四川淫羊藿属8种植物的同工酶分析

目的 分析四川淫羊藿属8种植物的酯酶(EST)同工酶和过氧化物酶(POD)同工酶.方法 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE)分离叶片组织中的EST同工酶和POD同工酶,用NTSYSpc2.1软件对酶谱进行聚类分析.结果 淫羊藿属植物的EST和POD同工酶酶带都较少,13份材料仅有6条POD酶带,4条EST酶带,不同物种和同种不同居群之间的同工酶酶谱均表现出差异;通过POD和EST同工酶电泳酶谱聚类分析,将13份材料聚为两大类,第一大类全为大花类群的淫羊藿,第二大类全为小花类群的淫羊藿.结论 淫羊藿属植物的POD和EST同工酶电泳酶谱在一定程度上能反映出材料间的系统关系,但并不能完全真实的反映材料间的亲缘关系,还需要综合考虑形态学、细胞学、DNA分子标记以及地理学等更多的研究结果.     

重楼属植物遗传多样性的RSAP标记

目的:研究重楼属植物DNA指纹图谱,初步探讨RSAP分子标记技术在重楼属植物遗传多样性研究上的应用.方法:采用限制性位点扩增多态性(restriction site amplification polymorphism,RSAP)技术对重楼属8个种进行基因组DNA多态性分析.结果:用10条RSAP引物即选出18对引物组合构建了8个种的DNA指纹图谱.通过遗传距离构建系统进化树,重楼属8个种的进化关系得到了很好的分辨.结论:RSAP标记能够对重楼属植物进行准确的分子鉴定,为重楼属中药材的种类鉴定和种间的分类地位提供分子生物学依据.     

引种栝楼过氧化物同工酶分析

目的: 对国内不同产区栝楼进行种源间亲缘关系的分析。方法: 采用烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术对不同种源栝楼过氧化物同工酶(POD)进行研究。结果: 不同产区栝楼过氧化物同工酶在酶带数、迁移率和酶量等方面存在差异。栝楼POD酶谱共有10条谱带,分为5个类群,Ⅰ,Ⅴ和其他4个类群亲缘关系都较远,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ这3个类群的亲缘关系较近。结论: 过氧化物同工酶谱可以作为不同种源栝楼遗传多样性鉴定的参考依据。     

重楼属植物分子生物学研究进展

重楼属植物是重要的药用类群,其分子生物学领域的研究受到了广泛关注。开展重楼属植物研究,不仅具有重大科学意义,而且具有重要的经济和生态价值。从分子标记、分子鉴定、系统进化与谱系地理学、转录组学、蛋白质组学、基因克隆与功能研究等方面对重楼属植物的分子生物学研究进展进行综述,并就当前亟需解决的问题进行了探讨,以期为加快分子生物学技术在重楼属植物研究中的应用提供参考。     

陕西产重楼属种质资源的SCoT遗传多样性分析

目的对陕西产重楼属6个类群的遗传多样性和亲缘关系进行分析。方法采用SCoT分子标记技术和非加权平均距离法(UPGMA)对陕西产重楼属6个类群48份样品进行遗传多样性和聚类分析。结果从82条SCoT引物中共筛选出12条多态性稳定、清晰的引物,48份重楼样品共扩增出152个DNA片段,多态性片段数为135,平均每个引物扩增出12.67个DNA片段,其多态性为88.82%;重楼属植物在物种水平上具有较高的遗传多样性,Nei’s基因多样性指数(H)为0.267 4,Shannon指数(I)平均值为0.404 1,居群间遗传分化系数(Gst)为0.517 9,种群间基因流(Nm)为0.465 4;6个类群重楼按遗传多样性水平排序为七叶一枝花宽叶重楼具柄重楼狭叶重楼宽瓣重楼北重楼,聚类分析可将北重楼组和其他重楼组区分开来,当遗传距离一定时,重楼属6个类群被完全区分开来。结论 SCoT分子标记可获得多态性丰富、清晰的条带扩增图谱,表明该技术可用于陕西产重楼属主要类群物种分子鉴定和亲缘关系研究,为筛选与药典收载种类近缘的可替代资源种类、指导合理利用地方种类自然资源提供了科学依据。     

8种卷柏属药用植物的RAPD分析

目的:用分子标记技术鉴别8种卷柏属药用植物并进行亲缘关系分析。方法:从60个随机引物中筛选出8个引物,采用随机引物扩增多态DNA(RAPD)技术,对8种卷柏属植物的17份样品的DNA提取物进行扩增和分析。结果:共扩增出58个位点,获得清晰的RAPD图谱,建立了8种卷柏属植物类群亲缘关系的树系结构图。结论:该方法显示了8种卷柏属植物之间明显的种间差异,以及同一种植物在不同产地产生的变异,能为这些植物种以及种下的分类鉴定提供遗传学依据。     

陕产重楼属南重楼组药用植物类群及资源调查

目的调查陕产重楼属南重楼组药用植物类群及资源概况。方法采用文献调查法、访问调查法和样线调查法,对设定的陕西省典型县域重楼属南重楼组药用植物类群、自然分布及资源状况进行调查。结果陕产重楼属南重楼组药用植物原记载分布有重楼、狭叶重楼、缺瓣重楼和具柄重楼。调查表明,实际分布还有宽叶重楼、短梗重楼、长药隔重楼、七叶一枝花和云南重楼5个变种,且均为分布新纪录,未见缺瓣重楼。南重楼组各类群植物的根茎均作为中药重楼使用,分布广、生长状况良好,自然植物资源处于濒危状态。结论本调查确定了陕产重楼属南重楼组共有2种6变种,填补了关于陕产重楼属药用植物分布记载方面的漏缺,查清了资源概况,为后续研究、保护和开发工作奠定了坚实基础。     

保山市重楼属种质资源初步研究

通过对保山市各县区重楼属植物资源开展实地调查,通过植物分类学,对重楼属植物进行基源鉴定,初步摸清重楼属种质资源及资源区域分布,对保山市各县区常见滇重楼、长柱重楼、金线重楼、黑籽重楼等几种植物的植物形态、种茎(种苗)形态、种子形态等方面予以附图和阐述,为保山市重楼属植物资源的开发利用提供参考依据。     

武当山区重楼属植物基于ITS2的种内鉴别研究

目的对武当山区重楼属植物进行种内分子鉴定研究,以DNA条形码技术解决重楼因种内形态差异小而难以鉴别的问题,规范重楼的正品来源,确保本地药材的质量以及临床用药的有效性。方法对ITS(internal transcribed spacers)序列进行克隆测序,以核基因ITS2片段作为DNA条形码,对研究材料进行PCR(polymerase chain reaction)扩增并双向测序,所得序列经Codon Code Aligner拼接后,用软件MEGA6.0(Molecular Evolutionary Genetics Analysis 6.0)进行相关数据分析,并构建NJ邻接树(neighbor-joining tree),利用Keller等建立的ITS2数据库及其网站预测ITS2的二级结构。结果经BLAST鉴定,采集的武当山区重楼样本来源准确;武当山区重楼属植物ITS2序列长度均为232 bp,与七叶一枝花的基因序列相比,球药隔重楼有16个变异位点,华重楼只有1个变异位点;武当山区重楼的ITS2序列种内K2P(Kimura-2-parameter)距离为0~0.073 6,种内平均K2P距离为0.027 2;由所构建的系统聚类树可以看出,本地区重楼主要分为七叶一枝花和球药隔重楼2大类,华重楼为七叶一枝花的变种,宽叶重楼、狭叶重楼与七叶一枝花为一支,不支持宽叶重楼、狭叶重楼成为独立的变种;比较ITS2二级结构发现,武当山区重楼属植物螺旋区的茎环数目、大小、位置有明显差异。结论 DNA条形码为重楼属药用植物鉴别开辟一条新途径,不论是相似性搜索法、最近距离法还是NJ系统发育树等方法,其分析结果均充分表明,ITS2序列可将不同品种重楼药材很好地区分开;七叶一枝花、狭叶重楼、宽叶重楼的ITS2基因232个碱基序列完全相同,MEGA 6.0的分析结果也表明宽叶重楼、狭叶重楼与七叶一枝花属于一支,不支持宽叶重楼、狭叶重楼成为独立的变种,建议作为七叶一枝花的变型处理;ITS2作为DNA条形码序列能够有效地区别重楼属植物,在中药材的鉴定中具有重要的应用前景,在实现规范化种植规程中可用于种质种源的正确鉴定。     

重楼属植物的本草学和民族植物学研究

民族植物学是研究不同民族在其特定的社会文化背景下,如何利用当地植物的一门学科。重楼是一种来源于延龄草科Trilliaceae重楼属Paris的植物。它的应用历史悠久,功用显著,使用地域广泛,人们在长期的生产生活中积累了丰富的重楼使用经验。本研究将以民族植物学的观点,对重楼属植物的本草学记载、植物学分类、资源分布以及民族植物学文化进行搜集整理,为其进一步开发利用提供依据。同时对重楼属植物的资源保护提出对策。     

红外光谱结合判别分析对滇重楼生长年限的鉴别

目的: 建立滇重楼生长年限的鉴别方法,为滇重楼的质量控制提供参考。 方法: 利用傅里叶变换红外光谱技术测试了同一产地7种不同生长年限的68株重楼主根木质部和表皮样品的红外光谱,利用Omnic8.0软件计算样品的二阶导数光谱和四阶导数光谱,分别以主根木质部和表皮在1 800~900 cm^-1的红外光谱、二阶导数红外光谱和四阶导数红外光谱数据为样品特征,采用Mahalanbis距离逐步判别分析法,依据Fisher线性判别准则建立重楼生长年限的判别模型,对未知生长年限的样品进行鉴别比较。 结果: 四阶导数光谱比其他级别的光谱鉴别效果好,表皮光谱比木质部光谱的鉴别效果好;利用表皮的四阶导数光谱数据建立判别分析模型对重楼的生长年限进行鉴别时,训练样本回判正确率100%,测试样本预测正确率78.6%,总正确率95.6%。 结论: 傅里叶变换红外光谱结合逐步判别分析法可鉴别重楼的生长年限,为生产实践中预测重楼的生长年限提供了一种新思路。     

三峡库区栽培重楼药材和土壤中营养元素的相关性分析

目的:对三峡库区不同产地重楼属药用植物种植基地的根际土壤及药材中矿质营养元素K,Ca,Mg,Na,Mn,Zn,Cu,Ni的含量及其相关性进行分析评价,为重楼矿质营养元素诊断和指导合理施肥提供参考。方法:采用湿法消解处理重楼根茎及根际土壤,通过原子吸收分光光度法测定,所得数据用SPSS 18.0软件进行分析。结果:重楼根茎中营养元素与根际土壤中营养元素呈现一定的相关性。不同产地重楼根茎及其根际土壤中8种营养元素含量存在显著差异,重楼根茎中各营养元素平均含量排序为KCaNaMgCuMnNiZn,根际土壤则为MgNaCaKMnZnNiCu。重楼对Na,Cu,Ca具有一定的富集能力,重楼根茎及根际土壤中8种营养元素有多重相关性。结论:重楼药材主要通过选择性吸收调控其矿质营养元素的含量;重楼对营养元素的吸收积累具有一定的协同吸收作用。     

不同产地不同种类重楼药材重金属元素的含量测定及分析

目的:分析测定不同产地不同种类的重楼药材中的重金属含量,为重楼种植地区的选择和其重金属元素限量标准提供参考。方法:从云南省10个产地收集8种共39份重楼药材样品,采用微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测定重楼药材中的重金属砷(As),铜(Cu),汞(Hg),镉(Cd),铅(Pb),铬(Cr)的含量,采用聚类分析,统计分析和主成分分析不同产地和种类对重金属含量累积特征进行分析。结果:六种重金属含量均符合《中医药-中药材重金属限量》ISO国际标准;按《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》限量值标准,As,Cd,Pb的超标率为15. 4%,5. 1%,2. 6%,Cu,Hg均符合相关要求。聚类分析,主成分分析可将样品按产地分为大理和昭通两类,统计分析结果表明产地对重金属含量的影响极显著,不同品种间差异较小。结论:该研究结果表明云南省各产区种植重楼的重金属含量基本符合相关标准,重楼药材的重金属含量差异主要表现为地域差异,为规范化种植重楼药材和其重金属含量限量标准的制定提供了理论依据。     

HPLC-ELSD法分析重楼商品药材中甾体皂苷的含量

目的：建立重楼药材中主要生物活性成分甾体皂苷的HPLC-ELSD测定方法。方法：应用蒸发光散射检测器，以乙腈-水为流动相梯度洗脱，流速1 mL·min^-1，在反相C₁₈ (4.6 mm×150 mm, 5 μm)柱上，测定重楼药材中11个甾体皂苷的含量。结果：在30 min以内，成功地分离分析11个甾体皂苷。精密度、稳定性RSD均小于3%，加样回收率在95%～97%。结论：此方法对这11个甾体皂苷的测定具有良好的精密度。结果表明该方法简便、快速、选择性好，适用于常用中药重楼的质量分析。     

濒危民族药重楼种质资源调查及质量评价研究

重楼是一味传统民族药,其基源为重楼属多种植物的根茎,该属植物全世界共有26种,我国分布有20种.以横断山脉南段为核心的川、滇两省是重楼属植物在欧亚大陆的地理分布中心,也是重楼药材的传统产区.本课题对该地区重楼属的种质资源、开发利用情况、濒危状态开展了实地调查,并依据2005年版<中国药典>重楼药材的质控标准对该地区50份不同产地的重楼药材进行了质量评价,结果 可为重楼药材质量的系统评价和资源保护利用提供参考.     

重楼抗肿瘤作用机制研究进展

介绍中药重楼抗肿瘤的作用机制.通过中国知网和Pubmed检索工具,查阅近年来34篇相关资料,对中药重楼抗肿瘤作用机制的文献进行整理和分析.中药重楼可通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞转移、调节机体免疫等机制发挥抗肿瘤的作用.诱导肿瘤细胞凋亡为其主要途径,但某些作用机制尚需进一步研究.     

重楼药材和混伪品中5种皂苷的含量及对《中国药典》2015年版重楼含量测定修订的探讨

重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis或七叶一枝花P.polyphylla var.chinensis的干燥根茎。针对现行重楼药材标准存在的问题,前期研究提出"删除重楼皂苷Ⅵ,增补重楼皂苷H,以重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,H和Ⅶ的总量进行限度控制"。为了考察更广范围内重楼样品中重楼皂苷H的含量以及重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量,该研究基于2015年版《中国药典》重楼标准定量方法的色谱条件,进行了同步测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ含量的方法学验证,测定了69批不同来源重楼样品的含量;同时,测定了易混伪药材头顶一颗珠以及重楼属7种近缘植物根茎中5种重楼皂苷的含量。结果表明重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ分别在0.006 48~0.828,0.006 52~0.834,0.006 17~0.790,0.006 31~0.808 g·L-1线性关系良好,平均加样回收率在100.2%~101.4%,RSD均小于3.5%。方法学验证均符合含量测定要求。36批不同产地的七叶一枝花样品中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量在0.050 9%~3.99%(不含3批未检出);33批不同产地的云南重楼样品中4种成分总量在0.115%~3.23%。同属近缘植物中,球药隔重楼和长柱重楼中甾体皂苷含量较高,狭叶重楼、金线重楼、黑籽重楼含量较低,毛重楼几乎不含皂苷。饮片易混伪品头顶一颗珠中重楼皂苷Ⅵ在0.526%~1.55%,并且不含重楼皂苷H。建议以干燥品计,含重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量不得少于0.80%进行限度控制,以提升商品重楼药材质量,遏制低含量的重楼属近缘种(比如毛重楼、黑籽重楼和狭叶重楼等)以及头顶一颗珠的混伪现象。     

中药重楼研究进展

重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis或七叶一枝花Paris polyphylla var.chinensis的干燥根茎。对近年来重楼甾体类、氨基酸类无机元素、其他化合物以及止血作用、抗肿瘤作用、抗菌、抗炎作用、大脑与肾脑的保护作用,临床作用进行了归纳总结。认为甾体皂苷是重楼的主要活性物质,具有抗肿瘤、消炎、止血、抗氧化、促进子宫收缩和保护血管内皮细胞等药理作用。临床内服用于止血、止痛、抗癌抗肿瘤,外用抗感染、抗炎镇痛。目前,还未开发出具有很好活性的创新药物,需要加快重楼的药物创新研究。     

川滇地区重楼商品药材质量评价

目的：为重楼药材质量评价及资源合理利用提供依据。方法：收集川西南至滇西北地域的重楼商品药材，观察了外观质地，采用HPLC方法测定重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量。结果：不同产地重楼药材间指标成分含量差异显著；样品合格率仅为25％；药材质地与含量有一定相关性。     

基于顶空气相色谱法测定的重楼总皂苷中有机溶剂残留质量控制研究

目的:建立重楼总皂苷中正己烷、苯、甲苯、间二甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1,2-二乙基苯等共8种有机溶剂残留的测定方法。方法:将重楼总皂苷溶解于25%N,N-二甲基甲酰中,应用顶空气相色谱法,采用石英毛细管柱和氢离子火焰检测器,以高纯氮气为载气,测定重楼总皂苷中8种有机溶剂的残留量。结果:该法可将8种有机残留完全分离,且线性关系良好,r=0.9987~0.9998,精密度RSD均小于5.0%,平均加样回收率为95.24%~98.57%。结论:此法简便、准确、可靠,可用于大孔树脂制备的重楼总皂苷中有机溶剂残的质量控制。