荧光原位杂交技术诊断及监测膀胱癌复发的价值

膀胱癌是我国男性泌尿生殖系统肿瘤中的最常见肿瘤.近年来,报道尿脱落细胞荧光原位杂交技术代替膀胱镜及细胞学检查,具有无创,敏感性及特异性强等优点,是诊断及监测膀胱癌复发的理想手段.荧光原位杂交技术是用已知标记的单链核酸,按照碱基互补配对的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测到的杂交双链核酸.根据杂交到染色体上的位置,FISH探针可以分为染色体涂染探针、着丝粒探针、端粒探针和特定基因位点探针等.膀胱癌有特征性的染色体结构及数目的变异,常见的染色体异常发生在3、7、17号染色体数目的异常及9号染色体的部分缺失.现结合最新研究成果,概述FISH技术在膀胱癌中用于诊断及监测复发的价值.     

荧光原位杂交试剂用于诊断自然流产绒毛染色体异常的价值

目的：探讨早期孕妇中自然流产绒毛组织细胞中染色体异常发生率,建立标准的标本的处理以及FISH（fluorescence insitu hybridization）的操作方法为完善产前诊断与遗传咨询指南提供理论依据.方法：取材100例自然流产绒毛组织利用FISH技术检测13、21、16、22、18、X、Y染色体数目异常,随机选30例结合传统的细胞学检查实验准确性.结果：FISH的阳性结果中30例常染色体异常,其中以三体23例,三倍体6例,16号染色体9例,22号染色体6例,与传统细胞学检测结果一致.结论：染色体荧光原位杂交（FISH）探针具有较高的细胞遗传学的检测效率与核型分析相结合用于染色体数目异常的诊断可靠.     

双链探针实时荧光PCR技术用于BRCAI突变筛查的初步研究

以自行设计的荧光双链探针作为检测探针，结合实时荧光PCR检测，以构建的BRCAI基因外显子2（162A→G）突变为模型，建立荧光双链探针实时荧光PCR用于BRCAI突变检测的初步模型。结果表明该方法是一种简单、高通量、高灵敏度的筛查BRCAI基因突变的方法。     

双链探针实时荧光PCR技术用于BRCA1突变筛查的初步研究

以自行设计的荧光双链探针作为检测探针,结合实时荧光PCR检测,以构建的BRCA1基因外显子2(162 A→G)突变为模型,建立荧光双链探针实时荧光PCR用于BRCA1突变检测的初步模型。结果表明该方法是一种简单、高通量、高灵敏度的筛查BRCA1基因突变的方法。     

荧光探针量子点检测重金属与有害元素的研究进展及其应用于中药材安全性评价的展望

近年来,运用新型荧光探针量子点对重金属Pb(II)、Cu(II)、Hg(II)等及有害元素As(III)的检测逐渐成为科研领域的研究热点。列举了量子点的优越光学性质与运用量子点荧光探针检测重金属与有害元素的优势,阐述了离子络合反应、电子转移过程、荧光共振能量转移等引起的量子点荧光淬灭、荧光增敏及结合DNA滚环扩增、发射波长红移及比率荧光等方法检测重金属及有害元素的原理,并总结了量子点荧光探针在重金属与有害元素检测中的应用,以期为量子点荧光探针应用于中药中的重金属与有害元素的快速检测提供参考。     

IHC法与FISH法检测乳腺癌HER-2基因结果比较

目的比较免疫组织化学法(IHC)法和荧光原位杂交(FISH)法检测女性乳腺癌HER-2基因结果的可靠性。方法采用FISH双色法检测原发性浸润性乳腺癌中的HER-2基因及IHC检测HER-2蛋白表达情况,两者进行对比分析。结果在259例乳腺癌患者中,FISH检测阳性125例,IHC检测阳性239例,2者比较有显著性差异。将FISH结果和IHC结果进行分组比较,IHC为()者,FISH阳性率为76.19%;IHC为()者,FISH阳性率为52.25%。表明FISH和IHC有显著相关性。17号染色体非整倍体是造成IHC过度表达但FISH检测为阴性的主要原因。结论 IHC检测受实验室因素和主观因素影响,17号染色体非整倍体也是造成IHC过表达但基因不扩增的主要原因,所以确定HER-2扩增情况用FISH法检测更准确,能对患者的预后情况和治疗方案的选择提供更科学的依据。     

激光共聚焦显微技术及其在抗肿瘤药物研究中的应用

激光共聚焦显微镜(1aser scanni con focal microscope，ISCM)是一项集激光技术、电子技术、光学设计及计算机于一体的高科技产品，由激光器、荧光显微镜、共聚焦探测系统和图像分析系统等几部分组成，是近代生物医学图像分析仪器最重要的发展之一，它是在荧光成像基础上加装激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，使用紫外线或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观察诸如Ca2 、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化，成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代强有力的工具。     

荧光分析法在药物分析中的应用研究进展

对常用的荧光分析方法和新型荧光分析在药物分析中的应用进行了评述。常用荧光分析方法有胶束增敏荧光分析法、反相胶束增敏荧光分析法、稀土荧光探针法和同步荧光分析法;新型的荧光分析法有荧光猝灭分析法、化学计量学方法、色谱-荧光联用技术和流动注射-荧光检测技术。认为,目前荧光分析法的主要发展趋势是:进一步寻找对药物荧光增强效果更好的胶束体系;详细研究荧光探针的作用机理,寻求专属性强、灵敏度更高、制备更简便的稀土荧光探针;联合多种检测技术,探索多组分复杂组成的样品的快速、准确检测的方法。     

实时荧光定量PCR技术及其在中医药研究中的应用

在中医现代化研究过程中,越来越多地应用先进的现代科学技术,聚合酶链式反应(PCR)技术作为一项重要的研究工具,亦被不断地用于中医药的研究。荧光定量PCR是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术,在PCR反应体系中计入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效,高通量而且高敏感性等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足,目前该技术已逐渐成为中医药研究中的重要手段。本文概述了实时荧光定量PCR技术分别在中医诊断、中医药理研究、中医证实质研究和针刺作用机制研究中的应用。通过文献研究表明:应用实时荧光定量PCR,可以从分子基因水平探讨方剂或单味药及有效成分在组织、细胞及至分子层次上的作用机制,了解药物作用部位及靶点。探讨中医证候的病理生理学基础,并为阐明其生物学本质提供了新思路。使我国传统中医药体系的科学性在分子生物学的基因水平上得到了初步的验证。这些研究思路和方法为中医药的研究提供了借鉴,实时荧光定量PCR有望更广泛的应用于中医药研究中。     

花魔芋45s rDNA定位及FISH核型分析

对花魔芋45SrDNA进行染色体物理定位,并分析花魔芋荧光染色体核型。使用荧光原位杂交(FISH)技术进行定位。花魔芋有1对45SrDNA位点位于7号染色体短臂端部处;核型公式为K(2n)=2x=26=16m+6sm+4st,属2B核型。该研究为花魔芋染色体识别、分子细胞遗传图谱构建提供了稳定有效的细胞学标记。     

杀白细胞毒素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因的检测

目的了解杀白细胞毒素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)的红霉素耐药基因(ermA/B/C)检出情况。方法收集2007年1月—2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用聚合酶链反应对45株MRSA的ermA/B/C和PVL基因进行检测,分析PVL基因阳性MRSA的ermA/B/C检出率。结果45株MRSA中有33株检出ermA/B/C,检出率为73%(33/45);有12株检出PVL基因,检出率为27%(12/45);12株PVL基因阳性MRSA中有9株检出ermA/B/C,检出率为75%(9/12);33株PVL基因阴性MRSA中仅24株检出ermA/B/C,检出率为73%(24/33)。结论PVL基因阳性与PVL基因阴性MRSA的ermA/B/C检出率基本一致,MRSA的重要致病基因——PVL的产生可能与红霉素耐药基因ermA/B/C无关。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡促进与抑制因子基因表达的调控作用

目的探讨糖心康对糖尿病心肌损伤的保护作用及机理。方法采用STZ加高脂饮食造模。治疗组以中药糖心康灌胃,空白组及模型组以生理盐水灌胃,以基因芯片技术TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果模型组细胞凋亡较正常组发生率明显增加,两组比较差异非常显著(P<0.01),而糖心康组心肌凋亡率则下降,模型组大鼠Fas基因蛋白表达增强,与正常组比较差异非常显著(P<0.01),而糖心康组Fas基因表达减弱,与模型组比较差异显著(P<0.01),模型组Bcl-2表达减弱,而糖心康组Bcl-2表达较模型组增强,二者比较差异显著(P<0.01)。利用基因芯片技术在心肌基因表达谱中筛选出与细胞凋亡有关的促进与抑制因子基因主要有2个,即AFO41376,M75720。结论糖心康有抑制心肌细胞凋亡作用,可使Fas基因、AFD41376基因表达下调,使Bcl-2,M75720表达上调。这也是中药复方糖心康具有心肌损伤保护作用的机制之一。     

DNA条形码等分子鉴定技术与动植物类中药材的鉴定

中药材鉴定是控制中药质量、确保用药安全与效果的首要环节。DNA分子鉴定是从基因层面上进行中药材鉴别的手段,准确率高。DNA分子鉴定包括电泳技术、免疫技术、随机扩增多态性DNA(RAPD)、限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)、扩增片段长度多态性(AFLP)、简单重复序列(ISSR)及DNA条形码等,以DNA条形码应用最为广泛。DNA条形码是基因组中相对较短的、可用于物种鉴定的特异性基因片段。植物类中药材的条形码多选用核基因和叶绿体基因DNA片段,如叶绿体psbA-trnH基因、内转录间隔区(ITS)、叶绿体核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶大亚基(rbcL)和RNA转录体Ⅱ型内含子剪切酶基因(matK)等;动物类中药材的条形码多来自核基因和线粒体基因DNA,主要有线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(COⅠ)、核糖体RNA(rRNA)和线粒体细胞色素b基因(CytB)等。综述动植物类中药材DNA分子标记与鉴定技术应用进展,并探讨DNA条形码在药用动植物类中药材鉴定中存在的局限性及发展前景,为中药质量控制提供参考。     

Survivin、P53突变基因、PTEN基因在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因Survivin、P53突变基因和抑癌基因PTEN在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及相关性。方法：应用免疫组织化学法（SP），检测60例NSCLC组织标本和20例正常肺组织标本中的Survivin、P53突变基因、PTEN基因表迭情况。结果①在60例NSCLC组织标本中，Survivin、P53，PTEN表迭结果分别为47例（78．33%）、42例（70．00%）、27例（45．00％）。在20例正常肺组织标本中，Survivin、P53基因无表达，PTEN阳性表达18例（90%）。②Survivin、P53在NSCLC组织中的阳性表达明显高于正常肺组织（P〈0．01）。Survivin的阳性表达与NSCLC的组织学类型、分化程度、是否淋巴结转移及TNM分期无相关性（P〉0．05），P53的阳性表达与NSCLC的组织学类型、分化程度、TNM分期无相关性（P〉0．05），与NSCLC的有无淋巴结转移有相关性（P〈0．05）。PTEN在正常肺组织中的阳性表达明显高于NSCLC组织（P〈0．01）。PTEN的阳性表达与NSCLC的组织学类型及TNM分期无相关性（P〉0．05），与NSCLC的分化程度、有无淋巴结转移有相关性（P〈0．05）。③Survivin与P53在NSCLC的表达无相关性（P〉0．05），PTEN与Survivin、P53在NSCLC的表达均有显著差异（P〈0．05）。结论Survivin、P53突变基因、PTEN基因的异常表达与非小细胞肺癌的发生发展有关；三者在NSCLC的发生发展中起协同作用；P53突变基因和PTEN基因可作为诊断肺癌和评价肺癌预后的参考标志及基因治疗的新靶点。     

外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl-2基因及bax基因表达的影响

目的观察外燥对小鼠气管细胞凋亡与bc l-2基因及bax基因表达的影响。方法30只昆明种小鼠随机分为常温常湿组(A组),温燥组(B组),凉燥组(C组),每组10只。经处理后第14天用免疫组化法检测各组气管细胞凋亡率(%)、bc l-2、bax阳性指数(PI,%)、bc l-2/bax累积阳性指数(AI,%)与bc l-2:bax蛋白表达比值。结果3组小鼠气管细胞凋亡率均≤0.3%;B组与C组bc l-2 PI与AI均低于A组(P<0.01),B组、C组气管细胞bc l-2:bax蛋白比值中bax增加。结论外燥致气管细胞bc l-2表达降低、bc l-2:bax蛋白比值改变,bc l-2、bax阳性细胞以气道炎性病灶或纤毛缺损处多见,提示与外燥分子致病机制有关。     

Ki-67和Pten在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的：探讨子宫内膜癌组织中pten和Ki-67蛋白表达以及与子宫内膜癌发生、发展及预后的关系。方法：应用免疫组化SP法检测子宫内膜增生15例，子宫内膜不典型增生28例，子宫内膜癌62例中Ki-67和pten基因的表达，并分析其与子宫内膜癌发生，发展及预后的关系。结果：子宫内膜癌组中Ki-67蛋白阳性率明显高于增生期子宫内膜组及子宫内膜不典型增生组Ki-67蛋白阳性率（P〈0．05，P〈0．05），而子宫内膜癌组中pten蛋白阳性率明显低于子宫内膜不典型增生组及增生期子宫内膜组pten蛋白阳性率（P〈0．05，P〈0，05）；Ki-67在子宫内膜癌中的表达与组织分化、临床分期均显著相关（P〈0．01，P〈0．05），但其与肌层浸润、淋巴结转移无关（P〉0．05，P〉0．05），pten的表达与组织分化、肌层浸润深度、临床分期及淋巴结转移均显著相关（P〈0．5，P〈0．05，P〈0．01，P〈0．05）。结论：Ki-67和pten可能在子宫内膜癌的发生、发展及预后起着重要的作用，同时也是诊断子宫内膜癌及癌前病变的有价值的分子标记物。     

中药DNA条形码分子鉴定技术的应用与展望

中药材品种广泛,存在多基原的情况,质量差异较大,使临床用药安全性和有效性难以得到保证。因传统中药鉴定方法的局限性,对准确鉴别多基原中药材带来了一定的挑战。为了保证中药临床用药安全有效可控,中药鉴定学已成为最重要的研究课题之一,也是当前中医药事业急需解决的关键技术要求。DNA基因鉴别是从基因层面对中药材进行快速、准确的鉴定,包括DNA分子标记法、核酸探针杂交法和DNA条形码技术,其中DNA条形码技术应用最为广泛。DNA条形码是利用标准的DNA片段对物种进行鉴定的技术,2015年版《中国药典》收载了DNA条形码技术指导原则,建立了动物类采用细胞色素C氧化酶亚基I(COI)序列为主,转录间隔区间(ITS)2为辅;植物类采用ITS2/ITS为主,叶绿体psb A-trn H为辅的中药材鉴定体系。该技术的广泛应用为中药鉴别提供更高效快速的方法,并且有效地应用于多基原中药材的鉴别中,使中药品种混乱现象得到极大改观。文章首先对DNA条形码技术的原理、目的及意义、标准片段的选择进行介绍,着重阐述该技术在中药鉴定中的应用以及存在的局限性,并提出展望,以期为中药材的鉴定研究提供参考。     

老鸦瓣实时定量PCR内参基因的筛选和验证

药用植物老鸦瓣供需矛盾日益凸显,但分子生物学方面研究基础还较薄弱。为开展老鸦瓣相关功能基因表达量的分析检测,需要选择适宜的内参基因以提高实验结果准确性。从老鸦瓣转录组数据中筛选出8个候选内参基因(ACT,TUA,CYP,GAPDH,UBQ,UBI,EF1α,UBC),利用实时荧光定量技术检测候选内参基因在老鸦瓣鳞茎、叶、花以及芽茎不同发育阶段中的表达水平。应用GeNorm,NormFinder和BestKeeper软件以及RefFinder网站综合评估内参基因稳定性。结果表明8个候选内参基因中UBC的Ct变化范围最小,表达水平最稳定,适合作为内参基因;GeNorm和NormFinder软件分析结果显示UBC和UBI的稳定性相对较好;BestKeeper评估CYP和UBC表达较稳定;RefFinder网站综合排序稳定性最好的基因为UBC和UBI,而ACT在所有软件评估中稳定性最差。分别以稳定性最好的UBC,UBI和最差的ACT为内参基因检测老鸦瓣GBSS基因的表达,GBSS基因在UBC和UBI校正下表达模式相同,以ACT为内参时表达趋势有较大差异,进一步验证了筛选结果的可靠性,表明UBC和UBI均适合作为老鸦瓣不同器官和芽茎不同发育时期基因表达研究的内参基因。该研究筛选得到的稳定内参基因UBC和UBI为后续开展老鸦瓣中关键基因表达分析研究奠定了基础。     

中西药物对肺腺癌放射增敏基因表达谱初步研究

目的:利用基因芯片技术研究扶正增效方、甲硝唑对肺腺癌放射增敏基因表达谱,筛选出中西药物对放射增敏的差异表达基因及其共同表达基因。方法:捉取中西药物加放射组癌组织及单纯放射组癌组织RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与38500点人基因芯片杂交,筛选中西药物加放射组与单纯放射组差异表达基因。结果:中药加放射组与单纯放射组差异表达基因857条,上调349条,下调508条,其中39条GeneBank中登录,差异显著基因中15条表达上调,21条表达下调,分别为凋亡、转录调节、信号转导、细胞周期、DNA损伤与修复、免疫等相关基因;差异极显著基因1条,为THRA。西药加放射组与单纯放射组差异表达基因47条,已知显著差异基因3条,分别为DNA损伤与修复、转录调节、信号转导等相关基因。只有RARA基因在中西药放射组出现差异表达。结论:中西药物放射增敏存在不同的基因表达谱,说明中西药物放射增敏基因机制不尽相同,筛选出的特异表达基因和共同表达基因为进一步研究放射增敏药物开发和建立放射增敏动物模型具有重要意义。     

吉林人参Dof基因家族的鉴定及表达模式分析

Dof(DNA binding with one finger)转录因子是植物中特有的一类转录因子,在植物种子发育、组织分化和代谢调控方面起着非常重要的调控作用。为了研究Dof基因家族在人参中的数量和功能,该文以人参转录组数据库为基础,利用生物信息学手段,对人参Dof基因家族成员进行鉴定及其结构、进化、功能分化、表达模式及互作关系等进行了系统分析;同时,将人参Dof基因与已知人参皂苷合成关键酶基因进行关联分析,最终筛选到参与调控人参皂苷生物合成的候选PgDof基因。结果表明,吉林人参Dof基因家族含有57条基因;PgDof基因均具有Zf-Dof保守基序,在进化上比较保守且分成5个组群;表达模式分析结果确定了PgDof基因家族成员在不同组织部位、不同年生和不同农家品种之间存在不同程度的表达差异,同时通过"基因-皂苷含量""基因-基因"连锁分析,获得了PgDof14-1基因是参与调控人参皂苷生物合成的重要候选基因,并建立了该基因的人参发状根遗传转化体系,获得了阳性发状根无性系。该研究为人参中Dof基因家族的研究奠定了理论基础。