龟鹿益神颗粒调控MEK/ERK通路对慢性疲劳模型大鼠行为学及骨骼肌抗氧化系统的影响

目的:观察龟鹿益神颗粒对慢性疲劳大鼠模型行为学、骨骼肌MEK1/2、ERK1/2、SIRT1、SIRT3蛋白表达的影响,从MEK/ERK信号传导通路、抗氧化应激效应角度探讨龟鹿益神颗粒治疗慢性疲劳综合征的作用机制。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、苁蓉益肾颗粒组、龟鹿益神颗粒低、中、高剂量组,每组10只。采用慢性束缚加力竭游泳复合方法构建慢性疲劳大鼠模型,造模14 d后,正常组、模型组每天给予生理盐水灌胃,其余各组给予相应药物,14 d后测量大鼠体质量、旷场跨格次数、力竭游泳时间,取骨骼肌组织,蛋白印迹法测定MEK1/2、ERK1/2、SIRT1、SIRT3蛋白表达水平。结果:给药前:与正常组比较,各组大鼠体质量、旷场跨格次数、力竭游泳时间明显减少(P0.05,P0.05,P0.01)。给药后:和模型组比较,各治疗组大鼠体质量、旷场跨格次数、力竭游泳时间均有显著增加(P0.05,或P0.01),骨骼肌MEK1/2、ERK1/2、SIRT1、SIRT3表达显著增加(P0.01,P0.05,P0.05,P0.01)。结论:龟鹿益神颗粒能够显著改善慢性疲劳大鼠行为学指标,对MEK/ERK信号通路完整性有保护作用,可能通过提高骨骼肌中SIRT1和SIRT3,减轻氧化应激,发挥抗氧化作用,这也可能是其治疗慢性疲劳的作用机制之一。     

针刺对阿尔茨海默病模型小鼠行为学及线粒体分裂蛋白1、融合蛋白1表达和超微结构的影响

目的观察针刺对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠行为学,大脑海马神经元线粒体分裂蛋白1(Fis1)、线粒体融合蛋白1(OPA1)表达及线粒体超微结构的影响,探讨针刺治疗AD的作用机制。方法 40只雄性SAMP8小鼠随机分为针刺组和模型组,每组20只。另取20只同月龄雄性正常老化模型小鼠(SAMR1小鼠)作为正常组,针刺组选取"肾俞""百会""血海""膈俞"进行干预。8周后,Morris水迷宫实验检测小鼠行为学,之后提取海马组织,Western blot检测小鼠海马线粒体相关蛋白Fis1和OPA1的表达,电镜观察小鼠海马神经元线粒体超微结构。结果与模型组比较,针刺组逃避潜伏期明显缩短(P0.05),其停留在原平台象限时间延长和穿越原平台次数明显增加(P0.05);针刺组Fis1表达明显减弱,OPA1表达明显增强(P0.05,P0.01);针刺组线粒体超微结构明显改善,线粒体体密度及面密度明显增加(P0.05)。结论针刺可能通过提高模型小鼠学习记忆能力、下调Fis1表达、上调OPA1表达和改善线粒体超微结构,达到治疗AD的作用。     

升阳益胃颗粒对慢性疲劳大鼠骨骼肌PGC-1α及线粒体细胞色素氧化酶的影响

目的研究慢性疲劳综合征基本病机,探讨升阳益胃颗粒抗疲劳的作用机制。方法雄性大鼠60只,随机分为正常组、模型组、诺迪康胶囊组、升阳益胃颗粒低、中、高剂量组,每组10只。正常组不造模,其余5组造模,时间14d。造模结束后,每组给予相应药物剂量灌胃,1次/d,连续14d。造模前、造模后以及末次灌胃后测量一次大鼠体重及力竭游泳时间。大鼠麻醉后取其股四头肌,运用ELISA法测定PGC-1α和COX的含量。结果造模后,各造模组大鼠体重及力竭游泳时间低于正常组。灌胃后,模型组大鼠体重、力竭游泳时间及PGC-1α和线粒体COX含量明显低于其余5组;正常组高于诺迪康胶囊组和升阳益胃颗粒低剂量组,有显著性差异,而与升阳益胃颗粒中、高剂量组相比,则无显著性差异;升阳益胃颗粒中剂量组与升阳益胃颗粒高剂量组相比,无明显差异。结论升阳益胃颗粒可以明显改善慢性疲劳大鼠的疲劳状态,提高骨骼肌PGC-1α和线粒体COX的含量,这可能是其抗疲劳机制之一;升阳益胃颗粒中剂量即人体常规等效剂量,增加剂量其抗疲劳疗效并不会随之增加。     

电针对力竭运动大鼠骨骼肌α-肌动蛋白基因表达的影响

目的研究电针刺激对一次性力竭运动大鼠骨骼肌α-肌动蛋白基因表达的影响，初步探讨电针刺激提高运动能力、延缓运动性疲劳发生的分子生物学机理。方法40只SD雄性大鼠分为4组（对照组、模型组、力竭组、电针组），对照组大鼠常规饲养3周后处死取材；其他三组进行3周的游泳训练，模型组大鼠在游泳训练后处死取材；力竭组大鼠在游泳训练后进行一次性力竭游泳后处死取材；电针组大鼠在游泳训练后进行一次电针刺激，然后进行一次性力竭游泳，力竭游泳后处死取材。记录力竭游泳时间，用RT-PCR方法测定骨骼肌α-肌动蛋白基因表达。结果电针组的平均力竭游泳时间明显长于力竭组；模型组大鼠的骨骼肌α-肌动蛋白基因表达明显高于对照组和力竭组；电针组的α-肌动蛋白基因表达虽低于模型组，但高于力竭组和对照组。结论（1）3周游泳训练可以提高大鼠骨骼肌α-肌动蛋白的基因表达；（2）电针刺激有助于促进力竭运动大鼠的骨骼肌α-肌动蛋白基因的表达，延长大鼠力竭游泳时间，提高大鼠的运动耐力，延缓运动性疲劳的发生。     

小建中汤对运动性疲劳小鼠骨骼肌AMPK/PGC1-α信号通路的影响

目的:观察小建中汤对运动性疲劳小鼠骨骼肌中腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶增殖活化受体辅激活因子l-α(AMPK/PGC1-α)信号通路的影响。方法:40只昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、补中益气汤组、小建中汤组,每组10只。模型组、补中益气汤组和小建中汤组跑台训练建立疲劳模型,正常组不施加任何干预。跑台训练同时,模型组灌服等量的生理盐水,小建中汤给予5 g·kg-1剂量灌胃,补中益气汤组给予2. 8 g·kg-1剂量灌胃,连续6 d。实验结束后,检测各组小鼠体质量和跑台力竭时间;采用比色法检测各组小鼠血清尿素(UREA),乳酸脱氢酶(LDH),肌糖原(MG),骨骼肌Na+-K+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠骨骼肌病理形态变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠AMPK和PGC1-α的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量显著下降(P0. 01),Na+-K+-ATP,Ca2+-Mg2+-ATP,LDH,MG的活性明显下降(P0. 05,P0. 01),UREA的含量显著升高(P0. 01),AMPK,PGC1-α蛋白表达量显著升高(P0. 01);与模型组比较,小建中汤组小鼠体质量明显增加(P0. 05),跑台力竭时间显著延长(P0. 01),Na+-K+-ATP,Ca2+-Mg2+-ATP,LDH,MG的活性明显升高(P0. 05,P0. 01),UREA的含量显著下降(P0. 01),AMPK,PGC1-α蛋白表达量显著升高(P0. 01)。结论:小建中汤具有抗运动性疲劳的作用,其机制可能是通过提高骨骼肌AMPK/PGC1-α通路,增强线粒体氧化磷酸化减少代谢产物的堆积,减缓糖原的消耗分解,增强骨骼肌能量合成有关。     

维康颗粒防治亚健康疲劳的~1H-NMR血清代谢组学研究

目的观察中药复方维康颗粒对亚健康疲劳小鼠的干预效应,探讨其防治亚健康疲劳的作用机制。方法10周龄SPF级昆明小鼠30只,根据力竭游泳时间及空腹体质量分层随机分为空白组、模型组及维康颗粒组,每组10只。空白组正常喂养,模型组及维康颗粒组采用将小鼠强迫放入水深为0.8 cm的鼠笼中,每笼1只,每天放置18 h,连续7 d的方式造模。造模期间观察小鼠的行为学表现,造模结束后测试3组小鼠的力竭游泳时间,取腓肠肌行病理学(HE染色)观察及透视电镜检测,取血清行核磁共振氢谱(~1H-NMR)代谢组学检测分析。结果与空白组比较,模型组小鼠精神状态较差,体质量下降(P 0.05),力竭游泳时间缩短(P 0.01),病理学(HE染色)结果未见明显差异,但透视电镜可见线粒体破坏。与模型组比较,维康颗粒组精神状态有改善,体质量无明显变化(P0.05),但力竭游泳时间显著延长(P 0.05),透视电镜结果示线粒体损伤显著减轻。~1H-NMR血清代谢组学结果显示,亚健康疲劳时血清油脂、不饱和脂肪酸、葡萄糖表达下降,亮氨酸、丙酮酸等12种物质表达上升,而维康颗粒干预后葡萄糖表达上升,丙氨酸、乙酰乙酸等11种物质表达下降,其中葡萄糖、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酮异己酸、丙氨酸、赖氨酸、肌酸、脯氨酸、甘氨酸在干预后表达回调,提示这10种物质可能是维康颗粒干预亚健康疲劳的特异性代谢产物。结论维康颗粒防治亚健康疲劳可能与调整葡萄糖、亮氨酸等血清代谢物的表达,改善能量代谢有关。     

四君子丸对SAMP8小鼠海马CA3区神经元Lon蛋白表达的影响

目的 研究SAMP8小鼠海马Lon蛋白及线粒体动力学相关蛋白表达变化，为健脾益气法治疗阿尔茨海默病提供理论依据。方法 3月龄SAMR1小鼠8只作为正常组，3月龄SAPM8小鼠32只分为模型组、多奈哌齐组（0.013 g·kg^-1）、四君子丸低、高剂量组（3.24、12.56 g·kg^-1），每组8只，多奈哌齐组灌胃多奈哌齐，四君子丸低、高剂量组灌胃四君子丸溶液，灌胃30 d；第25天开始水迷宫定位航行实验，第30天开始水迷宫空间探索实验；第30天取材后，免疫组化检测线粒体融合蛋白2（MFN2）蛋白表达变化，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）表达，比色法检测三磷酸腺苷（ATP）含量，电镜检测神经元线粒体微观结构变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测β淀粉样蛋白（Aβ）、Lon蛋白、线粒体动力相关蛋白1（DRP1）蛋白、MFN1蛋白表达变化。结果 与正常组比较，模型组小鼠逃避潜伏期时间增加、穿越次数减少、AMPK表达上调，ATP含量降低，Aβ蛋白表达升高（P<0.01），DRP1蛋白表达显著升高（P<0.01），Lon、MFN1蛋白表达降低（P<0.05，P<0.01），MFN2蛋白减少，线粒体空泡化增加，嵴断裂；与模型组比较，四君子丸低、高剂量组逃避潜伏期时间减少（P<0.01）、穿越次数明显增加（P<0.05），AMPK表达下调（P<0.01）；四君子丸高剂量组ATP含量显著升高（P<0.01），Aβ、DRP1蛋白表达下调（P<0.05，P<0.01）；MFN1蛋白表达上调（P<0.05），四君子丸低剂量组空泡化较为明显，四君子丸高剂量组空泡化有所恢复，嵴较为清晰。结论 四君子丸可以通过上调Lon蛋白表达变化、纠正线粒体分裂融合蛋白紊乱，改变SAMP8小鼠的记忆功能，达到治疗阿尔茨海默病的目的。     

当归补血汤对再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位与自噬相关蛋白的作用研究

目的:观察当归补血汤含药血清对调节再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位及自噬相关蛋白的作用。方法:利用皮下注射苯油及腹腔注射环磷酰胺溶液50 mg/kg的方法制备再障小鼠模型,提取、分离骨髓单个核细胞,分别置于当归补血汤含药血清0.5%、2.5%、10%的培养基中进行体外培养,观察其对再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位及线粒体自噬标志物PINK1和泛素结合蛋白P62表达的影响。结果:与正常对照组相比较,模型对照组骨髓粒细胞线粒体膜电位明显降低,P62的蛋白表达明显下调(P<0.05),自噬泡的数量明显增高,PINK1蛋白表达明显上调(P<0.05);而与模型对照组比较,不同浓度当归补血汤20 g/kg含药血清使线粒体膜电位明显增加,P62的蛋白表达明显上调(P<0.05),自噬泡的数量明显降低,PINK1的蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:当归补血汤能够调节再障小鼠线粒体膜电位和自噬相关蛋白的表达,从而调节其线粒体自噬,影响造血细胞的凋亡。     

龟鹿益神颗粒对慢性疲劳大鼠骨骼肌中PGC-1α的影响

目的:研究慢性疲劳综合征的基本病机,建立慢性疲劳大鼠模型,观察龟鹿益神颗粒对慢性疲劳大鼠行为学指标和骨骼肌中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的影响。方法:雄性SPF级SD大鼠40只,随机分为正常组、正常对照组、模型组、苁蓉益肾颗粒组、龟鹿益神颗粒组,每组8只。除正常组、正常对照组不造模外,其他3组采用慢性束缚、夹尾激怒和力竭游泳方法构建慢性疲劳大鼠模型。正常组和模型组按10 ml/(kg·d)给予生理盐水灌胃,正常对照组和龟鹿益神颗粒组按1 250 mg/(kg·d)给予龟鹿益神颗粒混悬液灌胃,苁蓉益肾颗粒组按417 mg/(kg·d)给予苁蓉益肾颗粒混悬液灌胃。每天观察并记录大鼠的体质量、饮水量、进食量、粪便形态及鼠毛色泽等情况,用ELISA法检测大鼠骨骼肌中PGC-1α的含量。结果:造模前,各组大鼠体质量、力竭游泳时间、直立次数、跨格次数无明显差异。造模后,与正常组比较,模型组、龟鹿益神颗粒组、苁蓉益肾颗粒组大鼠体质量、力竭游泳时间、直立次数、跨格次数显著减少,差异均有统计学意义(P0.05)。给药后,与正常组比较,模型组大鼠体质量、力竭游泳时间、直立次数、跨格次数、骨骼肌中PGC-1α含量显著减少,正常对照组大鼠骨骼肌中PGC-1α含量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,龟鹿益神颗粒组和苁蓉益肾颗粒组大鼠体质量、力竭游泳时间、跨格次数、直立次数、骨骼肌中PGC-1α含量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);与苁蓉益肾颗粒组比较,龟鹿益神颗粒组大鼠力竭游泳时间、骨骼肌中PGC-1α含量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:运用慢性复合因素复制慢性疲劳动物模型具有可行性。龟鹿益神颗粒可以改善慢性疲劳大鼠身心疲劳状态,提高慢性疲劳大鼠骨骼肌中PGC-1α含量。     

补中益气汤对荷MFC胃癌小鼠骨骼肌ATP生成、线粒体氧耗量及ATP合成酶表达的影响

目的:探讨补中益气汤对荷MFC胃癌小鼠骨骼肌ATP生成、骨骼肌线粒体氧耗量及骨骼肌线粒体ATP合成酶表达的影响.方法:将60只KM雄性小鼠随机分成模型组,补中益气汤高剂量组、中剂量组、低剂量组,阳性对照组,每组12只,右腋下皮下无菌接种,建立荷胃癌MFC小鼠模型.接种24h后,治疗组补中益气汤低剂量组(0.045g·kg-1)、中剂量组(0.09g·kg-1)、高剂量组(0.18g·kg-1)灌胃给药;阳性对照组使用环磷酰胺注射(0.05g·kg-1);模型组给传代肿瘤小鼠予等体积生理盐水灌胃.连续给药2周,造模结束后处死各组小鼠,HPLC检测骨骼肌ATP、ADP及AMP含量,JC-1单体/聚合物检测骨骼肌线粒体的膜电位,Westernblot检测ATP合酶蛋白的表达.结果:与模型组比较,补中益气汤中剂量组的ATP及ADP含量显著升高(P<0.01),AMP含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,中剂量组的线粒体JC-1单体/聚合物显著降低(P<0.01);与模型组比较,中剂量组的ATP合成酶蛋白表达显著升高(P<0.01).结论:补中益气汤能够使ADP和AMP更高效率转化为ATP,保护骨骼肌氧化磷酸化;能够有效地促进线粒体ATP合成酶的活性,增强线粒体能量储备,达到治疗肿瘤相关性疲劳的作用.     

大鼠红细胞免疫功能低下模型的研究

目的：研究红细胞免疫缺陷动物模型。方法：大鼠采用低硒饲料喂养13周，观察红细胞免疫功能以及氧化抗氧化功能的变化情况。结果：第8周时，模型组动物红细胞免疫功能发生紊乱，以E-C3bR和E-ACCR低下为主。至第13周时更为明显，红细胞免疫黏附功能明显下降，E-IC含量明显增高。与此同时，红细胞氧化和抗氧化功能也发生明显变化，SOD、GSH-PX活性下降，MDA含量上升。结论：13周时，该模型表现为明显的红细胞免疫功能缺陷。     

关于中医药影响世界的思考

笔者从中医哲学观点影响世界，中医人文思想影响世界，中医精湛医术影响世界，中医药教育科研影响世界，中医“治未病”理念引领新方向，以及如何扩大中医药影响力进行了深入的探讨和思考，引经据典来论证中医药是我国劳动人民的第五大发明，其成果为人类的健康、经济发展、社会进步和文化传播做出了突出的贡献，并在世界造成广泛的影响。     

氮酮对蟾酥中蟾毒内酯类成分透皮吸收的影响

目的 :研究氮酮对蟾酥中蟾毒内酯类成分体外渗透动力学的影响。方法 :以裸鼠皮肤为实验屏障 ,研究氮酮浓度分别为 0 % ,2 % ,4% ,6 % ,8% ,1 0 %时蟾毒内酯的透皮速率常数。结果 :氮酮浓度为 0 % ,2 % ,4% ,6 % ,8% ,1 0 %时蟾毒内酯的渗透速率常数分别为 81 .2 5 ,1 1 4 .92 ,1 69.63 ,1 96 .31 ,2 0 8.2 7,2 61 .35(μg/cm2 ·h)。结论 :氮酮可以促进蟾毒内酯的透皮吸收 ,在实验浓度范围内 ,氮酮浓度为 1 0 %时有最大的透皮速率常数。     

观物取象思维方式对中医舌诊发展的影响浅论

与西医学相比较,中医舌诊显示出鲜明的特殊性。从甲骨文中对舌的最早记载,到秦汉时期舌诊的萌芽,从元代第一部舌诊专著的诞生,到明清时期对舌诊的极大发挥,中医舌诊经历了一个由简单到复杂,由零散到系统的发展过程,而观物取象的思维方式就是中医舌诊特殊性形成的根源之一。     

不同煎煮方法对清金宁气汤中黄酮类成分的影响研究

目的研究不同煎煮方法对清金宁气汤中黄酮类成分含量的影响。方法先采用HPD600型大孔树脂处理样品,以黄芩苷为对照品,在278 nm波长处测定吸收度。结果线性范围2.4~12μg/ml,回归方程为C=0.016A 0.0001,r=0.999 2,平均回收率99.1%。结论不同煎煮方法的清金宁气汤中黄酮类成分的含量具有差异。     

颈椎病的保守治疗机理研究探讨

就近年来颈椎病形成的机理研究和针灸、针刀、中药、手法治疗颈椎病的机理进行综述,并把传统医学与现代医学的思维进行融合,从多个直接或间接的角度对针灸、针刀、中药、手法治疗颈椎病的机理进行了探讨,并指出一些不足。     

全面护理应用对胆结石手术后患者的影响

目的:观察全面护理对于胆结石术后患者的护理效果。方法:将96名患者随机分为观察组、对照组各48例。2组均给予手术治疗,术后观察组予以全面护理支持,对照组给予一般常规护理,观察2组术后恢复情况及术后并发症的发生情况。结果:观察组住院天数明显短于对照组(P0.05)。总满意率对照组为75.00%,观察组为95.83%,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。并发症发生率观察组为31.25%,对照组为8.33%,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:术后全面护理干预能缩短胆结石术后患者的恢复时间,减少术后并发症的发生。     

方剂药理研究临床应用体会

方剂是理法方药的组成部分、新的药理研究成果不断出现,方剂与现代药理研究相结合在临床应用中具有重要意义。1　传统组方的局限性前人已制定出大批的方剂,数千年来沿用已久,但这些方在临床中还需要据证立法组方选药,现今临床病种繁多,病情复杂,往往有不少的患者是经西药治疗无效或者是现代医学处理棘手的病人,更为难的是有些病人按传统的四诊八纲也很难进行辨证,这就给传统的立法和组方遣药带来困难,譬如急慢性肾炎治疗后只剩下蛋白尿或血尿、高脂血症、高粘血症、高血压、糖尿病等,往往无任何临床症状,传统组方有一定的局限性。2　中医临…     

针刺对中风早期患者认知功能影响的临床观察

将６０例病情已稳定的中风早期患者随机分成实验组和对照组,每组各３０例。两组病人在接受常规针灸治疗及一些康复训练和临床药物治疗的同时,试验组同时加取四神聪、本神、通里、照海、舌三针等穴。然后应用黄东锋根据我国中风患者的具体情况而制定的认知功能积分表,来评估针刺对中风早期患者认知功能的影响。结果显示：实验组经３～４个月的治疗后,认知功能显著改善,与对照组相比,改善非常明显（ Ｐ＜ ０． ０１）,说明针刺某些特定穴位能提高中风早期患者的认知功能。