沉默VEGF对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R侵袭迁移的影响

目的 探讨沉默血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R迁移和侵袭能力的影响。方法 制备含VEGF-shRNA的慢病毒载体（VEGF-LV1、VEGF-LV2、VEGF-LV3）和对照shRNA重组慢病毒（VEGF-NC），并转染人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R，建立稳定沉默VEGF细胞（CNE-LV1、CNE-LV2和CNE-LV3）和阴性对照细胞（CNE-NC）。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞转染效果，划痕实验和Transwell小室实验检测VEGF沉默后细胞的迁移和侵袭能力。结果 成功构建VEGF-shRNA重组慢病毒并建立了稳定沉默VEGF细胞CNE-LV3。划痕实验和Transwell小室迁移实验显示，与空白对照组和CNE-NC组相比，CNE-LV3组细胞迁移率明显降低［（50.17±1.76）% vs （37.97±1.56）%，P＝0.001；（50.63±1.52）% vs （37.97±1.56）%，P＝0.001］，穿膜细胞数亦明显下降［（95.3±3.8） 个 vs （41.3±1.5） 个，P＜0.001；（94.3±4.0） 个 vs （41.3±1.5） 个，P＜0.001］；Transwell小室侵袭实验结果亦显示，CNE-LV3组细胞穿膜细胞数较空白对照组和CNE-NC组明显下降［（46.3±2.1） 个 vs（105.3±1.5） 个，P＜1.001；（46.3±2.1） 个 vs （93.3±2.5） 个，P＜0.001］。结论 沉默VEGF表达可抑制人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的迁移和侵袭能力。     

罗汉果醇通过激活AMPK信号通路调控肝细胞癌HepG2 细胞的脂代谢

[摘要] 目的：研究罗汉果醇(MO)对肝细胞癌HepG2 细胞脂代谢的调控作用及其分子机制。方法：采用油酸(OA)诱导肝细胞癌HepG2 细胞脂肪累积，建立脂肪变性细胞模型。运用CCK-8 法检测MO对HepG2 的细胞毒性，筛选其无明显细胞毒性的实验工作浓度。不同工作浓度MO作用后运用油红O染色法观察模型细胞内脂质累积情况，测定细胞内甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）含量。运用高通量转录组测序方法筛选参与脂代谢的关键基因，运用qPCR检测模型及给药细胞SREBP-1c、FASN mRNA的表达、WB法检测p-AMPKα、SREBP-1c、FASN等蛋白的表达水平。结果：运用OA诱导的模型HepG2 细胞内脂质大量累积，TG、TC含量显著升高。OA诱导后参与肝癌细胞脂代谢的关键基因SREBP-1c、FASN mRNA表达升高；p-AMPKα 蛋白表达降低，SREBP-1c、FASN等蛋白的表达显著升高。工作浓度MO干预后，细胞内脂质累积显著减少、TG和TC含量降低，SREBP-1c、FASN mRNA表达降低，p-AMPKα 蛋白表达升高而SREBP-1c、FASN等蛋白的表达明显降低。结论：MO能够通过激活HepG2细胞中AMPK信号通路相关因子SREBP-1c、FASN的表达抑制脂肪酸合成，从而发挥调节脂代谢的作用。     

LncRNA MEG3靶向miR-181a-5p调控宫颈癌细胞放射敏感性

目的 研究LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测放射抗性和放射敏感性宫颈癌细胞中LncRNA MEG3的表达;将过表达对照组(转染pcDNA 3.1)、过表达LncRNA MEG3组(转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-NC组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-NC)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-181a-5p组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-181a-5p),均用脂质体法转染至SiHa细胞;克隆形成实验检测细胞的存活分数;流式细胞术检测细胞的凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;Western blot检测细胞中PTEN、p-Akt、Akt的蛋白表达。结果 与放射敏感组相比,放射抗性宫颈癌组织中LncRNA MEG3的表达明显降低(P<0.05),其表达量与宫颈癌细胞的放射敏感性呈正相关;过表达LncRNA MEG3、抑制miR-181a-5p均可显著增强宫颈癌细胞SiHa放射敏感性,促进凋亡(P<0.05);野生型LncRNA MEG3细胞的荧光活性受miR-181a-5p的抑制。过表达miR-181a-5p逆转了LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射增敏和促凋亡作用及对PTEN/Akt信号通路的调控。结论 长链非编码RNA LncRNA MEG3可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-181a-5p调控PTEN/Akt 信号通路有关,可为提高宫颈癌的预后提供新方向。     

抑制EGFR信号通路对骨折愈合早期骨内、外膜来源干细胞增殖、分化能力影响的研究*

目的 探索抑制表皮生长因子受体（EGFR）信号通路对骨折愈合早期骨内、外膜来源SCs增殖、分化能力的影响。方法 将建立右股骨骨折模型成功的42只SD大鼠按随机数字表分为实验组与对照组，实验组给予Gefitinib 100 mg/（kg· d）（溶于0.5%甲基纤维素）灌胃，对照组给予等量0.5%甲基纤维素灌胃。术后1周提取右股骨骨内、外膜区域的SCs并进行体外培养。通过流式细胞术鉴定第3代干细胞表面标志物FITC-CD29、FITC-CD34、FITC-CD45、FITC-CD90; BrdU法检测各组干细胞增殖能力; 成骨诱导及成软骨诱导分化后行von Kossa染色及阿尔新蓝染色，检测干细胞的分化能力。结果 各组SCs表面标志物FITC-CD29、FITC-CD90呈高表达，FITC-CD34、FITC-CD45呈低表达; BrdU法检测发现实验组骨内、外膜SCs增殖能力较对照组显著降低（P<0.01）; 成骨诱导分化并染色后，实验组骨内、外膜SCs的矿化结节较对照组更多，成软骨诱导分化并染色后，实验组SCs的淡蓝色颗粒较对照组更多。结论 在骨折愈合早期，抑制EGFR信号通路能抑制骨内、外膜来源SCs的增殖，促进其成骨、成软骨的分化。     

纯合型家族性高胆固醇血症家系基因型与表型分析

目的对1个纯合型家族性高胆固醇血症(HoFH)家系进行遗传学分析.方法前瞻性研究.选择西安市儿童医院心内科2018年10月确诊的1个HoFH家系先证者及家系成员共20人为研究对象,收集临床资料,提取基因组DNA,对先证者进行全外显子靶向捕获二代测序,并在家系内进行Sanger测序验证.对家系成员杂合突变携带者和未携带者的基因型与表型进行分析.结果先证者为7岁10月龄男性患儿,生后尾骨处皮肤可见圆形绿豆大小黄色皮肤突起,3~4岁起双侧肘关节、膝关节及跟腱处皮肤逐渐出现直径0.5~1.5 cm的黄色瘤样结节,患儿身高、体重、智力发育与同龄儿相同.家族其他成员无类似皮肤黄瘤.患儿总胆固醇(TC)18.16~21.24 mmol/L,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)14.08~15.51 mmol/L,颈部超声提示双侧颈动脉及椎动脉弥漫性硬化斑块,心脏彩超提示主动脉瓣增厚、钙化.基因检测确定了先证者LDLR基因携带c.418G>A(p.E140K)纯合突变,分别遗传自患儿父母,二人为近亲结婚,均携带LDLR-E140K基因杂合突变.家系中携带LDLR-E140K基因杂合突变成员TC、LDL-C和载脂蛋白B分别为(8.40±0.13)、(6.79±0.01)、(1.95±0.05)mmol/L,明显高于未携带者[(4.59±0.28)、(3.35±0.39)、(0.86±0.10)mmol/L,t=7.269、4.595、6.311,P均<0.05].结论LDLR-E140K基因纯合突变致儿童HoFH,携带纯合突变的先证者临床表型最严重,携带杂合突变的家系成员均有高胆固醇血症表型,LDLR-E 140K是家族性高胆固醇血症的致病性变异.     

妊娠合并症及羊水污染与新生儿窒息的关联性及早期预防措施

目的 探讨妊娠合并症、羊水污染与新生儿窒息的关联性分析及早期预防措施.方法 选取(2018年4月至2021年3月)我院发生新生儿窒息的200例作为研究组,同期健康新生儿112例作为对照组,统计比较两组1 min Apgar评分,并对可能影响新生儿窒息的相关因素进行单因素及Logistic多因素回归分析.结果 研究组1min Apgar评分低于对照组(P<0.05);研究组妊娠期合并症、羊水污染、胎盘早剥、胎位异常、宫内窘迫、产程异常发生率较对照组高(P<0.05);胎位异常、羊水污染、产程异常、妊娠期合并症、宫内窘迫、胎盘早剥均为新生儿窒息危险因素(P<0.05).结论 娠期合并症、胎盘早剥、胎位异常、产程异常、羊水污染、宫内窘迫为新生儿窒息危险因素,临床应尽早明确上述因素,并结合上述因素实施科学合理防治措施,以降低新生儿窒息发生率.     

半夏泻心汤及其类方不同配伍对正常大鼠胃液成分的影响

目的为类方的配伍研究提供可参考的试验设计方法.方法用均匀设计法对半夏泻心汤及其类方进行组方药量变化研究,以胃液分析为药理学指标,对所得的药理实验数据进行逐步回归分析.结果在半夏泻心汤、甘草泻心汤方中,各药味对胃液成分的影响其变化趋势类似,但影响程度不尽相同,生姜泻心汤与其他两方出入较大.不同药味之间存在交互作用.结论本方法对类方配伍研究有一定参考价值.     

体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经胶质样细胞的实验研究

目的：观察体外以不同方法诱导的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs)分化为神经胶质样细胞，探讨MSCs作为组织工程周围神经种子细胞的可行性。方法：以大鼠MSCs为研究对象，分化学诱导组，共培养诱导组，未经诱导的MSCs作为对照组。通过体外动态观察细胞形态，免疫细胞化学，western blot，RT-PCR等手段对各组诱导后的细胞进行鉴定。结果：形态学观察显示两种诱导过程中的部分MSCs细胞都出现明显的神经胶质细胞的形态，共培养诱导组的MSCs在诱导后仍可继续传代培养，对照组细胞形态无变化。细胞免疫组织化学染色，western blot和RT-PCR结果显示两个诱导组细胞都能够表达神经干细胞标志性抗体(Nestin)、神经胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)和S-100抗体。结论：我们推断MSCs很有可能成为TEPN的理想种子细胞来源。     

显微硬度体外评估漂白牙膏的防龋效果

目前漂白牙膏的使用越来越普遍，这些牙膏常包含有0．5％～1．5％的过氧化脲作为漂白剂。有研究表明低浓度的过氧化脲对釉质没有明显影响，而高浓度的过氧化脲可造成釉质显微硬度降低、矿物质丢失甚至在釉质表面形成点隙。因此，对于含氟漂白牙膏来说，在漂白牙齿的同时，其防龋效果如何迄今还未见报道。本文的目的是在体外评估含氟漂白牙膏的防龋效果。