化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠整合素连接激酶的影响

目的:观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠整合素连接激酶(ILK)的影响。方法:选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为假手术组、化瘀泄浊方组[化瘀泄浊方5.7g/(kg.d)经口灌服]、阿魏酸哌嗪分散片组[给予阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg.d)]、缬沙坦组[给予缬沙坦5.3mg/(kg.d)经口灌服]及模型组[给予同等量生理盐水经口灌服],每组10只大鼠。全部大鼠于实验第21天全部杀检,免疫组化及RT--PCR检测肾组织ILK蛋白及mRNA的表达。结果:免疫组化及RT-PCR结果显示,与假手术组比较,模型组和各治疗组ILK的表达显著增强,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,化瘀泄浊方组、阿魏酸哌嗪分散片组、缬沙坦组ILK的表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05),其中化瘀泄浊方组ILK的表达优于阿魏酸哌嗪分散片组,差异有统计学意义(P<0.05),其他各组间均无明显差异(P>0.05)。结论:化瘀泄浊方能通过抑制肾组织ILK蛋白及其mRNA的表达,使病变肾组织细胞外基质合成减少,发挥对肾间质纤维化的治疗作用。     

化瘀泻浊方对肾间质纤维化实验大鼠TGF-β1、p-Smad2/3的影响

目的:观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠TGF-β1、p-Smad 2/3的影响。方法:选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组[给予缬沙坦5.3mg/(kg.d)经口灌服]、化瘀泄浊方组[化瘀泄浊方5.7g/(kg.d)经口灌服]、阿魏酸哌嗪分散片组[给予阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg.d)]与模型组[给予同等量生理盐水经口灌服],并设假手术组,每组10只大鼠。行HE、Masson染色观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测观察实验大鼠梗阻侧肾脏转化生长因子-β1(TGFβ1)及p-Smad 2/3在蛋白水平的表达。结果:模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质TGFβ1、p-Smad 2/3蛋白的表达也增加(P0.05)。各治疗组与模型组比较,TGFβ1、p-Smad 2/3表达明显减少(P0.05)。治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P0.05),其他各组间均无明显差异(P0.05)。结论:输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾纤维化面积明显增加,这可能与TGFβ1、p-Smad 2/3表达增加有关,化瘀泄浊方对其有一定的抑制作用。     

红花黄色素粉针对肾间质纤维化实验大鼠Ⅲ型胶原及转化生长因子-β1的影响

目的 观察红花黄色素粉针对肾问质纤维化实验大鼠Ⅲ型胶原(collagenⅢ,colⅢ)及转化生长因子-β1(transforming growth factor-1,TGFβ1)的影响.方法 选用健康、雌性SD大鼠40只,用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)方法复制大鼠肾问质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组[予缬沙坦10 mg/(kg·d)经口灌服]、红花黄色素粉针组(红花黄色素粉针62.5 mg/(ks·d)腹腔注射)与模型组[予同等量0.9%氯化钠注射液腹腔注射],并设假手术组,每组10只大鼠.行HE、Masson染色观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变,并用免疫组化方法检测观察实验大鼠梗阻侧肾脏colⅢ、TGFβ1在蛋白水平的表达.结果 模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾问质ColⅢ沉积明显增加,TGFβ1蛋白的表达也增加(P＜0.05).各治疗组与模型组比较,ColⅢ、TGFβ1表达明显减少(P＜0.05).2治疗组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾间质ColⅢ沉积明显增加,这可能与TGFβ1表达增加有关.红花黄色素粉针及缬沙坦对其有一定的抑制作用.     

复肾颗粒对肾间质纤维化大鼠肾脏TRAF6表达的影响

目的:观察复肾颗粒对单侧输尿管结扎致肾间质纤维化模型大鼠的肾脏保护作用,探讨其机制。方法:将60只雄性Wi st ar大鼠行单侧输尿管结扎术,分为模型组、假手术组、贝那普利组[10 mg/(kg·d)]、复肾颗粒1组[7.5 g/(kg·d)]、复肾颗粒2组[15 g/(kg·d)]、复肾颗粒3组[30 g/(kg·d)]。各组于灌胃给药及灌胃生理盐水14天后处死大鼠,收集大鼠血清进行血肌酐(Scr)、尿素氯(BUN)检测;取结扎侧肾脏,进行HE和Masson染色,观察肾小管间质纤维化程度,RT-PCR和West er n bl ot法检测肾组织TRAF6和α-SMA的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清中Scr和BUN含量均增加(P0.01),肾小管损伤程度较重(P0.05),肾组织TRAF6和α-SMA表达明显增多(P0.05);与模型组比较,不同剂量复肾颗粒作用后大鼠血清中Scr和BUN含量均下降(P0.05),肾小管损伤程度有所缓解(P0.05),肾组织内TRAF6和α-SMA表达降低(P0.05),随着药物剂量的增加,各指标程度加重。结论:复肾颗粒可明显减轻肾间质炎症细胞浸润及间质纤维化,延缓肾功能损害,复肾颗粒对单侧输尿管结扎大鼠肾小管间质纤维化有保护作用,其机制可能与抑制TRAF6和α-SMA表达有关。     

肾络通对肾间质纤维化模型小鼠肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨肾络通治疗肾间质纤维化的可能作用机制。方法纯系C57BL/6J野生小鼠(WT)及肾上腺髓质素基因敲除杂合子小鼠(AMKO)随机分为假手术组、模型组、依普利酮组及肾络通组,每组5只。除假手术组外,其余各组结扎左侧输尿管复制肾间质纤维化小鼠模型。依普利酮组给予依普利酮100 mg/(kg·d)加入饲料喂养,肾络通组给予肾络通溶液26 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予蒸馏水0.3 ml灌胃,共10天。HE、Masson染色观察各组小鼠梗阻侧肾组织病理改变;免疫组化法及Western Blot法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肾上腺髓质素(ADM)的表达;检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。结果 WT及AMKO小鼠各组血Scr和BUN含量比较差异均无统计学意义(P0.05)。肾脏病理结果显示,模型组肾小管扩张、上皮细胞坏死,肾间质大量炎性细胞浸润,胶原组织沉积显著增多,依普利酮组和肾络通组可明显抑制间质炎性细胞浸润及胶原沉积。与本鼠种假手术组比较,WT模型组和AMKO模型组α-SMA、TGF-β1表达明显升高,而ADM表达明显降低(P0.01)。与本鼠种模型组比较,依普利酮组和肾络通组α-SMA、TGF-β1表达明显降低,而ADM表达明显升高(P0.05或P0.01)。两鼠种之间比较,AMKO假手术组、模型组、依普利酮组、肾络通组ADM表达均低于相应的WT小鼠组(P0.05或P0.01)。结论肾络通可能通过上调ADM表达,降低α-SMA、TGF-β1表达,从而抑制肾小管上皮细胞表型转化,减轻了肾脏病理损伤。     

中药太灵丹对STZ诱导糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的影响

目的:探讨中药太灵丹对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的影响。方法:选择70只Wistar大鼠,根据体质量随机分为正常对照组10只,其余60只采用STZ诱导为糖尿病肾病大鼠模型,并分为模型组,太灵丹低剂量组[生药5 g/(kg·d)灌胃]、中剂量组[生药10 g/(kg·d)灌胃]、高剂量组[生药20 g/(kg·d)灌胃]及缬沙坦组[缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃],每组12只。连续处理14周,检测各组大鼠体质量、血糖、糖化血红蛋白(HAblc)、24小时尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及甘油三酯(TG)的变化。用HE、PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法检测肾组织转化生长因子β1 (TGF-β1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:1)模型组血糖、HAb1c、24小时尿蛋白定量指标均较正常对照组大鼠明显升高(P0.01或0.05)。病理学观察模型组大鼠肾小球肥大,基底膜增厚,细胞外基质增多及肾小管上皮细胞大量萎缩、空泡变性,间质内炎性细胞浸润。太灵丹各剂量组、缬沙坦组,上述改变较模型组明显减轻(P0.05),但组间比较差异无统计学意义(P0.05)。2)免疫组化显示:与正常对照组比较,模型组肾小管上皮细胞中E-cadherin表达减弱(P0.05),TGF-β1及α-SMA表达增强(P0.01)。太灵丹各剂量组及缬沙坦组,E-cadherin表达增强(P0.05),TGF-β1及α-SMA表达减弱(P0.05),但组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:太灵丹可能通过增强E-cadherin、减弱TGF-β1及α-SMA的表达改善肾小管上皮细胞转分化,从而减缓糖尿病肾间质纤维化的进展。     

肾复宁颗粒抑制5/6肾切除CRF大鼠肾组织α-SMA表达的实验研究

目的:研究肾复宁颗粒对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,验证肾复宁颗粒治疗CRF的效果,探索肾复宁颗粒治疗CRF的机理。方法:根据文献制作5/6肾切除大鼠CRF模型。术后将手术组大鼠按随机数字表法随机分为模型对照组、肾复宁颗粒大剂量组、肾复宁颗粒中剂量组、肾复宁颗粒小剂量组,每组各15只。造模4周后,对小、中、大剂量分别给予肾复宁颗粒3g/(kg·d)、6g/(kg·d)、9g/(kg·d)开始灌胃,假手术组和模型对照组分别予以4mL生理盐水灌胃。共干预8周,之后处死大鼠,测定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及肾组织中α-SMA的表达水平。结果:假手术组Scr、BUN无明显异常,模型对照组和肾复宁颗粒小、中、大剂量组Scr、BUN指标均高于假手术组(P<0.01),肾复宁颗粒小、中、大剂量组较模型对照组均明显降低(P<0.01),其中又以肾复宁颗粒大剂量组降低尤为显著。肾组织α-SMA水平检查结果:模型对照组较假手术组α-SMA水平明显升高(P<0.01),肾复宁颗粒小、中、大剂量组较模型对照组α-SMA水平均降低,其中以肾复宁颗粒中、大剂量组降低最为明显。结论:肾复宁颗粒可以使CRF大鼠的一般生存状态得以改善,降低Scr、BUN,抑制CRF大鼠残余肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾组织中的表达,从而使肾脏纤维化减轻,延缓CRF发展至终末期的进程,有效地保护和改善肾功能。     

姜黄素与依那普利对大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的对比研究

目的探讨姜黄素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。方法采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组、依那普利组。从造模后第2天起,姜黄素组、依那普利组分别给予100mg/(kg·d)姜黄素、10mg/(kg·d)依那普利腹腔注射。术后第4周,处死各组大鼠,用HE、Masson染色评定肾小管间质纤维化程度;用免疫组化方法检测肾组织内转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达部位及蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠血清尿素氮水平显著增加(P<0.01),肾间质纤维组织相对面积显著扩大(P<0.01),肾组织内TGF-β1、α-SMA、Vimentin表达均显著上调(P<0.01)。姜黄素或依那普利干预后,上述上调指标都被显著抑制(P<0.05或0.01)。两种药物之间比较,作用无显著性差异(P>0.05)。结论姜黄素及依那普利可能通过抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞转分化而减轻肾间质纤维化。     

肾络通对梗阻性肾病大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响

目的观察中药肾络通对梗阻性肾病大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法 48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、Tempol组和肾络通组,每组12只。除假手术组外,其余各组大鼠结扎左侧输尿管建立梗阻性肾病动物模型,造模后Tempol组以Tempol 30mg/(kg·d)入水瓶中饮用;肾络通组予肾络通煎剂26g/(kg·d)饮用,持续10天。HE、Masson染色观察各组大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清、尿液8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),比色法测定血清丙二醛(MDA)含量;TUNEL法及光镜下观察肾组织细胞凋亡;免疫组织化学法检测大鼠肾组织半胱氨酸-天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase 9)及半胱氨酸-天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase 12)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾间质大量炎性细胞浸润,胶原沉积显著增加;血清、尿液8-OHdG和血清MDA含量显著升高(P0.05或P0.01);细胞凋亡阳性细胞显著增多(P0.01);Caspase 9、Caspase 12蛋白表达明显上调(P0.01)。与模型组比较,Tempol组及肾络通组炎性细胞浸润及胶原沉积均减少,血清、尿液8-OHdG和血清MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);细胞凋亡阳性细胞显著减少(P0.05或P0.01);Caspase 9、Caspase 12蛋白表达明显下调(P0.05)。结论中药肾络通可减轻梗阻造成的氧化损伤,提高抗氧化能力,降低脂质过氧化水平,抑制细胞凋亡,其机制可能与降低Caspase 9、Caspase 12蛋白有关,并且效果与抗氧化剂Tempol相当。     

糖尿病大鼠肾小球系膜细胞表型转化及菟箭合剂的作用

目的：研究糖尿病大鼠是否存在肾小球系膜细胞表型转化及中药菟箭合剂的作用。方法：SD大鼠分为正常对照组(NC组,n=8)、单肾切除对照组(QC组,n=8)、单肾切除链脲佐菌素(STZ)糖尿病组(DM组,n=8)、缬沙坦治疗组(VT组,n=8)和中药菟箭合剂治疗组(ZY组,n=9),缬沙坦治疗组和菟箭合剂治疗组分别在单肾切除STZ糖尿病模型成模后灌喂缬沙坦[20mg／(kg·d)]和菟箭合剂[20g／(kg·d)]12周,用免疫组化的方法观察大鼠肾小球内α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和转移生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况,用计算机病理图像分析软件检测肾小球α-SMA和TGF-β染色阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比。结果：NC组和QC组大鼠仅个别肾小球内有少量α-SMA阳性显色,DM组大鼠肾小球内可见显著的α-SMA阳性显色,肾小球内α-SMA阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比和TGF-β1阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比显著增加(P<0．01),24h尿蛋白排泄量较NC组和QC组大鼠显著增多(P<0．01);VT组和ZY组大鼠24h尿蛋白排泄量较DM组显著减少,肾小球内α-SMA阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比和TGF-β阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比较DM组显著降低(P<0．01);ZY组24h尿蛋白排泄量较VT组低(P<0．01)。结论：单肾切除STZ糖尿病大鼠肾小球内可见大量的α-SMA的表达,提示糖尿病肾病时存在肾小球系膜细胞表型转化,中药菟箭合剂和缬沙坦治疗后可显著减少糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄量,抑制肾小球系膜细胞表型转化和肾小球内TGF-β的表达,菟箭合剂较缬沙坦降低糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄量的作用更为显著。