UPLC法同时测定不同产地桔梗中13种核苷类成分

目的:建立UPLC法同时测定不同产地桔梗中13种核苷类成分的含量。方法:采用超声法提取,色谱柱:Waters HSS T3柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相为乙腈(A)-0.01%甲酸溶液(B),梯度洗脱(1~8 min,0%~8%A;8~9 min,8%~15%A;9~10.5 min,15%A;10.5~11 min,15%~0%A;11~15 min,0%A);柱温为30℃,流速为0.3 m L/min,检测波长为260 nm;进样量为3μL。结果:不同产地桔梗中13种核苷类化合物的含量差异很大,总含量最高为山东泰安(1451.40μg/g),最低为河南南阳(325.86μg/g)。结论:UPLC方法操作简便,准确可靠,重复性高,可用于桔梗药材中核苷类成分含量的测定,可作为不同产地桔梗质量控制的一种评价指标。     

不同产地和商品等级延胡索中尿苷、鸟苷、腺苷的含量分析

目的:建立高效液相色谱法同时测定延胡索药材中尿苷、鸟苷和腺苷3种核苷成分含量的方法,并比较不同产地、不同商品等级中3种核苷类成分含量的差异和各成分间的结构比。方法:采用Venusil MP C18(2)色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相梯度洗脱(0~10 min,1%~5%A;10~15 min,5%~15%A;15~22 min,15%~17%A;22~26 min,17%~20%A;26~32 min,20%~24%A),流速1.0 m L·min-1,柱温35℃,检测波长260 nm。运用上述方法对38批延胡索药材进行测定,并对测定结果进行聚类分析。结果:测定了延胡索药材中3种核苷类成分的含量,在线性范围内线性关系良好(r0.999 8),平均回收率为99.63%~104.24%,RSD为0.7%~2.3%。38批延胡索样品中尿苷、鸟苷和腺苷均可检测到,不同产地延胡索药材中尿苷、鸟苷、腺苷量及组成结构比差异显著;同一产地不同种植户的延胡索药材其3种成分量及组成结构比也存在明显差异。采用聚类分析能将不同产地的38批延胡索药材分为3类。结论:总体上来说,不同产地延胡索药材成分的组成存在显著性差异,不同商品等级延胡索中核苷类含量无明显差异,延胡索药材的质量受自然环境、栽培技术因素的影响。该方法适用于延胡索中尿苷、鸟苷和腺苷的含量测定,为其质量控制提供保证。     

野菊花的质量标准研究

目的以黄酮类化合物蒙花苷和倍半萜类化合物豚草素A为指标成分,对不同产地的野菊花药材进行定性定量研究,提高野菊花的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对蒙花苷和豚草素A进行定性分析;采用高效液相法(HPLC)测定蒙花苷和豚草素A的量;YMC C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B);梯度洗脱,0~18 min,25%~26%A;18~26 min,26%~32%A;26~33 min,32%~34%A;33~35 min,34%~40%A;35~65 min,40%~50%A;体积流量0.8 m L/min;检测波长203、340 nm;柱温35℃。结果蒙花苷和豚草素A的TLC鉴别特征较为明显,不同产地二者的量有所不同,其中信阳野菊花药材中蒙花苷和豚草素A的量最高,分别为6.53%和0.81%。结论首次建立了野菊花药材不同类指标成分的TLC和HPLC法测定综合评价方法,该方法简单、准确、重复性好,研究表明蒙花苷和豚草素A的量能够反映野菊花药材的品质,为提高野菊花现有的质量标准提供了科学的实验依据。     

星裂硬皮马勃不同部位麦角甾醇含量的高效液相色谱法测定

目的建立星裂硬皮马勃中麦角甾醇的含量测定方法,并考察其不同部位麦角甾醇的含量。方法采用高效液相色谱法,汉邦ODS-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇,检测波长282 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃。结果麦角甾醇在进样量0.209 6~1.467 2μg范围内峰面积具有良好的线性关系,回归方程Y=130 328X-37 700(r=1),平均回收率为97.61%,RSD值为1.08%。菌丝中麦角甾醇含量高于孢子,发酵液中不含麦角甾醇。结论该方法简便、快速、准确,重复性好,麦角甾醇可作为控制星裂硬皮马勃药材及发酵菌丝质量的一个指标成分。     

HPLC法同时测定不同产地五味子中5种木脂素类成分的含量

目的:利用高效液相色谱法测定不同产地五味子中5种木脂素类成分的含量,并比较其差异。方法:采用菲罗门XB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~10 min,A为50%;10~15 min,A为50%~75%;15~25 min,A为75%;25~30 min,A为75%~50%);检测波长:217 nm;流速:1.0m L/min;柱温:30℃;进样体积:10μL。结果:5种木脂素类成分与相邻组分分离度均大于1.5,方法学考察结果均符合有关规定。结论:不同产地五味子中木脂素类成分含量存在较大程度的差异,建立的HPLC方法能够同时测定五味子药材中的5种成分的含量,可用于五味子药材及其制剂中木脂素类成分的含量测定和质量控制。     

淫羊藿黄酮类成分指纹图谱研究

目的建立淫羊藿中黄酮类成分HPLC指纹图谱。方法采用Agilent ZORBAX Eclispse SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～8 min,15%→25%A;8～25 min,25%A;25～32 min,25%→33%A,32～48 min,33%→38%A;48～60 min,38%→60%A;60～70 min,60%→85%A;70～75min,15%A),流速1.0m L/min,柱温30℃,检测波长为270nm,进样量10μL。对11批淫羊藿指纹图谱进行相似度分析及方法学考察。结果 11批淫羊藿药材有21个共有峰,相似度为0.845～0.952,对5个色谱峰进行了归属;方法学考察结果表明,建立的分析方法重复性、精密度、稳定性良好;相似度分析将11批淫羊藿分为4大类,与淫羊藿物种鉴定结果一致。结论不同产地淫羊藿有一定的相似性,HPLC指纹图谱能够为淫羊藿的物种鉴定及内在质量评价提供依据。     

不同产地爵床药材HPLC成分差异性研究

目的:研究不同产地爵床药材成分的差异性,建立HPLC检测方法。方法:采用Thermo Hypersil GOLD C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水进行梯度洗脱,检测波长262 nm,流速0.6 m L/min,柱温25℃,建立17个不同产地爵床药材HPLC图谱,应用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)"进行相似度评价,结合其中2个共有成分含量测定结果分析其差异性。结果:不同产地爵床药材HPLC图谱相似度在0.639~0.896,2个共有成分6'-羟基-爵床定B和爵床定B含量分别在0.024~0.531 mg/g、0.038~1.036 mg/g间。结论:不同产地爵床药材HPLC成分及其所测定的2个共有成分6'-羟基-爵床定B和爵床定B含量均存在明显差异性;所用HPLC检测方法经方法学验证稳定、准确、可靠,可用于分析检测爵床药材成分的差异性,也为该药材的质量评价提供参考。     

不同产地松香药材中松香酸的含量测定

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定不同产地松香药材中的松香酸含量,为松香药材的质量控制提供依据。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Akasil-C18柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-0.5%冰乙酸溶液(72∶15∶13);检测波长为241nm;流速为1.0ml/min,柱温30℃,进样量为10μl。结果:建立了松香中松香酸的提取方法和HPLC含量测定方法。10批松香中松香酸含量范围1.12%~81.35%。结论:市售不同产地松香药材中松香酸量差异较大,提示药材质量参差不齐,亟需质量规范和控制。本研究建立的方法结果准确,稳定性好,简便易行,可用于松香药材的质量控制。     

知母的HPLC-ELSD指纹图谱研究

目的采用HPLC-ELSD法建立知母的指纹图谱,全面综合反映和控制知母整体质量。方法 Thermo色谱柱C8(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.2%冰醋酸水溶液(B)梯度洗脱:0~5 min,5%~7%A;5~15 min,7%~15%A;15~36 min,15%~22%A;36~43 min,22%~35%A;43~51 min,35%~50%A;51~60 min,100%A;柱温25℃,体积流量1 m L/min,ELSD检测器雾化器(空气)体积流量2.6 L/min,漂移管温度100℃,进样量20μL。结果在60 min内获得了较好分离效果的特征图谱,确定12个主要特征峰作为共有峰,建立了能够使多数化学成分色谱分离的知母药材HPLC-ELSD指纹图谱。结论该方法简便、可靠,并且同时指认了知母中皂苷类和双苯吡酮类成分,能较全面地反映知母整体性的化学成分特征,可用于全面有效地控制知母的质量。     

HPLC法同时测定毛果婆婆纳中3种环烯醚萜苷

目的建立HPLC同时定量测定采自西藏、四川阿坝毛果婆婆纳中梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ的方法。方法采用外标法,Gemini C18色谱柱(110,4.60 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~13 min,3%A;13~20 min,3%~15%A;20~50 min,15%A;50~60 min,15%~21%A;60~70 min,21%A;70~110 min,21%~100%A),体积流量1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长203 nm。结果梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ的线性范围分别为0.101 5~5.076μg,0.093 2~4.66μg,0.043 6~2.18μg;平均加样回收率分别为98.9%(RSD 1.0%),103.8%(RSD 0.7%),98.8%(RSD 1.9%)。结论 10个产地婆婆纳中梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ的量差异明显,高低差异近10倍之多。     

椪柑柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶基因的克隆、分析及表达

目的克隆中药橘核主要来源品种椪柑Citrus reticulata的柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶(limonoid-UDP-glucosyl transferase gene,LGT)基因,并进行生物信息学及表达分析为橘核有效成分合成及调控机制研究提供基础。方法克隆获得LGT序列,通过生物信息学对该基因蛋白的特征进行分析,构建LGT与相关物种LGT的系统进化树,利用RT-PCR分析橘皮、橘肉以及橘核中LGT基因表达量,并进行分析和比较。结果测序所得椪柑LGT序列全长为1 530 bp,具有1 509 bp的完整开放阅读框,编码502个氨基酸。并对其蛋白二级、三级结构进行了分析和预测。基因表达分析结果发现椪柑LGT基因在橘核中表达量最低,其次为橘皮,表达量最高为橘肉。结论成功克隆、分析并表达了椪柑LGT基因,为橘核中柠檬苦素类物质合成及调控机制研究提供基础。     

酉时艾灸涌泉穴在肾阳虚质护士中的应用研究

[目的] 观察艾灸涌泉穴对肾阳虚质护士睡眠和生活质量的影响。[方法] 选取2022年5—9月肾阳虚质护士60例,随机将其分为对照组和艾灸组各30例,对照组酉时进行温水泡足,艾灸组酉时温水泡足后涌泉穴行温和灸20 min。14 d后评估两组护士的睡眠质量和生活质量。[结果] 组内干预前后相比,艾灸组与对照组干预后睡眠质量指数得分均低于干预前（P < 0.05）,生活质量得分均高于干预前（P < 0.05）;组间干预后比较,艾灸组睡眠质量指数得分低于对照组,且生活质量得分高于对照组（P < 0.05）。[结论] 酉时艾灸涌泉穴可显著提高肾阳虚质护士的睡眠质量和生活质量,建议肾阳虚质的护士,可通过艾灸涌泉穴改善体质,达到未病先防的目的。     

不同比例甘草配伍祖师麻抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究

目的 观察不同比例甘草配伍祖师麻对大鼠佐剂性关节炎（AA）模型的治疗作用,筛选两者配伍比例,探讨其配伍意义。方法 采用足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备AA模型,将140只模型大鼠随机分成14组：模型组,雷公藤多苷片组,祖师麻低、中、高剂量组,甘草低、中、高剂量组,祖师麻-甘草（3：1）低、中、高剂量组,祖师麻-甘草（3：2）低、中、高剂量组,另取10只正常大鼠为对照组,给药组大鼠造模前2 d开始ig给药,连续给药31 d,观察各组大鼠体质量变化,计算足肿胀度、关节炎指数（AI）,采用ELISA法检测大鼠血清炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的水平,观察大鼠膝关节组织病理变化,通过免疫组化法测定大鼠膝关节滑膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）、巨噬细胞游走抑制因子（MIF）的表达。结果 与模型组比较,祖师麻组、祖师麻甘草配伍组能够明显抑制AA大鼠体质量减轻的趋势,对抗AA大鼠足肿胀度及AI的增加,降低异常升高的血清TNF-α、IL-1β水平,改善关节病理组织变化,减少滑膜组织VEGF、MIF的表达,其中以祖师麻-甘草（3：2）配伍组效果最优。结论 祖师麻甘草配伍后,对AA大鼠各项指标改善作用显著,作用优于单用祖师麻,其最佳配伍比例为祖师麻-甘草（3：2）。调节血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1β及滑膜组织VEGF、MIF的表达,可能是祖师麻甘草配伍治疗类风湿性关节炎机制之一。     

肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量测定

目的:建立肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量方法.方法:采用紫外分光光度法,以去氢二异丁香酚为对照品,测定波长275 nm.结果:去氢二异丁香酚质量浓度在1.5～9.0 mg·L-1与吸光度呈良好线性关系,r=0.999 8,平均回收率97.6％(n=6),RSD 1.2％.结论:建立的方法简便、快速、重复性好.     

六经头痛片中辛夷和细辛GC指纹图谱研究

目的建立六经头痛片原料药材辛夷和细辛的GC指纹图谱,为六经头痛片质量评价提供依据。方法采用Aglient DB-WAX(20 m×0.18 mm,180μm)气相色谱柱,优化程序升温条件,测定11批辛夷、细辛原料药材,利用SPSS聚类分析和中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)建立辛夷药材指纹图谱,并通过Agilent 7890A-5975C气-质联用仪对共有峰进行指认。结果通过11批样品的测定和SPSS聚类分析将10批辛夷药材聚为一类,并建立辛夷药材GC指纹图谱,相似度均在0.9以上,共得22个共有峰,其中归属至全方的成分为14个,药材独有成分8个;将10批细辛药材聚为一类,并建立细辛药材GC指纹图谱,相似度均在0.9以上,共得11个共有峰,其中归属至全方的成分为4个,药材独有成分为7个。结论本方法专属性强、准确性高、重复性良好,可为辛夷、细辛药材的质量控制提供依据。     

酸碱药对甘草-马钱子配伍汤液沉积相态释放特性研究

目的 探讨甘草-马钱子配伍汤液沉积相态的释放行为,为甘草-马钱子配伍减毒提供科学参考。方法 建立沉积相态释放测定HPLC法,通过体外释放实验,追踪沉积相态在蒸馏水、人工胃液、人工肠液等不同介质中主成分的释放行为,并对其释放结果进行拟合研究分析。结果 甘草酸、马钱子碱以及士的宁在人工肠液中的释放量较大,且马钱子碱>甘草酸>士的宁。马钱子碱和甘草酸均与一级动力学模型拟合结果最佳,士的宁与Higuchi模型拟合结果最佳。结论 甘草-马钱子沉积相态主要毒效成分呈现出难溶性骨架材料缓释制剂的释放特性,毒(效)成分士的宁可能以沉积共聚体形式存在,在体释放呈缓释行为而减毒;同时,甘草酸的释放对减毒增效起到协同作用。     

夏天无HPLC指纹图谱及多指标含量测定研究

目的建立夏天无HPLC指纹图谱及多指标成分测定方法,为夏天无药材质量标准提升提供科学依据。方法采用HPLC法,Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(三乙胺调pH 6.0)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;进样量10μL;检测波长280 nm;建立15批夏天无药材的指纹图谱,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)进行评价,聚类分析和主成分分析将15批药材分为2类,同时测定原阿片碱、黄藤素、荷包牡丹碱和延胡索乙素4种成分的含量。结果建立了夏天无药材的HPLC指纹图谱,共标定了10个共有峰;原阿片碱、黄藤素、荷包牡丹碱和延胡索乙素线性关系良好,r均大于0.999 9,平均回收率分别为97.12%、100.09%、98.53%、99.71%。结论 HPLC指纹图谱结合多指标成分测定可为夏天无药材质量评价提供参考。     

瓜蒌皮药材的HPLC指纹图谱

目的：建立瓜蒌皮药材的 HPLC 指纹图谱。方法：采用 Agilent TC-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈-0.2%冰乙酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长 260 nm,流速 0.8 mL·min^-1,柱温 25℃,进样20 μL。结果：建立了瓜蒌皮药材的HPLC指纹图谱,方法学考察结果良好,确立了13个共有峰,其中5个共有峰得到确认,10批瓜蒌皮样品指纹图谱的相似度均>0.9。结论：该方法稳定性、重复性好,建立的指纹图谱可为瓜蒌皮的质量评价提供依据。     

不同氮源对丹参和藏丹参毛状根有效成分积累的影响

目的氮素是中药材有效成分积累的重要影响元素,为探讨不同氮源对丹参Salviamiltiorrhiza和藏丹参Salvia castanea毛状根生长和活性成分积累的影响。方法分别采用硝酸铵、水解乳蛋白、蛋白胨、牛肉浸膏、酪蛋白和酵母提取物6种氮源处理对丹参和藏丹参毛状根的影响,分析毛状根生长及活性成分积累的变化。结果硝酸铵最有利于2种丹参毛状根的生长。水解乳蛋白能够显著促进丹酚酸类成分的积累,与硝酸铵对照相比,丹参迷迭香酸和丹酚酸B含量分别提高了2.94倍和3.27倍,藏丹参二者含量分别提高了13.74倍和2.01倍。酵母提取物对2种丹参毛状根二氢丹参酮Ι和隐丹参酮积累的促进效果最为显著,水解乳蛋白能显著促进丹参根中丹参酮IIA的积累,牛肉浸膏则对藏丹参中丹参酮IIA积累的促进作用最为显著。结论硝酸铵是2种丹参毛状根生长的最佳氮源,水解乳蛋白是丹酚酸积累的最佳氮源,不同氮源对4种丹参酮的影响不一致,丹参和藏丹参对不同氮源的响应也不一致。该研究不仅对丹参毛状根规模化培养及活性成分工业化生产具有一定指导意义,也对藏丹参资源的开发利用提供了借鉴作用。     

内生真菌链格孢菌醋酸乙酯提取物对大肠杆菌抑菌机制的研究

目的研究分离自药用植物白毛蛇Humata tyermanni的内生真菌链格孢菌发酵产物醋酸乙酯提取物(B06e)对大肠杆菌的抑菌机制。方法采用倍比稀释法测定了B06e对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC);测定了B06e作用前后大肠杆菌培养液电导率、核酸和蛋白质的变化;结合流式细胞仪、扫描电子显微镜、凝胶阻滞实验、圆二色谱和荧光实时定量PCR的分析方法研究了B06e对大肠杆菌细胞膜结构、形态、DNA的影响。结果 B06e对大肠杆菌的MIC为25μg/m L,3×MIC处理组的电导率是对照组的1.01倍;3×MIC处理组的β-半乳糖苷酶活性是对照组的11.6倍;流式细胞仪分析表明3×MIC处理组被碘化丙啶(PI)染色的阳性细胞比是对照组的286.5倍;扫描电子显微镜结果显示,B06e处理后菌体表面变得粗糙,细胞膜大量塌陷;以上结果说明B06e能增大细胞膜的通透性,破坏细胞膜的完整性。凝胶阻滞、圆二色谱的结果表明,B06e能够以嵌插的方式与DNA结合,但不能降解DNA;实时定量PCR结果表明,经B06e处理后rec A和rec N基因的表达量分别是对照组的2.9和3.7倍,说明B06e能破坏DNA的结构,迫使大肠杆菌启动了SOS修复。结论 B06e通过破坏大肠杆菌细胞膜完整性和DNA的结构,使得细菌代谢紊乱,最终导致细菌丧失了生长繁殖的能力。