二陈汤对肺癌A549细胞中黏附分子-1和p38表达的影响

目的研究二陈汤对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的肺癌A549细胞中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和p38表达的影响。方法实验分为空白对照组、二陈汤对照组、TNF-α诱导组、二陈汤干预组、p38阻滞组,并给予相应干预。采用TNF-α诱导肺癌A549细胞产生ICAM-1高表达,以二陈汤含药血清处理ICAM-1高表达的肺癌A549细胞,采用Western blot免疫印迹法测定p38蛋白表达,以PCR法测定ICAM-1 mRNA水平,对二陈汤处理前后的ICAM-1表达水平及p38蛋白表达进行分析。结果二陈汤干预组肺癌A549细胞中血清ICAM-1表达及p38活性与TNF-α诱导组比较显著降低（P〈0.01）。结论在体外实验中,二陈汤有可能通过抑制p38的活性而实现对ICAM-1表达的调控,这可能为二陈汤控制肺癌转移的机制之一。     

α-细辛醚通过Bcl-2途径诱导人肺癌A549细胞凋亡研究

目的:探讨α-细辛醚通过bcl-2途径对人肺癌细胞系A549增殖抑制作用及凋亡诱导作用。方法:人肺癌A549细胞孵育24 h后,分别加入不同剂量α-细辛醚(0.25、0.5、1 mg/ml)作用于A549细胞,继续培养12,24,36,48 h,采用MTT法检测不同浓度α-细辛醚对A549细胞的增殖抑制情况;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达,western blot检测bcl-2和bax蛋白表达水平。结果:随着α-细辛醚剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)的增加,可明显抑制A549细胞的增殖,这种抑制作用具有时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞发生了凋亡;α-细辛醚不同剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)作用48h后bcl-2 mRNA和蛋白表达明显减少,bax mRNA和蛋白表达明显增加。结论:α-细辛醚对人肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;α-细辛醚可通过下调bcl-2表达和上调bax表达而诱导人肺癌A549细胞发生凋亡。     

蛴螬提取物诱导人肺癌A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞增殖的影响及其机制。方法:采用MTT法检测蛴螬提取物对人肺癌A549细胞的生长抑制率;用HE染色方法观测凋亡细胞的形态学变化;运用免疫组织化学SP法检测用药前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达改变。结果:用蛴螬提取物处理的人肺癌A549细胞生长抑制率明显高于对照组;施药早期细胞出现凋亡形态学变化;A549细胞经蛴螬提取物处理后CyclinD1表达均下降。结论:蛴螬提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的增殖抑制作用,其机制与下调CyclinD1的表达有关。     

蝎毒多肽提取物对A549细胞增殖抑制作用机制研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对非小细胞肺癌细胞株A549的增殖抑制作用及可能的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度PESV对A549细胞生长与增殖的影响,下游实验将对数生长期的A549细胞分为阴性对照组、PESV低、中、高剂量组,应用流式细胞术、免疫细胞化学法、Western blot法检测PESV干预后细胞周期及VEGF,HIF-1α和PTEN蛋白表达的变化。结果:MTT结果显示,PESV在一定浓度范围内对A549细胞的增殖活性有明显抑制作用(P<0.01)。流式细胞法、免疫细胞化学法及Western blot法结果显示,PESV干预后能使A549细胞阻滞于G0/G1期,并显著下调HIF-1α,VEGF表达,上调PTEN表达。结论:PESV能够抑制A549细胞的增殖,其作用机制可能与影响血管生成因子VEGF,HIF-1α和PTEN的表达而直接抑制细胞增殖、阻滞细胞周期和抑制血管生成有关。     

葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型PPAR-α及PGC-1表达的影响

目的:观察葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型中PPAR-α及PGC-1表达的影响,探讨其防治脂肪肝的作用机制。方法:建立游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型。用不同浓度葱白提取物进行干预24h后,MTT检测的细胞活性;油红O染色观察细胞内的脂滴;生化细胞内TG、ALT、AST含量;RT-PCR和Western Blotting分别检测细胞内PPAR-α、PGC-1基因的mRNA和蛋白表达。结果:游离脂肪酸诱导24h后,油红O染色显示脂肪变性;模型组TG含量较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);各组转氨酶没有明显变化;同时胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达降低。而葱白提取物各剂量组胞内的TG较模型组显著降低,差异有统计学意(P<0.05,P<0.01),并且胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达显著升高,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:葱白提取物对脂肪变性肝细胞有明显的保护作用,其机制可能与PPAR-α、PGC-1基因表达上调有关。     

二陈汤对CAM-1高表达肺癌A549细胞的影响

目的:研究二陈汤对肺癌细胞CAM-1表达的影响。方法:以TNF-α诱导肺癌A549细胞产生ICAM-1高表达,以二陈汤对CAM-1高表达肺癌A549细胞进行干预。结果:二陈汤可显著降低肺癌A549细胞的ICAM-1高表达。结论:二陈汤可能是通过降低肺癌细胞ICAM-1表达对肺癌发挥治疗作用的。     

葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和PEPCK,G6Pase表达的影响

目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PGC-1α的表达,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组(50 mg·kg~(-1))、转染组、空转组、葱白加转染组。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织组织结构;检测血液流变学及血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;大鼠血浆黏度(低切、中切、高切)、全血黏度均不同程度升高(P 0. 05,P 0. 01);血清ALT,AST,TC,TG水平明显增高(P 0. 05); PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达水平明显降低(P 0. 05);给予葱白提取物干预后,葱白组大鼠肝脂肪变性明显减轻;血清ALT,AST,TC,TG水平均降低(P 0. 05),PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白表达水平升高(P 0. 05)。PGC-1α转染的大鼠,即使给予同等剂量葱白提取物,与模型组比较,葱白加转染组肝脂肪变性未见明显改善;葱白加转染组PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达无明显差异。结论:葱白提取物能够改善NAFLD模型大鼠肝脂肪变性,其机制可能与增加PGC-1α的转录活性,促进PEPCK,G6Pase的表达进而增加线粒体合成有关。     

半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素蛋白表达的影响

目的:研究半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素(survivin)蛋白表达的影响及其作用机制。方法:体外培养(10%胎牛血清、1640培养基)肺癌A549细胞,MTT法观察半枝莲提取物对A549细胞的抑制作用,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学(SP)法检测半枝莲提取物对A549细胞survivin蛋白表达的影响。结果:MTT法结果显示,半枝莲提取物质量浓度5～40 mg·L-1对A549细胞的抑制率呈浓度依赖性(P<0.01)。半枝莲提取物18.86 mg·L-1剂量组凋亡指数为(38.40±7.41)%,对照组为(6.22±0.45)%,两者有显著性差异(P<0.01)。半枝莲提取物组survivin蛋白阳性细胞数明显低于对照组(P<0.01)。结论:半枝莲提取物能明显抑制肺癌A549细胞生长,其机制可能与下调survivin表达有关。     

三氧化二砷联合非诺贝特对人肺癌A549细胞抑制和凋亡的实验研究

目的 探讨三氧化二砷联用过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特对体外培养的人肺癌A549细胞增值和凋亡的影响及可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测三氧化二砷联用非诺贝特对肺癌A549细胞的生长抑制情况.采用Hoechest染色观察三氧化二砷联用非诺贝特对肺癌A549细胞的生长抑制作用,采用光学显微镜观察A549细胞形态学的变化.以流式细胞术检测联合用药对A549细胞的凋亡诱导作用.用RT - PCR法检测联合用药对A549细胞中caspase -3及survivin mRNA的表达变化情况.结果 非诺贝特对肺癌A549细胞有抑制作用,呈现时间剂量关系.三氧化二砷联用非诺贝特的用药组作用肺癌A549细胞48 h后比单用药组的细胞抑制作用要强(P＜0.05).RT - PCR结果提示联合用药组较单用药组上调caspase -3 mRNA的表达,下调survivin mRNA的表达.结论 过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特可以抑制肺癌A549细胞增值,与三氧化二砷联用可以增强对肺癌A549细胞杀伤作用,其机制可能与上调caspase -3的表达和下调survivin的表达相关.     

葛根素对人肺癌A549细胞株迁移与侵袭的作用及分子机制研究

目的:研究葛根素对人肺癌A549细胞株迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:以RPMI1640培养基培养人肺癌A549细胞,分别采用CCk-8法测定不同剂量(0、5、10、20μmol/L)的葛根素处理24、48、72 h后对人肺癌A549细胞体外增殖的影响,采用transwell实验测定葛根素对A549细胞的迁移和侵袭作用,采用ELISA试验检测A549细胞炎性细胞因子IL-6、TNF-α与炎症趋化因子MCP-1、TGF-β的表达量变化情况。结果:葛根素对A549细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度与时间依赖性,24 h后A549细胞的迁移、侵袭率、炎性细胞因子(IL-6、TNF-α)及炎症趋化因子(MCP-1、TGF-β)的表达水平明显下调。结论:葛根素能够抑制人肺癌A549细胞株的迁移及侵袭,可能与其发挥抗炎活性,下调炎症相关因子IL-6、TNF-α、MCP-1、TGF-β表达水平有关。     

丁香茄生物碱对人非小细胞肺癌体外作用及其机制研究

目的研究丁香茄生物碱对人非小细胞肺癌A549抗肿瘤转移作用及其机制。方法采用MTT法检测丁香茄生物碱对非小细胞肺癌A549细胞毒活性;划痕实验和Transwell细胞侵袭实验检测药物对肿瘤细胞体外迁移和侵袭作用的影响;ELISA法检测药物对细胞金属基质蛋白酶2(MMP-2)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)表达的变化。结果丁香茄生物碱可显著抑制肿瘤细胞的增殖(P0.05);抑制A549细胞的迁移和侵袭,高剂量抑制率为63.4%;与对照组比较,丁香茄生物碱组MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论丁香茄生物碱可对人非小细胞肺癌A549增殖,抑制肿瘤细胞侵袭,其作用机制可能与抑制MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。     

傣百解药用部位和非药用部位体外抗肺癌活性对比研究

目的:研究傣百解药用部位根和非药用部位地上部分乙醇提取物不同极性萃取物体外抗肺癌细胞的活性,筛选出傣百解的抗肿瘤活性部位,分析地上部位作为替代药材的可行性。方法:将傣百解地上部位和根干燥粉碎,用95%乙醇回流提取,减压浓缩得到醇提取物;以水分散后,依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到乙酸乙酯部位(A1和B1)、正丁醇部位(A2和B2)和水部位(A3和B3)。采用MTT法测定不同浓度部位对人肺癌细胞A549和H1299增殖的影响。结果:傣百解地上部位和根对两种肺癌细胞株均有一定的细胞毒活性,地上部位的抗肿瘤活性优于根,两个部位中A1和B1萃取物抑制肿瘤细胞增殖活性最强,对A549肿瘤细胞的IC50分别为51.28μg/mL和117.18μg/mL,对H1299肿瘤细胞的IC50分别为63.12μg/mL和95.11μg/mL。结论:傣百解地上部位的抗肿瘤活性优于根,具有替代可行性。     

纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用

目的:研究纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用。方法:采用机械研磨法制备纳米雄黄。以肺癌A549细胞株为靶细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活性,AnnexinV/PI双染色法检测A549细胞的凋亡,流式细胞术检测BAX蛋白和Bcl-2蛋白表达、Caspase-3活性、P53蛋白的表达。结果:纳米雄黄可显著抑制A549细胞的增殖,50μg/mL和100μg/mL的纳米雄黄处理48h后,A549细胞凋亡率显著增高为12.53%和69.19%;20μg/mL和50μg/mL的纳米雄黄作用24h,A549细胞中活性caspase-3由对照的(2.25±0.17)%增高到(3.84±0.63)%和(7.35±0.33)%;P53蛋白表达总体增高但加药48h高剂量组也有所降低;Bax蛋白表达由对照的(79.50±0.50)%增高到(92.45±0.35)%和(96.9±0.00)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(77.85±2.15)%增高到(87.10±10.5)%和(83.1±4.6)%。结论:纳米雄黄可有效诱导肺癌A549细胞发生凋亡。     

葱白提取物诱导PGC-1α活化非酒精性脂肪性肝病大鼠线粒体代谢的研究

[目的]探讨葱白提取物通过诱导过氧化物酶体增殖物受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)活化非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠线粒体代谢的机制。[方法]采用高脂饮食造模,将48只雄性大鼠随机分为空白组、模型组、葱白组、空转组、转染组、转染加葱白组,并运用小干扰RNA技术抑制PGC-1α的表达,实验检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测大鼠肝脏乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-1)mRNA的表达情况,观察肝脏组织病理改变,蛋白质印迹法(Western Blot)验证线粒体合成相关蛋白PGC-1α、核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子A(TFAM)和线粒代谢相关蛋白细胞色素c氧化酶B(COX-B)、细胞色素c氧化酶合成蛋白(SCOX)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)的表达。[结果]与空白组相比,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;葱白提取物可降低TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平(P<0.01),同时ACCase mRNA表达水平降低(P<0.01),CPT-1 mRNA表达水平升高(P<0.01),缓解脂肪肝变性,并上调PGC-1α、NRF-1、TFAM、COX-B、SCOX、MCAD蛋白的表达(P<0.01)。同时,与模型组相比,在转染加葱白组的大鼠中上述检测指标,未见明显变化。[结论]PGC-1α是葱白提取物治疗NAFLD的重要靶点。葱白提取物可通过上调PGC-1α改善NAFLD模型大鼠线粒体功能,维持线粒体呼吸链稳定,从而起到活化线粒体代谢以及改善脂肪肝变性的效果。     

丹参素对非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及相关核转录因子的影响

目的:探讨丹参素(DSS)抗肿瘤作用的分子机制,重点在于是否与其抗氧化作用及改变非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及影响相关核转录因子和信号通路有关。方法:通过体外DPPH自由基清除、高铁还原、亚铁螯合实验和DCFH-DA荧光探针标记ROS,检测DSS的抗氧化活性及对A549细胞内ROS水平的影响;采用MTT法测定DSS对A549细胞增殖能力的时效与量效关系;采用Western blot技术检测DSS对A549细胞内缺氧诱导因子HIF-1α及氧化还原调节转录因子Nrf2蛋白表达的影响,以及上游Akt,ERK1/2 MAPK信号磷酸化水平的影响。结果:DSS能够剂量依赖性降低A549细胞内ROS水平,与其较强的自由基清除和抗氧化活性有关;DSS能以时间和剂量依赖性的方式抑制A549细胞生长,进一步机制研究发现,DSS能降低Nrf2表达,与抑制Akt以及ERK1/2的磷酸化水平有关,但对HIF-1α的表达没有影响。结论:DSS具有治疗非小细胞肺癌的作用,机制在于通过清除ROS进而抑制Akt,ERK1/2的磷酸化而下调Nrf2的表达并最终抑制A549细胞的生长。     

三叶青提取物对肺癌A549细胞的体外抑制作用

目的:探讨三叶青提取物对肺癌细胞A549的体外抑制作用。方法:采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物对肺癌细胞A549体外抑制作用的时效、量效关系;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR法检测细胞凋亡相关基因BcL-2的表达。结果:三叶青提取物以1×10-3g·L-1的浓度与A549细胞共培养48 h,其细胞活性有显著降低;不同浓度的三叶青提取物和A549细胞共同培养,药物浓度为1×10-2、1×10-31、×10-4g·L-1的三叶青提取物对A549细胞活性有显著性抑制作用。琼脂糖凝胶电泳有明显的梯状条带;不同浓度三叶青提取物作用于A549细胞后,细胞BcL-2基因的表达随浓度的增加而降低。结论:三叶青提取物对A549细胞具有明显的体外抑制作用,其抑制作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及其机制

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用及对多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响.方法 MTT法测定白花蛇舌草乙醇提取物对A549/DDP细胞耐药的逆转作用;半定量RT-PCR和WesternBlot分别检测肿瘤细胞MRP mRNA和蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物使A549/DDP细胞对DDP的耐药倍数由10.294下降至5.586;并显著降低A549/DDPMRPmRNA和蛋白的表达.结论 白花蛇舌草乙醇提取物可以部分逆转肺腺癌A549/DDP细胞对DDP的耐药;其逆转作用可能通过降低细胞MRP的表达来实现.     

黄芪-莪术协同作用调节SIRT3/HIF-1α通路对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响

目的 观察黄芪-莪术药对通过调节SIRT3/HIF-1α信号通路对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及侵袭和迁移能力的影响。方法 复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,观察黄芪-莪术不同配比（1:1、2:1、3:1）干预14 d后对移植瘤重和肺转移的影响,计算抑瘤率,以抑瘤率优选黄芪-莪术配比;体外培养人肺腺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度黄芪-莪术提取物对A549细胞增殖的抑制作用,筛选其最佳给药浓度和作用时间,流式细胞仪检测A549细胞凋亡率,细胞划痕实验和Transwell实验检测A549细胞移动性及侵袭能力变化,Western-blot检测侵袭相关蛋白（COX-2、CD44v6、MMP-9）的表达水平,Western-blot及RT-PCR检测SIRT3/HIF-1α通路蛋白和mRNA表达。结果 黄芪-莪术不同配比干预后,小鼠瘤重和肺转移灶数明显减少（P <0.05）,其中3:1配比抑瘤作用最显著（P <0.05）;黄芪-莪术提取物0.4～0.8 mg/mL干预48 h对A549细胞增殖的抑制作用明显,应用0.4、0.6、0.8 mg/mL浓度处理...     

血三七醋酸乙酯提取物促进肺癌细胞凋亡的调控机制研究

目的研究血三七Polygonum amplexicaule var. sinense醋酸乙酯提取物(EAEP)对人肺癌A549和H1299细胞凋亡的影响及其机制。方法通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒及流式细胞术检测EAEP对A549和H1299细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westernblotting法检测EAEP对A549和H1299细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果 EAEP能显著促进A549和H1299细胞凋亡;显著提高促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA表达水平,降低抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达水平;显著提高Bax蛋白表达水平,降低Bcl-2蛋白表达水平。结论 EAEP能通过促进Bax的表达和抑制Bcl-2的表达诱导肺癌细胞凋亡。     

云南10种花的抗肿瘤活性研究

目的:探索云南花朵的抗肿瘤活性。方法:花朵烘干后磨成粉末,用乙醇提取后浓缩得花朵提取物。将体外培养的肿瘤细胞分成对照组和试验组,每组设6个复孔。用MTS法测试花朵提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用。将有对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖有较好抑制作用的花朵提取物进一步进行肿瘤活性测试。将该花朵提取物分为不同浓度,测试其对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制活性。结果:在采集来的10种花朵中,葱莲对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有较好的抑制活性,抑制率(43.07±4.52%)与阳性对照药物(47.62±3.24%)接近。进一步研究发现,葱莲对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞均有抑制活性,并且呈剂量效应关系。结论:葱莲花朵提取物具有较好的抗肿瘤应用前景。