细胞破碎-回流提取红豆杉中紫杉醇含量

目的 以东北红豆杉侧枝及叶为原料,采用细胞破碎与回流提取相结合的方法提取紫杉醇并测定其含量.方法 通过对细胞破碎-回流提取法的破碎时间、破碎功率、乙醇浓度等单因素实验确定最佳单因素水平并通过正交实验,确定了以乙醇为提取剂提取红豆杉中紫杉醇类化合物的最佳工艺条件.然后采用高效液相色谱法测定紫杉醇含量.结果 最佳提取条件:细胞破碎-回流提取破碎功率为70 W,乙醇浓度为95%,细胞破碎时间为40 min.高效液相色谱法测定紫杉醇回收率为86.22%～99.07%,精密度RSD为3.45%,重现性RSD为3.41%,红豆杉叶中紫杉醇含量为0.173 3 mg/g,红豆杉侧枝中紫杉醇含量为0.171 8 mg/g.结论 采用细胞破碎-回流提取方法提取红豆杉中紫杉醇可较大提高提取效率;用高效液相色谱法测定紫杉醇含量方法准确、可行.     

红豆杉的细胞工程学研究进展

利用红豆杉Taxus的培养细胞作为提取抗癌新药紫杉醇(Taxol)的原料来源的研究已取得了极大进展。到目前已知对红豆杉属的10个种或变种进行过细胞培养的研究,有些种培养细胞的紫杉醇含量高于原植物。通过加入生物合成前体和/或真菌诱导子等措施可以显著提高红豆杉培养细胞中紫杉醇的含量。紫杉醇酶标免疫含量测定的研究成功标志着培养细胞中紫杉醇的微量含量测定可以快速进行,为快速筛选高产紫杉醇细胞系提供了有力的检测手段。红豆杉的毛状根培养、固定化培养及胚培养等均已研究成功,为生产紫杉醇提供了多条途径。     

促进剂组合对中国红豆杉细胞悬浮培养紫杉醇合成的影响

目的研究中国红豆杉Taxus chinensis细胞悬浮培养中蔗糖、柠檬酸三铵、水杨酸和氨基酸前体组合对细胞生长和紫杉醇(taxol)积累的影响。方法采用L9(34)设计试验,考察了第9天添加蔗糖(10、16、22 g/L)、柠檬酸三铵(0、154、1 540 mg/L),第21天添加蔗糖(20、260、g/L)和不同时间组合添加水杨酸及氨基酸前体4个因素对红豆杉细胞悬浮培养和紫杉醇合成的影响。结果当在细胞培养的第0天添加1.67 mg/L硝酸银,第9天添加10 g/L蔗糖,第9天添加1 540 mg/L柠檬酸三铵,紫杉醇达到最高,在此最优组合处理时紫杉醇质量浓度达到39.2 mg/L,相对于最差组合处理的(2.1 mg/L)时提高18.7倍。结论促进剂组合对中国红豆杉细胞悬浮培养的生长和紫杉醇的合成都有很明显的影响。     

不同种类红豆杉愈伤组织的诱导及紫杉醇含量的差异

研究云南红豆杉、东北红豆杉、红豆杉、南方红豆杉和杂种红豆杉形成愈伤组织的一些因素,比较不同植株来源的愈伤组织系的生长特点和紫杉醇含量。通过考察愈伤组织形成的时间和比率来研究取样时间、当照条件、培养基中２,４－Ｄ浓度和外植体类型对愈伤组织诱导的影响,用高效液相色谱法测定愈伤组织中紫杉醇含量,愈伤组织形成的迟早和比率在不同种类红豆杉之间和同一种类不同植株之间差异较大,在黑暗中,在添加有０．１ｍｇ／ＬＢ     

红豆杉细胞培养过程中抗褐变剂研究进展

利用红豆杉细胞培养技术直接分离得到紫杉醇是解决紫杉醇供需矛盾的最佳途径之一。如何减轻和控制细胞培养过程中发生的褐变问题，又成为细胞培养法成败的关键因素。现就近几年来红豆杉细胞培养法生产紫杉醇过程中有关抗褐变剂方面的研究，从愈伤组织诱导、继代及细胞悬浮培养3个环节分别进行了简要论述。     

前体饲喂东北红豆杉细胞强化紫杉醇生产研究

研究东北红豆杉悬浮细胞培养提高紫杉醇含量和强化紫杉醇生产的方法。结果表明，加入前体物苯丙氨酸和醋酸钠对紫杉醇的生产均有明显的促进作用，且在实验范围内，随前体物浓度的增加促进作用加强。     

基于中药整体性的红豆杉抗乳腺癌活性成分筛选方法研究

目的 基于中药整体性建立2种红豆杉抗乳腺癌活性成分筛选方法：中空纤维细胞捕获结合高效液相色谱法（HFCF-HPLC）、细胞捕获-分散液相微萃取结合高效液相色谱法（CF-DLLME-HPLC）。方法 HFCF-HPLC是在模拟人体内环境状态下，将人乳腺癌MCF-7细胞种植到聚丙烯中空纤维管腔内部，再将该中空纤维放入红豆杉提取液中，筛选和捕获可以与细胞结合的抗乳腺癌活性成分群；CF-DLLME-HPLC是将MCF-7细胞与红豆杉提取液在细胞正常代谢的基础上共孵育，取不同孵育时间上清液进行分散液相微萃取处理，然后进行不同时间段下色谱分析比对，根据色谱峰变化发现潜在抗乳腺癌活性成分群。结果 HFCF-HPLC筛选出的活性成分是脱乙酰巴卡亭、巴卡亭Ⅲ、紫杉碱M、去乙酰紫杉醇、三尖杉宁碱、紫杉醇、云南紫杉烷；CF-DLLME-HPLC筛选出的活性成分是脱乙酰巴卡亭、巴卡亭Ⅲ、紫杉碱M、去乙酰紫杉醇、金松双黄酮。结论 2种方法均可以筛选出有效的抗肿瘤活性成分群，为活性成分的筛选、中药质量的综合评价提供一种方便、普适和高效的新方法。     

两相法和固定化细胞培养强化紫杉醇生产研究

研究了两相法和固定化细胞培养强化紫杉醇生产过程，结果表明，加入吸附树脂及时移走代谢产物，可以避免对细胞的反馈抑制作用，促进细胞合成紫杉醇，紫杉醇的产量提高了２．５倍。固定化培养细胞对紫杉醇的生产同样有促进作用，固定化后采用换液培养紫杉醇的产量有明显提高。固定化培养和两组培养的结合使用，可使紫杉醇的产量显著提高。     

南方红豆杉水提物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡与紫杉醇抑瘤机制不同的研究

目的:初步探讨南方红豆杉水提物抗人肺腺癌A549细胞(以下简称"A549细胞")的作用机制,明确其与紫杉醇抗肿瘤机制的不同。方法:以流式细胞仪检测南方红豆杉水提物对A549细胞凋亡的影响,以紫杉醇为对照;以普通光学显微镜观察南方红豆杉水提物和紫杉醇对A549细胞形态的影响;以Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白P-jnk的表达。结果:①流式细胞检测及光镜观察发现南方红豆杉水提物处理后A549细胞呈典型的早期凋亡表现(P<0.05,P<0.01),而紫杉醇组细胞以坏死及晚期凋亡表现为主(P<0.05,P<0.01),且其比例均呈现一定的剂量-效应关系;②Western blotting检测发现南方红豆杉水提物处理后A549细胞P38蛋白表达无明显变化、P-jnk蛋白随药物浓度增加表达减少(P<0.01)。结论:南方红豆杉水提物抗A549细胞的机制与紫杉醇不同,其作用机制主要与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

红豆杉愈伤组织中 sinenxans 高产细胞系的选择及其培养

 目的：对国产红豆杉愈伤组织中的sinenxans高产细胞系进行选择及培养，为半合成类紫杉醇抗癌药提供充足的前体化合物。方法：红豆杉培养细胞采用平板培养及二分法继代培养，应用高效液相色谱法测定培养物中的sinenxans含量，选择出sinenxans高产细胞系并扩大培养。结果：Sinenxans的含量在不同种红豆杉的愈伤组织及同种不同无性系间存在明显的差异，并与培养物的色泽有一定的相关性；不同的培养基组成与培养方式对高产细胞系的生长有较大影响；获得了一个sinenxans高产细胞系Ts 19，其sinenxans含量达细胞干重的4.0%；在一个培养周期中，Ts-19组织培养物生长缓慢，sinenxans的含量在培养前期有所下降，而在培养后期可达到最高水平。结论：在一定的培养条件下，选择出的sinenxans高产细胞系的sinenxans含量稳定。     

山茱萸总有机酸含量的变化及测定

目的　本文分析了山茱萸的总有机酸含量。方法　以容量法 (滴定法 )对不同产地及不同品种、同一品种不同生长时期、不同温度干燥的山茱萸总有机酸进行测定。结果　发现 13个样品 (9个品种 )山茱萸总有机酸的含量为 9.6 5 %～13.2 6 % ,不同品种的干品和鲜品有机酸含量不同 ,10月中旬总有机酸的含量最高 ,70℃干燥后总有机酸的含量最高。结论　产地不同、形态学各异的山茱萸总有机酸含量不同 ,同一品种不同生长时期、不同温度干燥 ,其含量也不同。此可作为确定山茱萸品种和优种选育、制订最佳加工方法的依据。     

pH对红豆杉愈伤组织生长、PAL活性和紫杉醇含量的影响

目的 研究不同pH值对东北红豆杉和南方红豆杉愈伤组织生长和紫杉醇含量的影响。方法 采用不同pH值的B5培养基培养两种红豆杉愈伤组织,测定生长率、PAL活性和紫杉醇含量。结果 不同红豆衫愈伤组织所需最适pH值不同,而有利于愈伤组织生长的pH值均不利于PAL活性的提高和紫杉醇的积累。即：愈伤组织生长快时,PAL活性将下降,紫杉醇含量也减少。结论 pH值明显影响红豆杉愈伤组织的生长及次级代谢水平,从而影响了紫杉醇的合成与积累。     

山茱萸乙醇提取液对NIDDM大鼠骨骼肌GLUT4表达影响的实验研究

目的 :在明确山茱萸降糖、促进胰岛增生和增加胰岛素分泌作用的基础上 ,研究山茱萸乙醇提取液对非胰岛素依赖型糖尿病 (NIDDM)大鼠骨骼肌GLUT4mRNA和蛋白表达的影响 ,探讨其降糖作用的分子机制。方法 :制备NIDDM大鼠模型。将动物分为 3组 ,每组 6只 :①正常对照组 ,②NIDDM模型组 ,③NIDDM模型 +山茱萸乙醇提取液给药组。动物每天灌胃一次 ,连续给药一个月。用Northernblot方法检测骨骼肌组织中GLUT4mRNA表达量 ,Westernblot方法检测骨骼肌组织GLUT4蛋白表达。结果:NIDDM大鼠骨骼肌GLUT4 mRNA表达显著减少 ,用山茱萸乙醇提取液治疗后 ,GLUT4 mRNA表达明显上调;GLUT4蛋白的表达变化与其mRNA表达变化一致。结论 :山茱萸通过促进NIDDM大鼠胰岛修复增生 ,增加进食后胰岛素的分泌 ,使骨骼肌等外周组织GLUT4mRNA和蛋白表达增加 ,发挥快速转运葡萄糖的作用。     

山茱萸去核的作用和方法研究

目的:比较山茱萸去核的作用,优选山茱萸产地加工方法和工艺。方法:比较山茱萸核和肉中的马钱素、莫诺苷含量;以马钱素含量为指标,采用正交试验分别对水烫法和烘法工艺进行优选。结果:山茱萸核中不含马钱素和莫诺苷;烘法的加热温度以及水烫法的加水量和烫的时间对马钱素含量均有明显影响;在60℃烘10 m in后去核为最佳工艺。结论:山茱萸去核的作用是为了去除非药用部位,烘法软化优于水烫法。     

浙产虎杖根茎与根中大黄素含量比较

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定浙产虎杖根茎与根中大黄素含量的方法,并比较根茎与根中的大黄素含量。方法:采用超声提取法制备供试品溶液,运用高效液相色谱法测定虎杖根茎与根中大黄素含量。Zorbax XDB-C18色谱柱;流动相为甲醇-1%冰醋酸(70∶30);检测波长:254nm;流速:1.5 mL.min-1;柱温:40℃;进样量:20μL。结果:大黄素进样在1μg.mL-1～500μg.mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9995),加样回收率为97.56%,RSD为2.72%(n=6)。浙产虎杖根茎与根中大黄素含量分别为22.965mg.g-1和16.285mg.g-1。结论:本法适用于虎杖中大黄素含量的检测。浙产虎杖根茎与根中大黄素含量丰富且存在差异。     

山茱萸结果期果实变化的动态研究

目的　山茱萸是一种常用的名贵中药材 ,本研究拟为今后改善山茱萸的管理方法 ,提高产量和质量提供一定的数据基础。方法　应用生态学和生物统计学等手段 ,初步研究了小环境对山茱萸出肉率的影响 ,以及果实成熟期果实、果核的变化动态趋势及相关性。结果　各采集地点山茱萸出肉率有显著差异 ;山茱萸果实大小在成熟期有一个明显的峰值 ,大约出现在 9月 2 2日 ;其果实与果核呈一定的线性相关性。结论　生态因子和人工管理的状况都会对出肉率、果实与果核大小产生影响。     

陕西佛坪山茱萸规范化种植基地适宜性研究

目的　对陕西佛坪建立山茱萸规范化种植基地的适宜性进行评价 ,为佛坪县进行山茱萸规范化种植提供科学依据。方法　采用国家规定的相关标准及其分析方法和相关的文献方法从区域性、安全性、可操作性三个方面对佛坪县山茱萸种植基地进行了分析与评价。结果　佛坪是山茱萸的道地产区 ,大气、土壤、灌溉水等环境因子均符合国家规定的标准。结论　佛坪县符合山茱萸规范化种植的条件     

乌梅对308株临床菌株的抑菌效果

目的观察乌梅对临床菌株的抑菌效果。方法采用琼脂稀释法,对乌梅进行308株临床菌株的抑菌活性检测。结果乌梅对112株金黄色葡萄球菌、112株表皮葡萄球菌和28株肠球菌的MIC50分别为0.72、1.44、0.72mg/mL;其MIC90分别为1.44、1.44、0.72mg/mL。对肺炎克雷伯菌和大肠杆菌的MIC90分别为2.88、1.44mg/mL。结论乌梅对革兰阳性球菌和某些革兰阴性杆菌均有较好的抑菌活性。     

大孔吸附树脂法分离纯化虎杖白藜芦醇苷的研究

 目的　研究大孔吸附树脂分离纯化虎杖中白藜芦醇苷的工艺条件及参数。方法　以白藜芦醇苷的吸附量和解吸率为考察指标,从中筛选树脂,并研究大孔吸附树脂分离纯化白藜芦醇苷的吸附性能和洗脱参数。结果　AB-8树脂对白藜芦醇苷有较好的吸附分离性能,适合于虎杖中白藜芦醇苷的提纯 ,经该树脂吸附解吸,饱和吸附量可达25.8mg·g^-1,解吸率达83.2%。结论　大孔树脂分离纯化白藜芦醇苷的纯度可达31.5%,而上柱前粗提物中白藜芦醇苷纯度为5.71%,说明采用本法分离纯化虎杖中白藜芦醇苷是可行的。     

不同炮制方法对芫花中4种黄酮苷元含量的影响

目的:采用高效液相色谱法分析芫花不同炮制品中4种黄酮苷元成分的含量,研究不同炮制方法对4种成分的影响。方法:采用Hanbon Hedera C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇-0.4%醋酸水溶液(70∶30),流速1.0mL.min-1,柱温30℃,检测波长338nm。结果:在线性范围内,木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素4种化合物分离度良好。在相应浓度范围内,4种化合物线性关系良好,r均在0.999 8以上;精密度RSD≤1.64%;平均加样回收率为99.69%～101.70%。结论:该方法快速、准确,适用于芫花不同炮制品中4种化学成分的定量分析。在7种炮制方法中,醋制法(药典)较其他6种方法能明显提高木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素的含量,同时能提高总黄酮苷元含量。