左归丸对肾虚大鼠MSCs增殖的影响

目的探讨补肾益精代表方左归丸对肾虚大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法 SD雌性大鼠双侧卵巢切除增龄3月法复制肾虚模型,用左归丸给予部分模型大鼠灌胃。分离、培养正常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs。观察各组大鼠MSCs细胞形态,生长周期,P3、P5代细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶衰老细胞染色结果。结果模型组大鼠P3、P5代MSCsOD值明显低于正常组、左归丸组(P<0.05)。各组大鼠MSCs细胞周期无明显差异(P>0.05)。模型组衰老细胞阳性率最高,明显高于正常组(P<0.01),但与左归丸组间差异不明显(P>0.05)。结论去卵巢大鼠MSCs增殖能力减弱,左归丸一定程度上改善肾虚大鼠MSCs增殖能力。     

菟丝子含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖的效应及机制

目的:探讨菟丝子含药血清体外对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及机制研究。方法:分离、培养大鼠MSCs,菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况;RT-PCR检测增殖过程中MSCs不同细胞因子mRNA的表达;Real-time PCR检测骨形态蛋白-2(BMP-2)mRNA表达;Western-blot检测BMP-2蛋白表达。结果:10%菟丝子含药血清具有显著促进MSCs增殖的作用(P<0.05),并显著促进BMP-2 mRNA的表达(P<0.05)。结论:10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进BMP-2 mRNA表达有关。     

左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化的影响

目的研究左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨与成脂分化的影响。方法通过腹腔注射D-半乳糖建模,制备衰老大鼠模型,分离培养MSCs,并诱导MSCs成骨和成脂分化。通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测、ALP染色观察MSCs成骨分化能力,通过甘油三酯(TG)表达量和油红O染色观察MSCs成脂分化能力。结果模型组MSCs ALP染色阳性率明显低于正常组,左归丸组MSCs染色阳性率明显高于模型组(P0.05)。成骨诱导14 d,模型组MSCs ALP活性值明显低于正常组而左归丸组明显高于模型组(P0.05)。油红O染色,模型组MSCs染色阳性率明显高于正常组,左归丸组MSCs染色阳性率明显低于模型组(P0.05)。成脂诱导7 d,模型组MSCs TG表达量明显高于正常组而左归丸组MSCs TG表达量明显低于模型组(P0.05)。结论左归丸可促进衰老大鼠MSCs向成骨细胞分化,同时可抑制其向脂肪细胞分化。     

杜仲汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制研究

探讨杜仲汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制。方法 将42 只雌性SD 大鼠随机分为假手 术组、模型组、阳性药组（戊酸雌二醇,0.09 mg·kg-1）、谷胱甘肽组（36 mg·kg-1）以及杜仲汤低、中、高剂量组 （0.54、1.08、2.16 g·kg-1）。去卵巢模型大鼠复制成功后,按照设定剂量灌胃给药,灌胃体积为10 mL·kg-1,每 日1 次,连续给药200 d。采用生化试剂盒检测大鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）含量;ELISA 法检测大 鼠血清中抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）、骨保护素（OPG）含量;骨密度仪检测大鼠股骨骨密度;HE 染色法观 察大鼠胫骨组织病理变化;Western Blot 法检测骨组织中骨形态发生蛋白2（BMP-2）、OPG、一型胶原（COL1） 蛋白表达水平;RT-PCR 法检测骨组织中BMP-2、Runt 相关转录因子2（RUNX2）mRNA 表达水平。结果 与 假手术组比较,模型组大鼠体质量增长值显著升高（P＜0.01）;血清GSH、OPG 的水平显著降低（P＜0.05,P＜ 0.01）,TRACP 水平显著升高（P＜0.01）;骨密度明显降低（P＜0.05）;骨小梁结构不完整,出现明显断裂,小 梁数稀疏且明显变薄;骨组织中BMP-2、OPG、COL1 蛋白表达水平均显著下降（P＜0.01）,BMP-2、RUNX2 mRNA 表达水平明显降低（P＜0.05）。与模型组比较,杜仲汤低、中、高剂量组大鼠体质量增长值均显著降低（P＜ 0.05,P＜0.01）,血清GSH 水平显著升高（P＜0.01）,骨小梁结构明显改善,骨小梁变粗,数量增加,骨组织 中BMP-2、RUNX2 mRNA 表达水平均显著升高（P＜0.01）;杜仲汤中剂量组大鼠的血清OPG 水平显著升高（P＜ 0.01）;杜仲汤低剂量组大鼠的血清TRACP 水平显著降低（P＜0.01）,骨组织中COL1 蛋白表达水平明显升高 （P＜0.05）;杜仲汤低、中剂量组大鼠的骨密度显著升高（P＜0.01）,骨组织中OPG 蛋白表达水平明显升高（P＜ 0.01）;杜仲汤中、高剂量组大鼠骨组织中BMP-2 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 杜仲汤能提高去 卵巢大鼠的骨密度,保护骨小梁完整性,对去卵巢大鼠骨质疏松症有一定防治作用,其机制可能与提高血清 GSH、OPG 水平,降低TRACP 水平,上调BMP-2、OPG、COL1 蛋白以及BMP-2、RUNX2 mRNA 表达,从 而促进骨形成有关。     

淫羊藿对骨质疏松MSCs成脂分化PPARγ mRNA表达的影响

目的 探讨淫羊藿含药血清在骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成脂分化过程中对过氧化物酶体增殖物激活受体亚型PPARγ mRNA表达的的影响。方法 分离、培养骨质疏松大鼠MSCs,传至3代。将所获细胞随机分为模型组,成脂诱导组,西药组,成脂诱导西药组,中药组,成脂诱导中药高、中、低剂量组。采用淫羊藿含药血清对MSCs进行干预,并与尼尔雌醇含药血清进行对照,观察各组PPARγ mRNA表达的变化。结果 与模型组比较,西药组、中药组PPARγ mRNA表达明显降低(P ＜ 0.01,P ＜ 0.05);与成脂诱导组比较,成脂诱导西药组、成脂诱导中药高、中、低剂量组PPARγ mRNA表达明显降低(P ＜ 0.05,P ＜ 0.01)。结论 淫羊藿含药血清可抑制绝经后骨质疏松症大鼠MSCs及其在成脂分化过程中PPARγmRNA的表达,从而抑制MSCs成脂分化,以防治骨质疏松症。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:中药复方补肾健脾活血方可以促进大鼠成骨细胞增殖分化,提高BMP-2、Smad5 mRNA和蛋白表达。     

血府逐瘀汤动员骨髓内皮祖细胞的影响因素分析

目的探讨血府逐瘀汤影响血管新生的相关因素。方法将24只SD大鼠随机分成血府逐瘀汤高、中、低剂量组和空白对照组,分别检测各组大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、促红细胞生成素(EPO)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)和一氧化氮(NO)的含量,观察血府逐瘀汤对内皮祖细胞动员因素的影响。结果与空白对照组比较,血府逐瘀汤高剂量组对血清VEGF、血府逐瘀汤中剂量组对血清SDF-1和GM-CSF,3个药物剂量组对血清NO的水平均有显著提高(P0.05或P0.01),但高、中剂量组均能降低血清G-CSF的含量(P0.05)。结论血府逐瘀汤可通过提高VEGF、SDF-1、GM-CSF和NO的水平动员骨髓内皮祖细胞参与血管新生,动员途径呈现多样性和复杂性。     

缺氧预处理MSCs移植对脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4表达的影响及清热化瘀方的干预作用

目的：观察缺氧预处理骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响及清热化瘀方的干预作用。方法：采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠（MCAO）模型，将216只SD大鼠随机分为6组：假手术组（SO）、模型组（MCAO）、MSCs移植对照组(N-MSCs)、经HP处理后的MSCs移植组(HP-MSCs)、MSCs移植联合清热化瘀方组(MSCs QRHY)、HP-MSCs移植联合清热化瘀方组(HP QRHY)。每组大鼠36只，每组根据取材时间点7d、14d、28d又可分为每组3个亚组，每个亚组12只大鼠。采用qRT-PCR和Western blot观察3个时间点SDF-1/CXCR4 mRNA及其蛋白的表达变化，并以TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果：各组缺血半暗带SDF-1/CXCR4 mRNA及其蛋白的表达均于7d达到高峰，14d，28d表达逐渐下降。其中7d、14d同一时间点组间比较，HP-MSCs组、MSCs QRHY组及HP QRHY组二者的表达均明显优于N-MSCs组（P＜0.01或P＜0.05），而以HP QRHY组增高最为明显（P＜0.05或P＜0.01），28d后，各移植组的表达趋势趋同，但仍高于模型组（P＜0.05）。结论：缺氧预处理MSCs移植能够显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4的表达，清热化瘀方能够进一步上调SDF/1CXCR4的表达，减少细胞凋亡。     

针灸对骨髓抑制模型小鼠血清造血生长因子等含量的影响

目的:通过观察针刺和艾灸前后骨髓抑制模型小鼠血清中粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的含量变化,探讨针灸改善化疗后骨髓抑制、促进白细胞升高的分子生物学机制。方法:选用清洁级、雄性昆明种小鼠80只,根据体质量随机分为正常组、模型组、针刺组、艾灸组,每组20只。模型组、针刺组、艾灸组注射环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)制造小鼠骨髓抑制模型,正常组腹腔注射等量0.9%NaCl溶液。造模后4h针刺组、艾灸组均选取"大椎""膈俞""肾俞""足三里"分别进行针刺、艾灸治疗,正常组、模型组同针刺组、艾灸组抓取、固定,不予任何治疗。均每日1次,连续5d。各组小鼠分别采尾部静脉血,人工镜检造模前至干预结束每日的外周血白细胞计数,并运用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察治疗3天、5天后各组血清中GM-CSF、G-CSF含量的变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠各时间点白细胞计数均降低(均P<0.05),血清中GM-CSF和G-CSF含量明显下降(均P<0.05)。治疗3天后,与模型组比较,针刺组与艾灸组白细胞计数增加,针刺组差异有统计学意义(均P<0.05),血清GM-CSF和G-CSF含量升高(均P<0.05)。治疗4天后,针刺组、艾灸组与模型组比较白细胞计数均增加(均P<0.05)。治疗5天后,与模型组比较,针刺组、艾灸组白细胞计数升高且接近正常值,血清GM-CSF和G-CSF含量明显升高(P<0.05)。结论:针刺和艾灸可以通过提高CTX小鼠血清中GM-CSF和G-CSF的含量,促进骨髓系造血细胞的增殖、分化,以利于骨髓造血功能重建,减轻烷化剂CTX造成的骨髓抑制,从而提升外周血白细胞。     

加味补阳还五汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响

目的探讨加味补阳还五汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响。方法将60 只雌性SD 大鼠随机分为假 手术组、模型组、福善美组（0.9 mg·kg-1）以及加味补阳还五汤高、中、低剂量组（18.18、9.09、4.545 g·kg-1）， 每组10 只。采用双侧卵巢摘除法建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模1 周后开始灌胃给药，每日1 次，连 续给药90 d。采用DPX-L 双能X 射线骨密度仪检测大鼠股骨的骨密度值；扫描电镜观察大鼠松质骨微结构变 化；ELISA 法检测大鼠骨髓内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及髓过氧化酶（MPO）的含量；采用 Western Blot 法检测大鼠胫骨组织中骨形成蛋白2（BMP-2）、骨保护素（OPG）及Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ）表达 情况。提取各组大鼠原代骨髓间充质干细胞（BMSCs），采用MTT 法检测各组大鼠BMSCs 生长速率，描绘生长 速率曲线。结果与假手术组比较，去卵巢后大鼠的骨密度明显降低（P＜0.01）；大鼠股骨的骨小梁塌陷，无 完整结构，有明显吸收陷窝；模型组大鼠骨髓内的MPO 水平明显升高（P＜0.05），而SOD 活力明显降低（P＜ 0.05），MDA 含量升高但差异无统计学意义（P＞0.05）；大鼠胫骨组织中BMP-2 及CollagenⅠ的蛋白表达明显下 调（P＜0.05），OPG 蛋白表达有下调但差异无统计学意义（P＞0.05）；模型组第3~8 天的BMSCs 增殖速率均明显 降低（P＜0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠的骨密度显著提高（P＜0.01）；松质骨微结构得到明显改善，骨 小梁结构比较完整，壁厚且连接性较好；各给药组的骨髓内SOD 活力均有所升高但差异无统计学意义（P＞ 0.05），加味补阳还五汤高剂量组的MDA、MPO 水平明显降低（P＜0.05，P＜0.01）；加味补阳还五汤中、高剂 量组去卵巢大鼠胫骨组织中BMP-2、OPG 及CollagenⅠ的蛋白表达明显上调（P＜0.05，P＜0.01）；各给药组第 3~8 天的BMSCs 增殖速率均明显升高（P＜0.01）。结论加味补阳还五汤可能通过上调骨组织中BMP-2、OPG 及CollagenⅠ蛋白表达，促进BMSCs 的增殖及骨向分化，降低体内氧化应激水平，从而发挥对去卵巢大鼠骨 质疏松症的防治作用。