罗汉果悬浮培养细胞的生长和罗汉果甜苷积累的动力学研究

目的:研究罗汉果悬浮细胞生长、罗汉果甜苷积累的动力学特征,为培养过程的优化控制提供理论依据。方法:考察1个培养周期内罗汉果悬浮细胞的鲜量重、干质量和罗汉果甜苷的含量,绘制生长曲线和生长速率曲线。结果:罗汉果悬浮细胞培养的生长周期约为21 d,0～6 d为细胞的延滞期,7～21 d为对数期,稳定期较短,第22天进入到衰亡期,在第21天时细胞鲜、干质量达到最大,分别为693.0,416.0 g.L-1,最大生长速率为0.040 g.L-1.d-1。罗汉果总苷和甜苷V从第7天开始快速积累,第21天达到最大值,生长速率分别为0.032 8,0.054 7 g.L-1.d-1。结论:联合研究细胞生长和产物积累,可以明确产物积累的动态变化规律,为培养过程的优化、代谢产物的调控和大规模的工业化生产提供实验依据。     

肉苁蓉细胞悬浮培养体系的建立

目的 研究由肉苁蓉愈伤组织建立细胞悬浮培养体系的培养条件.方法 在固体培养基上添加不同比例的生长激素,考察生长激素、细胞种龄和接种量对细胞生长和次生代谢产物苯乙醇糖苷(PeG)量的影响.结果 在添加1 mg/L 2,4-D的B5固体培养基上形成的愈伤组织松散易碎,适于进行悬浮培养.细胞种龄为25 d和接种量为3%～4%时细胞悬浮培养的结果最好,PeG产量达到最大,为0.82 g/L.细胞在悬浮培养时聚集体由大变小,直径小于0.5 mm的细胞聚集体由接种时的5%逐渐增加至第20天时的81%,其PeG量为10.1%.结论 通过摇瓶培养建立了较好的细胞悬浮培养体系.     

高产绿原酸杜仲细胞悬浮培养体系优化研究

目的优化杜仲细胞悬浮培养及其产绿原酸的条件。方法研究基本培养基种类、激素质量浓度、碳源种类及质量浓度、pH值、接种量和摇床转速等因素对杜仲细胞生长和绿原酸产量的影响,建立了高产绿原酸的悬浮细胞培养体系。结果B5培养基+0.5 mg/L NAA+0.6 mg/L 6-BA、蔗糖30 g/L、初始pH 5.0~5.5、接种量20g.FW/L以及摇床转速110 r/min为杜仲细胞悬浮培养的适合条件。结论优化后的培养条件为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

霍山石斛细胞悬浮培养及条件优化

目的利用细胞悬浮培养技术生产霍山石斛单细胞,解决石斛药用植物资源短缺问题。方法以霍山石斛叶片等外植体为实验材料,通过不同的制备方法获得霍山石斛单细胞,研究霍山石斛细胞培养的多种影响因素,应用正交设计优化霍山石斛细胞悬浮培养的条件。结果在蔗糖35 g/L,NH4NO3 1.3 g/L,pH 5.6,激素IAA 0.4 mg/L,6-BA 1.0 mg/L,培养时间14～18 d,在此条件下培养的霍山石斛细胞数为9.42×105个/mL。结论经过4次继代培养后石斛细胞多为圆状或椭圆状,细胞碎片减少。应用优化的细胞悬浮培养条件,能获得较大量的霍山石斛细胞。     

桔梗细胞悬浮培养体系对斑蝥素的生物转化研究

目的 研究桔梗细胞悬浮培养体系对抗癌天然活性成分斑蝥素的生物转化，以获得具有新颖结构的斑蝥素衍生物。方法 往桔梗悬浮培养体系中加入斑蝥素并培养6d，培养液经萃取后采用色谱方法进行分离纯化，产物的结构根据光谱数据予以鉴定。结果分离得到了以2：1比例混合存在的两个转化产物。经光谱分析，两个产物鉴定为羰基还原为羟基的一对差向异构体1β-羟基斑蝥素(Ⅱa)及1a-羟基斑蝥素(Ⅱb)。结论 Ⅱa和Ⅱb均为未见报道的新化合物。桔梗细胞培养体系对斑蝥素具有较强的选择性还原作用，此转化反应可用于斑蝥素衍生物的制备。     

长鞭红景天细胞悬浮培养体系优化研究

目的 优化长鞭红景天Rhodiola fastigiata细胞悬浮培养体系及生长条件.方法 研究基本培养基、激素、碳源、氮源等因素对长鞭红景天细胞生长和红景天苷产量的影响,建立高产红景天苷的细胞悬浮培养体系.结果 MS培养基+BA5.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L为长鞭红景天细胞悬浮培养的最适培养条件.结论 对培养条件进行优化,为利用长鞭红景天细胞大规模生产天然活性成分奠定基础,为缓解野生长鞭红景天资源的匮乏提供可行途径.     

红花悬浮细胞体系的建立及其化学成分的UPLC-Q-TOF/MS分析

目的构建红花悬浮细胞体系,为进一步研究红花的功能基因搭建平台。方法用红花无菌子叶作为外植体进行愈伤组织培养,选择淡黄色、质地疏松、增殖速度快的愈伤组织为材料进行悬浮培养,考察激素浓度、愈伤起始接种量、p H值、细胞活力对红花悬浮细胞体系的影响以及不同浓度茉莉酸甲酯(Me JA)刺激对悬浮细胞生长曲线的变化。采用UPLC-Q-TOF/MS法对红花悬浮细胞培养体系进行初步化学成分分析。结果红花悬浮细胞培养的最适宜配方是MS+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA,最适宜p H值为5.5~6.0,最适宜接种量为0.02 g/m L培养体系;不同浓度的Me JA刺激对细胞增殖率影响较大,50μmol/L Me JA能提高悬浮细胞增殖率,500μmol/L Me JA能对细胞增殖则有明显的抑制作用。从红花悬浮细胞培养体系中初步鉴定出13种化合物。结论利用红花子叶能建立较好的悬浮细胞培养体系,适宜浓度的Me JA刺激可提高悬浮细胞增殖率。     

白花曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱活性成分合成

目的 研究白花曼陀罗细胞悬浮培养合成生物碱。方法 在MS液体培养基上悬浮培养细胞生产生物碱，以碳源、pH值、接种量等为影响因子进行研究。结果 蔗糖为最佳碳源，细胞接种量以鲜重1.5～2.0g／L、培养液初始pH值5．5～6．0对曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱合成最有利，加入苯丙氨酸能促进生物碱的合成。结论 白花曼陀罗细胞悬浮培养能有效地合成生物碱。     

巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性研究

目的考察巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性,为巫山淫羊藿资源利用提供参考。方法选用悬浮培养所获得的均匀悬浮培养细胞为研究对象,在光照条件下进行悬浮培养,每隔3 d取样,测定相关的生理生化指标。结果巫山淫羊藿悬浮细胞的生长曲线呈"S"型,培养基中蔗糖、磷酸盐、硝酸盐、铵盐量均呈急剧下降趋势,最后变化趋于平缓,细胞合成黄酮最佳光照时间为每天12 h,黄酮合成量为27.854 82 mg/L。结论巫山淫羊藿细胞生长特性的研究为其大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

不同培养条件对隔山消悬浮培养细胞生长和萝摩米宁合成的影响

隔山消Cynanchum wilfordii(Maxim．)Hemsley的根在韩国民间用于防治老年病，其所含的萝摩米宁(gagaminine，一种甾类生     

罗汉果中1个新的天然皂苷

目的:研究罗汉果中的化学成分.方法:用各种色谱法分离和纯化化合物,通过多种波谱数据鉴定其结构.结果:从罗汉果乙醇提取物中分离鉴定了6个葫芦烷型三萜皂苷,分别为罗汉果皂苷Ⅲ A1(mogroside Ⅲ A1)、赛门苷Ⅰ(siameno-sideⅠ),罗汉果皂苷Ⅳa(mogroside Ⅳa)、罗汉果皂苷Ⅳe(mogroside Ⅳ e),罗汉果皂苷(mogroside Ⅴ)、11-氧-罗汉果皂苷Ⅴ(11-oxo-mogroside Ⅴ).结论:mogroside Ⅲ A1为首次从天然产物中分离得到,鉴定其结构为罗汉果醇-24-O-β-D-毗喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-毗喃葡萄糖基(1→6)]-β-D-毗喃葡萄糖苷{Mogrol-24-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-[β-D-glucopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside};其余5个化合物为已知化合物.     

气调贮藏对罗汉果贮藏质量影响研究

目的:探讨保持罗汉果贮藏质量的气调贮藏条件.方法:挑选无病虫害、无机械损伤、发育正常的罗汉果为试材,设置5％ CO2,15％ CO2,30％ O2的气体指标,以空气作对照贮藏罗汉果.结果:在45 d的贮藏期内,气调贮藏可以有效的保存了罗汉果的质量和含水量;更有效的延缓果实硬度的降低和可溶性固形物上升.结论:4组处理中,以5％ CO2气调组对罗汉果贮藏质量为最佳.     

不同罗汉果品种生育后期净光合速率变化的比较研究

目的:分析净光合速率(P_n)与罗汉果品质的关系.方法:以永青一号和野红一号2个生育后期的罗汉果品种为实验材料,采用CI-310便携式光合作用测定系统测生育后期的净光合速率;用HPLC测甜苷V.结果:永青一号的光补偿点低于野红一号,光饱和点相同.在整个生育后期永青一号的Pn、干果重和甜苷V含量均高于野红一号.结论:净光合速率可作为评价罗汉果品质的重要辅助指标.     

诱导单性结实罗汉果果实生长发育规律及品质研究

对外源激素诱导罗汉果单性结实所获无籽或少籽果实的生长发育规律及品质进行分析研究。采用形态学观测和酶联免疫吸附法(ELISA)对诱导单性结实果实生长发育过程中果实横、纵径、体积及内源激素(IAA,GA,ABA,ZR)含量进行测定的,同时观测成熟果实大小,种子变化和测定罗汉果甜苷含量,并以二倍体授粉与三倍体诱导及授粉组作为实验对照。结果显示,诱导单性结实罗汉果可获得少籽且种子空瘪无种仁果实;果实大小生长发育规律与授粉组相似;果实横,纵径和体积绝对值二倍体诱导组小于授粉组,而三倍体果实则相反。ABA,IAA含量和ABA/GA比值在果实发育中波动明显,单性结实果实内源激素IAA,ABA含量在生长期0~30 d先下降再升高,生长期内IAA,GA含量诱导果实高于授粉果实;罗汉果总苷质量分数为3.08%,罗汉果甜苷Ⅴ1.47%,两含量略低于授粉果实远高于三倍体授粉与诱导果实含量。激素诱导可使罗汉果单性结实得到果形及大小与正常授粉果实接近且少籽的果实,果实品质接近于正常授粉果实。     

基于体外心肌细胞活力的葛根提取工艺优选

目的:优选葛根药材的提取工艺.方法:采用正交试验法,选取提取时间、料液比、提取次数及乙醇体积分数为影响因素,以葛根素含量和药效学的体外心肌细胞活力为指标综合分析,优选提取工艺条件.结果:葛根的乙醇提取最佳工艺条件为加6倍量70％乙醇回流提取2次,每次1.5h.结论:化学指标结合药效学指标综合分析葛根的提取纯化工艺可较好地保证制剂的质量,且该优选工艺稳定可行.     

外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响

目的:探讨外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响。方法:将稳定继代的黄芩愈伤组织在含有不同浓度NAA或KT的MS液体培养基悬浮震荡培养,光照16 h黑暗8 h进行培养18 d后,采用HPLC的方法,测定黄芩苷的含量,采用酶联免疫吸附法测定内源激素的含量,以黑暗条件为对照。结果:①与对照组相比,光照和黑暗条件下分别加入0.2 mg.L-1NAA后,黄芩苷含量显著降低,分别为未加入NAA时的2.56%,3.36%。②黑暗条件下,加入外源NAA后,ZR含量显著降低,但IAA,ABA和GAs含量变化不明显。③0.2 mg.L-1 NAA和不同浓度KT的协同作用对黄芩苷的含量呈现先增长后降低的趋势。其中1.0 mg.L-1的KT作用下黄芩苷含量最高,且黑暗条件下显著高于光照条件,达到2.13μg.L-1。结论:外源生长素不利于黄芩有效成分黄芩苷的积累,0.2 mg.L-1 NAA+1.0 mg.L-1 KT的组合对黄芩苷的积累量具有显著的促进作用。     

罗汉果生长曲线及种子与果实生长相关分析

目的:建立果实生长曲线方程;研究种子与果实的相关性,为罗汉果栽培与繁育提供依据.方法:以伯林3号为材料,对单果重、纵横径进行函数生长曲线拟合;对发育阶段和成熟后的果实中的种子与果肉重、横径×纵径进行偏相关分析.结果:生长曲线回归方程经F检验,达到极显著水平;种子重、种子数与果肉重相关性不显著,而与横径×纵径具有极显著的正相关关系.结论:生长曲线属于倒数甬数,果实前30 d生长迅速,应着重加强水肥管理;果实正常发育成熟需要达到一定数量饱满的种子,并种子影响果实的体积大小、果形.     

白金妇安颗粒中白芍和柴胡提取工艺优选

目的:优选白金妇安颗粒中白芍和柴胡的提取工艺.方法:以HPLC测定芍药苷提取量,分光光度法测定的柴胡总皂苷提取量,采用单因素试验法优选提取溶剂,正交试验法对白金妇安颗粒提取工艺条件进行优选.结果:以70％乙醇为溶剂时芍药苷苷提取量最多,乙醇体积分数＞50％时,柴胡总皂昔提取量基本不变;优选提取工艺白芍、柴胡粉碎成粗粉,分别加8,6倍量70％乙醇回流提取2次,每次2h.结论:优选工艺合理,有效成分提取率高.     

蒲公英ISSR-PCR反应体系及扩增程序的建立与优化

目的:优化蒲公英ISSR-PCR反应体系及扩增程序;筛选适合的引物,并确定最佳退火温度.方法:采用CTAB法提取蒲公英叶片的DNA,利用正交试验设计,从Taq酶MIX、模板DNA、引物3种因素2个水平,对蒲公英ISSR-PCR反应体系进行考察;采用单因素实验对其扩增程序进行优化.结果:确立了适合于蒲公英的最佳ISSR-PCR反应方法,即在25 μL反应体系中,内含Taq酶MIX 15 μL(1.25 UTaq DNA聚合酶,1.8 mmol·L-1 Mg2+,dNTPs各0.24 mmol·L-1),0.3 μmol·L-1引物,5 ng模板.在此基础上,从50条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度.结论:采用单因子试验和正交设计方法可以快速建立ISSR-PCR反应体系,经过验证,证明该体系稳定可靠,可用于蒲公英遗传分析.