骨康及其含药血清中类性激素样物质含量的测定

目的：验证骨康方及其含药血清中是否有类性激素样物质的存在，同时探讨骨康含药血清的理想采血时间、以及给药剂量与血药浓度之间的关系。方法：采用放免法分别测定骨康方中及其不同给药剂量、不同采血时相的含药血清中类雌二醇(E2)样物质和类睾酮(T)样物质的含量。结果：骨康高浓度煎剂样品和骨康低浓度煎剂样品中均含有类E2样物质和类睾酮(T)样物质，而且呈明显的量效关系；最后一次用药后2小时采血的含药血清中类E2样物质含量最高，其中又以骨康中剂量组相对较高。结论：中药骨康及其含药血清中本身就含有类性激素样作用的物质；中药骨康含药血清理想采血时相可能是用骨康中剂量连续灌胃7天、最后一次用药后2小时采用。     

中药骨康含药血清中类雌二醇样物质含量的测定

为探讨中药骨康含药血清中是否含有类雌二醇(E2)样物质并确定其理想采血时间，以及给药剂量与血药浓度之间的关系。采用放免法测定了不同采血时相及不同给药剂量的含药血清中类E2样物质的含量。结果显示各组大鼠在用药前和最后1次用药后的不同采血时相，其含药血清中均含有类E2样物质；最后1次用药后2小时采血的含药血清中类E2样物质含量最高，其中又以骨康中剂量组相对较高。说明中药骨康含药血清中含有类E2样物质，其理想采血时相可能是用骨康中剂量连续灌胃7天、最后1次用药后2小时时。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

中药骨康对成骨细胞OPG和RANKL分泌的影响

目的：通过观察骨康含药血清对成骨细胞OPG、RANKL表达的影响,探讨其治疗骨质疏松的作用机制。方法：体外分离、培养成骨细胞,实验分为3组：正常血清组、中药骨康血清组和雌二醇含药血清组。采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞OPG和RANKL的表达。结果：中药骨康含药血清组RANKL含量显著低于空白对照组（P〈0.05）,而OPG分泌量显著高于空白对照组（P〈0.05）;中药骨康含药血清组与雌二醇含药血清组OPG和RANKL的含量无明显差异。结论：在去势状态下,中药骨康可能是抑制RANKL分泌,上调OPG分泌,而达到治疗骨质疏松症的作用。     

骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的 :从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法 :通过体外分离和培养成骨细胞体系 ,运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果 :用 5 %和 10 %的血清培养第 7天时三组的OD值均为最高 ,而 2 0 %的血清培养第 5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论 :骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果〔1〕已经证实 ,骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度 ,改善生物力学性能 ,调节体内激素水平 ,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

六神丸含药血清制备方法的优选研究

目的:以给药剂量和采血时间为切入点,探讨中药复方血清药理学的实验操作规范.方法:用MTT法测定不同给药剂量和不同采血时间制备的六神丸含药大鼠血清对HL-60细胞的生长抑制.结果:中剂量1小时的含药血清对HL-60细胞的生长抑制最明显.结论:中药复方血清药理学研究要注意给药剂量及取血时间的优选.     

芪蓟肾康加味煎剂对AngⅡ诱导的人肾小球系膜细胞分泌MMP-2、TIMP-2的影响

目的观察芪蓟肾康加味煎剂对人肾小球系膜细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-2)的影响,探讨芪蓟肾康加味煎剂延缓肾小球硬化的作用机制。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球系膜细胞增殖,并且采用血清药理学方法制备含药血清(芪蓟肾康加味煎剂与强的松)进行干预,ELISA法检测MMP-2、TIMP-2含有量,观察不同剂量含药血清在不同时间点(24、48、72 h)细胞分泌MMP-2及TIMP-2的含有量变化。结果 AngⅡ能有效刺激系膜细胞增殖,在芪蓟肾康加味煎剂及强的松含药血清的干预下,各时间点(24、48、72 h)对MMP-2、TIMP-2的表达起到了不同程度的抑制作用。结论芪蓟肾康加味煎剂可能通过抑制人肾小球系膜细胞分泌MMP-2、TIMP-2,从而延缓肾小球硬化。     

中药含药血清对体外培养鼠破骨细胞的影响

目的 :研究骨康抑制破骨细胞性骨吸收的机理。方法 :新鲜牛皮质骨经锯式切片机横切成 5 0um厚0 .5cm× 0 .5cm大小骨片 ,参照已建立的破骨细胞分离培养方法 ,从新生SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞。原代破骨细胞培养 2 4小时后 ,加入含药血清培养 7天。结果 :发现培养的细胞具有典型破骨细胞的形态特点。结果可见破骨细胞能在骨片表面形成吸收陷窝 ,其形态多样 ,随时间延长 ,陷窝扩大 ,数量增多 ,而骨康含药血清可抑制骨陷窝数量。结论 :这说明含药血清可直接抑制破骨细胞的功能 ,骨康抑制骨吸收的功能可能与其直接抑制破骨细胞功能有关。     

益肾骨康方促进小鼠体外成骨作用的研究

目的:研究益肾骨康方对小鼠体外成骨作用的影响。方法:Wistar大鼠灌胃益肾骨康方以提取含药血清,以蒸馏水灌胃获取对照血清,作用于体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞。以生长实验、碱性磷酸酶染色实验、茜红素染色实验分别检测益肾骨康方含药血清对生长速率、成骨分化及成骨矿化作用的影响。结果:益肾骨康方含药血清体外可增加骨髓间充质干细胞的生长速率,增加其成骨分化及矿化程度,具有统计学差异(P<0.05)。结论:益肾骨康方对小鼠的成骨有促进作用。     

益骨胶囊对成骨细胞增殖影响的时效及量效关系研究

目的 :运用中药血清药理学方法 ,观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞 (OB)体外增殖的影响 ,并探讨用于OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件。方法 :雌性 12月龄SD大鼠 80只 ,随机分为生理盐水组、益骨胶囊低剂量 (11 6g/kg)、中剂量 (34 8g/kg)、高剂量 (10 4 4g/kg)组 ,每日灌胃一次 ,连续 12天 ,分别在灌胃后的 0 5h、1h、1 5h、2h采血 ,分离血清 ,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养SD新生大鼠颅骨OB ,MTT法检测细胞增殖情况。结果 :末次灌胃后 1 5h采血组的吸收度 (A)值明显高于各组其它时间 (P <0 0 5 ) ;不同剂量各浓度的益骨胶囊含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用 ,其中以高剂量组的稀释比为 2 5 %的血清浓度最佳。结论 :益骨胶囊含药血清对OB增殖具有明显的促进作用 ;益骨胶囊用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量 9倍连续 12天灌胃、末次灌胃后 1 5h采血 ,血清添加浓度以 2 5 %为宜。     

加减归肾丸含药血清对卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的:探讨补肾健脾,调肝活血的加减归肾丸对卵巢颗粒细胞内分泌功能的影响.方法:离体培养大鼠卵巢颗粒细胞,采用加减归肾丸含药血清进行刺激,以补肾健脾的滋肾育胎丸含药血清及HMG为对照,6小时后采用ELISA法测定培养上清液中雌二醇(E2)含量.结果:加减归肾丸高剂量组含药血清与空白组相比E2有显著性差异(P＜0.05);加减归肾丸高剂量组含药血清与HMG组相比E2有显著性差异(P＜0.01);滋肾育胎丸中剂量组含药血清与HMG组相比E2有显著性差异(P＜0.05).结论:补肾健脾,调肝活血中药加减归肾丸含药血清对卵巢颗粒细胞内分泌功能具有显著影响.     

五种中药对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用

目的:观察单味中药黄芪、丹参、淫羊藿及复方右归饮药物血清和煎剂以及雪莲花药物血清及其醇提液对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用。方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌。按10倍于任用剂量进行SD大鼠灌胃,心脏采血,制备血清。取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入含药血清、煎剂及雪莲花醇提液。药物血清分为15%1、0%5、%和1%浓度,其煎剂及雪莲花醇提液浓度分为10-2、10-3、10-4、10-5,作用3天后用MTT法测定细胞活力。结果:雪莲花含药血清及其醇提液在4个浓度组均显示促进细胞增殖。结论:雪莲花具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。     

择时服用淫羊藿对性激素水平的影响

为了证实《黄帝内经》“择时服服药”理论的科学性,本研究通过择时服用淫羊藿对幼鼠性激素水平的影响,探讨服药时间与药效的关系。结果显示：（1）淫羊藿煎剂具有性激素样作用,可以使雌性小鼠子宫增重,雌二醇（E2）含量升高,雄性小鼠血清睾酮（T）含量升高;（2）卯时,酉时服药对雌性小鼠子宫增重,E2含量升高,雄性小鼠血清T含量升高有不同程度影响,卯时作用强于酉时,表明补肾壮阳药清晨服用效果最佳。     

中药骨康方对体外培养大鼠成骨细胞骨架保护作用的初步实验研究

目的:探讨在离心力作用下中药骨康方对大鼠成骨细胞微丝结构的保护与修复作用。方法:选用成年新西兰白兔,分2组分别灌服中药骨康方及戊酸雌二醇,制备中药骨康方和雌激素的含药血清。原代培养大鼠成骨细胞,制备细胞爬片,分为中药骨康方血清培养组(中药组),雌激素血清培养组(西药组)、不含药血清组(对照组)以及空白组。中药组、西药组及对照组3组细胞分别在240 g、200 g离心力下离心4 min,空白组不离心,离心后培养24 h以多聚甲醛固定各组细胞,鬼笔环肽荧光染色后,于共聚焦显微镜下观察。每张细胞爬片随机取5个视野,每个视野5~7个细胞,计算平均荧光值,并作统计学计算,P0.05为有统计学意义。结果:不同离心力作用下,中药组、西药组细胞与对照组细胞比较荧光强度明显较强,且差异有统计学意义(P0.001)。中药组与西药组中,240 g离心力与200 g离心力相比,前者细胞微丝荧光强度显著减弱(P0.001);中药组与西药组相比,200 g时,中药组细胞微丝荧光强度强于西药组细胞,有统计学意义(P0.001);240 g时,西药组细胞微丝荧光强度强于中药组细胞,且有统计学意义(P0.001)。结论:离心力作用下,中药骨康方含药血清对大鼠成骨细胞的微丝结构由保护和修复作用,但随着离心力的加大,该作用有限。     

中药复方糖耐康含药血清对3T3-L1脂肪细胞GSK-3β及Glu-T4的影响

目的观察中药复方糖耐康含药血清对3T3-L1脂肪细胞胰岛素信号转导途径中糖原合成激酶(Glycogen synthase kinase-3 GSK-3β)蛋白及葡萄糖转运子4(Glucose Transport 4 Glu T-4)mRNA表达的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞(油红"O"染色鉴定),用胰岛素联合地塞米松造成胰岛素抵抗细胞模型。同时制备糖耐康、罗格列酮及空白含药血清,对细胞进行分组,分为正常组(3T3-L1脂肪细胞)、模型组、空白血清组、罗格列酮含药血清组(含8%罗格列酮血清)、中药高(含12%中药血清)、中(含8%中药血清)、低(含4%中药血清)7个剂量组。作用48h。后提取蛋白和RNA以检测。用半定量RT-PCR法测定抗性3T3-L1脂肪细胞中Glu T-4 mRNA的表达。免疫印迹杂交法(Western blot)测定GSK-3的蛋白表达含量。结果正常组各项指标表达量最高。与模型组比较,各给药组中蛋白及基因表达量均有一定程度上调,且随着中药含药血清浓度升高上调程度升高,西药血清组作用接近中药高组或中组。结论糖耐康含药血清可能通过上调胰岛素信号转导受体后途径中Glu T-4 mRNA,下调GSK-3β蛋白表达量等,从而成为糖耐康改善胰岛素抵抗状态的作用机制之一。     

糖耐康对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨中药糖耐康治疗2型糖尿病的作用机制.方法 44只Wistar大鼠随机分为中药组(n=18),空白组(n=20),西药组(n=6).中药组给予糖耐康灌胃,制备中药血清;西药组给予吡格列酮灌胃制备西药血清;空白组给予蒸馏水灌胃制备空白血清.用3T3-L1脂肪细胞制备胰岛素抵抗模型,分为模型组、吡格列酮组及糖耐康高、中、低剂量组,并以正常脂肪细胞作为空白组.糖耐康高剂量组予含中药血清的培养液,糖耐抗中剂量组予含1份空白血清及2份中药血清配置的培养液,糖耐康低剂量组予含2份空白血清及1份中药血清的培养液,吡格列酮组予含西药血清的培养液,空白组和模型组给予基础培养液.各组均培养72h后采用ELISA法测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,免疫荧光法观察各组细胞内TNF-α蛋白表达,RT-PCR法测定细胞内TNF-α mRNA水平. 结果 模型组脂肪细胞TNF-α蛋白水平较正常组显著升高(P＜0.01);各给药组TNF-α蛋白水平均显著低于模型组(P＜0.01),且糖耐康高、中剂量组显著低于吡格列酮组(P＜0.01).模型组细胞内有大量TNF-α阳性反应颗粒,糖耐康中剂量组和高剂量组及吡格列酮组TNF-α阳性反应颗粒较模型组明显减少.与模型组比较,糖耐康高剂量组、中剂量组及吡格列酮组TNF-α mRNA表达明显减少,且以糖耐康中剂量组最少.结论 糖耐康能够有效改善成熟的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,明显降低胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中TNF-α的蛋白及其mRNA表达水平,这可能是其治疗2型糖尿病的作用机制之一.     

中药育发液对脂溢性脱发大鼠性激素、肝细胞生长因子水平的影响

目的:研究中药育发液对脂溢性脱发大鼠血清睾酮、雌二醇和毛囊细胞中肝细胞生长因子(HGF)水平的影响。方法:以101育发剂为阳性药,建立脂溢性脱发的大鼠模型,研究中药育发液对大鼠血清中睾酮、雌二醇、肝细胞因子水平的影响。结果:与正常对照组比较,脂溢性脱发模型大鼠血清T显著升高,T/E2显著升高,HGF水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,中药育发液高、低剂量组大鼠血清T显著降低(P<0.05),低剂量组T/E2显著降低(P<0.05);中药育发液高剂量组HGF显著升高(P<0.01)。结论:模型组大鼠体内存在着明显的性激素(尤其是雄激素)失调,中药育发液可使紊乱的T/E2趋于正常,并升高HGF水平,以减少毛发脱落。