银杏叶片及银杏叶胶囊的质量分析及建议

目的 比较目前市场上不同厂家的银杏叶片及银杏叶胶囊样品,对质量差异进行分析,并对二者的质量标准提高和市场监管提出建议。方法 按照2015年版《中国药典》（一部）银杏叶片及银杏叶胶囊含量测定项方法测定了银杏叶片及银杏叶胶囊中总黄酮醇苷及萜类内酯的含量,按照国家药品监督管理局发布的银杏叶片及银杏叶胶囊相关补充检验方法,对银杏叶片及银杏叶胶囊中游离黄酮（槲皮素、山柰素、异鼠李素）及槐角苷检查项进行了测定,并对48家企业生产的328批银杏叶片及银杏叶胶囊的总黄酮醇苷、萜类内酯含量测定项以及游离黄酮、槐角苷检查项进行分析,比较不同批次及不同厂家银杏叶制剂的质量差异。结果 328批银杏叶片及银杏叶胶囊质量均符合标准规定,但总黄酮醇苷及萜类内酯含量分布范围均较宽,不同企业间样品质量差异较大。结论 建议各企业对工艺进行优化,对原材料进行严格控制,以保证样品的批间一致性。     

银杏叶的指纹图谱建立及质量评价研究

目的比较不同产地、树龄、采收期银杏Ginkgo biloba叶的质量,固定欣脉胶囊处方中银杏叶的来源产地。方法建立银杏叶的HPLC指纹图谱测定方法,对不同产地、树龄、采收期银杏叶的指纹图谱进行测定,并测定不同产地、树龄、采收期银杏叶总黄酮醇苷和总萜内酯的量,对各批次银杏叶主要成分的量及指纹图谱进行对比分析。结果不同产地、树龄、采收期的银杏叶总黄酮醇苷、萜类内酯量以及指纹图谱均不同。结论所建立的指纹图谱测定方法为银杏叶的合理采收及质量评价提供了科学依据;江苏邳州、2~3年树龄、6~8月份采集的银杏叶质量较佳,可以作为欣脉胶囊处方中银杏叶的固定来源产地。     

HPLC-ELSD结合化学计量学研究银杏叶片中萜类内酯指纹图谱

目的：建立不同厂家银杏叶片中萜类内酯成分HPLC-ELSD指纹图谱。方法：色谱柱为Agi-lentExtend-C18（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为正丙醇-四氢呋喃-水（1：15：84）,柱温为30℃,流速为1mL·min-1,蒸发光散射检测器检测;采用LC／Q-TOFMS对指纹图谱中的共有峰进行指认。并利用化学计量学方法,包括主成分分析（PCA）、相似度分析（SA）、聚类分析（HCA）,对色谱数据进行分析。结果：该方法精密度、稳定性、重复性良好。同时采用LC／Q-TOFMS方法指认了5个共有峰,分别为银杏内酯J（M）、银杏内酯C、银杏内酯A、银杏内酯B及白果内酯。并采用该方法测定了市售14批银杏叶片,结合PCA、SA及HCA生成了银杏叶片中萜类内酯对照指纹图谱,并根据质量差异将样品分为4大类。结论：本方法可用于银杏叶片中萜类内酯成分的质量评价。     

HPLC-ELSD 结合化学计量学研究银杏叶片中萜类内酯指纹图谱

目的：建立不同厂家银杏叶片中萜类内酯成分HPLC-ELSD 指纹图谱。方法：色谱柱为Agilent Extend-C18（ 4.6 mmx250 mm,5 μm）,流动相为正丙醇-四氢呋喃-水（1:15:84）,柱温为30℃,流速为1mL·min-1,蒸发光散射检测器检测;采用LC/Q-TOF MS 对指纹图谱中的共有峰进行指认。并利用化学计量学方法,包括主成分分析（PCA）、相似度分析（SA）、聚类分析（HCA）,对色谱数据进行分析。结果：该方法精密度、稳定性、重复性良好。同时采用LC/Q-TOF MS 方法指认了5 个共有峰,分别为银杏内酯J（M）、银杏内酯C、银杏内酯A、银杏内酯B 及白果内酯。并采用该方法测定了市售14 批银杏叶片,结合PCA、SA及HCA 生成了银杏叶片中萜类内酯对照指纹图谱,并根据质量差异将样品分为4 大类。结论：本方法可用于银杏叶片中萜类内酯成分的质量评价。     

基于~1H-NMR技术的银杏二萜内酯原料药含量测定和指纹图谱研究

银杏二萜内酯原料是从银杏叶中提取纯化所得,是银杏二萜内酯葡胺注射液的原料。分别建立了银杏二萜内酯原料药的~1H-NMR含量测定和指纹图谱分析方法。采用~1H-NMR法对3批样品进行含量测定,并与高效液相测定结果进行比较,结果显示2种方法的检测结果基本一致。指纹图谱研究确定了24个质子峰作为共有指纹峰,并利用对照品及NMR信息对指纹峰进行了指认。10批样品的测定结果发现,其指纹图谱相似度均大于0.99。该研究建立的银杏二萜内酯原料药~1HNMR含量测定和指纹图谱分析方法,快速,便捷,且具有良好的精密度、稳定性和重复性,为银杏二萜内酯原料药及其制剂的质量评价提供依据以及新的思路。     

泰州地区银杏叶类制剂质量分析

目的:对泰州地区流通和生产的银杏叶类制剂进行质量分析,为其质量控制和临床疗效的一致性评价提供科学依据。方法:抽取泰州地区流通和生产的不同剂型的22批银杏叶类制剂,按国家食品药品监督管理局发布的银杏叶药品补充检验方法进行游离槲皮素、山柰素、异鼠李素和槐角苷项检查,按《中国药典》的规定进行总黄酮醇苷和萜类内酯含量测定。结果:22批样品游离槲皮素、山柰素、异鼠李素和槐角苷项检查结果均符合标准要求,游离槲皮素、山柰素、异鼠李素均未超过限度,样品均未检出槐角苷。总黄酮醇苷和萜类内酯均符合标准的限度要求,但萜类内酯项含量差异较大。结论:泰州地区流通和销售的银杏叶制剂未检测到非法掺入槲皮素、槐角苷等情况,总黄酮醇苷和萜类内酯含量均符合标准要求,但不同批次产品之间含量差异较大,临床疗效可能不同。     

经典名方泽泻汤的HPLC指纹图谱及多指标含量测定研究

目的建立经典名方泽泻汤的HPLC指纹图谱,结合化学模式识别技术对其进行分析,并测定泽泻汤中3种成分23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C和白术内酯Ⅲ的含量,为泽泻汤质量控制提供科学依据。方法采用Waters WAT054275C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,建立15批泽泻汤的HPLC指纹图谱,并采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"、SPSS22.0及SIMCA14.1软件对15批泽泻汤的HPLC指纹图谱进行相似度评价及聚类分析(CA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)等化学模式识别。同时测定23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C和白术内酯Ⅲ的含量。结果建立了15批泽泻汤的HPLC指纹图谱,相似度均0.94,标定了18个共有峰,指认出3个色谱峰,分别为11号峰白术内酯Ⅲ、15号峰23-乙酰泽泻醇C、16号峰23-乙酰泽泻醇B,CA和PLS-DA将15批泽泻汤样品分为2类,同时15批泽泻汤中23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C和白术内酯Ⅲ的质量分数分别为0.321～0.569、0.075～0.139、0.106～0.142 mg/g。结论 HPLC指纹图谱结合多成分同时测定的方法,快速、简便、重复性好,为泽泻汤及其制剂的质量评价提供参考。     

3种市售中药复方制剂消炎利胆片的HPLC指纹图谱研究

 目的 建立3种市售中药复方制剂消炎利胆片的HPLC指纹图谱，并对多批次产品的质量进行初步评价。方法 采用C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-水（分别含体积分数0.1%的甲酸）为流动相进行梯度洗脱，流速1.00 mL·min-1，检测波长254 nm，柱温25 ℃；建立消炎利胆片的HPLC指纹图谱，通过比对各组方中药提取物的HPLC图谱，确定消炎利胆片HPLC指纹图谱中主要色谱峰的组方中药来源；通过比对化学分离制得的对照品的保留时间，对部分主要色谱峰进行明确化学指认；利用中药指纹图谱相似度评价系统对3个厂家的24批市售产品进行相似度评价。结果 所建立的消炎利胆片指纹图谱具有较好的精密度、重现性和稳定性，在可检出的40个色谱峰中，31个色谱峰的组方中药来源得到明确，7个色谱峰得到化学指认。相同厂家不同批次市售消炎利胆片指纹图谱的相似度不低于0.954；3个厂家的24批市售消炎利胆片指纹图谱的相似度为0.845~0.987，然而，剪切图谱（脱水穿心莲内酯出峰前的指纹图谱，即0~69 min）的相似度仅为0.478~0.896。结论 所建立的HPLC指纹图谱表达了上述3种市售消炎利胆片中多组分的整体特征，为评价市售消炎利胆片的质量提供了可靠的实验数据。     

产地、树龄、采收期等因素对银杏叶中黄酮和萜内酯含量的影响北大核心CSCD

采用高效液相色谱法测定种植基地银杏叶药材中总黄酮醇苷的含量,样品经甲醇-25%盐酸回流提取,Agilent ZORBAX SB-C色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,以0.4%磷酸水溶液-甲醇(45∶55)为流动相进行等度洗脱,流速1 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长360 nm,进样量10μL。建立了基于超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS)测定银杏叶萜类内酯含量的方法,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),柱温30℃,样品室温度10℃,进样量10μL。质谱条件采用ESI^(+)多反应监测(MRM)模式扫描。分别采用上述方法测定6个银杏基地99批银杏叶样品总黄酮醇苷、萜类内酯含量,并对其结果进行统计分析,比较不同产地、树龄、采收期、性别、加工方式银杏叶中黄酮、萜内酯含量差异。结果表明99批银杏叶样品总黄酮醇苷质量分数为0.38%~2.08%,4种萜内酯总量为0.03%~0.87%。该实验所建立的方法操作简便、结果可靠,可用于银杏叶的定量分析,研究结果为银杏叶的质量控制提供了依据。     

基于定量指纹图谱分析与生物活性测定的通天口服液质量评价

目的:通过指纹图谱与生物活性测定相结合的方式科学评价通天口服液的质量。方法:采用HPLC建立通天口服液的指纹图谱,并对10批次通天口服液进行同步定量分析;以抗血小板聚集活性为生物活性指标,确定通天口服液中活性成分贡献度。结果:10批次的通天口服液相似度均0.96,标示出19个共有峰,确认第6,7,8,10,11号峰分别为芍药苷,升麻素苷,甘草苷,5-O-甲基维斯阿米醇苷,洋川芎内酯Ⅰ,同步定量分析结果显示,10批通天口服液中以上5个成分含量差异较大;抗血小板聚集活性结果显示,洋川芎内酯Ⅰ5-O-甲基维斯阿米醇苷升麻素苷芍药苷,洋川芎内酯Ⅰ为其主要活性成分(P0.001)。结论:建立了与通天口服液药效相关的指纹图谱,确定了与抗血小板聚集活性相关的主要化学成分为洋川芎内酯Ⅰ,5-O-甲基维斯阿米醇苷及升麻素苷,为通天口服液的质量评价提供一种更合理的手段。     

不同树龄银杏叶在不同季节中总黄酮和总内酯的含量变化

目的：确定银杏叶最适宜采收季节。方法：采用HPLC法（二级管阵列检测器DAD和蒸发光散射检测器ELSD）分别测定银杏叶中总黄酮和总内酯的含量。结果：不同树龄,不同季节的银杏叶总黄酮、总内酯含量不同,结论：银杏叶的总黄酮、总内酯以二、三年生的为高,总黄酮在5月份,总内酯在9月份含量为高。     

基于UPLC指纹图谱和黄酮醇苷含量的不同来源银杏叶的质量比较

目的 比较不同产地、性别、树龄银杏Ginkgobiloba叶在同一采收期的质量,为其资源评价提供依据。方法 收集5个产地共36批的银杏单株叶样品,采用超高效液相色谱法测定芦丁、槲皮素、异鼠李素和山柰素含量。用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件处理分析,建立银杏叶药材UPLC指纹图谱。结合主成分分析及偏最小二乘判别分析探讨不同性别银杏叶的质量差异。结果 各组样品相似度均大于0.85,雌株之间相似度低于雄株;产地、性别和树龄对银杏叶的化学成分组成和比例有一定的影响,成熟植株指纹图谱相似度变化幅度大于苗期植株;HM居群与其它居群样品的物候期不同。结论 不同产地雌雄株银杏叶的性状特征存在差异。LT居群银杏叶质量较佳且更稳定;苗期植株稳定性高于成熟植株;不同性别银杏叶质量差异标志物有所差异。为控制银杏叶内在质量建立了UPLC指纹图谱快速检测方法,并进行指纹图谱相似度评价,结合主成分分析及偏最小二乘判别分析方法用于分析不同性别银杏叶的质量,为银杏叶的质量比较和资源评价提供了科学依据。     

基于代谢组学和转录组学的不同生长年限下银杏萜类生物合成关键基因表达分析

目的 以不同发育阶段不同树龄的银杏叶（银杏幼树叶,多年生银杏树叶）为对象,分析次生代谢物变化规律,测定黄酮及萜内酯含量,分析萜类生物合成的通路和关键基因表达,为提高银杏萜内酯产量提供分子生药学数据。方法 采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术,并进行高通量转录组学测序（RNA-seq）,从差异表达基因中寻找次生代谢物生物合成的关联酶基因。结果 代谢数据表明,不同树龄,不同发育阶段的银杏叶次生代谢物明显不同,黄酮类成分,老树叶片与幼树叶4～7月含量均呈下降趋势;同发育阶段,幼树叶含量高于老树叶片含量;萜内酯类成分,老树叶片4～7月含量略微呈上升趋势,幼树叶略微呈缓降趋势;同发育阶段,幼树叶含量高于老树叶片含量。转录组分析出萌发期,老树叶片与幼树叶片生长状态相似,5～7月老树叶与幼树叶基因表达发生较大变化。筛选出49条与萜类合成有关的候选基因,分析后发现甲羟戊酸途径（mevalonatepathway,MVA）中老树叶表达高于幼树叶;甲基赤藻糖醇磷酸途径（methylerythritol4-phosphate pathway,MEP）中幼树叶表达高于老树叶。结论 幼树叶比老树叶药用活性成...     

基于高通量测序与UPLC-Q-TOF/MS技术的不同产地银杏叶内生菌与其主要化学成分相关性探究

目的 利用高通量测序,通过比较不同产地银杏叶内生菌的差异,并结合化学成分相关性分析,从微生态的角度区分不同产地银杏叶的品质差异。方法 以都江堰、平邑、崇明3个产地4—7月的银杏叶片为研究对象,采用16S rDNA、内转录间隔区（ITS）扩增子高通量测序方法分析叶片内生细菌、真菌的多样性及群落组成,再基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF/MS）对银杏叶主要化学成分含量进行检测,并对其内生菌多样性及主要化学成分含量进行相关性生物信息学分析。结果 3个产地银杏叶内生真菌的多样性和丰富度均为都江堰>崇明>平邑;内生细菌的多样性随着月份整体呈降低趋势,丰富度在6月份最高;不同产地叶片间优势内生真菌与优势内生细菌均一致。相关性分析发现,银杏叶片内生细菌与黄酮醇苷大多呈显著正相关,如假单胞菌（Pseudomonas）、罗姆布茨菌（Romboutsia）、葡萄球菌（Staphylococcus）等;银杏叶片内生真菌中,黄酮醇苷与链格孢属（Alternaria）、枝孢属（Cladosporium）、球腔菌属（Mycosphaerella）呈显著正相关。结论 通过高通量测序免培养的方法获得了较全面的内生菌信息,优于传统培养法。药用银杏在不同地域的内生优势菌较为一致,这可能与其稳定生成的次生代谢化合物有关。可通过属水平的群落结构区分3个产地银杏叶;化学成分与内生菌的相关性可以预测出与药效成分有关的菌群。研究结果为进一步筛选银杏叶内生菌提供了实验基础,为探讨药用银杏道地性的形成机制提供了新思路。     

银杏叶提取工艺正交试验研究

目的以总黄酮醇苷、萜类内酯的综合转移率为指标,确定银杏叶最佳提取工艺。方法采用正交设计方法,系统考察乙醇浓度、料液比、提取时间3个因素对银杏叶提取工艺的影响,利用高效液相色谱法测定总黄酮醇苷、萜类内酯的含量,计算转移率。结果最佳提取工艺条件为:采用85%乙醇加热回流提取3次,第1次加5倍量(V/W)溶剂提取3 h,后2次分别加入3倍量(V/W)溶剂提取2 h。结论本工艺操作简单、合理、节能、高效,适用于工业化生产。     

HPLC指纹图谱法评价市售胖大海的质量一致性

目的:建立胖大海高效液相色谱指纹图谱分析方法,比较不同地区市售胖大海质量的一致性,为其质量评价提供参考.方法:通过对提取条件和色谱条件进行考察,构建高效液相色谱指纹图谱法并用其测定购自国内不同地区的市售胖大海样品的指纹图谱,采用相似度分析软件对指纹图谱进行分析比较.结果:确定了胖大海指纹图谱的提取条件和高效液相色谱条件,发现了胖大海的20个共有特征峰,8份市售胖大海样品的相似度为0.942 ～ 0.984.结论:建立了胖大海的高效液相色谱指纹图谱分析方法,通过该方法证明中国不同地区的市售胖大海的质量比较一致.     

良种银杏幼苗叶质量分析(Ⅱ)

目的：进行良种银杏幼苗叶质量分析。方法：有用RP－HPLC－ELSD法测定良种银杏幼苗叶内酯含量。结果：总内酯含量，6月份高于8月份，11月份含量明显下降；嫁接苗高于实生苗，雄性高于雌性。结论：活性成分含量与生长季节、树龄、培育方式、生长环境、立地条件等诸因素有关。由主要活性成分BB与GB综合评价：江西良种银杏幼苗叶优于文献报道的银杏叶的质量。     

银杏叶制剂中银杏酚酸研究进展

银杏叶具有很高药用价值,银杏叶提取物(GBE)中的黄酮醇苷与萜类内酯分别具有抗氧化、抗血小板聚集及改善记忆、增强免疫等药理作用。但银杏叶中含有的银杏酸(GA)有强致敏性及细胞毒性,即使在制剂中微量残留也能引起严重的不良反应。为减少银杏类制剂用药安全隐患,该研究从GA的化学结构,不良反应与毒性及发生机制,GA脱除与减毒等进行综述,期望为提高银杏叶制剂的安全性研究提供新思路。     

国产与进口银杏叶片萜类内酯Beagle犬生物利用度的比较

目的比较国产与进口银杏叶片在Beagle犬体内的药动学参数和生物利用度。方法 Beagle犬分别ig国产与进口银杏叶片后,取血测定。采用LC-MS检测Beagle犬血浆中银杏叶片萜类内酯(银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯)的含量,绘制血药浓度-时间曲线,采用DAS软件计算药动学参数。结果 Beagle犬ig国产银杏叶片(80 mg/kg)后银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的药-时曲线下面积(AUC0~t)分别为51.64、19.86和72.90 ng·h/m L,而ig进口银杏叶片(80 mg/kg)后三者的药-时曲线下面积(AUC0~t)分别为69.98、24.35和169.60 ng·h/m L。根据2种制剂中3种成分的含量,国产银杏叶片中银杏内酯A、银杏内酯B、白果内酯的相对生物利用度分别为37.77%、33.70%和95.98%。结论 Beagle犬ig国产银杏叶片后的萜类内酯生物利用度显著低于进口银杏叶片。