埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎活动期大鼠结肠黏膜Notch信号通路的调控作用

目的:观察穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜组织Notch受体1及靶基因Hes 1、Math 1表达的影响,从Notch信号通路角度探讨其治疗UC的机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、埋线+艾灸组、埋线组、艾灸组,每组6只。采用5%三硝基苯磺酸+50%乙醇混合溶液灌肠法复制UC模型。模型成功次日开始治疗,穴位取"上巨虚""天枢""大肠俞"。艾灸组艾条温和灸10 min, 1次/d,共14次。埋线组用简易埋线针进行穴位埋线,1次/周,共2次。埋线+艾灸组于艾灸后6 h埋线。HE染色法观察结肠黏膜组织形态变化;q-PCR法和Western blot法检测结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1和Math 1 mRNA及蛋白表达。结果:正常组大鼠结肠上皮完整、结构清晰,杯状细胞丰富,腺管结构正常。模型组大鼠结肠黏膜结构模糊,上皮大量破损、脱落,杯状细胞缺失,腺管破坏,大量炎性细胞浸润,各治疗组较模型组结肠损伤有不同程度改善,埋线+艾灸组最为明显。与正常组比较,模型组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平升高(P0.01),Math 1 mRNA及蛋白表达水平降低(P0.01);与模型组比较,各治疗组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05),埋线+艾灸组、埋线组Math 1 mRNA表达水平升高(P0.01),各治疗组结肠黏膜组织Math 1蛋白表达水平升高(P0.01)。埋线+艾灸组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平低于埋线组、艾灸组(P0.01,P0.05),Math 1 mRNA表达水平高于艾灸组(P0.01),Math 1蛋白表达水平高于埋线组、艾灸组(P0.01)。结论:穴位埋线+艾灸对UC大鼠结肠损伤修复具有促进作用,其可能通过降低结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1表达水平,上调Math 1表达水平,抑制Notch信号通路的过度活化,从而调节结肠上皮分泌细胞系和吸收细胞系间分化的平衡而起效。     

穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜的抗炎修复作用

目的:观察穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠体质量、大便性状、出血情况、肠黏膜组织形态及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,探讨艾灸和埋线联合应用对UC大鼠的抗炎修复作用。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、埋线组、埋线加艾灸组,每组6只。采用三硝基苯磺酸联合乙醇灌肠法复制UC大鼠模型。穴位选取双侧"天枢""大肠俞""上巨虚"。艾灸组给予温和灸,每次10 min,每日1次,共干预14次。埋线组给予穴位简易埋线,每周1次,共干预2次。埋线加艾灸组干预方法同艾灸组、埋线组,埋线干预于温和灸干预6 h后进行。观察各组大鼠一般情况、体质量、大便性状、出血情况,并进行疾病活动指数(DAI)评估;HE染色法观察结肠黏膜组织形态变化;免疫组织化学法和Western blot法检测结肠黏膜IL-6的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠饮食减少,活动、精神差,易激惹,毛发少泽,便稀或不成形,肛周红肿伴脓血分泌;治疗后3个治疗组一般情况较模型组均有不同程度的改善。与正常组比较,模型组大鼠DAI明显升高(P0.01);与模型组比较,埋线加艾灸组、埋线组、艾灸组DAI均明显降低(P0.01,P0.05);埋线加艾灸组DAI明显低于埋线组、艾灸组(P0.01)。HE染色结果显示,正常组结肠组织结构完整清晰;模型组结肠黏膜上层缺损严重,有大量炎性细胞浸润;各治疗组大鼠结肠组织损伤均有所改善,有少量炎性细胞浸润,其中埋线加艾灸组改善最明显。与正常组比较,模型组结肠黏膜组织IL-6阳性表达及蛋白表达量明显增高(P0.01);与模型组比较,埋线加艾灸组、埋线组、艾灸组结肠黏膜组织IL-6阳性表达及蛋白表达量明显降低(P0.01,P0.05);且埋线加艾灸组IL-6明显低于埋线组、艾灸组(P0.01)。结论:埋线联合艾灸能有效降低UC大鼠DAI,改善结肠黏膜的病理损伤,下调促炎因子IL-6的表达,从而达到对UC大鼠结肠黏膜的抗炎修复作用。     

艾灸通过调控NLRP3炎性小体缓解5-氟尿嘧啶诱导的大鼠化疗性肠黏膜炎的实验研究

目的:探讨艾灸通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)缓解5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的化疗性肠黏膜炎的作用机制。方法:将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和艾灸组,每组10只,造模前7 d对艾灸组行艾灸处理,模型组与艾灸组采用单次腹腔注射5-FU造模,造模完成后,艾灸组继续行艾灸处理,正常组与模型组常规饲养,观察各组大鼠一般情况,检测血清中IL-1β、TNF-α、NLRP3含量,观察结肠组织病理改变,检测结肠组织NLRP3 mRNA表达水平,以及NLRP3组成相关蛋白及IL-1β的表达。结果:腹腔注射5-FU后,模型组体质量和摄食量下降明显,肠黏膜形态不规则,损伤严重,肠绒毛变短融合,上皮细胞排列紊乱。与模型组比较,艾灸组体质量增长、血便、摄食量均有不同程度改善,疾病活动指数评分显著低于模型组。艾灸组血清中IL-1β、TNF-α、NLRP3含量均显著低于模型组(P0.05或P0.01);艾灸组结肠组织中NLRP3炎性小体组成部分NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白及IL-1β表达显著低于模型组(P0.05)。结论:艾灸可通过抑制NLRP3炎性小体改善5-FU诱导的大鼠化疗性肠黏膜炎症状。     

艾灸对炎症性肠病大鼠结肠黏膜肥大细胞和TRPV1的影响

目的:观察艾灸对炎症性肠病大鼠结肠肥大细胞和TRPV1的影响,探讨肥大细胞和TRPV1在艾灸治疗炎症性肠病中的作用机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、西药组,每组10只。采用TNBs建立炎症性肠病大鼠模型,艾灸组给予天枢穴温和灸治疗,造模10 d后,收集标本.对大鼠行结肠大体形态评分及组织学损伤评分,分别用免疫组织化学法检测大鼠结肠黏膜中TRPV1的表达,采用改良甲苯胺蓝染色和计算机图像处理技术观察各组大鼠结肠肥大细胞形态和功能变化。结果:与正常组相比,艾灸组、模型组、西药组结肠组织学损伤评分均显著增高(P<0.01);而与模型组相比,艾灸组能显著改善组织学损伤评分(P<0.05)。模型组大鼠结肠黏膜肥大细胞脱颗粒率、TRPV1表达水平明显高于正常组(P<0.01);艾灸组结肠黏膜肥大细胞脱颗粒率、TRPV1表达与模型组相比显著降低(P<0.05)。结论:艾灸能够显著改善炎症性肠病大鼠结肠损伤及炎症反应,这可能与其有效抑制结肠黏膜肥大细胞脱颗粒、下调TRPV1的表达有关。     

祛瘀生新法对溃疡性结肠炎大鼠溃疡组织中IL-1β,IL-10表达的动态影响

目的:研究中医经验方“溃结2号方”对实验性大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)结肠黏膜组织白细胞介素-1β(interleukin-1β IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10 IL-10)表达的影响.方法:采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid TNBS)加免疫诱导法复制UC大鼠模型,造模成功后,共36只大鼠,随机分组为模型组,模型+阳性对照组(中药方组),模型+阴性对照组[柳氮磺胺吡啶(SalicylazosulfapyridineSASP)组]大鼠,每组12只.观察大鼠治疗后14 d及21d后大鼠结肠组织黏膜的病理改变(DAI及CMDI评分结果),用免疫组织化学PAP二步法检测大鼠结肠组织中IL-1β、IL-10的表达.结果:治疗14 d时,实验结果表明:中药组大鼠疾病活动指数(Disease Activity Index DAI)及结肠黏膜损伤指数(Colonic Mucosa Damage Index CM-DI)积分明显低于模型组(P＜0.05)和SASP组(P＜0.05),但与SASP组相比无明显差别;而中药组溃疡创面中IL-1β表达明显低于模型组(P＜0.01),也明显低于SASP组(P＜0.05);中药组创面中Ⅱ-10水平却明显高于模型组与SASP组(P＜0.05);治疗21d时,实验结果显示:中药组大鼠DAI及CMDI积分明显低于模型组(P＜0.01)和SASP组(P＜0.05),中药组大鼠Ⅱ-1β表达明显低于模型组(P＜0.01),也明显低于SASP组(P＜0.05);中药组IL-10表达明显高于模型组和SASP组(P＜0.05).结论:溃结2号方对溃疡性结肠炎大鼠有良好的治疗作用,且时间越长效果越好,其作用机理可能与降低IL-1β表达,和提高IL-10水平有关.     

白头翁汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜损伤修复作用的影响

目的 观察加味白头翁汤对TNBS局部灌肠加高脂高糖法UC大鼠模型结肠黏膜形态的影响,对其黏膜损伤修复作用机制进行探讨.方法 采用加味白头翁汤、及西药SASP对UC大鼠模型进行治疗,治疗结束后采集结肠黏膜标本,首先肉眼观察结肠黏膜组织,按组织损伤评分标准进行评分,进行组间比较分析.然后将结肠组织石蜡包埋,HE染色,光镜下进行观察.结果 模型组大鼠结肠黏膜损伤指数与正常组之间差异极显著(P＜0.01),加味白头翁汤方组可使结肠黏膜组织损伤和病理组织学评分降低,与模型组比较,差异显著(P＜0.01)；与西药对照组比较,无显著性差异(P＞0.05).结论 溃疡性结肠炎大鼠动物模型复制是成功的,加味白头翁汤方可抑制UC的炎性细胞浸润,使炎症减轻,同时还有促进结肠黏膜损伤修复,恢复结肠黏膜的分泌功能的作用.     

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜细胞间黏附分子-1基因和蛋白表达的影响

目的观察四神丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法40只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、四神丸组及柳氨磺吡啶(SASP)组,除空白组外,其余各组大鼠均以TNBS/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型,四神丸组给予四神丸浸膏剂5 g/kg灌胃,SASP组SASP 0.3 g/kg灌胃,灌胃体积均为10 mL/kg,空白组、模型组灌服等体积生理盐水,持续3周。肉眼观察结肠大体形态损伤并进行评分,采用RT-PCR和免疫组化法检测ICAM-1基因和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠组织黏膜层肉眼观察可见炎症和溃疡形成。模型组大鼠结肠组织ICAM-1基因和蛋白的表达量上调(P＜0.01);与模型组比较,四神丸组ICAM-1基因和蛋白表达量下调,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)。结论四神丸可能通过下调ICAM-1 mRNA和ICAM-1蛋白的表达量,抑制炎症细胞浸润,阻止并减轻结肠组织损伤,起到治疗UC的作用。     

基于5-羟色胺信号通路探讨艾灸治疗腹泻型肠易激综合征的机制

目的:观察艾灸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏敏感性、稀便率、结肠组织中5-羟色胺(5-HT)信号通路相关分子表达的影响,探讨艾灸治疗IBS-D的机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和艾灸组,每组10只。采用慢性束缚联合番泻叶灌胃法建立IBS-D大鼠模型。艾灸组艾灸大鼠"天枢""上巨虚",每天1次,每次30 min,共干预7 d。干预结束后,观察各组大鼠稀便率和直肠扩张所引起腹部回缩反射的最小容量阈值,酶联免疫吸附法检测结肠中5-HT含量,荧光定量PCR法检测结肠组织中色氨酸羟化酶1(TPH1)、5-HT转运体(SERT)和5-羟色胺受体3(5-HT3R)的mRNA表达量,Western blot法检测结肠组织中TPH1、SERT和5-HT3R的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组腹部回缩反射的最小容量阈值明显下降(P0.01),稀便率、结肠中5-HT含量及TPH1、5-HT3R的蛋白和mRNA表达量明显升高(P0.01),SERT的蛋白和mRNA表达量明显降低(P0.01)。与模型组比较,艾灸组腹部回缩反射的最小容量阈值明显升高(P0.01),稀便率、结肠中5-HT含量及结肠组织中TPH1、5-HT3R的蛋白和mRNA表达量均明显降低(P0.01),SERT的蛋白和mRNA表达量明显升高(P0.01)。结论:艾灸"天枢""上巨虚"可能是通过对IBS-D大鼠结肠组织中5-HT信号通路的多靶点协同作用来治疗IBS-D。     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠肿瘤坏死因子-α含量及艾灸鼠结肠上清液对培养的结肠上皮细胞内紧密连接蛋白及其基因表达的影响

目的:通过观察温和灸、隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导大鼠结肠上皮细胞紧密连接--咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin-1)和闭锁蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)及其基因表达的影响,探讨艾灸对肠上皮屏障损伤的修复/保护机制.方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组和西药组,各12只.采用三硝基苯磺酸制备克罗恩病(Crohn's Disease,CD)大鼠模型.温和灸组与隔药灸组选择"天枢""气海"穴分别予以温和灸和隔药灸,每日1次,共治疗14次;西药组以柳氮磺胺吡嘧溶液灌胃,每日2次,共14次.治疗结束后剖取各CD组大鼠结肠,制备结肠黏膜上清液;正常组纯化并培养结肠上皮细胞建立肠上皮屏障体外模型.将各CD组结肠黏膜上清液分别与正常大鼠结肠上皮细胞混合培养1周,采用ELISA法检测各组结肠黏膜上清液TNF-α含量,Western blot和荧光定量PCR法观察其对CD大鼠体外结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达的影响.结果:CD模型组较正常组大鼠结肠黏膜上清液中TNF-α含量有显著增高(P<0.01),温和灸、隔药灸和柳氮磺胺吡嘧治疗后TNF-α含量显著降低(均P<0.01),其中温和灸、隔药灸组优于西药组(均P<0.05);与此同时,温和灸、隔药灸和西药组结肠黏膜TNF-α上清液体外诱导大鼠结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达较模型组有显著增高(P<0.01,P<0.05),且隔药灸、温和灸两组也优于西药组(均P<0.05).结论:艾灸(隔药灸、温和灸)可能是通过降低CD大鼠结肠黏膜异常增高的TNF-α,进而促进或调节结肠上皮紧密连接.ccludin,claudin 1和ZO-1及其mRNA表达,达到修复/保护肠上皮屏障损伤的目的.     

芍药汤对湿热蕴结型溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜通透性相关蛋白表达的影响

目的:探究芍药汤对湿热蕴结型溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠肠黏膜通透性的作用机理。方法:将60只大鼠随机分为空白组、模型组、芍药汤高、中、低剂量组、柳氮磺吡啶(Salicylazosulfa Pyridin,SASP)组(西药组),每组10只,雌雄各半,采用高脂高糖辛辣饮食+免疫复合法+2,4,6-三硝基苯磺酸(Trinitrobenzenesulfonic Acid,TNBS)结合乙醇的方法复制湿热蕴结型UC大鼠模型,用药干预后第21天处死,取大鼠结肠病变部位组织,检测结肠组织中ZO-1、Occludin mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组中ZO-1、Occludin mRNA表达显著下降(P 0.01);与模型组比较,西药组中ZO-1和Occludin m RNA表达明显升高(P 0.01),芍药汤高、中剂量组ZO-1及Occludin mRNA表达显著提高(P 0.01)。与空白组比较,模型组中ZO-1、Occludin蛋白表达水平显著下降(P 0.01);与模型组比较,西药组、芍药汤各剂量组中ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显升高(P 0.01)。结论:芍药汤可以改善湿热蕴结型UC大鼠的肠黏膜通透性,修复肠黏膜屏障功能,达到治疗UC的目的。