基于LPS诱导的体外炎症模型建立羊耳菊抗炎活性成分的PK-PD结合模型北大核心CSCD

该文旨在基于脂多糖(LPS)诱导的体外炎症模型建立羊耳菊抗炎活性成分的PK-PD结合模型,以期阐明羊耳菊抗炎活性成分在炎症细胞内的动态变化与其药效消长之间的相互关系。首先采用1μg·mL^(-1)LPS诱导RAW264.7细胞24 h后,建立体外炎症模型。然后比较400μg·mL^(-1)的羊耳菊提取物干预后其含有的木犀草苷(luteolin,LUT)、绿原酸(chlorogenic acid,CA)、隐绿原酸(cryptochlorogenic acid,CCA)、3,4-二咖啡酰基奎宁酸(3,4-dicaffeoylquinic acid,3,4-DCQA)、4,5-二咖啡酰基奎宁酸(4,5-dicaffeoylquinic acid,4,5-DCQA)等5个抗炎活性成分在正常细胞和炎症细胞中的药代动力学。同时取各时间点细胞上清液测定炎症因子NO和TNF-α作为药效研究,与药动学部分通过WinNonlin 8.2软件中的Phoenix Model进行拟合,建立羊耳菊提取物中LUT、CA、CCA、3,4-DCQA、4,5-DCQA等5个成分的整合PK-PD结合模型。结果表明,与正常细胞相比,5个成分在模型细胞中摄取增加或下降,T_(max)提前,吸收变快,MRT、t_(1/2)延长,CL_(z/F)和V_(z/F)有增加或减少的趋势。以NO为药效指标时,羊耳菊中多效应成分整合后的PK-PD模型为E=7.45×[1-Ce^(5.74)/(78.245.74+Ce^(5.74))];以TNF-α为药效指标时,羊耳菊中多效应成分整合后的PK-PD模型为E=79.28×[1-Ce^(6.45)/(85.106.45+Ce^(6.45))]。研究结果提示炎症状态会改变羊耳菊的细胞药代动力学过程,而且羊耳菊活性成分发挥抗炎的作用可能与下调炎症细胞中NO和TNF-α的分泌有关,且NO和TNF-α可能为羊耳菊活性部位作用于炎症相关作用靶点。     

板蓝根不同提取部位抗炎镇痛活性比较研究

目的比较不同板蓝根提取部位的抗炎、镇痛活性。方法采用脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,检测板蓝根不同提取部位对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及前列腺素E2(PGE2)的影响,考察其抗炎活性;采用醋酸扭体法及热水缩尾法2种动物模型考察板蓝根提取物的镇痛活性。结果板蓝根水洗及30%、50%、70%乙醇提取4个部位均具有一定的抗炎、镇痛活性,其中抗炎的有效部位集中在50%、70%乙醇提取部位;镇痛的有效部位集中在水洗部位以及70%乙醇提取部位。结论板蓝根的不同提取部位均具有抗炎、镇痛活性,板蓝根70%乙醇提取部位在抗炎、镇痛活性上均显示出较强的作用,其机制可能与抑制炎性因子PGE2及TNF-α释放有关。     

痹祺胶囊提取物对RAW264.7细胞模型的抗炎作用

目的通过比较研究痹祺胶囊(马钱子、党参、丹参、白术、茯苓、川芎、三七、地龙、甘草、牛膝)不同溶剂提取物的抗炎作用,从而确定最佳提取溶剂。方法 3种溶剂提取痹祺胶囊,水、石油醚、正丁醇的提取物与脂多糖(LPS)刺激小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7共孵,用酶联免疫吸附法(ELISA)、Griess Reagent法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)和一氧化氮(NO)的水平;以实时定量逆转录-聚合酶链式反应(Real-time RT-PCR)检测细胞炎症相关指标白介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α的mRNA表达水平,比较3种提取物的抗炎作用。结果 3种提取物均能显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α,其中水提取物的抑制作用最强,且剂量依赖性最显著。在基因表达水平,只有水提取物对LPS刺激的RAW264.7细胞的IL-6、COX-2、iNOS的mRNA表达有显著抑制作用。结论体外细胞药理学实验结果表明,痹祺胶囊内容物以水、石油醚、正丁醇3种溶剂体系提取得到提取物均具有抗炎作用,但水提取物抗炎作用更显著。     

菊花超临界二氧化碳萃取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的保护作用

目的研究野菊花超临界二氧化碳萃取物(SCFE)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应的保护作用。方法体外培养RAW264.7细胞,LPS(100 ng·m L-1)诱导炎症模型,采用SCFE(75、150、300μg·ml~(-1))进行干预。MTT法测定细胞活性,Griess法测定细胞内一氧化氮(NO)水平,ELISA测定细胞内炎性介质PGE2及细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的表达水平,RT-PCR法测定相关细胞因子和合成酶的m RNA表达。结果与空白对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中NO、PGE_2以及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平(P0.05),而SCFE干预后上述指标均明显降低(P0.05)。SCFE干预组中细胞内一氧化氮合成酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的m RNA表达水平较LPS模型组显著下降(P0.05)。结论 SCFE对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应具有显著保护作用。     

氨基酸转化三七花中稀有人参皂苷及提取液对脂多糖诱导的RAW264.7细胞活性的影响

目的通过添加食品级氨基酸将三七Panaxnotoginseng花中普通人参皂苷转化为稀有人参皂苷,并对转化前后提取物的抗炎活性进行比较。方法应用单因素和正交试验考察了不同氨基酸种类、氨基酸浓度、反应温度、反应时间和液固比对稀有人参皂苷转化的影响,探讨并分析了转化前后三七花提取物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞增殖和抗炎活性的影响。结果天冬氨酸是最佳催化剂,在温度为120℃、天冬氨酸为5%、液固比为30m L/g和反应时间为2h时,4种稀有人参皂苷总转化含量为(47.12±0.52)mg/g。转化前后三七花提取物在1.56~200μg/m L,显著抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞的活性(P<0.05),显著抑制NO和白细胞介素-6(IL-6)的释放(P<0.05)。在质量浓度≥6.250μg/m L时,转化后三七花提取物显著对LPS诱导RAW264.7细胞炎症有更好的抑制作用(P<0.05),NO和IL-6促炎因子的分泌也显著减少(P<0.05)。结论对稀有人参皂苷的转化提供了绿色、安全和高效的转化方法。三七花在转化后对LPS诱导的炎症反应有明显的抑制作用,为三七花的开发利用提供了新思路。     

蘘荷根茎乙醇提取物对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响北大核心CSCD

目的:探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎活性及作用机制。方法:以70%乙醇为溶剂对蘘荷根茎回流提取制得提取物,测定其总酚酸和总黄酮含量,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS)鉴定其化学成分;MTT法测定蘘荷根茎乙醇提取物对RAW264.7细胞和L929细胞存活率的影响;用脂多糖(LPS)对RAW264.7细胞进行诱导建立体外炎症模型,通过NO检测试剂盒、ROS检测试剂盒、ELISA、免疫印迹法检测其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路中一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放量、活性氧(ROS)水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎作用及可能的作用机理。结果:蘘荷根茎乙醇提取物富含酚类成分[(15.07±0.13)mg GAE/g],鉴定出酚类化合物为L-酪氨酸、原儿茶酸、原儿茶醛、4-甲基水杨酸、对羟基安息香醛、咖啡酸、香兰素、对羟基肉桂酸、白果新酸;蘘荷根茎乙醇提取物在31.3、62.5、125、250μg/mL时对RAW264.7和L929细胞的存活率无显著影响;与空白对照组比较,模型对照组NO、IL-6、TNF-α和ROS含量显著升高(P<0.01),iNOS表达、P38、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达明显上调(P<0.05或P<0.01),IκBα和细胞质NF-κB p65的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,蘘荷根茎乙醇提取物31.3、62.5、125、250μg/mL组NO、IL-6的释放量明显降低(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物62.5、125、250μg/mL组ROS水平显著降低,iNOS表达、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达显著下调,细胞质NF-κB p65表达显著上调(P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物125、250μg/mL组IκBα表达明显上调(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物250μg/mL组TNF-α的释放量明显降低和P38的磷酸化表达明显下调(P<0.05)。结论:蘘荷根茎乙醇提取物具有良好的抗炎作用,其抗炎机制可能与抑制LPS诱导的MAPK和NF-κB通路的活化有关。     

卫矛提取物不同组分总黄酮含量及抗氧化抗炎活性评价

目的比较卫矛提取物不同极性组分总黄酮含量及抗氧化抗炎活性。方法 60%乙醇提取卫矛黄酮类化合物,经萃取制得4个不同极性的组分(石油醚组分、乙酸乙酯组分、正丁醇组分、水组分)。采用分光光度法测定各组分的总黄酮含量;通过清除DPPH自由基、ABTS自由基试验和还原力试验,评价各组分的抗氧化活性;利用脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮模型,评价各组分的抗炎活性。结果卫矛提取物总黄酮的含量为(271.25±5.51)mg·g-1,其中乙酸乙酯组分的总黄酮含量最高,为(773.61±12.03)mg·g-1,显著高于总提取物和其他组分(P0.01)。活性评价结果表明卫矛提取物具有良好的抗氧化和抗炎活性,其中乙酸乙酯组分的抗氧化活性最强,乙酸乙酯组分和石油醚组分则具有良好的抗炎活性。结论卫矛的化学成分具有良好的多样性,其作用机制具有多组分、多靶点、多途径的特点,其具体机制有待进一步深入研究。     

紫金龙乙醇组分对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的:研究紫金龙乙醇组分(AVEC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的影响。方法:用脂多糖(10μg·L-1)刺激生长良好的RAW 264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度AVEC对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)含量。结果:AVEC在低于400 mg·L-1时对RAW 264.7细胞无毒性作用。与空白对照组相比,LPS可以明显诱导RAW 264.7细胞分泌炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.01);与模型组相比,100~400 mg·L-1的AVEC可明显下调LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.05,P<0.01),并呈现良好的剂量依赖关系。结论:AVEC可以抑制脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其抗炎作用可能与减少炎症因子TNF-α,IL-6和NO有关。     

倒心盾翅藤抗炎活性部位对马兜铃酸肾病大鼠肾脏的保护作用

目的 筛选倒心盾翅藤抗炎活性成分，考察其对马兜铃酸肾病大鼠肾脏的保护作用。方法 采用CCK-8法评价倒心盾翅藤各个极性部位对RAW264.7细胞的毒性，确定适宜的给药剂量。利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞复制炎症模型，给予药物干预后，Griess法检测NO水平，筛选出具有抗炎活性的部位。采用灌胃关木通水提液的方法复制大鼠马兜铃酸肾病模型，给予不同剂量倒心盾翅藤提取物(相当于生药15、30、60 g/kg)干预后，BCA法检测大鼠24 h尿蛋白量，ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，HE染色观察肾组织病理变化，Western blot法检测肾组织p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 倒心盾翅藤二氯甲烷部位在12.5～200μg/mL质量浓度范围内对RAW264.7未产生细胞毒性。25、50、100μg/mL二氯甲烷部位能抑制LPS诱导RAW264.7细胞释放NO(P<0.05,P<0.01)。倒心盾翅藤二氯甲烷部位各剂量组均降低马兜铃酸肾病大鼠24 h尿蛋白量和血清IL-...     

金莲花不同花部提取物的抗炎活性

目的:研究金莲花花萼、花冠、花蕊群、子房、花柄5个花部提取物的抗炎活性,探讨抗炎活性与其总黄酮含量的相关性。方法:通过LPS诱导的RAW264.7细胞体外炎症模型,采用Griess试剂法测定细胞的NO释放量,考察不同花部提取物的抗炎活性;采用硝酸铝比色法测定各花部提取物的总黄酮含量。结果:金莲花各花部提取物均能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO,抑制率顺序为子房和花蕊群花萼和花柄花冠;各花部提取物的总黄酮含量顺序为花柄花萼花冠子房花蕊群。结论:金莲花各花部提取物均有抗炎作用,且抗炎活性的强弱与其总黄酮含量不成正比。