二乙酰基莲心碱对心室肌细胞电生理的影响

目的:探讨二乙酰基莲心碱(Diacetyl-linesinine)对兔心室肌细胞动作电位、L型钙电流以及延迟整流钾电流的影响。方法:选取10只体重1.5～2.0kg的健康新西兰白兔,酶解法分离兔单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察不同浓度的二乙酰基莲心碱对心室肌细胞动作电位、钙电流和延迟整流钾电流的作用。结果:①10、30μmol·L-1的二乙酰基莲心碱使复极50%的动作电位时程(action potential duration at50%repolarization,APD50)和复极90%的动作电位时程(action potential duration at90%repolarization,APD90)明显延长(P<0.05),而100μmol·L-1的二乙酰基莲心碱使APD50和APD90不再继续延长,反而缩短;②二乙酰基莲心碱浓度依赖性减少钙电流和延迟整流钾电流,10、30、100μmol·L-1的二乙酰基莲心碱可分别使峰值钙电流下降56.96%、65.91%及73.61%;使延迟整流钾电流下降17.46%、45.82%及51.06%。结论:二乙酰基莲心碱在低浓度时延长APD,高浓度时缩短APD;二乙酰基莲心碱可浓度依赖性阻滞兔心室肌细胞的钙电流和延迟整流钾电流。     

小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对HERG通道表达的影响

目的:利用免疫荧光化学染色法和Western blot法分别定性、定量地检测不同浓度的小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对稳定转染在HEK-293细胞中HERG钾通道表达的影响,以及不同浓度的小檗碱对大鼠心肌组织Ikr通道蛋白表达的影响,探讨小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱的抗心律失常机制.方法:Western blot法检测HERG-HEK细胞上HERG通道蛋白的表达;免疫荧光化学染色法并利用共聚焦显微镜定性测定不同浓度的小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对HERG通道蛋白表达的影响;Western blot法定量检测不同浓度的小檗碱对大鼠心肌组织Ikr通道蛋白表达的影响以及小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对稳定转染在HEK-293细胞中HERG钾通道蛋白表达的影响.结果:Western blot法检测稳定转染有HERG基因的HEK293细胞能高水平的表达HERG通道蛋白.10,30μmol· L-1的小檗碱明显抑制HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达(P＜0.0l).10,20 mg·kg-1的小檗碱抑制大鼠心肌组织Ikr通道蛋白的表达(P＜0.05).3,10,30μmol·L-1的莲心碱促进HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达(P＜0.05).甲基莲心碱不影响HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达.结论:稳定转染的HERG-HEK细胞能高水平的表达HERG通道蛋白;小檗碱对体外HERG-HEK细胞和大鼠心肌组织Ikr通道的蛋白表达均有抑制作用;莲心碱促进HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达;甲基莲心碱对HERG通道蛋白表达无影响.     

苦参碱影响豚鼠乳头肌细胞动作电位的实验研究

目的:观察苦参碱对豚鼠心室肌动作电位的影响,探讨其抗心律失常的作用机制。方法:豚鼠分为对照组、苦参碱组(10,50,100μmol.L-1)、乌头碱组(1μmol.L-1)、乌头碱(1μmol.L-1)+苦参碱(50μmol.L-1)组,乌头碱(1μmol.L-1)+苦参碱(100μmol.L-1)组;采用标准微电极记录技术记录动作电位时程(APD)、动作电位0相幅值(APA)、动作电位50%复极化时程(APD50)和90%复极化时程(APD90)。结果:苦参碱浓度依赖性(10,50,100μmol.L-1)适度延长APD50和APD90,降低APA;乌头碱明显延长APD(和对照组比较P<0.05),APD50,APD90;苦参碱(100μmol.L-1)能纠正乌头碱对APD,APD50,APD90的过度延长作用(和乌头碱组比较P<0.05或P<0.01)。苦参碱(100μmol.L-1)能显著降低APA(和乌头碱组比较P<0.05)。结论:苦参碱能纠正乌头碱对APD,APD50,APD90的过度延长作用,能使乌头碱诱发心律失常的APA降低,维持动作电位在正常范围可能是苦参碱抗心律失常的机制之一。     

益气复脉合剂抗乌头碱致大鼠心肌细胞动作电位异常的研究

目的:利用膜片钳技术阐述益气复脉合剂抗心律失常的作用机制。方法:采用酶解法分离大鼠心肌细胞,利用膜片钳方法考察益气复脉合剂抗乌头碱致大鼠心肌细胞动作电位异常的作用。结果:益气复脉合剂可显著缩短乌头碱所致动作电位时程APD、APD_(50)、APD_(90)的延长,对静息电位、超射、幅度及最大上升速率并无明显改变。结论:益气复脉合剂抗乌头碱致室性心律失常的作用机制可能与抑制心室肌细胞的Ca~(2+)内流以及K~+外流有关。     

莲心碱对豚鼠心室肌细胞动作电位及钠与钙电流的影响

为探讨莲心碱 (liensinine,L ien)对心肌离子流的影响及抗心律失常作用机制。采用全细胞膜片钳技术 ,记录了 L ien对单个豚鼠心肌细胞动作电位 (AP)及纳电流 (INa)与 L -型钙电流 (ICa- L)的影响。 L ien 3～ 30μmol/ L 可剂量依赖性地降低 AP幅度 (APA)、静息电位 (RP) ,延长 AP时程。 L ien10 ,30 μm ol/ L 分别使 INa及 ICa- L从给药前的 (8.6± 2 .3) n A和 (75 8± 177) p A降至 (5 .4± 1.7)、(2 .2± 1.6 ) n A和 (335± 12 2 )、(137±10 0 ) p A。L ine10 μmol/ L 抑制 INa和 ICa- L的 I- V曲线并使后者的峰值电流电位略右移。结果表明 L ien有钠、L -型钙通道阻滞作用 ,这些可部分解释其抗心律失常作用机制     

海葵素对大鼠和豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

目的:研究海葵素-Q(AP-Q)对心室肌细胞钾电流的作用。方法:采用酶解法制备豚鼠和大鼠单个心室肌单细胞,应用全细胞膜片钳记录方法记录心室肌细胞钾电流(Ito、IK和IK1)。结果:AP-Q3-100nmol/L浓度依赖性地阻滞Ito,EC50分别为10.5nmol/L,去极化至 50mV时,AP-Q10nmol/L使Ito从给药前的(13.3 -3.4)pA/pF升至(19.46 -4.3)pA/pF。AP-Q0.1-100nmol/L浓度依赖性地增大IK和尾电流(IK tail),EC50分别为4.7nmol/L和5.0nmol/L。AP-Q1pmol/L-100nmol/L浓度依赖性地增大IK1,EC50值为0.2nmol/L。结论:AP-Q增大IK,Ito和IK1的作用可能是其缩短心室肌动作电位时程(APD),增大静息电位(RP)的原因。     

苦参碱对休克血浆致豚鼠心室肌细胞电生理变化的影响

目的:进一步研究苦参碱对实验性豚鼠心室肌细胞在休克血浆(SP)影响下的电生理效应,以及苦参碱(Matrine)的心肌细胞保护作用。方法:采用常规标准玻璃微电极细胞内研究记录技术,观察休克血浆致离体豚鼠心室肌细胞动作电位的影响以及不同浓度苦参碱的影响作用。结果:(1)采用SP灌流后,豚鼠心室肌细胞动作电位幅度(APA)升高(P0.05),复极50%时间(APD50)、复极80%时间(APD80)延长(P0.05);(2)25μmol/L的Matrine可降低休克血浆引起的APA升高效应(P0.05);(3)50μmol/L的Matrine使APA进一步下降(P0.01),明显延长APD50、APD80(P0.05),使动作电位时程APD明显延长(P0.05);(4)100μmol/L的Matrine使APA显著下降(P0.01),并明显延长APD50、APD80(P0.01),使动作电位时程APD显著延长(P0.01)。结论:休克血浆对豚鼠心室肌细胞动作电位的变化具有明显的影响,苦参碱具有剂量依赖性的干预作用。     

HERG钾通道表达与小檗碱的抗肿瘤作用的关系

目的：以HERG钾通道为靶点，研究HERG钾通道表达水平与小檗碱的抗肿瘤作用的相关性。方法：采用Westem blot检测了HERG钾离子通道在不同肿瘤细胞的表达情况，经过质粒的分离和纯化、基因转染技术、MTT法研究了HERG钾通道的表达与小檗碱杀伤肿瘤细胞作用的关系，同时通过对细胞粘附能力和明胶酶分泌的测定研究了小檗碱对肿瘤细胞粘附和明胶酶分泌的影响。结果：HERG通道蛋白在不同肿瘤细胞的表达水平高低不同，在HT-29细胞中表达较高，而在A549细胞中基本不表达，在MCF-7、MCF-7／ADM、Bel-7402、PG细胞中表达居中。HERG通道蛋白表达较高的HT-29细胞对小檗碱的敏感性比表达较低的A549细胞弱。将berg基因转染入表达较低的A549细胞后，HERG通道蛋白的表达明显增加，而小檗碱的细胞增殖抑制作用明显降低，IC50值是A549亲本细胞的3．0倍；同时，它还能抑制HT-29细胞对Ⅰ型胶原的粘附和HT1080细胞分泌明胶酶MMP-9，这种抑制作用呈浓度依赖性。结论：小檗碱对肿瘤细胞的杀伤作用可能与HEIRG通道的表达呈负相关，即HERG表达高，杀伤作用较弱，反之，杀伤作用较强。同时，小檗碱可能通过抑制肿瘤细胞的粘附功能和释放明胶酶的功能而影响肿瘤的侵袭和转移。HERG钾通道可能是与肿瘤化疗相关的分子靶点。     

环维黄杨星D对大鼠心律失常双向作用的电生理研究

目的通过环维黄杨星D(CVB—D)对大鼠离体心室乳头肌的电生理作用,探讨其抗心律失常和致心律失常的可能机制。方法采用标准玻璃微电极技术,观察记录大鼠离体右心室乳头肌跨膜电位。结果(1)CVB—D在13．3～63．3μmol／L剂量范围内呈剂量依赖性延长动作电位复极化时程(APD),主要延长APD50、APD70和APD90;在33．3～63．3μmol／L剂量范围内,呈剂量依赖性抑制静息电位(RP)、动作电位幅度(APA)和0相最大去极化速率(Vmax)。(2)CVB—D还具有时间依赖效应,当20μmol／L灌流心室肌10min后开始出现作用,随着药物作用时间的延长,APD50、APD70和APD90也逐渐增大,但是到30～40min左右时作用达最高峰,此后并不继续延长。(3)CVB—D明显延长动作电位的有效不应期(ERP)、增大ERP与APD的比值。(4)CVB-D在较高浓度(33．3μmol／L)作用超过45min后有些细胞出现频发、多源性自发性活动。结论CVB—D具有抗室性心律失常作用,其机制与延长心室肌细胞动作电位时程及其有效不应期(ERP)和增大ERP与APD的比值有关,同时也具有致心律失常作用,其致心律失常作用可能与抑制RP、APA、Vmax以及过度延长APD有关。     

炙甘草汤对缺血缺氧心室乳头肌细胞电生理效应的研究

目的:探讨炙甘草汤对豚鼠缺血缺氧心室肌细胞动作电位的影响及对心肌的保护作用。方法:豚鼠随机分为正常对照组、缺血缺氧组和缺血缺氧+炙甘草汤组。用玻璃微电极细胞内记录的方法,描记正常灌流液、缺血缺氧灌流液和缺血缺氧+炙甘草汤(40mg/ml)灌流液灌流时的豚鼠心室乳头肌细胞动作电位,测量其RP、APA、Vmax、APD50、APD90和APD。分别描记5min、10min、15min和20min四个时间点的动作电位。结果:与正常对照相比,缺血缺氧条件下豚鼠离体心室肌细胞动作电位的0相最大除极速率、复极50%和90%时间及动作电位时程均明显减小(p<0.05或0.001);而在缺血缺氧灌流液中加入炙甘草汤可明显减小APD50、APD90和APD的缩短速度(P<0.05或0.01)。结论:炙甘草汤可减慢缺血缺氧状态下心室肌细胞动作电位时程的缩短速度。     

延胡索中季铵生物碱的高分辨基质辅助激光解吸电离质谱研究

目的：研究中药中季铵生物碱的基质辅助激光解吸电离质谱行为。方法：以延胡索为例，采用2，5-二羟基苯甲酸为基质，以样品和基质混合均匀点样，直接分析中药生物碱提取物；利用高分辨质谱数据确定生物碱化合物的元素组成。结果：从延胡索中检出并鉴定了去氢紫堇碱等5种季铵生物碱。结论：基质辅助激光解吸电离质谱为中药中季铵生物碱提供了一种快速分析方法。     

分光光度法测定岩黄连不同部位总生物碱的含量

目的建立一种简单快速的方法来测定岩黄连总生物碱含量,为岩黄连质量控制提供依据。方法采用氯仿超声提取岩黄连不同部位样品,依据酸性染料比色法的原理,以盐酸小檗碱为对照,溴甲酚绿为指示剂,在416 nm波长下比色测定样品中总生物碱含量。结果吸光度值与生物碱含量线性关系良好(r=0.999 1);回收率为101.91%,RSD为1.75%;测定结果在3 h内稳定,RSD为1.09%;岩黄连根部生物碱含量最高,达到48.77 mg/g,叶和夹果其次,花和茎中最低。结论该测定方法简便可靠,可用于岩黄连质量控制;部位不同总生物碱含量也不同。     

延胡索免煎颗粒与饮片中活性成分含量的对比研究

目的：比较和研究延胡索免煎颗粒与饮片之间的质量差异,为临床合理应用免煎颗粒提供依据。方法：分别采用电位滴定法和RP-HPLC法测定延胡索免煎颗粒与饮片中总生物碱和延胡索乙素的含量。结果：延胡索免煎颗粒中总生物碱和延胡索乙素的含量分别为5．55mg/g和0．8537mg/g,延胡索饮片中总生物碱和延胡索乙素的含量分别为5．14mg/g和0．7276mg/g。结论：延胡索免煎颗粒与中药饮片所含主要有效成分含量有一定差异,免煎颗粒优于传统饮片。     

博落回总生物碱分离纯化工艺研究

本研究以博落回总生物碱含量及回收率等为考察指标，研究大孔吸附树脂分离纯化博落回总生物碱工艺。结果表明：AB．8型大孔吸附树脂对博落回总生物碱静态饱和吸附量为104．65mg／g（干树脂），洗脱率95．9％，动态饱和吸附量为96．5mg／g（干树脂），总生物碱回收率在91．24％、纯度在90％以上，是实验树脂中分离纯化博落回总生物碱的最佳大孔吸附树脂。分离纯化博落回总生物碱最佳工艺条件为：AB-8型大孔吸附树脂，洗脱剂为90％乙醇，洗脱剂用量为2-3倍树脂体积，上柱总生物碱量与树脂比为1：10．4，上柱液总生物碱浓度为21．57mg／ml，流速2-3ml／min，上柱液pH值7—8。     

海葵素对大鼠和豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

  目的 研究海葵素 -Q （ AP-Q ）对心室肌细胞钾电流的作用。 方法 采用酶解法制备豚鼠和大鼠单个心室肌单细胞，应用全细胞膜片钳记录方法记录 心室肌细胞钾电流（ <> I _to ， <> I _K 和 <> I _K1 ）。 结果 AP-Q 3 ~ 100 nmol L^-1 浓度依赖性地阻滞 <> I _to ， EC₅₀ 分别为 10.5 nmol L^-1 ，去极化至 +50 mV 时， AP-Q 10 nmol L^-1 使 <> I _to 从给药前的（ 13.3 ± 3.4 ） pA pF^-1 升至（ 19.46 ± 4.3 ） pA pF^-1 。 AP-Q 0.1~100 nmol L^-1 浓度依赖性地增大 <> I _K 和尾电流 (<>I_{K tail} ) ， EC₅₀ 分别为 4.7 和 5.0 nmol L^-1 。 AP-Q 1 pmol L^-1~100 nmol L^-1 浓度依赖性地增大 <> I _K1 ， EC₅₀ 值为 0.2 nmol L^-1 。 结论 AP-Q 增大 <> I _K ， <> I _to 和 <> I _K1 的作用可能是其缩短 APD ，增大 RP 的原因。     

高速离心分配色谱法去除夏天无总生物碱中荷包牡丹碱的工艺研究

目的 采用高速离心分配色谱(FCPC)方法去除夏天无总生物碱中的毒性成分荷包牡丹碱(BI)。方法 以体积流量、转速、样品浓度为考察因素,通过正交试验优化各工艺参数,同时对优化后的工艺结果与溶剂萃取法比较,并对最优工艺进行线性放大实验。结果 最佳工艺为样品质量浓度80 mg/mL,转速1 200 r/min,体积流量4 mL/min。通过放大实验制得相应去除BI的夏天无总生物碱部位,BI去除率>94.0%,其余生物碱回收率>85.0%,优于传统溶剂萃取法。该工艺分离时间短,重现性好,操作简便。结论 该工艺操作简单、快速、环保,不仅为提高夏天无总生物碱的安全性提供思路,而且为去除毒性成分的夏天无总生物碱产业化道路提供了方法。     

pH依赖型黄连总生物碱结肠靶向微丸的制备及其体内外释放性能评价

目的:制备用于治疗溃疡性结肠炎的pH依赖型黄连总生物碱靶向微丸并对其体内外释放性能进行评价。方法:采用丙烯酸树脂(eudragit)S100和eudragit L100-55双层包衣制备pH依赖型黄连总生物碱结肠靶向微丸。以盐酸小檗碱为指标进行了体外释放度和大鼠体内释放的初步评价。结果:体外释放度试验表明盐酸小檗碱在人工胃液中2 h累计释放度<0.1%,在人工小肠液中4 h累计释放度<10%,在人工结肠液中3 h累计释放度>90%;体内试验表明在大鼠体内包衣微丸大部分能完整到达盲肠或结肠部,并在上述部位开始崩解释放。结论:pH依赖型黄连总生物碱靶向微丸能够实现结肠的定向释放。     

星点设计-效应面法优化夏天无总生物碱微孔渗透泵片处方

目的:应用星点设计-效应面法优化夏天无总生物碱微孔渗透泵片处方.方法:以NaCl用量、致孔剂含量、包衣增质量为自变量,药物累积释药量及累积释放量曲线的线性相关系数(r)为因变量,应用Design Expert对处方进行优化,并对优化处方进行验证.结果:最优处方为NaCl用量34 mg,致孔剂质量分数99％,包衣增质量4％;优化处方呈零级释放特性.结论:通过星点设计-效应面法成功建立了处方优化模型,实现了夏天无总生物碱微孔渗透泵片的处方筛选.     

草乌总生物碱的提取工艺研究

目的：优选草乌总生物碱的提取方法与工艺。方法：采用L9（34）正交设计并结合单因素轮换法,滴定法测定草乌总生物碱量,以总生物碱得率为指标,选定草乌总生物碱的提取方法,并优化提取工艺条件。结果：采用超声法提取,加8倍量水提取2次,每次3h。以此条件提取草乌总生物碱得率为2.43mg/g。结论：本试验所确定的提取条件科学合理、稳定可行。     

Simultaneous Determination of Six Quaternary Ammonium Alkaloids in Coptidis Rhizoma by UPLC

Objective To establish a new,rapid,and reliable reversed-phase ultra performance liquid chromatography (RP-UPLC)method for the simultaneous determination of six quaternary ammonium alkaloids(QAAs)in Coptidis Rhizoma.Methods The effect of different experimental parameters on the analysis of QAAs by RP-UPLC was evaluated.Results Optimal resolution was achieved with an Acquity UPLC BEH C18 column using a gradient elution profile and a mobile phase consisting of water spiked with 10 mmol/L ammonium bicarbonate(A,pH adjusted to 10.0 by ammonia water)and acetonitrile(B),at a flow rate of 0.30 mL/min and wavelength of 345 nm. The column temperature was set at 30℃.The proposed method was found to be reproducible,precise,and rapid according to the method validation.Conclusion The proposed method,which is compatible with MS analysis and the preparation of QAA,provides some helpful insights into the quality control of Coptidis Rhizoma.