龙眼肉不同提取物的神经保护作用及其机制

目的:探讨龙眼肉的神经保护作用及其机制。方法:采用Aβ诱导PC12细胞损伤,用龙眼肉不同提取物作用于损伤的PC12细胞,Elisa试剂盒检测SOD、MDA水平,MTT检测细胞增殖;采用H2O2诱导PC12细胞损伤,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡。结果:龙眼肉水提取物和正丁醇提取物能提高Aβ诱导损伤的细胞存活和SOD活力,抑制H2O2诱导损伤的早期细胞凋亡,对MDA含量无明显影响;乙酸乙酯提取物可减少H2O2诱导损伤的各期细胞凋亡及坏死,但对Aβ诱导损伤的细胞存活以及SOD活力和MDA含量无明显影响。结论:龙眼肉具有神经细胞保护作用,但不同提取物作用机制可能不同。     

当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞凋亡的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法 H2O2诱导PC12细胞凋亡,构建氧化损伤神经细胞凋亡模型。实验分为正常对照组、模型组及中药低、中、高剂量组,中药各组给予不同剂量当归红芪超滤膜提取物。流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位变化,Western blot检测Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达。结果与模型组比较,中药各剂量组细胞凋亡率明显降低,线粒体膜电位升高,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达均减弱,Bcl-2表达增强,Bcl-2/Bax比值升高(P0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物具有抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡的作用。     

蒺藜皂苷对H2O2诱导PC12细胞凋亡保护作用及其机制研究

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin of Tribulus terrestris,GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法实验分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.001),凋亡比率下降(P<0.01),线粒体膜电位回升(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞术检测凋亡率,DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平;Rhodamine123染色法检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测胞浆Cyt-C的表达;ELISA法检测caspase-3和caspase-9酶活性。结果 250μmol/L MPP+处理PC12细胞,细胞存活率显著降低,并明显诱导细胞产生凋亡。而经灯盏花素(12.5、25、50μg/L)预处理,有效抑制MPP+诱导的细胞调亡,明显增加PC12细胞存活率,同时使细胞活性氧的增加和线粒体膜电位的降低;并明显抑制胞浆Cyt-C的释放和caspase-3和caspase-9的高表达。结论灯盏花素预处理能明显提高MPP+诱导的PC12细胞损伤的细胞存活率,其机制可能与抑制细胞线粒体凋亡途径有关。     

南葶苈子抑制氧化应激与自噬通路抗H_2O_2诱导的H9c2细胞损伤作用研究

目的探究南葶苈子水提物(DS)对H_2O_2诱导的心肌H9c2细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法使用高效液相色谱与质谱联用方法分析鉴定DS中主要成分峰。采用H_2O_2处理制备H9c2细胞损伤模型,分为对照组、模型组、普罗布考组及DS 100、200、400μg/m L组,MTT法检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞自噬水平、线粒体膜电位;试剂盒检测细胞氧化应激相关指标;Incell-Western法检测凋亡通路关键蛋白和自噬标志性蛋白表达水平。结果共分析鉴定了DS中含量最高的7种成分。与模型组比较,DS可以提高H9c2细胞活力(P0.05、0.01)与细胞存活率(P0.01),改善线粒体膜电位水平(P0.01),调节凋亡通路关键蛋白Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达(P0.01),抑制心肌细胞凋亡;并能极显著降低细胞自噬水平(P0.01),升高自噬标志性蛋白自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、p62表达水平(P0.01),抑制心肌细胞自噬;降低心肌活性氧(ROS)水平(P0.01),调节细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平(P0.01),改善心肌细胞氧化应激。结论 DS可以有效保护由H_2O_2引起的H9c2细胞损伤,其机制可能与改善细胞的氧化应激、抑制细胞凋亡和自噬有关,其物质基础可能与所含的黄酮苷类成分有关。     

通络化痰胶囊对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的:探讨通络化痰胶囊对过氧化氢(H2O2)所致的大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)细胞凋亡的保护作用及机制.方法:PC12细胞常规培养后,首先通过MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和通络化痰胶囊药物浓度的筛选;确定造成PC12细胞损伤的H2O2浓度和通络化痰胶囊的安全作用浓度后,将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组和通络化痰胶囊6.25,12.5,25,50,100mg·L-15个治疗组.用200 μmol· L-1H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞存活率、Hoechst33342荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变、流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率、Western blot 方法检测与细胞凋亡线粒体途径密切相关的蛋白细胞色素C(CytC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的变化.结果:200 μmol· L-1H2O2诱导PC12细胞损伤明显,浓度小于等于100 mg·L-1的通络化痰胶囊浓度对正常PC12细胞的存活率没有抑制作用.与模型组比较,各通络化痰治疗组PC12细胞存活率提高(P＜0.01),凋亡率下降(P＜0.01),Cytc和Caspase-3的表达减少(P＜0.01),其作用与剂量有关.结论:通络化痰胶囊可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关CytC和caspase-3的表达有关.     

金银花对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨金银花水提物对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化损伤模型,以不同浓度金银花水提物(5、25和50μg/ml)进行研究,采用MTT法检测细胞活力,DCFH-DA检测ROS的水平,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫印迹实验检测细胞中Sirt3和凋亡相关蛋白蛋白表达。结果:不同浓度金银花水提物(5、25和50μg/ml)能够抑制H_2O_2诱导的细胞死亡并呈剂量依赖性。H_2O_2组细胞活力和凋亡率较对照组显著增加,给予金银花水提物作用48 h后,明显降低细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量,增加超氧化物歧化酶(SOD)活力,抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡并上调Sirt3、IDH2、Bcl-2蛋白表达,下调Bax、caspase3蛋白表达。结论:金银花水提物能够抑制H_2O_2诱导的PC12细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞凋亡并调控ROS/Sirt3途径有关。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度;增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的。结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

丹参酮ⅡA(TanⅡA)对内皮细胞的氧化损伤及凋亡的影响

目的:观察丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人脐静脉内皮细胞氧化损伤所致凋亡的保护作用机制研究。方法:不同浓度的丹参酮ⅡA预处理细胞24 h再给与4×10-4mol/L H_2O_2处理3 h。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测凋亡,ROS和线粒体膜电位值;高内涵筛选技术检测AIF;Cell Death Detection ELISA试剂盒检测DNA fragment。结果:丹参酮ⅡA(5、10、20×10-6mol/L)可以浓度依赖性的抑制H_2O_2诱导的内皮细胞损伤,TanI IA抑制H_2O_2引起的细胞凋亡降低被升高的ROS值,升高H_2O_2抑制的线粒体膜电位。同时可以抑制H_2O_2诱导的AIF的核转移并且H_2O_2引起的DNA fragment具有减轻作用。结论:丹参酮ⅡA可以减轻H_2O_2诱导的内皮细胞氧化损伤及凋亡,并且主要是通过抑制AIF核内转移实现的。     

银杏叶内酯N对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨银杏内酯N抗谷氨酸诱导大鼠PC12细胞损伤的影响及机制。方法:使用谷氨酸建立PC12细胞损伤模型,给予不同浓度银杏内酯N,并以银杏内酯B为阳性对照。采用MTT比色法测定细胞存活率;采用吖啶橙(AO)染色检测银杏内酯N对PC12凋亡的作用;采用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)、线粒体膜电位的影响,采用Western blot检测Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果:银杏内酯N在2~8μmol/L剂量时,可抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡及ROS的升高,稳定受损PC12细胞的膜电位,降低Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:银杏内酯N能拮抗谷氨酸导致的PC12细胞损伤,其机理与减少ROS的生成,稳定细胞膜电位,抑制Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

四逆汤抗氧化应激性损伤保护心肌细胞机制的探讨

目的:观察四逆汤在乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤过程中的保护效应,探讨四逆汤抗氧化应激性损伤保护心肌细胞的机制.方法:采用H2O2诱导损伤制备SD乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含不同浓度的四逆汤含药血清DMEM培养基培养细胞,应用流式细胞仪检测培养细胞的存活率,用1 m mol/LH2O2处理心肌细胞,分别在处理0.5h,1 h,2 h,4 h和8 h后检测细胞的凋亡率和坏死率,同时检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)和细胞内丙二醛(MDA);对H2O2处理不同时间的心肌细胞线粒体膜电位进行检测.结果:采用含15%四逆汤含药血清的DMEM培养基是心肌细胞生长的合适浓度;四逆汤含药血清能降低细胞培养液中的LDH活性以及细胞内MDA的含量,减少细胞的凋亡率和坏死率;降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度.结论:四逆汤对于H2O2造成的心肌细胞损伤具有保护作用,这种作用与保护线粒体膜电位的稳定有关.     

灯盏细辛对谷氨酸致神经细胞凋亡的影响及其作用机制

目的观察灯盏细辛对谷氨酸致神经细胞凋亡的影响,并探讨其部分作用机制。方法培养PC12细胞,用谷氨酸诱导建立神经细胞损伤模型。应用流式细胞仪观察灯盏细辛对PC12细胞凋亡和细胞内Ca2+浓度的影响,用逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)检测抑凋亡基因Bcl-2的表达,用罗丹明123荧光染色法检测细胞线粒体膜电位(MMP)水平。结果灯盏细辛能够抑制谷氨酸诱导的细胞凋亡,降低细胞内Ca2+浓度,升高线粒体膜电位。结论灯盏细辛可能通过抑制细胞凋亡而起到保护神经元的作用,其作用机制可能与增高线粒体膜电位、减低细胞内Ca2+浓度有关。     

龙血通络胶囊对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:本文探讨过氧化氢(H_2O_2)诱导PC12细胞损伤后,龙血通络胶囊的神经保护作用及其潜在作用机制。方法:以500μmol·L~(-1)H_2O_2构建PC12细胞损伤模型,实验分为空白组,模型组(H_2O_2,500μmol·L~(-1)),龙血通络胶囊组(LTC,1,2,4 mg·L~(-1))。通过细胞增殖毒性检测(CCK-8),胞内活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位水平(JC-1),细胞凋亡率以及蛋白免疫印迹法(Western blot)评价龙血通络胶囊对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。结果:与空白组比较,模型组的细胞存活率显著降低(P0.01),ROS水平显著上升(P0.01),线粒体膜电位水平下降,细胞凋亡率显著升高(P0.01),剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)水平显著上升(P0.01)。与模型组比较,LTC组(1,2,4 mg·L~(-1))能浓度依赖性升高细胞的存活率(P0.01),降低ROS水平(P0.05),维持线粒体膜电位水平,降低细胞的凋亡水平(P0.01),并显著降低PARP蛋白的剪切水平(P0.01)。结论:龙血通络胶囊对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能是通过抑制胞内氧化应激,维持线粒体功能,促进DNA修复等途径进而抑制神经细胞凋亡。     

复方银杏叶颗粒对H_2O_2致H9c2细胞损伤的保护作用

目的观察复方银杏叶颗粒(YXY)对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法采用H2O2建立心肌损伤模型,给予YXY 25、50、100、200μg/m L预处理24 h,MTT法测定细胞生存率,相差显微镜观察细胞形态学改变;试剂盒法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平;共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子浓度及线粒体膜电位。结果 H2O2 500μmol/L作用6 h可显著降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤;YXY预处理可提高细胞生存率,改善损伤细胞形态学改变,减轻LDH、CK外漏,降低细胞上清中MDA、NO水平,增加SOD活性,减少H9c2细胞内ROS生成,降低细胞内钙离子浓度、减轻线粒体膜电位的下降。结论 YXY对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤有保护作用。     

管花肉苁蓉醇提取物对缺氧/缺糖再灌注所致神经细胞损伤的保护作用及机制研究

探究管花肉苁蓉醇提取物(CTEE)对缺氧/缺糖再灌注(OGD/R)所致的PC12细胞损伤的抑制作用及潜在机制。实验以OGD/R诱导PC12细胞作为损伤模型,通过MTT法检测细胞存活率、通过AO/EB与Hoechst 33258染色法考察细胞凋亡、通过JC-1染色法考察线粒体膜电位变化、通过MitoSOX染色法考察线粒体氧化应激反应,通过Western blot法考察凋亡相关蛋白(PARP,cleaved PARP,caspase-3,cleavd caspase-3,Bax,Bcl-2)的表达,研究了CTEE(12. 5,25,50 mg·L-1)对神经细胞的保护作用。结果显示,CTEE可以有效保护OGD/R诱导的PC12细胞损伤,并提高PC12细胞存活率,AO/EB与Hoechst 33258染色法显示CTEE可以有效抑制细胞凋亡。此外,JC-1与MitoSOX染色法显示CTEE可显著降低细胞中线粒体的氧化应激及线粒体膜电位的失调,且呈剂量依赖性。同时,CTEE可明显抑制线粒体凋亡信号通路中关键蛋白caspase-3和PARP的激活,且明显抑制Bax的升高和Bcl-2的下调。以上结果表明,管花肉苁蓉醇提取物对OGD/R所致的PC12细胞损伤具有较好的保护作用,其潜在机制可能是通过抑制线粒体氧化应激及相关凋亡信号通路实现的。     

基于AMPK/Sirt1信号通路研究黔北绿茶水提物对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨黔北绿茶水提物通过AMPK/Sirt1信号通路抗过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定黔北绿茶水提物对过氧化氢诱导的PC12细胞存活率和死亡率的影响,ELISA法检测活性氧(ROS)含量,TUNEL实验检测细胞凋亡情况,罗丹明123荧光染色观察线粒体膜电位的改变,Western-blot法检测相关蛋白表达。结果:不同浓度黔北绿茶水提物(12.5~50μg/ml)能够提高过氧化氢作用的细胞活力并呈浓度依赖性。黔北绿茶水提物(12.5~50μg/ml)作用48 h后能够显著提高细胞线粒体膜电位并上调抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白、p-AMPK、Sirt1蛋白表达,下调促凋亡蛋白Bax、caspase 3蛋白表达。结论:黔北绿茶水提物能够显著抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡,其作用可能与调控AMPK/Sirt1依赖的细胞凋亡途径相关。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的调控作用

目的探索白藜芦醇对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法用200μmol.L-1H2O2作用2 h复制HUVECs损伤模型,白藜芦醇分为3个浓度干预组(13.75,27.5,55μmol.L-1)于损伤前2 h加入;MTT法测定细胞活力,比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的含量,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光染料JC-1标记法检测线粒体膜电位。结果 13.75μmol.L-1白藜芦醇能显著增强H2O2损伤HUVECs后的细胞活力(P<0.05,与H2O2组比较),提高SOD活性(P<0.05,与H2O2组比较)及GSH含量(P<0.05,与H2O2组比较),降低细胞凋亡率(P<0.01,与H2O2组比较),恢复线粒体膜电位;而55μmol.L-1白藜芦醇对H2O2诱导的HUVECs细胞活力降低、细胞内SOD的活性和GSH的含量以及线粒体膜电位的下降无明显影响,但却能进一步促进H2O2诱导的HUVECs凋亡率(P<0.05,与H2O2组比较)。结论白藜芦醇在低浓度时对H2O2诱导的HUVECs凋亡具有抑制作用,而在高浓度时却对凋亡有促进作用。     

芍药苷对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的 探讨芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SYSY细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 MTT法测定细胞存活率;Hoechst 33342染色检测细胞凋亡;罗丹明123(Rho123)染色检测线粒体膜电位(MMP)改变.结果 1.5mmol/L H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,导致SH-SY5Y细胞核形态改变和MMP改变.经过31.25和62.5 μg/ml浓度的芍药苷处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡明显减少,同时减少H2O2引起的MMP改变.结论 芍药苷可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,减少H2O2引起的MMP改变.     

芍药苷对谷氨酸引起的PC12细胞损伤的保护作用

 目的探讨芍药苷对谷氨酸引起PC12细胞损伤的保护作用。方法MTT和测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Fura3/AM为荧光指示剂,用1420 Vector2多标记免疫分析仪研究芍药苷对谷氨酸所致损伤PC12细胞内Ca²⁺的作用,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位。结果芍药苷可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原MTT的能力,抑制该细胞LDH的释放;芍药苷还可抑制兴奋性氨基酸所引起的细胞内Ca²⁺含量的升高;剂量相关性地降低PC12细胞的凋亡百分率。结论芍药苷可抑制谷氨酸诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制细胞内钙超载,稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的:探讨生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:以H2O2处理PC12细胞制作成氧化应激损伤模型,采用MTT法检测生地黄水煎剂对PC12细胞活性的影响,并采用Westen blot法检测PC12体外凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C、caspase3的表达情况。结果:经150μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率明显降低,而经生地黄水煎剂(2.5、5、10mg/m L)预处理后,细胞存活率大致呈浓度依赖增长,并明显抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的高表达,提高Bcl-2/Bax比值。结论:生地黄水煎剂对氧化应激损伤的PC12细胞凋亡具有保护作用,其保护机制是通过抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的表达,并提高Bcl-2表达而实现的。