ml可诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡，在培养24h～72h期间，具有量效关系和时效关系。银杏外种皮多糖40～160μg/ml也同时促进bax基因的表达。结论：银杏外种皮多糖的抗肿瘤作用机制之一可能与其诱导癌细胞凋亡有关，其诱导癌细胞凋亡的作用机制之一可能与其影响bax基因的表达有关。     

藤黄酸诱导人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡作用

目的：探讨藤黄酸(gambogic acid，GA)诱导体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法：通过MTT比色法分析藤黄酸对人胃癌SGC-7901细胞在24，48，72 h增殖的影响，并通过光镜、电镜观察细胞形态学的改变及流式细胞术检测藤黄酸对SGC-7901肿瘤细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响，用免疫组化方法检测凋亡相关基因bax和bcl-2的蛋白表达变化。结果：藤黄酸可明显抑制SGC-7901细胞的增殖，48h半数生长抑制剂量(IC50)为1．47，1．6 μmol／L的藤黄酸可导致7901细胞形态学的改变，流式细胞术显示细胞周期亦发生变化，G2／M期细胞增加，凋亡率呈时间-剂量相关性。同剂量的藤黄酸还可增加抑癌基因bax和减少诱癌基因bcl-2的蛋白表达量。结论：藤黄酸可明显抑制SGC-7901肿瘤细胞的生长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与其减少Bcl-2／Bax的比值相关。     

反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的:观察反左金丸水提物(waterextractsofRetro-zuojinPill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bcl-2和bax表达的影响。方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化以及Westernblot方法检测WERZP对人胃癌细胞SGC-7901中bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果:WERZP作用SGC-7901细胞24h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10mg·mL^-1WERZP作用SGC-7901细胞24h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±0.23),(55.91±0.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5～10)mg.mL^-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达。结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一。     

右旋柠烯对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨右旋柠烯(D-limonene)对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法：以D-limonene作用于SGC-7901、BGC-823及AGS三种不同类型人胃癌细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪及电镜检测细胞生长抑制率、凋亡率以及形态学改变，免疫细胞化学法检测p53、bax和bcl-2基因表达。结果：D-limonene处理后的细胞生长抑制率与凋亡率均增加，与药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经D-limonene处理后SGC-7901、BGC-823细胞株p53、bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。AGS细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。结论：D-limonene对人胃癌细胞的抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡，不同类型的细胞株作用途径可能不同。升提p53与bax及降低bcl-2的蛋白表达为其诱发冒癌细胞．凋亡的机制之一。     

双苓扶正抗癌制剂对SGC-7901细胞增殖及c-myc基因表达的研究

目的：研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌细胞增殖及c-myc基因表达的影响。方法：采用MTT比色法,观察双苓扶正抗癌制剂（40～640 μg·mL^-1）5个剂量组单用及其与阿霉素（0.4,4.0 μg·mL^-1）及顺铂（0.1,1.0 μg·mL^-1）分别合用在体外对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用；采用流式细胞技术检测该制剂（80～320 μg·mL^-1）对c-myc基因阳性蛋白标记率的影响。结果：双苓扶正抗癌制剂单用体外作用24 h,对人胃癌细胞增殖具有抑制作用,在40～640 μg·mL^-1剂量下,其抑制率随剂量增加而增加；与阿霉素(0.4,4.0 μg·mL^-1)或顺铂(0.1,1.0 μg·mL^-1)分别合用,可提高对人胃癌细胞的抑制率；在80～320 μg·mL^-1剂量下,可抑制c-myc基因的表达。结论：双苓扶正抗癌制剂单用对人胃癌细胞增殖具有抑制作用,且具有量效关系；与阿霉素或顺铂分别合用对人胃癌细胞的抑制作用具有协同效应；下调c-myc基因的表达可能是该制剂抑制肿瘤细胞增殖的作用机制之一。     

竹节香附素A对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬的影响

目的探讨竹节香附素A(RA)对胃癌SGC-7901细胞的影响及其分子机制。方法 MTT观察RA对胃癌细胞SGC-7901生长抑制;流式细胞术检测RA对细胞凋亡的影响;透射电镜观察RA诱导自噬;Western blot检测凋亡、自噬相关蛋白表达。结果 RA能显著抑制SGC-7901细胞生长;RA能诱导SGC-7901细胞凋亡和自噬;Western blot检测发现,随着给药剂量增加,LC3-I逐渐向LC3-II翻转,PARP及bcl-2表达递减,bax、p-p38表达递增。结论 RA能有效抑制SGC-7901细胞生长,其机制可能是诱导细胞凋亡和自噬,RA诱导凋亡及自噬可能是通过激活MAPK通路实现的。     

扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌细胞株PC-3体外增殖能力的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法测定不同浓度扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测其对PC-3细胞凋亡及细胞周期的影响,并以Western blot分析扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞凋亡调控蛋白bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果:扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞体外增殖抑制作用明显,呈浓度及时间依赖性。流式结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可诱导PC-3细胞凋亡,并能够增加G_2/M期细胞比例,降低S期细胞比例,呈浓度依赖性。Western blot结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可下调bcl-2蛋白的表达,而上调bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:扶正利湿抗癌方含药血清可以通过调节bcl-2和bax蛋白的表达发挥体外抑制PC-3细胞增殖的作用。     

央芪汤对胃癌细胞凋亡影响的实验研究

目的观察央芪汤对胃癌细胞凋亡的影响。方法培养人胃癌细胞SGC-7901细胞株,用MTT法评价央芪汤对胃癌细胞增殖的抑制作用,确定央芪汤对胃癌细胞的IC50值,采用流式细胞术检测央芪汤对胃癌细胞凋亡的诱导作用,免疫细胞化学法检测胃癌细胞中bcl-2及caspase-3蛋白的表达情况。结果央芪汤可以显著促进胃癌细胞SGC-7901的凋亡(P0.01),明显增加胃癌细胞SGC-7901凋亡蛋白caspase-3的表达(P0.01),并可明显抑制抗凋亡蛋白bcl-2的表达(P0.01)。结论央芪汤可以通过促进胃癌细胞的凋亡,达到抗肿瘤的目的。     

动脉粥样硬化与细胞凋亡

动脉粥样硬化(AS)的发病机理尚未清晰。传统的观点有三大假说。脂质假说、血栓源假说和损伤反应假说。但近年来。人们认为细胞凋亡与AS的形成有密切的关系。以下就细胞凋亡与动脉硬化的关系，动脉粥样硬化细胞凋亡的细胞外调节以及细胞内调节作一综述。     

The cephalostatin way of apoptosis

The cephalostatins, bis-steroidal natural products from the marine tube worm Cephalodiscus gilchristi, were isolated by Dr. G. R. Pettit and his group. These compounds show a unique cytotoxicity profile in the in vitro screen of the National Cancer Institute, suggesting a novel mechanism of action. Indeed, cephalostatin 1 ( 1) is an extremely powerful agent that acts via an unusual apoptosis pathway. It induces selective Smac/DIABLO, but no cytochrome c release from mitochondria. Nevertheless, caspase-9 is required for apoptosis induction. Interestingly, caspase-9 is activated without the participation of the apoptosome, leading to the question of its mechanism of activation. We found that endoplasmic reticulum stress-associated caspase-4 contributes to nonclassical cephalostatin-mediated caspase-9 activation, additionally pointing out the unusual pathway used by this substance. Cephalostatin 1 ( 1), therefore, provides a very good tool to discover novel apoptotic pathways, which might be important in the understanding and treatment of chemo-resistant cancer.     

青蒿素对肿瘤细胞凋亡相关基因的调控

青蒿素(artemisinin)及其衍生物是一类传统抗疟药.近年来有研究表明:青蒿素可通过抑制增殖、诱导凋亡、抗血管生成等发挥抗肿瘤作用.而其诱导凋亡作用是近期学者研究的重点,多数学者认为其主要通过上调促凋亡基因(Bax)、下调抗凋亡基因(Survivin、Bcl-2)、协调双向调节基因(Bid、Bim)抗肿瘤,最终引起特征性的形态学改变.     

腺嘌呤对电离辐射诱发AHH-1细胞凋亡的保护作用

目的：观察腺嘌呤对淋巴母细胞AHH-1辐射损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法：照射前12h给予不同浓度的腺嘌呤,再经4．O Gy 60Coy射线照射诱发细胞凋亡,采用MTS法计算细胞存活率;Annexin V-FITC／PI双染法、Caspase3／7发光法检测细胞凋亡率;DNA Ladder法观察凋亡断裂条带;RT-PCR分析细胞Caspase-9、Bax、Bcl-2mRNA表达的变化。结果：与正常组比较,电离辐射后细胞存活率79．4％显著下降（P〈0．01,加入0．001,0．01,0．1μmol·L^-1。腺嘌呤细胞存活率分别为85．4％,89．6％,92.2％明显升高（P〈0．01）,且随作用浓度的增加而增大,DNA断裂片段也减少,细胞中Caspase-9、Bax表达明显减少,Bcl-2表达明显增加,凋亡的各项指标均明显改善。结论：腺嘌呤对电离辐射诱发的细胞凋亡有保护作用,并且对细胞凋亡的抑制呈剂号依赖正相关美系．     

Clematis mandshurica protected to apoptosis of rat chondrocytes

OBJECTIVE: To investigate the effect of SKI 306X, a purified extract from the mixture of three herbs, i.e. Clematis mandshurica, Trichosanthes kirilowii and Prunella vulgaris, on apoptosis in chondrocytes. DESIGN: Rat chondrocyte cell line RCJ3.1C.18 cells were incubated with 1 microM staurosporin and SKI 306X or each of its components. Cell viability was determined by trypan blue exclusion assay. Induction of apoptosis was determined by nuclear condensation or fragmentation after Hoechst staining. Amount of apoptosis was quantified both by nuclear morphology and flow cytometry. Expression level of Bcl-2, and caspase-3 and PARP activations were assayed by Western blot. RESULTS: SKI 306X significantly prevented staurosporin-induced apoptosis. Among its three components, only Clematis mandshurica significantly decreased the amount of staurosporin-induced apoptosis. Although the level of Bcl-2 expression was decreased after staurosporin treatment, it was sustained after the combination treatment with Clematis mandshurica. Whereas staurosporin induced the degradation of 32 kDa caspase-3 precursor and the production of 85-kDa cleavage products of PARP in a time-dependent fashion, Clematis mandshurica treatment prevented those manifestations. CONCLUSIONS: Pharmacological efficacy of SKI 306X protecting osteoarthritis in part may result from the inhibition of apoptosis in chondrocytes by Clematis mandshurica.     

复方海蛇胶囊抗PC-12细胞凋亡研究

目的:研究复方海蛇胶囊对β-淀粉样蛋白(Aβ_1~42)诱导的PC-12细胞凋亡的影响,探讨复方海蛇胶囊应用于痴呆的治疗机制。方法:采用四氮唑蓝比色法(MTT法)确定复方海蛇胶囊对神经生长因子(NGF)诱导培养PC-12细胞的安全剂量后,加或不加Aβ,分别用MTT法、流式细胞术(FCM术)检测不同质量浓度的复方海蛇胶囊(0.01,0.1,1,5 mg.mL^-1)对PC-12细胞凋亡的影响;用蛋白免疫印迹(Western-blot)法分别检测凋亡执行酶caspase-9与caspase-3的活性。结果:复方海蛇胶囊对NGF诱导培养的PC-12细胞的安全剂量为小于10 mg.mL^-1。复方海蛇胶囊各剂量组对Aβ诱导的PC-12细胞的凋亡具有明显的抑制作用。各组数据(A)分别为:1.75±0.12,0.73±0.35,0.79±0.11,0.83±0.07,1.31±0.07和1.80±0.38,与空白组比较P<0.01,流式细胞检测中凋亡细胞的百分率降低(1.93±0.41)%,(46.17±4.08)%,(35.35±4.63)%,(28.62±3.81)%,(15.13±3.15)%,(7.84±1.76)%,与空白组比较P<0.01。另外,复方海蛇胶囊抑制了Aβ诱导PC-12细胞的caspase-9和caspase-3活性的增高。结论:复方海蛇胶囊可显著抑制Aβ诱导PC-12细胞的凋亡,其机制可能通过抑制凋亡执行酶caspase-9,caspase-3的活性实现。     

癌细胞诱导分化、凋亡的新途径

“古今中外第一针”是《中药事业报》１９９７年９月５日报道癌灵１号注射液（亚砷酸注射液）治疗急性早幼粒细胞白血病时用的标题。看似吹嘘，实际不然，经过国内外检索证实我们是有史以来第一家将砒霜注入到人的血管与椎管的人。并且使急性早幼粒细胞白血病得到了痊愈，...     

中药诱导白血病细胞凋亡的实验研究进展

综述了现代医学用观测细胞凋亡的方法来研究中药对白血病细胞的作用，观察发现很多中药提取物或单体有明显的体外促进白血病细胞凋亡的作用。     

去甲斑蝥素诱导肿瘤干细胞凋亡作用研究

目的探究去甲斑蝥素(NCTD)对肿瘤干细胞促凋亡作用。方法分别以UMUC-3膀胱癌和Hep G2肝癌细胞为研究对象,通过无血清、低吸附、单克隆的方法筛选肿瘤干细胞(CSC),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CSC干性标志物表达变化,MTS法检测NCTD及紫杉醇(PTX)对CSC的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 2种细胞经筛选获得成球生长细胞克隆,其干性基因NANOG、OCT4、ABCG2、CD133、CD34表达明显升高,释放入含血清培养基后干性基因表达下调。经筛选所得的CSC对PTX高度耐药,但对NCTD耐药性低。NCTD可诱导CSC凋亡,但对干性基因表达没有显著影响。结论 NCTD诱导凋亡杀伤CSC,但对CSC分化没有显著影响。     

木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡

[目的] 探究木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡的作用机制。[方法] 通过 CCK8 法检测木香内酯对 U87 细胞增殖作用的影响; 采用 Annexin V-FITC/PI 双染法检测木香内酯对 U87 细胞凋亡率的影响, 采用 JC-1染色法检测木香内酯对 U87 细胞线粒体膜电位的影响; 采用 DCFH-DA 探针检测木香内酯对 U87 细胞中 ROS 含量的影响;采用生化法检测木香内酯对 U87 细胞氧化应激指标丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、微量还原型谷胱甘肽（GSH）和一氧化氮（NO）含量的影响; 采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测木香内酯对U87 细胞 Caspase-3、Bax、Bcl-2 的 mRNA 表达水平的影响; 采用分子对接寻找木香内酯与 Caspase-3、Bax、Bcl-2 的具体结合位点。[结果] 木香内酯呈剂量依赖性抑制 U87 细胞的生长, 细胞半抑制浓度 IC₅₀ 为 11.27 μmol/L;细胞凋亡水平检测结果显示木香内酯 20 μmol/L 组 U87 细胞凋亡率增加, 差异具有统计学意义（P<0.001）; 线粒体膜电位水平检测结果显示木香内酯 5 μmol/L 组、10 μmol/L 组、20 μmol/L 组 U87 细胞线粒体膜电位降低, 差异具有统计学意义（P<0.001）;氧化应激检测水平显示, 木香内酯呈剂量依赖性上调 U87 细胞中 ROS、MDA、NO 水平; 下调 SOD、GSH 水平, 差异具有统计学意义（P<0.05）; 木香内酯 20 μmol/L 组 U87 细胞 Caspase-3、Bax mRNA 表达水平均上调, 差异具有统计学意义（P<0.01）, 而 Bcl-2 mRNA 表达水平下调, 差异具有统计学意义（P<0.05）。分子对接结果显示木香内酯分别与 Caspase-3、Bcl-2、Bax 氨基酸残基 ARG-164, LEU-168, ARG-66 形成稳定的结合能。[结论] 木香内酯能明显抑制 U87 细胞生长和介导细胞高氧化应激水平, 降低线粒体膜电位并促进细胞凋亡。