应用UPLC-Orbitrap-MS分析草乌及其不同炮制品化学成分差异

草乌是有毒药之一,需经过炮制后方能使用。中药中草乌常用的炮制方法为水煮至内无白心,口尝微有麻舌感,蒙古族药中常用诃子制草乌,2种方法均能减毒。该实验利用UPLC-Orbitrap-MS对生草乌、药典法制草乌、诃子制草乌进行分析,比较炮制前后化学成分变化,为阐明诃子制草乌炮制减毒原理提供依据。通过比对生草乌与各炮制品的正负离子模式离子流出峰分析草乌炮制前后成分变化情况,并以化合物炮制前后离子峰面积比为炮制前后变化指数,将草乌主要活性成分经2种炮制方法炮制后的含量变化趋势进行对比,发现生草乌经药典法炮制后,新增14-O-anisoylneoline,dehydro-mesaconitine等14种成分,同时N-demethyl-mesaconitine,aconitine消失,且双酯型生物碱含量明显减少,单酯型和醇胺型生物碱含量明显增加,说明药典法制草乌是通过降低主要毒性成分双酯型生物碱的含量来减毒的;草乌经诃子汤炮制后,原草乌中含有的生物碱类化学成分变化较小,新增gallic acid,chebulic acid,shikimic acid等9种诃子中含有的化学成分,猜测诃子制草乌的减毒机制可能与诃子中化学成分有关。该研究结论表明药典法制草乌与诃子制草乌中化学成分有质的不同,二者具有不同的减毒原理。     

草乌炮制方法的研究

本文介绍用润蒸、润煮两种新方法炮制草乌,总生物碱含量比药典法高2.56倍和2.88倍。经高效液相色谱法测定,主要毒性成份双酯型生物碱含量几乎同样大幅度下降。小鼠急性毒性试验初步证明是安全的。     

蒙药草乌人工尿炮制的初步研究

本文采用童便和人工尿炮制草乌，用《中国药典》法测定草乌生物碱含量，并测定其ＬＤ５０，试验结果，童便和人工尿炮制草乌的毒性均明显降低。     

醋的种类对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的：探讨醋的种类对醋制草乌生物碱类成分的影响,为筛选炮制辅料用醋提供依据。方法：采用不同类型的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较采用不同类型的醋制备的草乌炮制品中生物碱的含量差异。结果：各炮制品中双酯型生物碱的含量：生草乌〉食用乙酸制草乌〉工业乙酸制草乌〉陈醋制草乌≈龙门米醋制草乌〉玫瑰醋制草乌〉药典法制草乌;单酯型生物碱的含量：药典法制草乌〉食用乙酸制草乌〉龙门米醋制草乌≈工业乙酸制草乌〉陈醋制草乌≈玫瑰醋制草乌〉生草乌。结论：醋制草乌可以达到炮制减毒的效果,食用醋比乙酸的减毒效果更佳。     

醋的用量对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的：探讨醋的用量对醋制草乌生物碱类成分的影响。方法：采用不同用量的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较生草乌、药典法制草乌、不同用量醋制草乌中生物碱的含量差异。结果：醋制草乌可以使双酯型生物碱水解,生物碱含量的变化与醋的用量有一定相关性;醋制草乌中单酯型生物碱的含量明显高于药典法制草乌。结论：醋制草乌可以作为一种新的草乌炮制方法,但应减少临床用量。     

蒙医对草乌炮制的历史沿革与发展现状

草乌为毛茛科植物北乌头(Aconitum kusnezoffii Reichb)的干燥块根,属蒙医常用药材,草乌有大毒,尤以双酯型二萜类生物碱乌头碱(Aconigne)、中乌头碱(Mesaconlfine)、次乌头碱(Hypaconitine)的毒性最强.有强心作用,中毒时出现心率不齐,呼吸麻痹而死亡.蒙医炮制草乌的目的是降低毒性和增强药效.相关古代文献材料中可以看出,蒙医方剂中,草乌一般生用,与大量的诃子配伍使用或以童尿调和,且多数内服方剂中都是草乌和诃子同时入伍,且很多情况下先后排列.随着蒙医药事业的不断发展,蒙医对草乌的炮制也在蒙医自身的实践以及受国内和国际上对草乌的炮制的研究而不断的发展.其炮制方法有其蒙医理论与民族和地区特点,汇总各地炮制方法有诃子水制草乌、干草水制草乌、童尿制草乌、酸奶制草乌、盐水制草乌、清水制草乌、高压蒸草乌、去尖刮皮炮制等.不少学者对用诃子汤炮制草乌,进行深入研究,探索其炮制原理,证明蒙医用诃子炮制草乌以降低毒性足科学的.并且据有关资料显示,对草乌的化学成分、毒性及炮制、药理作用以及作用机理、毒理学等方面的国内外研究颇多.应该充分借鉴和吸收兄弟民族医学及现代医学的研究成果,深入研究草乌,让草乌这一用途厂泛、疗效确切的天然蒙药更充分的服务于人类的健康保健,从而促进蒙医药的发展进程.     

产业化生产中草乌不同炮制品的“减毒-存效”研究

研究产业化生产中草乌不同炮制品的毒性和药效的相关性,确定"减毒-存效"的最佳炮制方法。采用HPLC测定草乌及其不同炮制品中6种乌头碱类生物碱的含量;采用Bliss法分别测定草乌及其不同炮制品对小鼠半数致死量(LD50)或最大给药剂量;以二甲苯致耳肿胀法和醋酸扭体法试验考察不同炮制品的抗炎、镇痛作用。结果显示:①草乌生品中3种双酯型生物碱总量为0.358 8%;药典水煮法炮制品中3种双酯型生物碱总量为0.002 2%,3种单酯型生物碱总量为0.036 2%;常压蒸制法炮制品中3种双酯型生物碱总量为0.006 0%,3种单酯型生物碱总量为0.056 7%;②生草乌的LD50为5.4 g·kg^-1,药典水煮法和常压蒸制法炮制品的最大给药剂量为133.34 g·kg^-1;病理观察显示,与正常组比较,2种炮制品对于小鼠的心、肝、肾均有一定的损伤;③药典水煮法和常压蒸制法炮制品均具有抗炎、镇痛作用(P<0.01或P<0.05),其抗炎镇痛作用强弱为:常压蒸制法>药典水煮法。上述结果提示:生草乌毒性较大,采用常压蒸制法炮制后毒性明显降低,同时又保留了良好的的抗炎和镇痛作用;与药典水煮法相比,常压蒸制法具有工艺可操作性强、饮片质量稳定、抗炎镇痛作用更强等优势,适用于产业化生产。     

草乌炮制工艺研究

通过生品，药典法，江西法炮制草乌所含总成生物碱与毒性生物碱的比较，提出江西法炮制草乌的特点。     

蒙药诃子汤制草乌总生物碱对乳大鼠心肌细胞的毒性作用研究

目的 探讨蒙药诃子汤炮制草乌总生物碱对心肌细胞的毒性作用.方法 制备乳大鼠原代心肌细胞,胎盘蓝染色法检测心肌细胞存活率,免疫组织化学染色法鉴定心肌细胞.制备的原代细胞培养3-4d,分别加入诃子汤制草乌、生草乌总生物碱0.5、0.25、0.125、0.0625 mg/mL培养30、60 min,MTT法检测心肌细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,Hoechst33528荧光染色法检测细胞核凋亡率.结果 诃子汤制草乌总生物碱、生草乌总生物碱在与心肌细胞共同孵育30 min、60 min时均能降低心肌细胞活力,细胞LDH漏出率增加,发生细胞凋亡;诃子汤制草乌总生物碱所致的心肌细胞毒性作用弱于生草乌总生物碱.结论 经诃子汤炮制的草乌总生物碱对心肌细胞的毒性作用明显低于生草乌总生物碱,表明采用诃子汤炮制确能降低草乌的心肌毒性.     

草乌炮制新工艺的研究

本文研究了草乌润后加压蒸或常压蒸的炮制新工艺,其总生物碱的含量均高于药典法炮制品,而毒性成分酯型生物碱的下降幅度接近药典法炮制品,从化学成分的角度阐明了草乌炮制新工艺的优越性,认为采用115℃、0.5 kg/cm~2藻2h和蒸4h的方法为佳。     

蒙药炮制草乌中生物碱含量的变化

本文采用滴定法测定了不同炮制方法制得的制草乌总生物碱含量,用反相HPLC法测定几种剧毒性双酯类生物碱含量,探讨了不同炮制方法对草乌中生物碱含量变化的影响。     

诃子中的鞣质成分对诃子汤制草乌的影响 ——诃子制草乌炮制原理探讨Ⅰ

目的:探讨诃子中的鞣质成分对诃子汤制草乌中生物碱类成分的影响,解析蒙药诃子制草乌的炮制原理。方法:采用HPLC测定诃子汤制草乌、清水制草乌、去鞣诃子汤制草乌中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱以及苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱的含量。结果:各炮制品中双酯型生物碱的含量:诃子汤制草乌(0.692 5%)>清水制草乌(0.565 7%)>去鞣诃子汤制草乌(0.493 8%);单酯型生物碱的含量:诃子汤制草乌(0.110 1%)>去鞣诃子汤制草乌(0.0833%)>清水制草乌(0.076 8%)。结论:鞣质可抑制生物碱类成分的溶出,使其缓慢水解进而达到降低毒性的作用。     

蒙药草乌炮制的研究

对诃子炮制的草乌进行对比实验,结果剧毒性生物碱含量相近,用提取液给药进行动物实验,毒性相似,而直接口服给药测定LD_(50)则诃子制草乌毒性明显降低。     

正交实验探讨爆压法炮制马钱子的最佳条件

目的：优化选择爆压法炮制马钱子的最佳条件。方法：用正交设计对爆压法炮制马钱子的工艺进行研究。结果：加热5min,气压达152kPa,马钱子中士的宁的含量均可达砂炮制的效果,符合《中国药典》炮制马钱子的标准。结论：筛选的爆压法炮制工艺,能确保马钱子炮制品的临床用药安全和疗效。     

巴戟天炮制前后微量元素的含量变化研究

目的:测定经不同加工炮制后巴戟天饮片中Fe、Cu、Mn、Zn、Cd等微量元素的含量,并进行比较,分析加工炮制方法对其微量元素含量的影响。方法:采用原子吸收分光光度法,其中Fe、Cu、Mn、Zn用火焰法,Cd用石墨炉法,测定生巴戟天、巴戟肉、盐制巴戟天、甘草制巴戟天炮制后微量元素含量。结果:巴戟肉中各微量元素含量均比生巴戟天高,经过盐制和甘草制后的巴戟肉微量元素含量比蒸制过的巴戟肉低。结论:不同炮制方法会引起巴戟天微量元素含量产生变化,可以为进一步研究巴戟天的炮制机理提供参考数据。     

复合辅料炮制何首乌对二苯乙烯苷和游离蒽醌的影响

目的:研究不同复合辅料对何首乌有效成分二苯乙烯苷和游离蒽醌含量的影响,为选择何首乌炮制辅料提供依据。方法:分别采用4种复合辅料炮制何首乌,用高效液相色谱法测定二苯乙烯苷和游离蒽醌的含量。结果:各炮制品中二苯乙烯苷含量均高于《中国药典》2015年版中的要求,游离蒽醌含量均未达到《中国药典》2015年版中的要求;其中,采用黑豆汁生姜汁炮制的二苯乙烯苷和游离蒽醌的含量最高,分别是6.19%和0.04%;另外,二苯乙烯苷和游离蒽醌含量最低的分别是用黑豆汁米泔水制和用黑豆汁熟地汁制的。结论:不同复合辅料对何首乌成分二苯乙烯苷和游离蒽醌的影响不同。     

爆压法对马钱子总生物碱的影响及急性毒性试验研究

目的:观察爆压法对马钱子的总生物碱含量和急性毒性的影响.方法:采用溶剂提取法提取总生物碱并测定其含量,用薄层层析对总生物碱中士的宁和马钱子碱进行定性分析,并通过小白鼠灌胃给药测定爆压品和生品的LD50.结果:马钱子经爆压法和砂烫法炮制后,总生物碱的含量下降甚微,与生品比较仍达92%～95.6%,而爆压法与生品急性毒性比较下降了38.3%(P＜0.01).结论:爆压法既能显著降低马钱子毒性,又能保证其效价不会明显下降.     

太原地区使用制川,草乌饮片中酯型生物碱的含量测定

依《药典》法对太原地区5个医院所售的制川、草乌饮片进行了酯型生物碱的含量测定。结果表明:制川乌含量为0.022％～0.112％,制草乌含量为0.030％～0.124％,均未超过药典的0.15％限量。     

草乌不同炮制方法与急性毒性的相关性研究

目的:研究草乌的炮制方法与毒性的相关性。方法:根据草乌的急性毒性预实验做最大耐受量或药物半数致死量的实验。结果:高压蒸制方法炮制的草乌毒性最小。结论:诃子制草乌(方法二)毒性最小。     

十地区制川,草乌饮片质量分析

依《药典》法对六省市十地区市售制川、草乌饮片进行质量分析表明,制川乌总碱含量为0.1634～0.9627%,制草乌总碱含量为0.2000～0.7678%.制草乌双酯型生物碱太多高出《药典》规定限量,毒性偏高.制川、草乌饮片的经验鉴别与其内在质量不成平行关系.