芹菜素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢紊乱的作用及机制研究

目的研究芹菜素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢紊乱的作用及机制。方法 8周龄雄性db/db小鼠随机分组分为模型组、芹菜素组(50 mg·kg~(-1)·d~(-1)),以雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组。各干预8周后,检测小鼠体质量、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、成纤维细胞生长因子-19(FGF-19)、空腹胰岛素水平(Fins)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);肝组织HE染色观察肝细胞脂质蓄积; RT-PCR检测肝脏SREBP1c、FAS、Sirt1、PGC1α、CPT1基因表达; Western blot检测PPARα蛋白表达。结果与模型组比较,芹菜素组小鼠体质量、FBG、CHO、TG、FFA显著降低(P0.05,P0.01),FGF-19显著升高(P0.01); HE染色肝细胞脂肪变性程度减轻,胞内脂滴数量减少,细胞排列整齐;肝脏SREBP1c、FAS mRNA表达降低(P0.05,P0.01),Sirt1、PGC1α、CPT1αmRNA表达显著升高(P0.05); PPARα蛋白表达显著升高(P0.01)。结论芹菜素可以改善糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂肪代谢紊乱,可能是通过下调肝脏SREBP1c、FAS mRNA表达,上调肝脏Sirt1、PGC1α、CPT1α、PPARα表达实现的。     

桑叶黄酮对糖尿病大鼠血糖水平的影响及机制探讨

目的:通过观察桑叶黄酮降血糖作用,探讨其作用机制。方法:8周龄雄性SD大鼠24只,链脲佐菌素(STZ)腹腔注射造模成功后,按血糖、体质量随机分为模型组、吡格列酮组、桑叶黄酮组,每组8只,另设同周龄正常SD大鼠8只为正常组。治疗6周后,检测大鼠的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),总胆固醇(cholesterd,CHO),甘油三酯(total triglyceride,TG),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),血清胰岛素水平(fasting insulin,Fins),计算胰岛素抵抗指数(homa insulin-resistance,HOMA-IR);采用实时荧光定量PCR,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏相关mRNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,Fins,HOMA-IR,体质量,CHO,TG,FFA明显升高(P0.05,P0.01);肝脏蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),腺苷酸激酶2(adenylate kinase2,AK2),过氧化物酶增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(peroxisome proliferator activated receptor gamma coactivator 1-alpha,PGC1α)mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。与模型组比较,桑叶黄酮组FBG,Fins,HOMA-IR,体质量,CHO,TG,FFA明显降低(P0.05,P0.01);肝脏PKC mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01),AK2,PGC-1αmRNA表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:桑叶黄酮具有降低血糖,FFA的作用,机制可能是通过抑制FFA诱导的PKC途径以及改善基于AK2,PGC1α表达的能量稳态发挥抗糖尿病效果。     

异槲皮苷对db/db小鼠肝脏脂肪酸代谢及相关基因表达的影响

[目的]研究异槲皮苷对自发性糖尿病小鼠肝脏脂肪酸代谢相关基因表达的调控作用。[方法]8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、异槲皮苷组,雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组,药物干预4周后,检测小鼠体质量、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA),肝质量和肝质量/体质量;肝组织苏木精-伊红(HE)染色观察肝细胞脂质蓄积;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)基因表达。[结果]与模型组比较,异槲皮苷组小鼠体质量、FBG、CHO、TG、FFA、肝质量、肝质量/体质量显著降低(P0.05或P0.01);苏木精-伊红(HE)染色肝细胞脂肪变性减轻,肝脏SREBP1c、FAS m RNA表达降低(P0.05;P0.01),PGC1α、PPARαm RNA表达显著升高(P0.05)。[结论]异槲皮苷可以改善db/db小鼠肝脏脂肪酸代谢紊乱,可能是通过下调肝脏SREBP1c、FASm RNA表达,上调肝脏PGC1α、PPARα表达实现的。     

穿龙薯蓣皂苷对再生障碍性贫血小鼠PPARγ,C/EBPα及脂肪分泌因子表达的影响

目的:观察穿龙薯蓣皂苷对再生障碍性贫血小鼠的治疗作用及其对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ),CCATT增强子结合蛋白α(CCAAT-enhancer binding proteinα,C/EBPα),脂联素(Adiponectin),瘦素(Leptin)的影响,探究其在骨髓间充质干细胞脂肪化过程中发挥效应的可能机制。方法:BALB/c小鼠随机分为正常组及模型组,模型组小鼠经60Coy照射联合尾静脉输注DBA/2小鼠淋巴细胞混悬液法造模。模型评估成功后,将成模小鼠随机分为6组,分别为模型组,穿龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组(37. 44,74. 88,149. 76 mg·kg-1·d-1),环孢素组(23. 5 mg·kg-1·d-1),雷公藤多苷组(9. 36 mg·kg-1·d-1),相应药物灌胃14 d。干预完成后,检测各组小鼠外周血象并制作骨髓细胞涂片评价骨髓增生情况。采用贴壁法分离培养各组小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)并进行成脂诱导;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠BMMSCs中PPARγ,C/EBPα,Adiponectin,Leptin mRNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠外周血白细胞(white blood cell,WBC),血红蛋白(hemoglobin,HGB),血小板(blood platelet,PLT)明显降低(P 0. 05);与模型组比较,各治疗组小鼠血象均有不同程度回升,以穿龙薯蓣中剂量组最优(P 0. 05)。与正常组比较,模型组小鼠BMMSCs中PPARγ,C/EBPα,Adiponectin,Leptin mRNA和蛋白表达明显升高(P 0. 05);与模型组比较,各治疗组小鼠上述指标均被不同程度抑制,其中穿龙薯蓣皂苷中剂量组和环孢素组PPARγ,C/EBPα,Adiponectin,Leptin mRNA和蛋白表达明显下调,优于雷公藤多苷组(P 0. 05)。结论:穿龙薯蓣皂苷能够促进再障小鼠外周血象恢复,改善骨髓造血。穿龙薯蓣皂苷可抑制AA小鼠BMMSCs PPARγ,C/EBPα的表达,减少脂肪细胞分泌的Adiponectin,Leptin,进而有效地抑制BMMSCs向脂肪细胞的过度分化。     

青钱柳总皂苷对游离脂肪酸诱导的H4-ⅡE细胞脂肪代谢的影响及作用机制

目的:研究青钱柳总皂苷(CPS)对游离脂肪酸(FFA)诱导的H4-ⅡE肝细胞脂肪代谢的影响和作用机制。方法:以FFA诱导的H4-ⅡE大鼠肝细胞为模型,培养72 h后,采用Neutral red法检测CPS(0,0.05,0.10,0.20,0.40 g·L~(-1))对细胞活性的影响;根据细胞活性检测结果选择CPS低剂量组(CPS-L,0.10 g·L~(-1))和高剂量组(CPS-H,0.20 g·L~(-1))干预,油红O(Oile red)染色并测定细胞内脂质含量;药物干预2 h后实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肝细胞相应基因表达,药物干预30 min后,利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞相应蛋白磷酸化水平。结果:与正常组比较,0.10,0.20 g·L~(-1)CPS干预后肝细胞活性明显升高(P0.05);干预72 h后,Oile red染色显示FFA(20μmol·L~(-1))诱导后呈现大片红染的脂滴,细胞脂质含量显著增加(P0.01),CPS干预后细胞中红染的脂滴减少,细胞脂质含量较FFA(20μmol·L~(-1))诱导组明显减少(P0.05,P0.01);与模型组比较,CPS-L和CPS-H组腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),乙酰Co A羧化酶(ACC)蛋白磷酸化水平明显升高(P0.05,P0.01);胆固醇应答元件结合蛋白1c(SREBP1c),脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论:CPS能够显著降低体外FFA诱导肝细胞脂质沉积,可能是通过上调AMPK,ACC蛋白磷酸化水平,下调SREBP1c,FAS mRNA表达而发挥作用。     

糖耐康对自发性2型糖尿病小鼠NE，α1-AT蛋白表达的影响

目的:观察中药糖耐康(Tangnaikang,TNK)对2型糖尿病(T2DM)的ob/ob小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE),α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)蛋白表达的调节作用。方法:将32只雄性SPF级ob/ob小鼠按体质量随机分为模型组(生理盐水),TNK高剂量组(TNK溶液16.04 g·kg~(-1)),TNK中剂量组(TNK溶液8.02 g·kg~(-1))和TNK低剂量组(TNK溶液4.01 g·kg~(-1))。另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组(生理盐水)。灌胃4周。每周记录小鼠一般状态和体质量和空腹血糖(FBG),第25天进行口服葡萄糖耐量(OGTT)实验,第27天进行胰岛素耐量(ITT)实验,灌胃结束后,取血清检测空腹胰岛素(Fins),NE,α_1-AT,取脂肪组织检测NE,α_1-AT,p-IRS1,葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组ob/ob小鼠体质量显著增大,糖脂代谢指标均呈糖尿病表现,血清和脂肪组织NE显著增加(P0.01),α_1-AT显著减少(P0.01)。与模型组比较,TNK高剂量组体质量,甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL)指标均显著减少(P0.01),高密度脂蛋白(HDL)显著增加(P0.01),FBG,Fins,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),曲线下面积(AUC)_(ogtt),AUC_(ITT)均显著减少(P0.01),血清和脂肪组织NE显著减少(P0.01),α_1-AT显著增加(P0.01),脂肪组织p-IRS1和GLUT4明显增加(P0.05)。结论:TNK能够降低ob/ob小鼠体质量,改善糖脂代谢,升高α_1-AT水平,降低NE水平,调节IRS1/GLUT4信号的关键位点,可能是其改善中性粒细胞介导的脂肪组织IR的作用机制之一。     

桂皮醛对糖尿病小鼠血糖水平的影响及机制

目的:观察桂皮醛(cinnamaldehyde,CA)降血糖作用,并探讨其作用机制。方法:6~8周龄雄性db/db小鼠24只,按血糖随机分为模型组,二甲双胍组(0.2 g·kg~(-1)),桂皮醛低剂量组(0.025 g·kg~(-1))和桂皮醛高剂量组(0.05 g·kg~(-1)),每组6只,另设同周龄C57BL/6J小鼠6只为正常组。治疗4周后,检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),总胆固醇(total cholesterd,TC),甘油三酯(total triglyceride,TG),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),血清胰岛素(fasting insulin,Fins)水平,计算胰岛素抵抗指数(homa insulin-resistance,HOMA-IR);取肝脏组织检测肝糖原含量以及高碘酸-希夫(periodic acid-Schiff stain,PAS)染色;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏相关mRNA和蛋白表达。结果:治疗4周后,与模型组比较,CA组小鼠体质量,FBG,Fins,HOMA-IR,血脂明显降低(P0.05,P0.01),肝脏糖原含量显著升高;小鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphate,G-6-P),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)mRNA表达显著降低(P0.01),p-蛋白激酶B(protein kinase B,Akt),p-糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:CA具有降低血糖作用,相关机制可能是通过上调肝脏胰岛素信号通路Akt,GSK-3β磷酸化水平,抑制G-6-P,PEPCK mRNA表达实现。     

小檗皮水浸膏对db/db糖尿病小鼠视网膜病变的影响(Ⅱ)

目的:观察小檗皮浸膏对基因突变自然发病型db/db糖尿病小鼠视网膜蛋白激酶C-β(PKC-β),缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探索该药防治糖尿病视网膜病变的作用机制。方法:选用18周龄db/db糖尿病小鼠,db/m型同性同窝瘦型小鼠为对照。采用随机方法将db/db小鼠分为db/db组,小檗皮高、中、低剂量组(1.50,0.75,0.38 g·kg~(-1)),羟苯磺酸钙组(0.23 g·kg~(-1)),盐酸小檗碱组(0.135 g·kg~(-1))。相关药物连续ig 2个月,并于ig 2个月末处死小鼠。采用免疫组化方法观察3种因子在视网膜结构的表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测视网膜内3种因子的基因与蛋白表达。结果:与db/m组比较,db/db组视网膜组织PKC-β,VEGF免疫组化反应呈阳性,表达显著增加(P0.01);HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达量有升高趋势,但差异无统计学意义;db/db组三种因子的基因与蛋白表达显著增加(P0.01)。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P0.05),小檗皮高剂量组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P0.01),其他各给药组较db/db组PKC-β表达有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组视网膜组织HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达有降低趋势,但差异无统计学意义;小檗碱组、小檗皮低剂量组视网膜组织VEGF免疫组化反应呈阳性,表达明显降低(P0.01),其他各给药组视网膜组织VEGF有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组HIF-1α基因表达明显降低(P0.05),其他各给药组PKC-β,HIF-1α,VEGF基因表达有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、低剂量组PKC-β蛋白表达显著降低(P0.01),小檗皮中剂量组PKC-β蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义;羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、中剂量组HIF-1α蛋白表达显著降低(P0.01),小檗皮低剂量组HIF-1α蛋白表达量有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组VEGF蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:小檗皮浸膏防治db/db糖尿病小鼠视网膜病变的作用机制可能与抑制PKC-β,HIF-1α,VEGF表达有关。     

匙羹藤干预db/db小鼠胰岛素抵抗及脂肪组织ADPN、TNF-α mRNA表达的实验研究

目的:观察匙羹藤(Gymnema sylvestre,GS)对自发性2型糖尿db/db小鼠空腹血糖(FBG)、血脂(TG、TC、LDL、HDL)、血清胰岛素(Fins)及脂联素(ADPN)、TNF-αmRNA表达的影响,探讨GS对胰岛素抵抗的作用及对ADPN、TNF-α基因表达的关系。方法:将SPF级27只db/db小鼠随机分3组(n=9):模型组、GS组、吡格列酮组;并选8只db/+m鼠为正常组。连续灌胃给药4周后检测FBG、Fins、血脂、FFA,并用RT-PCR检测脂肪组织中ADPN、TNF-αmRNA的表达。结果:模型组和治疗组的体质量、FBG、Fins、TG、CHOL、LDL、FFA水平和TNF-α的mRNA表达明显高于正常组,而ISI指数和ADPN mRNA的表达低于正常组;与模型组相比,匙羹藤组db/db小鼠的FBG、Fins、TC、LDL-C水平降低,提高ISI指数,上调ADPN mRNA的表达。结论:匙羹藤可改善糖脂代谢紊乱,增加胰岛素的敏感性,其机制可能与改善脂肪细胞因子TNF-α和ADPN的表达有关。     

开郁清热方干预自发2型糖尿病大鼠腹腔脂肪组织SREBP—1c、FAS表达的实验研究

目的：研究开郁清热方对自发2型糖尿病大鼠（OLETF大鼠）腹腔脂肪组织SREBP—1c、FAS蛋白及mRNA表达的影响。方法：将成模OLETF大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、开郁清热方组,以LETO大鼠为空白对照组。采用免第疫组化、RT—PcR法检测腹腔脂肪组织SREBP—1c、FAS蛋白及mRNA的表达。结果：开郁清热方组的脂肪组织SREBP—1c、FAS蛋白及mRNA表达水平较模型组明显减低（P〈0．01,P〈0．05）。结论：开郁清热方具有降低自发2型糖尿病大鼠脂肪组织SREBP—1c、FAS蛋白及mRNA表达的作用。