阳春砂愈伤组织的诱导

目的:通过阳春砂组织培养获得愈伤组织,建立阳春砂愈伤组织的诱导体系。方法:将阳春砂根状茎芽及阳春砂试管苗的茎段、根尖作为愈伤组织诱导的外植体材料,接种到以MS为基本培养基,分别添加不同浓度的6-苄基腺嘌呤(6-BA),ɑ-萘乙酸(NAA)及2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的培养基中(各培养基的p H约为5. 8),探讨不同外植体材料及不同培养基对阳春砂愈伤组织诱导的影响。结果:研究结果显示,阳春砂根状茎芽及试管苗的茎段、根尖3种外植体材料均能有效地诱导产生愈伤组织;其中阳春砂根状茎芽、试管苗茎段2种外植体材料诱导产生愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA(1. 5 mg·L-1)+2,4-D(1. 0 mg·L-1)+NAA(0. 5 mg·L-1),最高诱导率分别为15%和60%;试管苗根尖诱导产生愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA(2. 0 mg·L-1)+2,4-D(1. 0 mg·L-1)+NAA(1. 0 mg·L-1),最高诱导率76%,为阳春砂愈伤组织诱导的最佳外植体材料。结论:该研究初步建立了阳春砂的根状茎芽及试管苗的茎段、根尖3种外植体的愈伤组织诱导体系,试管苗根尖为愈伤组织诱导的最佳外植体。     

正交法优化植物生长调节剂在黄芪愈伤组织生长中的应用

目的 研究膜荚黄芪叶愈伤组织诱导、生长及黄芪多糖合成的最佳生长调节剂组合.方法 以膜荚黄芪叶为外植体,运用正交设计研究 6-BA、2,4-D 和 NAA 等3种植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导、培养及黄芪多糖合成的影响.结果 分别以诱导率、相对生长速率和黄芪多糖含量为指标,结果表明 NAA 和 6-BA 对愈伤组织诱导率影响显著,6-BA、2,4-D 和 NAA 都对愈伤组织的生长影响显著,2,4-D 和 NAA 对黄芪多糖合成影响显著.结论 诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS 2,4-D(0.5 mg·L-1) 6-BA(1.0 mg·L-1) NAA(2.0 mg·L-1);愈伤组织生长的最佳培养基为:MS 2,4-D(0.5 mg·L-1) 6-BA(2.0 mg·L-1) NAA(2.0 mg·L-1);促进黄芪多糖合成的最佳培养基为:MS 2,4-D(1.0 mg·L-1) 6-BA(1.0 mg·L-1) NAA(1.0 mg·L-1).     

多花黄精组织培养体系的研究

为加快多花黄精优良种苗的繁育,通过叶片叶龄及部位、基本培养基和植物生长调节剂等关键因子的综合调控,建立多花黄精的组培快繁体系并通过细胞学观察解析愈伤组织形成与分化。结果表明:30 d龄多花黄精试管苗叶基部在MS+6-BA 1. 50 mg·L~(-1)+2,4-D 0. 20 mg·L~(-1)培养基上愈伤组织诱导率最高,为80. 00%,愈伤组织脱分化启动及愈伤组织的形成是多起源的;不定芽分化最佳培养基为MS+6-BA 4. 00 mg·L~(-1)+2,4-D 0. 20 mg·L~(-1),分化率达90. 33%,每块愈伤组织平均分化芽数5. 16个,不定芽有外起源和内起源2种发生方式,分别由愈伤组织近表层细胞和愈伤组织内部拟分生组织形成;采用正交试验设计筛选出不定芽最佳增殖培养基为MS+6-BA 2. 00 mg·L~(-1)+NAA 0. 10 mg·L~(-1)和MS+6-BA 2. 00 mg·L~(-1)+NAA0. 20 mg·L~(-1);切分三叶无菌苗接入培养基1/2 MS+IBA 2. 00 mg·L~(-1)中,生根率最高,为94. 00%;移栽于泥炭-蛭石1∶1的基质中生长良好,存活率达85. 00%以上。该研究为多花黄精工厂化育苗提供了关键解决途径。     

五鹤续断快繁体系的建立和优化

目的 研究五鹤续断快繁体系关键技术的建立和优化.方法以五鹤续断(Wu-He Dipsacus asper)初春萌发的幼嫩茎、茎尖和叶作为外植体,对五鹤续断愈伤组织的诱导及根和芽分化的培养基进行优化筛选.结果诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA1.5 mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1),在光照下培养长势好;诱导丛生芽的最优培养基为MS+6-BA2.0 mg·L~(-1)+NAA0.5 mg·L~(-1);诱导生根的最佳培养基为1/2MS+NAA1.0 mg·L~(-1)+ PP3 330.4 mg·L~(-1).结论 建立了一套五鹤续断快速繁殖技术体系.     

野藤茶愈伤组织的诱导研究

目的探讨影响野藤茶愈伤组织诱导因素,建立野藤茶愈伤组织培养方法。方法以生长旺盛的野藤茶的叶、茎为外植体,采用组织培养方法,观察不同外植体、光照和植物生长物质种类及其配比对野藤茶愈伤组织诱导的影响。结果叶和茎都能诱导愈伤组织,25℃、暗培养有利于愈伤组织生长,6-苄氨基嘌呤(6-BA)与α-萘乙酸(NAA)和2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的配合使用有利于愈伤组织的诱导,出愈率可达86.1%。结论野藤茶愈伤组织的最适宜培养基为MS+6-BA 1.5 mg.L-1+NAA 8 mg.L-1+2,4-D 40 mg.L-1(pH 5.8)。     

湖北麦冬花药愈伤组织诱导及再生植株的获得

目的:探讨药用植物湖北麦冬花药愈伤组织诱导和植株再生条件.方法:以湖北麦冬花药为外植体,采用MS培养基,附加不同的植物激素进行实验.常规压片法结合显微镜进行再生植株染色体的计数分析.结果:MS+2,4-D 1.0 mg·L~(-1)+KT 2.0 mg·L~(-1)诱导愈伤组织效果最好,愈伤组织诱导率可达41.07%.MS+6-BA 1.5～2.0 mg·L~(-1)+NAA0.1～0.3mg·L~(-1)适于不定芽的诱导,不定芽转入附加NAA 0.1～0.3 mg·L~(-1)的1/2 MS的生根培养基上,生根后获得完整的再生植株,再生植株为体细胞起源.同时,讨论了4℃低温预处理对愈伤组织诱导的影响.结论:建立了湖北麦冬花药体细胞组织培养体系和快速繁殖途径.     

外源激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响

目的 筛选最佳激素组合,提高锁阳组织培养效率.方法 以锁阳肉质茎维管组织作为外植体,以MS为基本培养基,基于正交实验设计研究三种外源激素配比(NAA、2,4-D和6-BA)以及蔗糖和琼脂浓度对锁阳愈伤组织诱导的影响.结果 NAA、2,4-D和6-BA三种激素对锁阳愈伤组织诱导均有显著影响,不同激素之间对出愈率的作用效应大小为2,4-D ＞NAA＞6-BA,诱导锁阳愈伤组织最佳激素配比为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA(2.0mg/L).培养基中琼脂浓度和蔗糖浓度对锁阳愈伤组织诱导率有一定影响,蔗糖浓度以30g/L,琼脂浓度以4.5g/L时愈伤组织诱导率最高.结论 锁阳愈伤组织诱导最适培养基为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA (2.0mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(4.5 g/L).     

珍稀药材小蔓长春花组织培养及长春胺含量的测定

目的:研究不同植物生长物质配比对小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织诱导的影响,及各生长期无菌植株、愈伤组织中长春胺含量差异.方法:以小蔓长春花无菌苗的叶、茎、根为材料,采用正交设计实验研究2,4-D,6-BA,NAA对小蔓长春花愈伤组织诱导的影响.在无菌植株生长20,40,60 d,愈伤组织形成高峰期30 d,继代培养30 d时,采用HPLC分别对其中的长春胺含量测定,实验数据进行统计分析.结果:培养基中添加的6-BA,NAA对小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织的诱导、生长无显著影响,而2,4-D则影响显著.无菌植株生长20,40,60 d时,长春胺分别为(0.015±0.003)%,(0.097±0.001)%,(0.113±0.06)%;诱导培养、继代培养至30 d时,小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织长春胺分别为(0.024±0.0025)%,(0.016±0.0015)%,(0.010±0.0015)%,(0.041±0.002)%,(0.019±0.001)%,(0.016±0.002)%.结论:诱导小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织形成的最适培养基为MS+2,4-D 1.0mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1.不同生长期无菌植株中长春胺含量差异显著,源于不同外植体的愈伤组织中的长春胺含量不同,其中叶诱导的愈伤组织长春胺含量显著高于茎、根产生的愈伤组织.     

博落回愈伤组织和悬浮细胞培养体系的建立及两种生物碱的积累

目的建立博落回愈伤组织及悬浮细胞的培养体系,并对培养体系中产生的血根碱、白屈菜红碱的含量进行测定。方法通过不同激素筛选诱导形成愈伤组织及培养悬浮细胞的最佳条件;采用HPLC方法检测两种生物碱的积累。结果附加6-BA 0.6 mg·L~(-1)+2,4-D 1.2 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)的MS培养基适用于愈伤组织的诱导,附加6-BA 0.6 mg·L~(-1)+2,4-D 1.2 mg·L~(-1)+KT 0.6 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)的MS培养液适用于悬浮细胞的培养;HPLC法测定血根碱在愈伤组织、悬浮细胞及博落回药材根中的含量分别为2930.41 mg·kg~(-1),2357.72 mg·kg~(-1),6464.24 mg·kg~(-1),白屈菜红碱分别为6.19 mg·kg~(-1),37.53 mg·kg~(-1),364.17 mg·kg~(-1)。结论建立了博落回愈伤组织及悬浮细胞的培养体系,利用植物组织培养的方式可以获得博落回中的血根碱及白屈菜红碱。     

叶下珠愈伤组织快速培养体系研究

目的:诱导叶下珠得到愈伤组织并对其培养条件进行优化。方法:以茎、叶、种子为外植体,以MS为基本培养基,考察不同外植体在不同外源激素及不同配比下愈伤组织的诱导率;以诱导条件下优化得到的激素配比为基础,通过改变激素NAA、2,4-D和6-BA的相对比例,考察叶下珠愈伤组织继代生长的最佳条件。结果:茎为最佳外植体;最佳诱导培养基为MS+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA,此条件下诱导率可达90%以上;最佳继代培养基为MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA;外源激素NAA、2,4-D和6-BA不同比例组合后对叶下珠愈伤组织诱导及继代培养影响较大。结论:首次成功建立叶下珠愈伤组织快速培养体系,为利用现代生物技术方法保护和利用叶下珠物种资源提供了一种新途径。     

夏枯草愈伤组织诱导和植株再生技术的研究

目的:探讨夏枯草愈伤组织诱导和植株再生条件。方法:采用正交试验法研究不同外植体、蔗糖、植物生长物质及其配比对夏枯草愈伤组织诱导和分化的影响。结果和结论:以叶片为外植体诱导愈伤效果最好,茎段次之,叶柄不能诱导出愈伤组织;6-BA是影响夏枯草愈伤组织形成的主要因素;诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+6-BA 3.0 mg.L-1+NAA 0.1mg.L-1+2,4-D 0.5 mg.L-1+蔗糖3%;宜于愈伤组织分化的培养基为1/2 MS+6-BA 3.25 mg.L-1+NAA1.25 mg.L-1+蔗糖2%;最佳生根培养基:MS+IBA 1.0 mg.L-1+蔗糖3%。     

款冬叶柄愈伤组织培养与再生体系建立

以款冬幼嫩叶柄为材料,研究植物生长调节剂对其离休培养与植株再生的影响,建立了款冬离体快繁技术体系。结果表明:款冬叶柄切段较理想的灭菌方法为75%乙醇浸泡30 s,转入饱和漂白粉上清液浸泡15 min;适合愈伤诱导的培养基为MS+6-BA 3.0 mg·L~(-1)+2,4-D 2.0 mg·L~(-1),诱导率96.2%;在培养基MS+ZT 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.3 mg·L~(-1)上芽苗分化效果较好,分化率91%,平均芽数8.26个;较佳的不定芽增殖培养基为MS+KT 1.0 mg·L~(-1)+IBA 0.3 mg·L~(-1),增殖倍数为11.81,平均苗高4.9 cm;生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg·L~(-1),生根数平均为5.68条,生根率为95.22%以上;瓶苗移栽于河沙-有机肥3∶1的基质中生长良好,成活率达90%以上;大田试验表明:同等栽培条件下款冬组培株、栽培株和野生株在生长量与花粒产量等方面存在显著差异,以组培株生长量与花粒产量相对较高。组培品与野生品有效成分含量基本一致。     

抱茎苦荬菜的组织培养及植株再生

目的:探讨苦荬菜组织培养和植株再生条件。方法:以苦荬菜叶片为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行优化筛选。结果:最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 1.5 mg.L^-1+6-BA1.5 mg.L^-1+NAA1.0 mg.L^-1+IBA1.5 mg.L^-1+KT1.5 mg.L^-1,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2,4-D 0.2 mg.L^-1+6-BA0.5 mg.L^-1+NAA 0.5 mg.L^-1+IBA 0.5 mg.L^-1+KT0.5 mg.L^-1,不定芽经附加IBA0.1 mg.L-1的1/4 MS培养基生根后移栽成活,获得再生植株。结论:建立了一套有效的苦荬菜组织培养再生体系。     

巫山淫羊藿离体胚培养的研究

目的:研究药用植物巫山淫羊藿组织培养技术,为工厂化育苗提供科学根据。方法:以巫山淫羊藿的种胚为外植体,采用MS培养基,附加不同浓度2,4-D,6-BA,IBA,NAA进行正交试验。结果:诱导愈伤组织的最优培养基为:MS+2,4-D2 mg.L-1+IBA 2 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1;愈伤组织分化的最优培养基为:MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+IBA 1 mg.L-1;诱导芽的最优培养基为:MS+IBA 2 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1;芽增殖的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1。结论:通过诱导愈伤组织途径和丛生芽途径,建立了巫山淫羊藿种胚外植体诱导和培养方法,达到快速繁殖的目的。     

土贝母组织培养的研究

目的:研究土贝母茎段、叶片外植体愈伤组织的诱导和培养方法及其与土贝母皂苷积累的关系。方法:在MS或B₅培养基上,试验不同种类、不同含量的植物生长物质及其组合对土贝母茎段和叶片愈伤组织诱导和增殖的影响。结果:茎段愈伤组织诱导的最佳培养基配方是MS附加2,4-D 2.0 mg.L^-1,NAA 0.5 mg.L^-1和BA 1.0mg.L^-1;叶片愈伤组织诱导的最佳培养基配方是MS附加2,4-D 0.5 mg.L^-1和NAA 2.0 mg.L^-1。愈伤组织在MS附加2,4-D 2.0 mg.L^-1,NAA 0.5 mg.L^-1和BA 1.0 mg.L^-1的培养基上积累土贝母皂苷的含量最高;在B5附加2,4-D2.0 mg.L^-1,NAA 0.5 mg.L^-1和BA 1.0 mg.L^-1的培养基上经多次继代培养后,可形成较为均一、稳定的愈伤组织系。结论:建立了土贝母茎段、叶片外植体愈伤组织的诱导和培养方法,为植物组织细胞培养生产土贝母皂苷提供实验依据。     

雷公藤不定根培养体系的建立及中试放大研究

以MS为基本培养基,进行雷公藤不定根的诱导研究时发现,不论是以雷公藤幼叶还是以幼叶诱导的愈伤组织为外植体,在添加1.0 mg·L^-1 IBA的培养基上均可以诱导出不定根并建立良好的不定根培养体系;以雷公藤愈伤组织建立的悬浮细胞在添加2.0~4.0 mg·L^-1 NAA时,也可以形成不定根并建立稳定的不定根培养体系,雷公藤不定根的3个培养体系中雷公藤甲素含量均超过自然生长的根皮中的含量,其中AR3不定根中雷公藤甲素含量最高,为根皮的5.3倍。在使用5 L发酵罐进行中试放大培养时,与250 mL摇瓶培养相比,每升培养基不定根增长量、次生代谢产物含量差异不大,这为通过组织培养生产雷公藤次生代谢产物奠定了基础。     

催眠睡茄植株再生体系的建立

目的:建立和优化催眠睡茄植株再生体系。方法:以催眠睡茄的叶片作为外植体,探讨不同植物生长物质对愈伤组织诱导,丛生芽分化以及试管苗生根的影响。结果和结论:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT;丛生芽诱导的最优培养基是MS+1.0 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA,试管苗生根诱导最优培养基为1/2MS+0.5 mg.L-1NAA;在珍珠岩-腐殖土(1∶1)的基质中,再生植株室外移栽成活率达到92%。     

华重楼植株的快速繁殖研究

目的以华重楼Paris polyphylla var.chinensis根茎为外植体,建立华重楼植物的快速繁殖技术。方法以MS为基本培养基,通过研究激素6-BA、2,4-D、NAA、IBA、KT、IAA和头孢曲松钠、活性炭等对愈伤组织诱导、不定芽分化和不定根产生的影响,找出组培苗诱导培养的最佳培养基配方。结果华重楼最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.5mg/L+2,4-D 3.0 mg/L;最佳不定芽分化培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L+头孢曲松钠300 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+活性炭0.5%。当组培苗长出第1片叶且不定根长出4条以上时将组培苗取出,先放在无菌水中栽培5 d,再移栽至松软土壤中,组培苗生长健壮,成活率为100%。结论在获得愈伤组织的基础上,进一步完成对不定芽的诱导与无根苗生根培养,筛选出了培育华重楼组培苗的最佳条件。     

药用植物墨旱莲的组织培养研究

 目的研究利用组织培养技术对药用植物墨旱莲进行快速繁殖。方法以顶芽、茎、叶和幼苗(上部为绿体,下部为愈伤组织)为外植体,诱导愈伤组织及根和芽的分化。结果在顶芽、茎、叶和幼苗4种外植体中,顶芽的愈伤组织诱导率和芽分化率均高达100%,愈伤组织褐化少,生长良好,易被诱导出不定芽,是较为理想的快速繁殖材料;茎段的愈伤组织诱导率也达100%,但其中不带茎节的茎段不能直接诱导芽分化。在适宜的培养基中顶芽和带节的茎段能大量生根,生根率均达100%。结论较适宜诱导愈伤组织的激素组合是MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.5mg·L^-1,诱导芽分化适宜的激素组合为MS+6-BA3.0mg·L^-1+NAA0.3mg·L^-1,根的诱导则在MS+NAA0.2mg·L^-1上进行。