温阳解毒化瘀颗粒对肝衰竭肠源性内毒素血症大鼠TLR4、NF-κB 表达的影响

目的：研究温阳解毒化瘀颗粒对肝衰竭肠源性内毒素血症（IETM）大鼠Toll 样受体4（TLR4）、核因子-κB（NF-κB）表达的影响,探索其抗肝衰竭的作用机制。方法：取SD 大鼠85 只,随机分为正常组、模型组、对照组和温阳解毒化瘀颗粒（实验组）,采用D-半乳糖胺腹腔注射建立肝衰竭IETM 模型。观察72 h内各组大鼠死亡率,检测血清转氨酶（ALT、AST）和门静脉内毒素水平,HE 染色观察肝组织病理变化,免疫组化检测肝组织TLR4、NF-κB 的表达。结果：与正常组比较,模型组血清转氨酶（ALT、AST）和内毒素水平均显著升高（P<0.01）,肝组织病理损伤程度明显加重,TLR4、NF-κB 表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,实验组血清转氨酶（ALT、AST）和内毒素水平均显著降低（P<0.01）,肝组织病理损伤程度显著改善,TLR4、NF-κB 表达明显下降（P<0.01）。结论：温阳解毒化瘀颗粒对肝衰竭具有较好的防治作用,下调肝脏TLR4、NF-κB 表达,降低内毒素水平,是其抗肝衰竭的作用机制之一。     

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠TOLL样受体表达与炎性细胞因子关系的研究

目的:探讨解毒化瘀颗粒对D-氨基半乳糖(D-Gal N)联合脂多糖(LPS)诱导的急性肝衰竭大鼠肝组织Toll样受体表达与炎性细胞因子的关系,并探讨其相关作用机制。方法:将120只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、解毒化瘀颗粒组和阳性(内毒素拮抗剂E5531)组,各30只。除空白组,其余各组均采用一次性腹内联合注射D-Gal N和LPS诱导肝衰竭模型。造模完成后观察各组存活率,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),内毒素的含量,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测肝组织Toll样受体2(TLR2),TLR4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western-blot)法检测肝组织白细胞介素-2(IL-2),IL-6,IL-10的蛋白含量,并用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肝组织病理情况。结果:(1)与模型组比较,解毒化瘀颗粒组及E5531组均能提高肝衰竭大鼠48 h存活率(均P0.01);(2)模型组大鼠血清AST,ALT及内毒素水平均高于空白组(均P0.01),解毒化瘀颗粒组和E5531组AST,ALT及内毒素水平均较模型组显著降低(均P0.01);(3)解毒化瘀颗粒组和E5531组TLR2,TLR4,TNF-αmRNA表达较模型组明显降低(均P0.01);(4)与模型组比较,解毒化瘀颗粒组和E5531组IL-2,IL-6的表达降低(均P0.01),但两组间比较差异无统计学意义,模型组IL-10表达减少(P0.01),但不受E5531和中药的影响;(5)Spearman’s相关分析提示肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达水平与TNF-αmRNA,IL2,IL-6水平呈正相关(均P0.05);而与IL-10的水平均无相关性;(6)与模型组比较,解毒化瘀颗粒可以显著改善肝组织坏死和炎性细胞浸润,更优于E5531。结论:TLR2,TLR4可能通过启动下游的炎性因子基因表达及细胞因子释放而参与了D-Gal N联合LPS诱导的急性肝衰竭,而调控TLR2及TLR4表达可能是肝衰竭治疗的新方向以及解毒化瘀颗粒拮抗肝衰竭的机制。     

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠肝组织TLR2、TLR4和TNF-α mRNA表达的影响

目的:探讨解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭(ALF)大鼠Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)及细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达的影响及其拮抗肝衰竭的机制。方法:将120只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、中药组和阳性对照组,各30只。一次性腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)/脂多糖(LPS)构建急性肝衰竭大鼠模型。观察各组大鼠存活率,检测各组大鼠血清ALT、AST水平,RT-PCR法检测肝组织中TLR2、TLR4和TNF-αmRNA的表达。结果:(1)与模型对照组比较,中药组及阳性对照组均能提高肝衰竭大鼠48 h的存活率(均P0.05),虽然中药组48 h存活率高于阳性对照组,但差异无统计学意义(P=0.464);(2)模型对照组大鼠血清AST、ALT水平均高于空白对照组(均P=0.000),中药组和阳性对照组均低于模型对照组(均P0.000),虽中药组与阳性对照组AST、ALT比较差异无统计学意义(均P0.05);(3)RT-PCR结果显示,中药组和阳性对照组TLR2、TLR4、TNF-αmRNA表达较模型对照组明显降低(均P=0.000),与阳性对照组比较,中药组TLR2、TLR4、TNF-αmRNA表达差异无统计学意义(均P0.05)。结论:解毒化瘀颗粒可通过降低TLR2、TLR4、TNF-αmRNA的表达,从而降低促炎因子的生成、提高肝衰竭大鼠存活率和拮抗肝衰竭。     

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞FLIP蛋白表达影响的研究

目的:探讨解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡及凋亡抑制蛋白FLIP的影响,进而揭示其治疗肝衰竭的分子机制。方法:将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化瘀颗粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,用D-GalN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型,观察各组小鼠存活率;HE染色法和TUNEL法观察肝组织的病理变化及检测肝细胞凋亡情况;免疫组化法检测FLIP蛋白在肝组织中表达。结果:成模后48h存活率解毒化瘀颗粒组高于其他药物组;肝组织HE染色镜下所见的坏死细胞以点状坏死为主,程度比模型组及其它药物干预组轻微;TUNEL法检测结果显示:解毒化瘀颗粒组肝细胞凋亡指数明显减少,与其余药物干预组及模型组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05);免疫组织化学染色结果显示:凋亡抑制蛋白FLIP在解毒化瘀颗粒组肝组织中表达量明显升高,而在其他药物干预组及模型组中则呈低表达(P<0.01或P<0.05)。结论:解毒化瘀颗粒能上调内毒素肝衰竭模型肝细胞浆中FLIP的表达,并发挥抑制凋亡效应。提示阻断FADD凋亡信号传递,有可能是解毒化瘀颗粒防治急性肝衰竭的机制之一。     

FADD蛋白在急性肝衰竭小鼠肝细胞中的表达

目的探讨解毒化瘀颗粒对抑制急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡及凋亡蛋白FADD的影响,进而揭示其治疗肝衰竭的机制。方法将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化瘀颗粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,用D-GalN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型,观察各组小鼠存活率;应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡的情况;应用免疫组化法和图像分析技术检测肝细胞FADD蛋白的表达。结果成模后48 h存活率解毒化瘀颗粒组高于其他药物组;TUNEL法检测结果显示:解毒化瘀颗粒组肝细胞凋亡指数明显减少,与其余药物干预组及模型组比较均有显著性差异(P<0.01或0.05);免疫组织化学染色结果显示:促凋亡因子FADD蛋白在解毒化瘀颗粒组肝组织中表达量低,而在其他药物干预组及模型组中则呈现高表达,有显著性差异(P<0.01或0.05)。结论解毒化瘀颗粒可通过下调内毒素肝衰竭模型中肝细胞FADD蛋白表达,并发挥其抑制凋亡效应,进而拮抗肝衰竭。     

解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白及TBIL的影响

目的:探讨解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)蛋白及总胆红素(TBIL)的影响。方法:将96只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型对照组、解毒化瘀Ⅱ方组,采用D-GalN+LPS联合制备大鼠急性肝衰竭模型,Western blot检测肝组织TLR4蛋白表达,并对TBIL含量进行测定。结果:急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4与血清中TBIL表达显著增强,解毒化瘀Ⅱ方能明显降低肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白及血清TBIL的表达,与模型对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论:解毒化瘀Ⅱ方能降低急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白表达及血清中TBIL水平,对肝细胞有一定的保护作用。     

解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响

目的观察解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响。方法采用对乙酰氨基酚灌胃制作大鼠肝损伤模型。将实验大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组和解毒护肝方高、中、低剂量组,各给药组给予相应药液灌胃,正常组和模型组给予生理盐水灌胃。生化分析仪检测血清AST、ALT活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)含量;RT-PCR和Western blot分别检测肝组织JNK2基因和蛋白的表达;酶标仪检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;免疫组化染色观察Toll样受体3(TLR3)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠ALT、AST、DBIL、TNF-α水平显著升高(P0.01),JNK2 mRNA和p-JNK2、TLR3蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,解毒护肝方中、低剂量组大鼠AST、ALT活性显著降低(P0.05,P0.01),解毒护肝方低剂量组大鼠DBIL含量显著降低(P0.05),解毒护肝方高剂量组大鼠TNF-α含量显著降低(P0.01),解毒护肝方高、中剂量组大鼠JNK mRNA和TLR3蛋白表达均显著下调(P0.05,P0.01),p-JNK2蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠有明显的保护作用,以中、低剂量组效果最为明显,其机制可能与调控TLR3/TNF-α/JNK2信号通路有关。     

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠Fas相关死亡结构域蛋白表达的影响

目的：通过急性肝衰竭动物模型研究解毒化瘀颗粒对肝细胞凋亡的影响。方法：使用D-GalN联合LPS一次性腹腔注射制备急性肝衰竭的小鼠模型,观察解毒化瘀颗粒干预后小鼠肝细胞凋亡（TUNEL法）的情况以及FADDmRNA（SYBR荧光实时定量PCR法）的表达。结果：解毒化瘀颗粒组干预后肝细胞凋亡指数减少,与模型组及各药物干预组比较,差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。FADD在解毒化瘀颗粒组肝组织中表达量低,而在其他药物干预组及模型组中则差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）,含量明显升高。结论：解毒化瘀颗粒能提高肝衰竭小鼠的存活率,通过降低急性肝衰竭肝细胞的FADD表达拮抗凋亡效应是其主要作用机制。     

解毒化瘀方下调TLR4拮抗脂多糖/D-半乳糖胺诱导的大鼠暴发性肝衰竭

目的研究解毒化瘀方对脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)/D-半乳糖胺(D-galactosamine, D-GaIN)诱导大鼠急性肝衰竭(fulminant hepatic failure, FHF)的保护作用及其分子机制。方法 Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、中药组和阳性对照组。除空白对照组外,其余三组采用一次性大鼠腹腔内注射D-Gal和LPS建立FHF模型;空白对照组每天正常喂食无处理;模型组每天正常饲喂,并给予蒸馏水;阳性对照组于造模前5天给予E5531;中药组于造模前5天给予解毒化瘀方直至造模后8h。分别观察各组48h大鼠生存率,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、苏木精-伊红染色法(HE染色)、原位末端标记法(transferase-mediated deoxyuridine)triphosphatenick-end labeling,TUNEL)评价肝脏组织病理损伤程度和凋亡;Western-blot检测肝脏Toll样受体4 (Toll like)receptor?4,TLR4)的表达。结果①与模型对照组比较,中药组及阳性对照组均能显著提高LPS/D-GaIN诱导的大鼠生存率,下调血清ALT、AST水平以及肝组织TLR4及TNF-α的表达(P0.01),且中药组与阳性对照组之间比较差异无统计学意义(P0.05);②HE染色显示,与模型对照组比较,中药组及阳性对照组显著减轻大鼠肝脏坏死面积、组织结构破坏及出血程度;TUNEL染色表明,与模型对照组AI比较,中药组和阳性对照组AI值显著降低(P0.05),而中药组和阳性对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论解毒化瘀方对脂多糖/D-半乳糖胺诱导的大鼠暴发性肝衰竭具有保护作用,这种保护作用可能与下调肝细胞TLR4的表达,从而减少TNF-α的生成有关。     

解毒化淤颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞Caspase-3mRNA表达的影响

目的 探讨解毒化瘀颗粒抑制急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的作用及可能的机制.方法 将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化淤颗粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,用D-GalN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型,观察各组小鼠存活率,SYBR荧光实时定量PCR法检测肝细胞内天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3 mRNA)的表达.结果 成模后48 h存活率解毒化淤颗粒组高于其他药物组;促凋亡因子Caspase-3在解毒化淤颗粒组肝组织中表达量低,而在其他药物干预组及模型组中则高表达.结论 急性肝衰竭中Caspase-3表达与肝细胞凋亡程度有相关性,解毒化淤颗粒能下调内毒素肝损伤肝细胞Caspase-3表达并抑制其凋亡效应,降低肝衰竭小鼠死亡率,提示解毒化淤颗粒抑制肝细胞凋亡有可能是其防治急性肝衰竭的机制之一.     

解毒化瘀颗粒调控急性肝衰竭大鼠肝细胞Cadd45a表达的实验研究

目的探索解毒化瘀颗粒是否对急性肝衰竭大鼠肝细胞Cadd45a表达具有调控作用。方法以LPS联合D氨基半乳糖构建急性肝衰竭大鼠模型,解毒化瘀颗粒干预治疗,成模后24h处死各组大鼠,分离肝细胞,Western Bolt和实时荧光定量PCR检测肝细胞Gadd45a蛋白和mRNA表达。结果急性肝衰竭大鼠肝细胞Gadd45a蛋白和mRNA表达明显增高(与空白组比较,P0.05),而解毒化瘀颗粒可下调Gadd45a蛋白和mRNA表达(与模型对照组比较,P0.05)。结论高表达的Gadd45a参与急性肝衰竭病理进程,解毒化瘀颗粒可下调Gadd45a表达,影响Gadd45a下游生物学效应,可能包括抑制肝细胞凋亡。     

健脾解毒化瘀方对肝衰竭大鼠肝脏的保护作用及对TLR4表达的影响

目的研究健脾解毒化瘀方对肝衰竭大鼠的保护作用及对Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、对照组和实验组,除正常组外,其余组均采用D-半乳糖胺(D-gal)腹腔注射方法建立肝衰竭大鼠模型。于造模前4 d开始,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,对照组和实验组分别给予谷氨酰胺溶液和健脾解毒化瘀方灌胃,直至造模后24 h,于造模1 d后处死大鼠,检测各组大鼠血清ALT、AST、内毒素水平,镜下观察肝组织病理学变化,取肝组织采用免疫组化法检测TLR4表达情况。结果模型组血清ALT、AST、内毒素水平均明显高于正常组(P均0.05),实验组及对照组各指标水平均明显低于模型组(P均0.05);实验组及对照组肝组织病理学分级好于模型组(P均0.05),病损评分及TLR4染色光密度值均明显低于模型组(P均0.05)。实验组与对照组间上述指标比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论健脾解毒化瘀方对肝衰竭大鼠肝功能有明显保护作用,其可能通过下调肝组织TLR4的表达而起到抗肝衰竭的作用。     

解毒化瘀颗粒抑制急性肝衰竭大鼠肝线粒体通透性转换的实验研究

目的:明确解毒化瘀颗粒在急性肝衰竭动物实验中的治疗作用及是否可抑制急性肝衰竭大鼠肝线粒体通透性转换。方法:采用D氨基半乳糖联合内毒素脂多糖构建急性肝衰竭大鼠模型,解毒化瘀颗粒干预治疗,成模后24 h收集各组大鼠标本,同时观察各组大鼠48 h存活率,全自动生化仪检测血清ALT、AST含量,分光光度仪检测肝线粒体在520 nm处吸光度的变化来测定PT孔开放情况,Western Bolt检测肝线粒体与胞质细胞色素C蛋白含量,测定Caspase-3蛋白活性情况。结果:解毒化瘀颗粒可提高急性肝衰竭大鼠48 h存活率,降低血清ALT、AST含量,抑制肝线粒体PT孔开放,提高线粒体细胞色素C含量,降低细胞质细胞色素C含量,抑制下游Caspase-3蛋白活性。结论:解毒化瘀颗粒可抑制急性肝衰竭大鼠肝线粒体通透性转换,抗急性肝衰竭肝细胞凋亡。     

祁州漏芦对肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的拮抗作用

目的研究祁州漏芦提取物(RUE)对内毒素和半乳糖胺诱发的急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的拮抗作用。方法应用内毒素和半乳糖胺制备小鼠急性肝衰竭模型,采用分光光度法检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),用苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理学变化,用比色法检测肝脏Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活化水平,用琼脂糖凝胶电泳法检测小鼠肝细胞DNA断裂情况。结果与对照组比较,模型组小鼠血清ALT、AST活性升高,肝组织病理学损伤加重;血清TNF-α增高;肝组织Caspase-3、8和9相对活性升高,肝细胞DNA断裂程度增高。与模型组比较,RUE组小鼠血清ALT、AST活性降低,肝组织损伤减轻;血清TNF-α水平下降;肝Caspase-3、8和9相对活性降低,肝细胞DNA断裂程度减少。结论祁州漏芦对内毒素和半乳糖胺致急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡具有拮抗作用。     

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠细胞因子及肝组织的影响

目的:从炎症因子角度探讨解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠免疫网络的细胞因子调节作用和对肝组织的影响。方法:取Wistar大鼠120只,取正常组20只,其余大鼠采用D-氨基半乳糖(D-Gal N)+脂多糖(LPS)联合制备大鼠急性肝衰竭模型,造模成功的大鼠分别分为模型组,解毒化瘀颗粒低、中、高剂量组(9.1,28.76,57.55 g·kg~(-1)),E5531组(内毒素拮抗剂,10 mg·kg~(-1)),每组20只,造模前5 d开始ig给药,正常组与模型组均给予等量蒸馏水,2次/天,造模后给药48 h后处死大鼠,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),IL~(-1)0水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理组织学改变。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α,IL-6水平明显升高,IL~(-1)0水平明显降低(P0.05),模型组大鼠肝组织明显的炎性细胞浸润,病理损伤较为明显;与模型组比较,解毒化瘀颗粒低、中、高剂量组TNF-α,IL-6水平及显著降低,IL~(-1)0水平表达升高(P0.05),肝组织病理结果提示解毒化瘀颗粒低、中、高剂量组的肝组织损伤程度均较模型组减轻,有显著性差异(P0.05)。结论:解毒化瘀颗粒通过减少促炎因子的水平、抑制促炎因子表达,提高抗炎因子的水平及表达来改善患者全身炎症反应、保护肝细胞功能,解毒化瘀颗粒拮抗急性肝衰竭大鼠的作用机制之一。     

解毒化瘀Ⅱ方对实验性肝衰竭大鼠肝脏坏死面积及肝线粒体超微结构的影响

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对实验性暴发性肝衰竭大鼠肝脏坏死面积及肝线粒体超微结构的影响。方法:将84只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组,中药安宫牛黄丸组,西药乳果糖组;除正常组外各组均用皮下注射硫代乙酰胺(TAA)造成大鼠实验性暴发性肝衰竭模型,观察各组大鼠造模后12h肝脏的大体结构、病理组织学改变、坏死面积及肝线粒体超微结构。结果:模型组肝细胞大量坏死,肝线粒体高度水肿、坏死;解毒化瘀Ⅱ方各组能改善肝细胞、肝线粒体的病理损伤程度,减少坏死面积,与模型组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),并呈现出量效关系;解毒化瘀Ⅱ方高剂量组在减少坏死面积、改善肝线粒体超微结构作用上优于乳果糖组、安宫牛黄丸组(P<0.05或P<0.01)。结论:解毒化瘀Ⅱ方对肝衰竭大鼠肝细胞、线粒体具有较好的保护作用。     

基于TLR4/NF-κB通路的解毒化瘀通腑方干预内毒素性肝损伤的作用机制

目的研究解毒化瘀通腑方通过TLR4/NF-κB通路干预内毒素性肝损伤的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠共160只,随机分为模型组,中药高、中、低剂量组,TLR4单克隆抗体组各30只,并设置空白组。造模各组给予D-GalN (300mg/kg)+LPS(30μg/kg)腹腔注射制备内毒素肝损伤模型。分别在24h、48h、72h三个时间点处死8只大鼠,观察大鼠肝功能(ALT、AST)、内毒素、TNF-α、IL-1β、IL-6水平变化;RT-PCR法检测肝组织中TLR4、NF-κB mRNA表达;Western-Blot法检测肝组织中CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB蛋白表达;HE染色观察肝组织病理变化。结果造模后大鼠肝损害明显,内毒素及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高,肝组织中TLR4、NF-κB mRNA表达及CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达同步升高,24h达到高峰,之后逐渐下降,同一时间点以模型组大鼠肝脏损害最为严重,中药组损害程度较模型组相对较轻,其中以中药高剂量对肝脏的保护作用最为明显,在24h、48h时间点中药高剂量组ALT及AST与模型组比较有显著性差异(P0.05);内毒素水平及炎性因子TNF-a、IL-1β、IL-6水平在同一时间点与模型组比较有显著性差异(P0.05);在同一时间点,中药高剂量组大鼠肝组织TLR4、NF-κB mRNA表达及CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达与模型组比较有显著性差异(P0.05),和TLR4抗体组表现相近,两者比较差异无统计学意义(P0.05)。肝组织病理损害以模型组最重,在同一时间点中药中、高剂量组肝组织病理损害表现较模型组轻。结论解毒化瘀通腑方能够降低内毒素肝损伤大鼠血清内毒素水平,影响TLR4/NF-κB通路炎性级联信号的传导,抑制NF-κB的激活,减少炎性递质及细胞因子的释放,从而减轻内毒素对机体的损害,起到肝细胞保护作用。     

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响

目的：研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas／FasL表达的影响。方法：SPF级Wistar大鼠84只，随机分为空白组、模型组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、安宫牛黄丸组、乳果糖组，以硫代乙酰胺（TAA）皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型，造模前3d开始灌胃给药，2次/d，间隔12h，共给药5．5d；采用ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α含量，Western blot法测定肝细胞TNFR1的表达量，免疫组化法检测Fas／FasL在各组肝细胞中分布的趋势及表达强度。结果：与空白组比较。模型组大鼠血清中TNF-α含量升高，肝细胞TNFR1、Fas、FasL的表达均显著增强，差异有统计学意义（P〈0．01），解毒化瘀Ⅱ方能降低血清TNF-α的含量，抑制肝细胞TNFR1、Fas/FasL的表达，呈现量效关系。并以解毒化瘀Ⅱ方高剂量组作用效果最佳。结论：解毒化瘀Ⅱ方抗肝衰竭的作用机制可能是通过干预TNF-α/TNFR1及Fas／FasL的表达，阻止死亡信号的转导，抑制肝细胞凋亡。     

凉血化瘀解毒法对急性肝衰竭模型大鼠免疫功能、Toll样受体及VEGF表达的影响

目的观察凉血化瘀解毒法对急性肝衰竭(ALF)模型大鼠免疫功能、Toll样受体及VEGF表达的影响。方法采用腹腔注射脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-Gal)法诱导建立急性肝衰竭大鼠模型,按照数字表法随机分为模型组、中药组和阳性组,每组30只,另选择30只Wistar大鼠为空白组,空白组和模型组给予2 mL生理盐水灌胃,中药组给予2 mL的凉血化瘀解毒方灌胃,阳性组给予15 mg/kg复方甘草酸苷灌胃,分别于第2日和第5日处死15只大鼠,比较肝组织病理学、肝功能指标、炎症因子、Toll样受体及血管内皮生长因子(VEGF)表达变化。结果模型组第2日和第5日肝组织结构严重破坏,弥漫性片状坏死,炎性细胞浸润,可见较多红细胞填充;中药组和阳性组第2日肝损伤程度减轻,肝组织结构较清晰,细胞排列较整齐,红细胞和炎性细胞减少,第5日较模型组显著改善,肝小叶结构均有所恢复,可见增生肝细胞,炎性浸润明显减轻。模型组谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(ALT)及总胆红素(TBIL)水平显著高于对照组,第2日和第5日中药组和阳性组GOT、ALT及TBIL水平显著降低,且第5日显著低于第2日(P 0.05)。模型组CD4+和NKT细胞含量显著低于对照组,CD8+含量高于对照组,第2日和第5日中药组和阳性组CD4+和NKT细胞含量显著升高,CD8+含量显著低于对照组,且第5日低于第2日(P 0.05)。模型组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)水平显著高于对照组,第2日和第5日中药组和阳性组TNF-α、IL-2和IL-6水平显著降低,且第5日显著低于第2日(P 0.05)。模型组TLR2、TLR4和VEGF蛋白表达水平显著高于模型组,第2日和第5日中药组和阳性组TLR2、TLR4和VEGF蛋白表达水平显著降低,且第5日显著低于第2日(P 0.05)。模型组VEGF蛋白及mRNA表达水平显著高于模型组,第2日和第5日中药组和阳性组VEGF蛋白及mRNA表达水平显著降低,且第5日显著低于第2日(P 0.05)。结论凉血化瘀解毒方可显著改急性肝衰竭模型大鼠肝损伤程度,改善肝功能,其机制可能与提高免疫功能,减轻炎症反应,降低TLR2、TLR4和VEGF蛋白及mRNA表达水平有关。