银杏内酯B柔性纳米脂质体的制备及体外透皮研究

目的：制备银杏内酯B(GB)柔性纳米脂质体，并对其体外透皮规律进行研究。方法：采用薄膜分散法制备银杏内酯B柔性纳米脂质体，并对其形态及粒径大小进行分析；采用改良的 Franz 扩散池进行体外透皮吸收试验，比较银杏内酯B醇溶液、银杏内酯B柔性纳米脂质体及普通银杏内酯B纳米脂质体的经皮累积渗透量及渗透速率。结果：此方法制得的脂质体平均包封率为(89.52±1.76)%，平均粒径为(208.3±25.49) nm，Zata电位为-49.2 mV。柔性纳米脂质体8 h的累积透过量为189.97 μg·cm^-2，8 h的渗透速率为23.75 μg·cm^-2·h^-1。结论：柔性纳米脂质体包封率较高，稳定性良好，可显著促进银杏内酯B的透皮吸收。     

银杏内酯B柔性纳米脂质体的制备及体外透皮研究

目的：制备银杏内酯B(GB)柔性纳米脂质体，并对其体外透皮规律进行研究。方法：采用薄膜分散法制备银杏内酯B柔性纳米脂质体，并对其形态及粒径大小进行分析；采用改良的 Franz 扩散池进行体外透皮吸收试验，比较银杏内酯B醇溶液、银杏内酯B柔性纳米脂质体及普通银杏内酯B纳米脂质体的经皮累积渗透量及渗透速率。结果：此方法制得的脂质体平均包封率为(89.52±1.76)%，平均粒径为(208.3±25.49) nm，Zata电位为-49.2 mV。柔性纳米脂质体8 h的累积透过量为189.97 μg·cm^-2，8 h的渗透速率为23.75 μg·cm^-2·h^-1。结论：柔性纳米脂质体包封率较高，稳定性良好，可显著促进银杏内酯B的透皮吸收。     

银杏内酯对PC12细胞缺糖损伤凋亡相关基因的影响

目的：考察银杏内酯对缺糖引起的PC12细胞损伤的保护作用及对凋亡相关基因表达的影响,探讨银杏内酯对中枢神经系统的保护机制。方法：缺糖培养引起PC12细胞损伤,分别加入100,10,1,0.1 mg·L^-1的银杏内酯,MTT法检测给药前后与正常组的细胞活力变化,实时荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR, FQ-PCR)法分析各组抑制凋亡基因(Bcl-2),凋亡诱导基因(Bax)及原癌基因(c-myc)的表达情况。结果：缺糖培养早期12 h时,银杏内酯给药使Bcl-2表达量增高,Bax和c-myc表达量降低；缺糖培养24 h时,银杏内酯仅能引起c-myc的表达量下降。结论：在细胞缺糖损伤早期,银杏内酯通过调节凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-myc产生细胞应激保护效应,在损伤晚期主要通过调节c-myc的表达量产生应激保护效应。     

银杏二萜内酯葡胺注射液中银杏内酯A、B、K与人血浆蛋白结合率的测定

目的：研究银杏二萜内酯葡胺注射液与人血浆蛋白的结合情况。方法：采用平衡透析法测定银杏二萜内酯葡胺注射液中银杏内酯A（GA）、银杏内酯B（GB）和银杏内酯K（GK）与人血浆蛋白的结合 率,以LC-MS/MS法测定透析内外液中各待测物的浓度,计算其血浆蛋白结合率。结果：血浆中其他成分对测定无干扰,各待测物在选择浓度范围内线性关系均良好,精密度及稳定性结果均符合方法学要求;样品孵育8 h后,GA、GB和GK与人血浆蛋白结合基本达到平衡,此时GA（0.34、1.70 和8.51 μg·mL^-1）与人血浆蛋白结合率为84.03%-88.11%,GB（0.62、3.09 和15.5 μg·mL^-1）与人血浆蛋白结合率为41.21%-53.56%,GK（0.04、0.20 和1.01 μg·mL^-1）与人血浆蛋白结合率为45.24%-59.59%。结论：该方法操作简便、快速,灵敏度高,能满足生物样品的分析要求。GA与血浆蛋白结合较强,GB和GK具有中等强度的蛋白结合率。     

液相色谱-电喷雾质谱定量测定银杏内酯的研究

目的:研究了用液相色谱-电喷雾质谱联用技术定量测定4种银杏内酯的方法。方法:采用ZOR-BAXRX-C₁₈(2.1 mm×150 mm)色谱分析柱,梯度洗脱,0 min时,流动相甲醇-水(25∶75),25 min,甲醇-水(35∶65);柱温25℃;流速0.25 mL.min^-1,采用电喷雾负模式[ESI(Neg)]、选择离子采集方式[SIM]定量测定了银杏内酯A,B,C和白果内酯BB。结果:该方法测定银杏内酯的线性范围为4.04~1.01×10²ng,r为0.993 7~0.999 8,RSD为2.50%~4.73%。选择离子采集方式的检测限可达1.47×10^-3~0.320μg.mL^-1。结论:该方法稳定、可靠,能快速定量测定微量银杏内酯。     

HPLC-ELSD在肝微粒体中银杏萜内酯的测定及其代谢研究中的应用

 目的为研究银杏萜内酯的代谢作用机制和进一步开发利用,建立其体外代谢的HPLC-ELSD测定法。方法以Dia-monsil^TMODS-C₁₈为色谱柱;甲醇-水(37:63)为流动相,流速1.0mL·min^-1;蒸发光散射检测器(ELSD)检测:漂移管温度60℃,雾化气(N₂)压力0.25MPa。鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯用乙醚提取,空气流下挥干乙醚,残渣用适量流动相溶解,取40μL进样,测定剩余银杏内酯A,B,C和白果内酯的含量。对鼠肝微粒体孵育液中银杏萜内酯的HPLC-ELSD进行方法学研究,并应用于银杏萜内酯的体外代谢研究。结果白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C分别在3.30～133.60,6.8～136.0,5.40～109.0和3.6～72.0mg·L^-1内呈现良好的线性关系,相关系数r分别为0.9936,0.9964,0.9959和0.9930(n=5)。测得定量限分别为3.30,6.80,5.40和3.60mg·L^-1(RSD<15%,n=3);检测限分别为12,32,20和16ng(S/N=3);方法回收率分别为85.9%～102.9%,85.9%～98.3%,88.6%～98.9%和85.4%～101.8%(n=5),日内、日间精密度小于10.5%。孵育液中其他成分不干扰银杏萜内酯的测定。结论本法简便、准确,可用于银杏萜内酯的体外代谢研究。     

采用UPLC-TQ-MS同时测定银杏花粉24种资源性化学成分

分析评价银杏花粉中黄酮类、萜内酯类、银杏酸类以及原花青素类化学成分。采用UPLC-TQ-MS的方法对银杏花粉中24种资源性化学成分进行定性定量分析。结果显示芦丁和槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(4→1)-β-L-吡喃鼠李糖苷达到120.9 μg·g^-1和114.0 μg·g^-1,山柰酚为222.1 μg·g^-1。该文采用UPLC-TQ-MS的方法首次同时测定银杏花粉中24种资源性化学成分,此方法快速、便利,质量准确,为银杏花粉的资源化利用提供了基础性工作。     

银杏内酯A，B在家兔体内的药代动力学研究

 目的 建立测定血液中内酯浓度的方法,并对银杏内酯A,B在大白兔体内的药物代谢动力学进行了研究。方法 6只大耳白兔,于耳缘静脉按4 mg·kg^-1给银杏内酯生理盐水溶液,于给药后不同的时间放血,用气相-质谱联用法(GC-MS)测定血药浓度,计算药代动力学参数。结果 大耳白兔静脉注射银杏内酯A,B后的代谢符合二房室模型,t_1/2分别为1.5,0.96 h。AUC值分别为361.55,97.70 μg·ml·min^-1。结论 用GC-MS法测定银杏内酯的血药浓度,从色谱图可以看出,银杏内酶A,B的分离效果良好,血浆杂质峰不干扰测定,专一性强,平均回收率高,稳定性好,灵敏度较高,是测定银杏内酯的较好的方法。     

LC-MS/MS快速测定不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯的含量

 目的建立银杏叶中银杏内酯和白果内酯的高效液相电喷雾二级质谱(LC-MS/MS)定量分析方法,并对不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯含量进行测定。方法银杏叶样品以甲醇-水(1:9)提取,并用乙酸乙酯萃取,采用Phenomenex ODS柱分离,流动相为甲醇-水(60:40),流速0.7 mL·min^-1。电离方式为电喷雾正离子,采用多反应检测模式(MRM),捡测离子分别为m/z 409.4→345.3(银杏内酯A)、m/z 425.3→361.3(银杏内酯B)、m/z 441.4→325.3(银杏内酯C)和m/z 327.4→309.3(白果内酯)。结果分析过程仅需8.5 min,且无杂质干扰,4种成分回收率为91.79%～101.48%银杏内酯A,B和白果内酯含量分别在7月18日、8月19日和7月5日采摘的样品达到最高。结论方法快速、准确、选择性好,适合银杏内酯和白果内酯的定量分析,七月份叶子中内酯含量最高,为最佳采摘时间。     

银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的LC-MS/MS含量测定研究

该实验建立了同时测定银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸含量的LC-MS/MS方法。采用Agilent Zorbax Eclipse plus C₁₈色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.8 μm);流动相甲醇-0.2%甲酸水(95 : 5),等度洗脱;流速0.5 mL·min^-1;质谱条件:采用ESI^-多反应监测(MRM)模式扫描。结果显示,5种银杏酸在0.2~36.0 μg·L^-1线性关系均良好(r≥0.999 5);银杏酸C13 : 0(白果新酸),C15 : 1,C17 : 2,C15 : 0,C17 : 1的最低定量限(LOQ)分别为0.18,0.18,0.21,0.10,0.20 μg·L^-1;平均回收率在73.28%~87.56%;3批样品中所含总银杏酸的质量分数为0.023~0.028 μg·g^-1,均远低于药品注册标准规定的限度(含总银杏酸以白果新酸计,不得过百万分之二)。该方法简便、快捷,灵敏度高,可用于银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的快速测定。     

银杏内酯A／B对高胆固醇诱导的PC12细胞胆固醇代谢的影响

[目的]基于体外血脑屏障（BBB）环境,观察高胆固醇环境下PC12细胞胆固醇的代谢情况及银杏内酯A、B对其的影响。[方法]利用Transwell装置共培养星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞建立体外BBB,并与PCI2细胞共培养。在Transwell内皮细胞侧添加40μmol／L胆固醇,并分别给予30μmol／L银杏内酯A和25μmol／L银杏内酯B进行干预。干预结束后,采用反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）技术,检测胆固醇代谢关键酶低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP-1）、胆固醇酰基转移酶（ACAT）、ATP结合盒转运子A1（ABCA1）及胆固醇24S-羟化酶基因（CYP46）在mRNA水平的表达。[结果]高胆固醇环境下,LRP-1表达下调（P〈0．01）,ACAT及ABCA1表达上调（P〈0．05）,CYP46的表达有上调趋势;药物干预后,除LRP-1有不同程度的升高（P〈0．05）,其余各指标均无明显变化。[结论]GKA、B对高胆固醇环境下PCI2细胞胆固醇代谢关键酶LRP-1的表达有一定影响。     

Cell clone technique for Taxus cuspidata Sieb. et Zuicc.]

The cell clone technique was studied for Taxus cuspidata with needle-derived calli cells. The plating efficiency(PE) of the third generation of suspension culture cells was found to be the highest one and the PE of the medium solidified with phytagel was found to be almost the same as that of the medium solidified with low melting agarose gel. Solid-solid double layer culture was found to promote the PE of Taxus cuspidata cells moderately. A large number of stable cell lines with high growth rate were obtained and the browning problem of cells was completely solved via plate culture of the cell clones of T. cuspidata. The growth rate of the best cell line reached 0.4 g.FW/g.FW.d.     

Biosynthesis of 4'-O-methylpyridoxine (Ginkgotoxin) from primary precursors

Cell suspension cultures of Ginkgo biloba and Albizia tanganyicensis were investigated for the presence of 4'-O-methylpyridoxine (ginkgotoxin, 2), the 4'-O-methyl derivative of vitamin B(6) (pyridoxine, 1). The cultures produced the toxin even in the absence of vitamin B(6) (a common additive to plant cell culture media). This indicates that the pyridoxine ring system of ginkgotoxin is synthesized de novo by the cultured cells. A feeding experiment with D-[U-(13)C(6)]glucose revealed that the mode of incorporation of label into the pyridoxine moiety of 2 matched that observed for 1 in Escherichia coli. Thus, the data obtained in this investigation provide independent proof supporting the current hypothesis on vitamin B(6) biosynthesis. The 4'-O-methyl group of ginkgotoxin (2) was labeled from L-[methyl-(13)C(1)]methionine. This indicates that ginkgotoxin is likely to be derived by 4'-O-methylation of pyridoxine (1). The G. biloba cell suspension culture may be a suitable system to get further insight into vitamin B(6) and/or ginkgotoxin biosynthesis.     

几种因素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷积累的影响

为了完善人参细胞悬浮培养体系,论文研究了人参细胞悬浮培养的动态,探明了培养瓶瓶盖透气滤膜的有无,摇床转速和接种量对人参细胞生长和皂苷积累的影响。结果表明人参细胞悬浮培养过程中,细胞生物量和皂苷产量在培养20 d时达到最大值,因此,可将培养期定为20 d。培养瓶盖上有透气滤膜时有利于人参细胞生长和皂苷合成;悬浮培养时摇床转速影响细胞生长但对皂苷合成无影响,转数为120 r·min^-1时,皂苷生产量最高。每个培养瓶接种6 g鲜重的细胞时,细胞生长和皂苷积累明显好于其他接种量,总皂苷质量分数达12.8 mg·g^-1DW,生产量达146.6 mg·L^-1。     

凹叶厚朴细胞悬浮培养的研究

目的研究凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etils.Subsp.biloba（Rehd.etwils.）Law的细胞悬浮培养。方法以凹叶厚朴茎段诱导的愈伤组织为材料,应用L9（34）正交设计研究植物生长调节剂对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响,通过单因素试验,考察初始接种量、蔗糖浓度、pH值对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响。结果植物生长调节剂6-BA是影响凹叶厚朴悬浮细胞生长的主要因素;最佳初始接种量为8ml;最佳蔗糖浓度为30g/L;最佳pH值为6.5时。结论初步建立了适合凹叶厚朴悬浮细胞培养的体系。     

内生青霉菌纤维素酶在银杏总黄酮提取中的应用研究

目的:利用筛选的高产纤维素酶内生青霉菌的发酵液辅助提取银杏黄酮。方法:采用单因素分析和正交试验,以银杏总黄酮提取率为指标,对酶辅助提取中影响总黄酮提取效果的主要因素(如酶解时间,温度,pH,酶料比等)进行研究。结果:通过单因素试验和正交试验,得出纤维素酶发酵液酶解银杏叶的最佳条件为:发酵液以酶料比15∶1加入银杏干粉中,在pH5.0、温度50℃下,酶解处理3 h,该条件下的银杏黄酮提取率达到了1.33%,比常规醇提法提高了18.75%,与纯酶辅助提取率相近。结论:内生青霉菌发酵液辅助法是提取银杏总黄酮的有效方法。     

银杏叶提取物胃漂浮滞留缓释片的制备和体外释放度评价

目的：制备银杏叶提取物胃漂浮滞留缓释片,并考察其体外释放度。方法：采用单因素试验法确定影响处方的关键因素;以释放度为指标,采用正交实验设计优化筛选最佳处方与制备工艺。结果：确定了最佳处方组成;释药动力学模型符合Higuchi方程。结论：本文制备的胃滞留漂浮片外观及可压性良好,具有良好的缓释性能,释药机理为扩散和溶蚀的双重作用。     

Effect of ginkgolides on beta-amyloid-suppressed acetylocholine release from rat hippocampal slices

As Ginkgo has been shown to improve age-related memory de fi cits and beta-amyloid-related peptides have been suggested to play a signi fi cant role in memory degeneration in Alzheimer's disease, the present study was carried out to examine the effect of two major ginkgolides, A and B, on beta-amyloid peptide-modulated acetylcholine (ACh) release from hippocampal brain slices. Addition of beta-amyloid fragment(25-35) (0.01-1 micro M) in the superfusion medium suppressed the K(+)-evoked [(3)H]-ACh release from the rat hippocampal slices in a concentration-related manner; a 40% reduction in ACh out fl ow was observed with the highest amyloid concentration used (1 micro M). Inclusion of ginkgolide B (GKB, 0.01-10 micro M) caused a concentration-related reversion of the inhibitory effect elicited by the effective concentration of beta-amyloid (1 micro M). The reversal of the beta-amyloid-inhibited ACh release by GKB (1 micro M) was not blocked by tetrodotoxin (1 micro M) indicating a direct interaction of GKB on the cholinergic nerve terminals. In contrast, addition of the same concentration range of ginkgolide A (GKA, 0.01-10 micro M) had no effect on beta-amyloid-inhibited ACh release. These results suggest that GKB may elicit its anti-amnesic effect by minimizing the inhibitory effect of beta-amyloid peptides on cholinergic transmission.     

麦冬二年栽培的适宜密度组合

通过亩丛数和每丛株数两个密度因子的不同组合，对二年栽培麦冬的产量和单株生长量的影响结果分析，得出每亩种植１．１￣１．３万丛，每丛５￣１０株为麦冬二年栽培的适宜密度组合区间。     

银杏叶提取物对高脂胆固醇喂饲家兔血管神经酰胺含量和泡沫细胞凋亡的影响

目的：观察预防性应用银杏叶提取物对家兔实验性动脉粥样硬化的形成、血管壁神经酰胺量和泡沫细胞凋亡的影响，探讨银杏叶提取物抗AS的作用及可能机制。方法：将24只新西兰家兔随机分为3组：正常对照组、高胆固醇组、银杏叶提取物组。分别给予普通饲料(正常对照组)和高胆固醇饮食(其它2组)喂养；银杏叶提取物组另预防性给予银杏叶提出物；实验结束后，运用图象分析法测定主动脉内膜脂质斑块面积百分比；用高效薄层层析扫描分析血管组织神经酰胺的变化；用Tunel法检测血管组织泡沫细胞的凋亡指数。结果：银杏叶提取物可明显缩小主动脉内膜脂质斑块面积，降低动脉组织神经酰胺浓度，减少血管壁泡沫细胞凋亡的数量。结论：银杏叶提取物具有较好的抗AS作用，神经酰胺与动脉粥样硬化形成和泡沫细胞凋亡有关。