植物生长物质对红景天愈伤组织诱导和培养的影响

目的:考察植物生长物质对四裂红景天愈伤组织诱导和培养的影响并分析愈伤组织中红景天苷含量。方法:运用正交设计实验,在MS固体培养基中添加不同种类、不同含量的植物生长物质,进行愈伤组织的诱导和培养,并用HPLC检测愈伤组织中红景天苷的含量。结果:培养基中含有2,4-D1mg·L^-1,NAA2mg·L^-1,6-BA0.5mg·L^-1,KT0.1mg·L^-1时,愈伤组织诱导效果最好,诱导率为83.3%。当生长物质配比为2,4-D1mg·L^-1,6-BA0.1mg·L^-1和KT0.5mg·L^-1时,最适于愈伤组织的培养,培养30d后干重达11.77g·L^-1,红景天苷的含量为干重的0.28%。结论:红景天愈伤组织在诱导和培养2个阶段所需的生长物质种类和含量有很大差异;诱导的愈伤组织能够合成红景天苷。     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的，是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组，以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响，划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响，Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响，倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响，透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响，流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响，蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较，红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05），愈合面积均明显增加（P<0.05），且呈时间和浓度依赖性；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少；红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高，且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05），神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05），肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用，且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

RP-HPLC内标法测定大鼠血清红景天苷浓度的研究

 目的RP-HPLC内标法建立大鼠血清中红景天苷浓度的测定方法。方法健康♂SD大鼠尾静脉注射红景天苷(60mg·kg^-1)后,分别于不同时间点眼眶静脉丛取血0.5mL,高氯酸沉淀血清蛋白,离心取上清液进样分析。色谱柱为SHIMADZU C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(10∶90∶0.011∶0.016),流速为1.5mL·min^-1,检测波长为277nm,柱温为50℃,进样量10μL,内标为咖啡因。结果红景天苷质量浓度在0.56～70mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9975),以信号/噪音=3∶1计算,红景天苷最低检测浓度为0.15mg·L^-1,日内、日间精密度分别≤4.5%,≤5.4%,血清样品的平均回收率为(99.27±4.38)%。结论建立的RP-HPLC内标法方法简便、快速、准确,适合于红景天苷的血药浓度测定及药动学研究。     

反相高效液相色谱法测定女贞子中红景天苷的含量

 目的 测定女贞子中红景天苷的含量。方法 用反相高效液相色谱法,流动相为甲醇 水(7.5∶92.5),紫外检测波长278 nm,流速1.6 mL·min^-1。结果 红景天苷对照品在7～456 mg·L^-1浓度内线性关系良好,r＝0.999 7。平均加样回收率97.2%,RSD为3.4%。结论 该法简便,分离完全,结果可靠,适用于女贞子中红景天苷的测定。     

高山红景天苷对大鼠心钠素基因表达的影响

 目的 从基因表达水平研究高山红景天苷对大鼠心脏内分泌功能的影响。方法 分别给各组大鼠按15 mg·kg^-1·d^-1ip红景天苷氯化钠溶液。饲养30 d后,断头处死。冷酚法提取心房总RNA,用(α³²P)标记的大鼠心钠素前体原cDNA控针与各组大鼠心房总RNA做Northern blot杂交和Dot blot杂交,以检测心房ANP-mRNA的含量。结果 老年大鼠ANP-mRNA含量明显低于青年大鼠,注射红景天苷后,老年大鼠ANP-mRNA含量增加而青年大鼠减少。结论 老化过程中ANP基因表达能力明显衰退,红景天具有一定的抑制心脏内分泌功能老化的作用。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

HPLC测定6种青海产红景天植物中红景天苷的含量

 目的 研究提取方法及HPLC测定条件以测定狭叶红景天、吉氏红景天、深红红景天、四裂红景天、大花红景天和园丛红景天中红景天苷的含量。方法 色谱柱：Spherisorb C₁₈(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相：甲醇-水(20∶80);流速：1.0 ml·min^-1;检测波长：223 nm。结果 甲醇回流30 min可提取完全;红景天苷线性范围为0.097～0.870 μg,平均回收率为99.6%,RSD＝1.62%。结论 该分析方法简便、灵敏、准确;红景天苷含量与红景天种类有一定的关系。     

紫外分光光度法测定复方红景天片中总黄酮含量

目的:建立以紫外分光光度法测定复方红景天片中总黄酮含量的方法。方法:采用紫外分光光度法,检测波长为254nm,以大豆苷元为标准品测定本品总黄酮含量。结果:本品中大豆苷元浓度在0.8～6.4mg·L^-1范围内与吸光度线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为100.76%(RSD=0.37%)。结论:该方法准确可靠,操作简便,稳定性好。     

复方酪萨维口腔速崩片中蔷薇红景天提取物的大孔树脂纯化工艺优选

目的：优选大孔树脂纯化复方酪萨维口腔速崩片中蔷薇红景天提取物的工艺条件。方法：以红景天苷、酪萨维的含量及回收率为指标,通过单因素试验筛选大孔树脂型号并优选其纯化工艺。结果：AB-8型树脂分离效果较好,最佳工艺为蔷薇红景天提取物加适量水充分溶解以2 BV·h^-1的流速上样,径高比1：7,红景天苷、酪萨维的比上柱量分别为7.18,10.43 mg·g^-1,水洗除杂,加40%乙醇12 BV洗脱,洗脱流速4 BV·h^-1,树脂可重复利用3次;红景天苷、酪萨维平均提取量分别为1.870%,3.186%,平均回收率分别为82%,96.26%,平均纯度依次为5.72%,9.72%,纯度分别提高了2.51,2.94倍,浸膏得率由纯化前的13.73%减少至4.57%。结论：AB-8型大孔树脂对红景天苷和酪萨维具有良好的纯化效果,优选的工艺稳定可行。     

特女贞苷与红景天苷的大鼠在体胃肠吸收比较

特女贞苷与红景天苷是女贞子炮制前后含量变化较大的2种活性成分。为探讨女贞子炮制增效机制,该实验采用大鼠在体胃肠灌流模型,用HPLC测定给药后不同时间点大鼠胃与小肠灌流流出液中特女贞苷与红景天苷含量并计算吸收速率常数和吸收百分率,结果在特女贞苷的胃肠灌流流出液中均可检出其次级苷红景天苷。特女贞苷与红景天苷在小肠中的吸收速率常数分别为0.055 3,0.144 2 h^-1,4 h累计吸收率分别为24.46%,60.14%,在胃中吸收速率常数分别为5.70,8.26 h^-1,4 h累计吸收率分别为34.21%,47.23%。实验证明特女贞苷在大鼠胃与小肠内均可被代谢为红景天苷,红景天苷较特女贞苷更利于胃肠吸收。结果提示女贞子炮制后补肝肾药效增强与特女贞苷转化为红景天苷后更利于机体吸收有关。     

何首乌水培繁殖及生根相关生理生化特征的动态变化

目的:为何首乌人工繁育和更深一步研究何首乌生根机制提供理论依据和技术指导.方法:以何首乌嫩枝为材料,进行2号生根粉(ABT2)不同浓度的对比试验,研究水培繁殖及生根过程中内源激素吲哚乙酸(IAA)、玉米素核苷类(ZRs)、脱落酸(ABA)含量及吲哚乙酸氧化酶(IAAO)、多酚氧化酶(PPO)活性的动态变化.结果和结论:50mg·L(-1)ABT2处理何首乌插条,平均生根率到达了94%,10,25 mg·L(-1)ABT2处理插条生根率为75%,88%,而对照只有46%生根.何首乌水培生根过程可分为根诱导期、露白期和伸长期3个阶段.内源激素含量、氧化酶活性的动态变化与插条不定根生长过程密切相关,不定根诱导期需要低含量的内源激素IAA,ZRs,ABA和较高活性的IAAO;不定根形成露白期需要高含量内源激素IAA、较高活性的PPO、低含量的ZRs,ABA和低活性的IAAO;不定根伸长期需要一定含量的IAA,ZRs,ABA和较高活性的PPO,IAAO.生根过程中,50mg·L(-1)ABT2的处理增加了插条内IAA含量和PPO活性,降低了插条内ABA,ZRs含量和IAAO活性.     

金银花花中活性成分含量及其相关酶活性的动态变化规律研究

目的: 研究不同花期金银花中活性成分含量及其相关次生代谢过程中关键酶活性的动态变化规律,为确定金银花最佳采收期,调控金银花质量和相关管理规范提供指导. 方法: 测定金银花不同花期苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)的活性,以及总酚、总黄酮、绿原酸、花色苷等活性成分的含量. 结果: 从三青期到金花期,金银花中总酚、总黄酮和花色苷的含量呈下降趋势,三青期达到最高值,分别为4.04,6.71,0.26 mg·g^-1,绿原酸在三青期达到最高值,为0.968 mg·g^-1,大白期达到最低值,后又小幅升高.PAL,PPO,POD的活性从三青期逐渐下降,到银花期达到最低值,同三青期相比,三者的下降幅度分别为43%,62%,56%,后到金花期略有上升. 结论: 在金花期之前,金银花中的PPO,POD活性与酚类物质程正相关.在金银花成熟期,由于呼吸作用的加强,诱导POD活性上升,使POD成为金银花成熟阶段催化酚类物质氧化为醌的关键酶,即POD是控制金银花成熟阶段活性成分含量的关键酶.     

外源蔗糖对盐胁迫条件下甘草幼苗生长及有效成分含量的影响

以甘草幼苗为实验材料,研究了外源蔗糖对NaCl胁迫条件下甘草幼苗生长及有效成分含量的影响。结果表明,在盐胁迫条件下,添加一定浓度的外源蔗糖后,甘草幼苗的日相对生长率呈升高趋势,可明显的消弱这种胁迫效应,说明外源蔗糖具有缓解盐胁迫的效应。总黄酮含量和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性呈极显著升高,外源蔗糖对盐胁迫下甘草幼苗根系生长的缓解作用在很大程度上与PAL活性的增强所引起的黄酮含量的增加有关,当外源蔗糖的浓度为10 mmol·L^-1时,PAL的活性达到最大,当外源蔗糖的浓度为15 mmol·L^-1时,PAL的活性又成下降趋势,表明这种缓解作用具有浓度效应。在施加不同浓度的外源蔗糖后甘草苷含量的变化跟总黄酮含量的变化相似,施加不同浓度的外源蔗糖后甘草酸含量比在盐胁迫下高,达到未受盐胁迫时的水平,外源蔗糖的浓度梯度对甘草酸积累的影响不明显。     

罗汉果细胞悬浮培养体系的建立与优化

目的:研究6-BA,萘乙酸(NAA),碳源,pH对罗汉果悬浮培养细胞生长的影响,探讨罗汉果细胞悬浮培养的最适条件.方法:考察1个培养周期内罗汉果悬浮细胞的鲜重和干重,绘制生长曲线和生长速率曲线;采用正交试验设计对6-BA,NAA,碳源,pH 4因素3水平的组合进行优化.结果:罗汉果悬浮细胞培养的生长周期约为21 d,0～6 d为细胞的延滞期,7～21 d为对数期,稳定期较短,第22天进入到衰亡期,在第21天时细胞鲜、干质量达到最大,分别为693.0,416.0 g、L-1,最大生长速率为0.040 g·L-1·d-1.NAA是影响罗汉果悬浮细胞生长的关键因素,其影响效应依次为NAA＞6-BA＞pH＞碳源.悬浮细胞生长的适宜培养基为MS+1.0 mg·L-1 6-BA +0.02 mg·L-1 NAA,4.0％蔗糖为碳源,初始培养基pH5.5～6.0.结论:通过组织培养方式可以成功建立罗汉果细胞悬浮培养体系.     

皱皮木瓜与光皮木瓜品质多性状指标综合评价

目的:对重庆产果用型皱皮木瓜和光皮木瓜的8项鲜食品质指标进行全面测定,并基于模糊综合评判原理探索样品鲜食品质综合评价方法。方法:分别以重庆产皱皮木瓜与光皮木瓜样品为试材,以总糖、可滴定酸、抗坏血酸含量,超氧化物歧化酶活性与齐墩果酸、熊果酸、总黄酮、总皂苷含量为指标,采用滴定法、比色法以及高效液相色谱法分别对重庆产果用型木瓜鲜食品质性状进行全面测定,并采用模糊概率法对二者的鲜食品质进行探索性评价研究。结果:皱皮木瓜和光皮木瓜中平均超氧化物歧化酶活性,果汁可滴定酸、总糖、抗坏血酸及齐墩果酸、熊果酸、总黄酮、总皂苷分别为73.197 U.mg-1,0.357 g.L-1,0.854 mg.L-1,1.118 mg.L-1,0.320%,0.461%,43.90 mg.g-1,23.11 mg.g-1和77.914 U.mg-1,0.252 g.L-1,0.845 mg.L-1,1.260 mg.L-1,0.255%,0.176%,41.24 mg.g-1,15.01 mg.g-1,皱皮木瓜和光皮木瓜样品果用型鲜食品质综合评分分别为0.599,0.367。结论:重庆产果用型皱皮木瓜鲜食品质优于光皮木瓜,模糊概率法可用于多性状指标样品的品质综合评价。     

玄参中4种主要活性成分的HPLC定量分析

 目的建立应用HPLC-UV同时测定玄参中4种主要活性成分——哈巴俄苷、肉桂酸、安格洛苷C和acteoside含量的方法。方法采用Hypersil BDS-C₁₈色谱柱(4.0 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈和1%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长278 nm,柱温25℃。结果哈巴俄苷、肉桂酸、安格洛苷C和acteoside线性范围分别为15.12～302.4 mg·L^-1,7.72～154.4 mg·L^-1,24.84～496.8 mg·L^-1,6.64～132.8 mg·L^-1;平均回收率(n=5)分别为101.59%(RSD=2.40%),96.75%(1.32%),100.11%(3.95%),99.89%(2.08%)。结论本方法简单、快速、准确可靠,可作为玄参药材的质量控制方法。     

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系。方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响。结果:N₆液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L^-1、接种量60-80g·L^-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA0.2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1有利于黄酮合成,而附加BA0.5mg·L^-1+NAA3mg·L^-1则对生长有利。结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成。     

催眠睡茄植株再生体系的建立

目的:建立和优化催眠睡茄植株再生体系。方法:以催眠睡茄的叶片作为外植体,探讨不同植物生长物质对愈伤组织诱导,丛生芽分化以及试管苗生根的影响。结果和结论:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT;丛生芽诱导的最优培养基是MS+1.0 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA,试管苗生根诱导最优培养基为1/2MS+0.5 mg.L-1NAA;在珍珠岩-腐殖土(1∶1)的基质中,再生植株室外移栽成活率达到92%。     

白色紫锥菊不定根诱导及咖啡酸衍生物积累研究

以白色紫锥菊试管苗子叶为外植体,研究了植物生长素2,4-D,IAA,IBA,NAA对不定根诱导以及IBA浓度对液体悬浮培养中不定根的生长及咖啡酸衍生物积累的影响,并进行了生物反应器培养.结果表明,对白色紫锥不定根诱导最适合植物生长素是IBA1.0mg· L-1,不定根诱导数目达到22.5根/培养皿.液体悬浮培养中IBA 1.0 mg·L-1最适合不定根生长及咖啡酸衍生物的积累.白色紫锥菊不定根在5L气升式生物反应器中培养30 d后可获得8.98 g· L-1干重,是三角瓶悬浮培养干重4.38 g·L-1的2.05倍;生物反应器培养的不定根中紫锥菊苷质量分数为14.08 mg·g-1(干重),是栽培根的2.4倍;氯原酸,菊苣酸,总咖啡酸衍生物含量是栽培根的4.0 ～25.6倍.该研究为大量生产紫锥菊药品可提供富含紫锥菊苷等咖啡酸衍生物的高品质生物医学药材.