补阳还五汤对大鼠缺血性脑中风损伤后轴突再生的影响

目的:探索补阳还五汤促进缺血性脑中风大鼠轴突再生和神经康复的作用。方法:SD大鼠共180只,建立大脑中动脉梗死(MCAO)模型,选取造模成功的大鼠随机分成模型组、补阳还五汤组(12 g·kg~(-1))和尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),另设假手术组,每组28只。连续灌胃给药7 d后,断头取脑,通过TTC染色检测脑梗死率,测定脑含水量检测脑水肿程度,改良银染法观察轴突变性,免疫荧光染色观察神经微丝蛋白-200(NF-200)的表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测排斥性导向分子a(RGMa),Ras同源酶(Rho),Rho激酶(ROCK)和脑衰反应调节蛋白2(CRMP2)的mRNA表达,并通过改良神经功能评分观察神经功能恢复情况。结果:与假手术组比较,模型组的脑梗死体积和脑含水量显著上升(P0.01),神经功能显著下降(P0.01),轴突变性和神经纤维损伤严重,轴突生长相关蛋白的mRNA表达异常(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤组和尼莫地平组的脑损伤程度明显降低,表现为脑梗死率和脑含水量显著降低(P0.01),轴突变性减少;NF-200阳性染色增多;RGMa,Rho和ROCK的mRNA表达明显降低(P0.05),CRMP2的mRNA表达显著升高(P0.01),神经功能明显提高(P0.05)。结论:补阳还五汤可通过调节轴突生长相关蛋白的mRNA表达促进缺血性脑中风损伤后轴突再生,从而改善神经功能。     

细胞膜固相色谱法联合网络药理学探讨补阳还五汤促进缺血性脑卒中康复的作用

目的:采用细胞膜固相色谱法联合网络药理学探讨补阳还五汤促进缺血性脑卒中康复的作用机制。方法:细胞膜固相色谱法筛选补阳还五汤供试液中与海马神经元细胞特异性结合的成分;检索PubChem,PharmMapper,在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM),GeneCards等数据库获取特异性结合成分的作用靶点及缺血性脑卒中疾病的靶点;借助STRING,Cytoscape 3.7.1软件绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;利用DAVID在线数据库对PPI网络中的核心靶点进行基因本体(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)生物途径分析,探讨补阳还五汤促进缺血性脑中风康复可能的作用机制。结果:通过细胞膜固相色谱法,筛选出了13个与海马神经元细胞特异性结合的成分;通过网络分析和靶点富集,显示作用靶点主要关联细胞增殖调控、蛋白质磷酸化、缺氧反应、血管生成等生物过程,对叉头转录因子(FoxO)信号通路、腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路、细胞凋亡通路等具有广泛的干预作用。结论:补阳还五汤可能通过调节FoxO,AMPK,NF-κB,细胞凋亡等信号通路促进缺血性脑中风的康复。     

激光散斑衬比成像技术观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后脑微血流的影响

目的：建立脑缺血再灌注大鼠模型,观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后脑微血流的影响。方法：将动物分为对照组、模型组、补阳还五汤组、重组人血管内皮抑制素组、补阳还五汤+重组人血管内皮抑制素组,应用激光散斑衬比成像技术观察大鼠梗死区域脑血流状态,测定脑组织的含水量,并检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白及基因表达水平。结果：与对照组相比,脑缺血再灌注大鼠模型大鼠脑血流速度明显降低（P<0.01）,脑组织含水量增高（P<0.01）,VEGF蛋白和基因的表达减少（P<0.01）;与模型组相比,补阳还五汤组能明显提高脑缺血再灌注大鼠模型大鼠脑血流速度（P<0.01）,降低脑组织含水量（P<0.01）,提高VEGF蛋白和基因的表达（P<0.01）。结论：补阳还五汤具有改善缺血再灌注后脑血流的作用,而调节VEGF蛋白及基因的表达水平是其参与改善脑血流的主要途径之一。     

王老吉凉茶化学成分研究

目的:对王老吉凉茶化学成分进行研究。方法:采用大孔树脂、硅胶柱层析、Sephadex LH-20和Rp-18柱色谱进行分离纯化,利用现代波谱技术对化合物进行结构鉴定。结果:从王老吉凉茶的总提物中分离并鉴定出17个化合物,分别为:甘草酸(1)、甘草苷(2)、灰毡毛忍冬皂苷乙(3)、川续断皂苷乙(4)、异绿原酸A(5)、绿原酸(6)、木犀草苷(7)、水仙苷(8)、芦丁(9)、原儿茶酸(10)、原儿茶醛(11)、咖啡酸(12)、迷迭香酸(13)、三叶豆苷(14)、迷迭香酸甲酯(15)、α-香树脂醇(16)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖(17)。结论:分离的化合物多为水溶性较好或者极性较大的化合物,主要的结构类型为酚酸类成分7个(化合物5、6、10～13、15);黄酮苷类成分6个(化合物2、7～9、14、17);皂苷类成分3个(化合物1、3、4);甾醇类成分1个(化合物16)。     

毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2 小胶质细胞极化的影响

探讨毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2 小胶质细胞极化的影响。方法 将对数生长期BV2 细胞 随机分为6 组：正常组、模型组、尼莫地平组（5 μg·mL-1）、毛蕊异黄酮高剂量组（20 μg·mL-1）、毛蕊异黄酮中 剂量组（10 μg·mL-1）、毛蕊异黄酮低剂量组（5 μg·mL-1）。氧糖剥夺3 h 后,各给药组换成含药的完全培养基, 复氧6 h。采用CCK-8 法检测细胞活力;测定细胞上清液中的一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白 细胞介素1β（IL-1β）、IL-10 含量;免疫荧光双染法检测BV2 细胞极化;Western Blot 法检测BV2 细胞的 iNOS、CD206 蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组的BV2 细胞活力显著降低（P＜0.01）,NO、 TNF-α、IL-1β 水平明显升高（P＜0.05）,IL-10 水平明显降低（P＜0.05）;免疫荧光双染检测中M1 型小胶质细 胞标记物iNOS 表达显著增强（P＜0.01）;Western Blot 检测中iNOS 蛋白表达明显上调（P＜0.05）,M2 型细胞标 志物CD206 蛋白表达明显下调（P＜0.05）。与模型组比较,毛蕊异黄酮低、中、高剂量组及尼莫地平组的BV2 细胞活力显著提高（P＜0.01）,NO、TNF-α、IL-1β 水平明显降低（P＜0.05）,IL-10 水平明显升高（P＜0.05）; 免疫荧光双染检测中毛蕊异黄酮（10 μg·mL-1）组BV2 细胞的iNOS 表达显著减弱（P＜0.01）;Western Blot 检测 中毛蕊异黄酮（10 μg·mL-1）组BV2 细胞的iNOS 蛋白表达明显下调（P＜0.05）,CD206 蛋白表达明显上调（P＜ 0.05）。结论 毛蕊异黄酮能促进活化的BV2 小胶质细胞向M2 型极化,抑制其向M1 型极化,减少炎性介质 的产生,降低氧化损伤,对缺血后脑组织损伤具有保护作用。     

益脑康提取液指纹图谱的建立及4种成分含量的测定

目的：建立益脑康提取液的HPLC指纹图谱及其指标成分含量测定方法,结合指纹图谱和含量测定结果,为评价益脑康的质量提供依据。方法：采用HPLC法,建立10批益脑康提取液的HPLC指纹图谱,标定共有峰,并进行相似度评价;对采用对照品对比确认的盐酸益母草碱、阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷等4个成分进行含量测定,比较不同批次样品的质量差异。结果：10批益脑康提取液相似度均大于0.9,确定了22个共有峰,指认出峰5为盐酸益母草碱、峰8为阿魏酸、峰9为毛蕊异黄酮苷、峰18为芒柄花苷;4种成分在各自范围内线性关系良好（R²≥0.999 6）,精密度、稳定性、重现性试验中的RSD均小于5%,平均加样回收率为99.00%~103.62%,10批益脑康提取液中4种成分的含量为0.703~1.099,0.918~2.428,0.258~0.475,0.112~0.222 mg·g^-1。结论：所建立的指纹图谱和含量测定方法准确可靠,重现性好,可用于益脑康提取液的质量控制,并为益脑康相关制剂开发与质量评价提供参考。     

基于UPLC-Triple TOF MS/MS和网络药理学技术分析打箭菊总黄酮部位保肝活性成分及其潜在靶点研究

目的:研究打箭菊总黄酮部位的主要化学成分,以其总黄酮中的化学成分结合网络药理学方法预测其保肝作用的潜在靶点。方法:采用80%乙醇加热回流提取打箭菊药材,提取液过AB-8大孔树脂柱,以30%乙醇洗脱获得总黄酮部位,利用UPLC-Triple TOF MS/MS技术对打箭菊总黄酮部位进行检测,通过对照品、分子量和质谱裂解规律对打箭菊化学成分进行鉴定。通过Pubchem数据库、Swiss Target Prediction数据库和Cytoscape分析软件构建打箭菊总黄酮化学成分-靶点作用网络图。结果:从打箭菊总黄酮部位中鉴定18个主要的化学成分,其中12个化学成分通过串联质谱进行了结构推测,6个化学成分通过对照品得到确证。通过网络药理学研究预测出打箭菊保肝作用的5个潜在靶点。结论:UPLC-Triple TOF MS/MS技术可用于打箭菊总黄酮部位的化学成分鉴定,通过网络药理学研究可预测打箭菊保肝作用的潜在靶点,为深入阐释打箭菊保肝作用机制提供参考依据。     

虎金方对MAFLD小鼠脂质代谢相关因子的影响北大核心

目的:探讨虎金方对MAFLD模型小鼠脂质代谢相关因子的影响及治疗作用。方法:将50只SPF级健康雄性C57/BL6J小鼠随机分为5组:正常对照组、模型组及虎金方高(21.24 g/kg)、中(10.62 g/kg)、低(5.31 g/kg)剂量组,每组10只。正常对照组予低脂饲料进行喂养,其余各组予高脂饲料进行喂养。造模成功后,虎金方各剂量组灌胃相应浓度药液,其余各组灌胃相应体积生理盐水,1次/d,共4 w。末次给药后,采血用于检测血脂及肝功能。分离适量肝组织投入4%多聚甲醛溶液内用于制作病理切片,其他肝组织用于检测脂质代谢相关因子的基因表达。结果:与正常对照组比较,模型组中TC、TG、ALT、AST水平显著升高(P<0.01);HE及油红O染色观察结果显示,在小鼠的肝组织内可见分布较多脂肪空泡,肝细胞体积增大,部分组织细胞呈气球样病变,红色脂滴分布广泛;RT-PCR结果显示肝组织mTOR、S6K1、LXRα、FAS、SCD1 mRNA表达显著升高,ACC mRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,虎金方各剂量组TC、TG、ALT、AST水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肝组织内脂肪空泡明显减少,仅部分仍可见散在脂滴,其中以高剂量组改善尤为明显;虎金方各剂量组肝组织mTOR、S6K1、LXRα、FAS、SCD1 mRNA表达显著降低,ACC mRNA表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:虎金方对MAFLD小鼠有一定治疗作用,其机制可能与调控脂质代谢相关因子,抑制脂质积累,促进脂质代谢有关。