地龙类药材的理化鉴别

用薄层色谱法和凝胶电泳法分别对地龙类药材进行鉴别研究。结果表明：两种方法均可用于地龙类药材的鉴别。     

地龙类药材药理作用比较

地龙类药材热浸剂均具有明显的解热、降压、平喘和利尿作用,其中广地龙和沪地龙的解热作用强于土地龙,地龙类药材其它作用的大小无显著性差异。     

广地龙古今入药品种对比研究

目的:对中药广地龙进行品种考证,并对市售广地龙商品进行品种鉴别,借此判断广地龙古今入药品种的异同。方法:通过查阅本草文献,并整理历版中国药典及地方中药材标准,分析广地龙药材品种的收载情况。采用性状鉴别结合分子鉴定的方法对市售广地龙进行品种鉴别。结果:本草中所记载的"白颈蚯蚓"与现今国家与地方标准收载的钜蚓科环毛蚓属参环毛蚓等多种蚯蚓特征基本一致。目前市售广地龙药材伪品较多,大腔蚓和暗孔远盲蚓为最常见的2种伪品。结论:该研究可为广地龙药材的开发与临床用药提供参考。     

近红外判别结合COI序列基因分析鉴定地龙物种基源

目的:建立地龙药材的真伪鉴别方法，为地龙药材优质用药提供新方法。方法:采用COI序列进行分子生物学层面的基因序列分析，近红外二级光谱判别建模分析进行光谱学层面的分析，两者共同鉴定地龙药材的真伪。结果:COI序列分析能够鉴别地龙种属，明确药材的基源，近红外建模分析结果与COI序列分析结果一致。结论:近红外判别与COI基因分析结合能够简便，全面的控制地龙药材真实性，明确药材基源。     

地龙、全蝎、水蛭薄层色谱鉴别方法研究

目的:建立地龙、全蝎、水蛭的薄层色谱鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对地龙、全蝎、水蛭药材中氨基酸类成分进行定性鉴别。结果:色谱斑点清晰,分离效果理想,能够稳定鉴别出所含氨基酸种类。结论:本方法可操作性好,重复性强,薄层特征明显,可作为此类药材的定性鉴别方法。     

灰关联度模型的地龙商品药材质量评价研究

目的:建立比较地龙不同品种(广地龙、沪地龙)的质量评价方法。方法:应用灰关联度模型,以不同品种的地龙商品药材5类主要成分含量构成模型数据集,以定义的相对关联度为测度,建立地龙药材质量评价模型。结果:通过该模型对20批地龙药商品材(10批广地龙、10批沪地龙)的质量评价,与传统公认的地龙药材质量相符合。结论:该方法及模型可用于地龙商品药材质量评价。     

不同产地地龙药材的微性状鉴别及品质研究

目的:通过对市场上地龙及其混伪品进行微性状区分,结合灰分、重金属及浸出物的检测,研究和规范市场上地龙的品种,为地龙的鉴别提供依据,提高市场上地龙药材的品质。方法:通过查阅相关资料,收集市场上不同品种的地龙药材。使用体视显微镜观察样品,拍摄不同景深的图片,利用景深合成技术合成一张高清的微性状图片来对其进行鉴别;根据中国药典方法对其灰分、重金属和浸出物进行检测。结果:通过微性状鉴别发现不同药材市场上同一产地地龙有不同程度的非正品存在,其受精囊孔周围的乳突情况和所处的环节以及雄孔的形状有明显的区别。不同产地的地龙药材灰分和重金属大部分合格,浸出物大部分不合格。结论:利用微性状鉴别法能够准确快速的鉴别地龙的品种并能区分其混伪品,简单方便,效率高;地龙药材的品质有待进一步研究。     

骨碎补类药材鉴别研究

目的对骨碎补类药材进行鉴别研究,找出快速鉴别该类药材的鉴别点。方法采用药材来源鉴别和性状鉴别的方法。结果骨碎补类药材形状多为圆柱形难以鉴别;药材大小因年限的差别没有鉴别意义;药材质地和气味区分不明显;药材断面分体中柱(维管束)的颜色、形状和排列方式具有较高的鉴别率,是骨碎补类药材的重要鉴别依据。结论为骨碎补类药材的品种整理、鉴定及质量标准制定提供理论依据。     

基于COI和16SrRNA基因的地龙药材及其混淆品的DNA条形码鉴定

目的 利用线粒体细胞色素C氧化酶亚基1（COI）和16S核糖体RNA（16SrRNA）对地龙药材及常见混伪品进行分子鉴定,探讨快速、准确鉴定地龙药材及其混伪品基原物种的方法。方法 收集地龙药材的药典收载品种及其易混品种10种,提取DNA,得到其COI和16SrRNA序列。所得序列经DNAStar校正后,用MEGA6.0自带的Clustal W多重比对,除去冗余位点,比对结果经MEGA6.0分析,构建地龙药材及其混淆品的邻接（N-J）树。结果 地龙药材的正品来源参环毛蚓（Pheretima aspergillum）、通俗环毛蚓（P. vulgaris）、威廉环毛蚓（P. guillelmi）及栉盲环毛蚓（P. pectinifera）与其混淆品种间COI和16SrRNA基因序列均存在较多变异位点。由所构建的N-J系统聚类树图显示所测物种的单系性,即16SrRNA、COI可以很好的将地龙药材区别于其他混伪品。结论 所获得的COI和16SrRNA序列可作为不同状态的地龙类药材物种鉴定的分子依据,并为进一步建立地龙等动物类中药物种真实性鉴定体系奠定了重要的实验基础。     

地龙HPLC指纹图谱分析方法的研究

目的:建立地龙药材指纹图谱的测定方法。方法:采用HPLC法测定地龙药材0.9%生理盐水提取液的指纹图谱。结果:建立了地龙药材HPLC指纹图谱,确定了9个色谱峰为其共有峰。结论:利用地龙药材指纹图谱可以对地龙药材的质量进行全面控制。     

地龙（参环毛蚓）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为保障临床用药的安全性和有效性，建立地龙（参环毛蚓）药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据地龙氧化酶亚基1（COⅠ）基因序列筛选出地龙配方颗粒的稳定引物区间，并根据区间内筛选获得地龙的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据SNP位点设计地龙特异性鉴别引物dlshmy-F及dlshmy-R，分别采集地龙及其混伪品，建立地龙配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系，对该方法进行耐受性和适用性考察。结果 退火温度为62 ℃，循环次数为36次，地龙及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后，可在约170 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带，其他近源伪品如通俗环毛蚓、保宁腔蚓、栉盲环毛蚓等20种伪品及阴性对照均无条带。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法可快速准确的鉴别出地龙药材、配方颗粒、冻干粉中的参环毛蚓源性成分，准确鉴定出全国广地龙中药材及饮片以及地龙的基原，也可为其他的中药配方颗粒质量标准研究提供了参考。     

地龙的研究进展

通过对近年来国内外有关地龙研究文献的整理和分析,总结归纳了地龙的品种鉴定、药材质量控制、化学成分、药理作用及地龙人工养殖的最新研究进展。根据2015年版《中国药典》记载,地龙包括参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓。目前的研究表明,已有很多学者以地龙线粒体中细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)与16S r DNA基因作为DNA条形码进行地龙品种的鉴别,还运用了X射线衍射Fourier谱法及线粒体中12S rRNA基因作为分子标记来鉴定地龙品种,其鉴定方法还需进一步研究。目前已建立起多种地龙药材质量的控制方法,包括地龙HPLC指纹图、高效毛细管电泳特征图谱、酶活性为指标评价地龙药材质量及以灰关联度模型评价地龙药材质量等方法。地龙主要的化学成分包括蛋白质、氨基酸、酶类、脂类、微量元素、核苷酸等化合物,其主要药理作用有平喘降压、解热镇痛、抗凝血、抗血栓、抗肿瘤、增强免疫等。地龙的主要药效成分包括地龙蛋白、酶类、氨基酸、微量元素等,在有的药理作用中具体哪种成分发挥作用及其作用机制尚未明确,还需进一步深入研究。有关地龙的人工养殖鲜有报道,其养殖技术尚未成熟,规范化人工养殖地龙还处于摸索阶段。目前对地龙的研究还不足,使其具有广阔的研究和开发的前景。本文综述了近年来地龙的研究进展,为地龙的进一步研究提供参考依据。     

常用商品麦冬类药材的比较鉴别

目的:比较鉴别常用商品麦冬类药材。方法:采用性状、显微、紫外、薄层等方法对不同来源商品麦冬类药材进行比较鉴别。结果:不同来源商品麦冬类药材在性状、显微、紫外及薄层色谱方面存在显著差异。结论:该结果可用于不同来源商品麦冬类药材的快速鉴别。     

基于AOTF-近红外光谱技术的川贝母药材即时快速鉴别研究

目的探索建立一种针对川贝母药材的即时快速分析方法。方法收集贝母类药材共81批,应用便携式AOTF近红外光谱仪采集其光谱,通过主成分分析法(PCA)分别对贝母类药材、川贝母类药材及商品"松贝"与伪品进行快速鉴别。结果该方法实现了川贝母类药材与非川贝母药材的快速鉴别,能有效区分川贝母类药材,并可快速甄别"松贝"及其混伪品。结论该方法是一种简便、快速、低耗、无损的新型分析技术,能用于川贝母类药材的快速鉴别。     

肺热清解口服液质量标准研究

目的研究肺热清解口服液的质量控制方法。方法采用紫外分光光度法测定肺热清解口服液中总黄酮的含量,采用薄层色谱法对肺热清解口服液中桑白皮进行定性鉴别,采用纸色谱法对肺热清解口服液中的地龙进行定性鉴别。结果总黄酮的浓度在0.00526～0.05260 mg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系(r＝0.9998),平均回收率为98.65%,RSD＝0.28%(n＝6)。桑白皮的薄层色谱在与对照药材色谱相应位置上显相同的斑点,地龙的纸色谱在与氨基酸对照品和地龙对照药材的纸色谱相应位置上显相同的颜色,阴性对照均无干扰。结论本方法简便、准确,可作为控制肺热清解口服液质量的方法之一。     

地龙的多重位点特异性PCR鉴别

目的:近年来,中药材地龙的商品价格不断上涨,市场的混伪品随之增加。其主要鉴别特征在药材中大部分丢失,难以区分。因此,急需建立一种准确、稳定的中药材地龙基原鉴别方法。方法:根据地龙及其混伪品的COI基因序列差异找到变异位点,从而设计参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,优化反应体系并进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上将特异性引物组合,构建多重聚合酶链式反应(PCR)体系,从而建立了一种高效准确、操作简便、专属性强、重复性好的中药材地龙及其常见混伪品的多重位点PCR鉴别方法。结果:在该方法下广地龙基原参环毛蚓可得到366 bp片段,沪地龙基原通俗环毛蚓和威廉环毛蚓可得到487 bp片段,栉盲环毛蚓可得到475 bp片段,其他混伪品均无条带。将之组合形成的多重PCR可在一次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别沪地龙和广地龙。结论:该文所建立的多重位点特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中药材地龙真伪。     

乙酸纤维素薄膜电泳法鉴别十种动物类药材

用乙酸纤维素薄膜电泳法鉴别乌梢蛇、白花蛇、蜈蚣、地龙、竹蜂、海龙、海马、水蛭、蛤蚧、鹿茸,结果表明10种动物类药材的电泳图谱有明显的区别,并具有各自的特征区带。     

地龙配方颗粒的质量标准研究

目的:建立地龙配方颗粒质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)对地龙配方颗粒进行定性鉴别;用高效液相色谱法(HPLC)及高效毛细管电泳法(HPCE)分别对地龙配方颗粒的次黄嘌呤和琥珀酸进行含量测定。结果:TLC中地龙配方颗粒在与氨基酸对照品、地龙对照药材相应位置上,呈相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。地龙配方颗粒的次黄嘌呤含量范围为1.6mg/袋～3.3mg/袋,琥珀酸的含量范围为23.58mg/袋～35.38mg/袋。结论:本实验建立的定性及定量方法简单可行、重复性好,能有效地控制地龙配方颗粒的质量。     

防己类药材鉴别要点

目的由于防己类药材种类不同,功效、主治有别,易引起临床使用混淆。方法经查阅各种文献资料,系统地整理出防己类药材商品名的来源、产地及药材鉴别要点。结果防己类药材来源不同其功效主治有别。结论由于药材性状、显微鉴别特征不同,功效主治各有侧重,望临床甄别使用。     

地龙药材两种采收加工方法的比较

目的 对地龙药材的采收加工方法进行改造，并和药典方法进行比较。方法 用纤维蛋白平板法和TAME法测定两种采收加工方法所得地龙的纤溶活性及单位效价，采用不同干燥条件对地龙进行干燥，并给小鼠灌胃两种地龙提取液，测出最大耐受量。结果 改进新法采收加工地龙药材活性较大，两种采收加工方法的毒性无显著性差异；在日光下暴干省时、质量好、收率高。结论 改进新法采收加工地龙药材与药典方法相比其活性较高，并不增加药材本身的毒性，干燥条件以日光下暴晒为佳。