去氢骆驼蓬碱诱导急性白血病Jurkat细胞凋亡及其机制

目的本研究旨在研究去氢骆驼蓬碱体外诱导Jurkat细胞凋亡及其可能机制。方法采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对Jurkat细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡;应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡过程中bcl-2与ICAD的表达变化情况。结果去氢骆驼蓬碱对Jurkat细胞有明显的生长抑制作用,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;bcl-2与ICAD在Jurkat细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论去氢骆驼蓬碱可诱导Jurkat细胞凋亡,bcl-2与ICAD在去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。     

去氢骆驼蓬碱诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡

目的：探讨去氢骆驼蓬碱（Harmine，HM）诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法：MTT法检测HM对该细胞系的生存抑制率，光镜下观察凋亡细胞，流式细胞仪（FCM）检测凋亡率，基因组DNA琼脂糖凝胶电泳（DNALadder）检测凋亡梯状条带。结果：HM处理SGC-7901细胞后，细胞的存活率明显降低；细胞形态观察到有核固缩与核断裂的凋亡现象；流式细胞仪测定细胞周期的G1期前有亚二倍体的凋亡峰；基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测到明显的凋亡梯状条带。结论：HM能诱导人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡。     

吴茱萸碱、小檗碱对SGC-7901/DDP耐药性及耐药相关蛋白的影响

目的：探讨吴茱萸碱、小檗碱及其联合使用对顺铂（Cisplatin, DDP）耐药胃癌细胞SGC7901/DDP敏感性的作用。方法：体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,实验分为对照组、DDP组、吴茱萸碱+DDP 组、小檗碱+DDP 组及吴茱萸碱+小檗碱+DDP 组,CCK8 检测各组SGC-7901/DDP 细胞增殖能力;Western Blot 分析耐药及凋亡相关蛋白P-gp、MRP、caspase-3、caspase-9的表达。结果：CCK8实验表明吴茱萸碱、小檗碱在不影响SGC-7901/DDP 细胞活力的情况下可显著增强DDP抑制细胞增殖的作用,且小檗碱（8 μM）与吴茱萸碱（3.2 μM）联合给药增强SGC-7901/DDP化疗敏感性的作用明显强于二者单独给药（P <0.001）;Western Blot结果表明,SGC-7901/DDP细胞经吴茱萸碱、小檗碱处理后,caspase-3、caspase-9表达上调,P-gp、MRP表达下调。结论：吴茱萸碱、小檗碱单用及其联用可在体外显著增强SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性,其效应与凋亡蛋白caspase-3、caspase-9表达升高,耐药相关蛋白P-gp、MRP表达下调相关。     

去氢骆驼蓬碱通过诱导凋亡发挥抗肿瘤药理作用研究进展

目的去氢骆驼蓬碱是药用植物骆驼蓬中的有效单体化合物,具有中枢兴奋、抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤等多方面药理作用。本文对近年来有关去氢骆驼蓬碱通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤药效方面的研究情况进行综述,主要包括去氢骆驼蓬碱体内外抗瘤药效,去氢骆驼蓬碱诱导肿瘤细胞凋亡的检测方法及分子机制,为去氢骆驼蓬碱抗肿瘤应用方面的深入研究提供参考。     

去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的实验研究

目的：研究去氢骆驼蓬碱对白血病细胞的作用及其机制。方法：采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对各白血病细胞的生长抑制作用;以U937、HL-60为作用细胞,用琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的作用;应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡过程中Bcl-2表达的变化情况。结果：去氢骆驼蓬碱对白血病细胞有明显的生长抑制作用,其对各白血病细胞抑制率无明显差异,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2在白血病细胞中有表达,并随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：去氢骆驼蓬碱可诱导白血病细胞凋亡,其作用与降低Bcl-2表达有关。     

川芎嗪对人胃癌细胞株SGC-7901/ADR增殖、凋亡和MDR1、GST-π表达的影响

目的:探讨川芎嗪诱导人胃癌细胞株SGC-7901/ADR凋亡及对MDR1、GST-π表达的调控作用。方法:不同剂量(0~120μM)川芎嗪内酯与人胃癌细胞株SGC-7901/ADR同培养不同时间(24、48及72 h),50μM 5-氟尿嘧啶(5-FU)作为阳性对照组,采用CCK8法测定细胞的增殖,流式细胞术测定细胞凋亡率。用不同剂量的川芎嗪与细胞培养48 h后,采用Western blot测定MDR1、GST-π蛋白的表达情况,用半定量RT-PCR测定MDR1、GST-πmRNA表达。结果:不同浓度川芎嗪处理人胃癌细胞株SGC-7901,川芎嗪抑制SGC-7901细胞增殖呈浓度及作用时间依赖性且120μM川芎嗪的抑制率与阳性对照组相当;而且应用流式细胞仪检测发现川芎嗪作用于人胃癌细胞株SGC-7901 48 h后,细胞出现凋亡。Western blot及半定量RT-PCR检测细胞中MDR1、GST-π及其mRNA的表达,结果显示,川芎嗪可下调MDR1、GST-π表达,下调作用与TMZ相当甚至更具优势。结论:川芎嗪能够抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖,诱导其凋亡,且能抑制细胞中MDR1、GST-π的表达,其表达量与川芎嗪剂量呈现明显的时间-浓度效应关系。     

中药生物碱逆转小鼠S180肉瘤细胞获得性多药耐药相关生物因子的过度表达

目的:探讨中药生物碱口服给药逆转化疗诱导的肿瘤细胞MDR的分子生物学基础,以指导临床应用中药逆转肿瘤多药耐药,提高化疗疗效。方法:给予亚于治疗剂量的联合化疗诱导腹水型S180小鼠,苦参碱、粉防己碱、氧化苦参碱和盐酸小檗碱4周,流式细胞仪免疫荧光检测S180肿瘤细胞P₁₇₀,LRP,TOPOII,Fas和细胞凋亡率。结果:苦参碱、粉防己碱明显降低化疗诱导后耐药细胞P₁₇₀,LRP的表达率和TOPOII活性,增加凋亡基因Fas表达率,促进耐药肿瘤细胞的凋亡;盐酸小檗碱明显降低化疗诱导后耐药细胞LRP,TOPOII的表达率;氧化苦参碱明显降低化疗诱导后耐药细胞LRP的表达率。结论:苦参碱、粉防己碱可通过对MDR相关生物活性物质的调节,干预化疗诱发的MDR的产生,并且其作用程度与生物碱的结构相关。     

冬凌草甲素注射剂诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究

目的研究冬凌草甲素注射剂诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及与细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的关系。方法 MTT法检测冬凌草甲素注射剂对SGC-7901细胞的细胞毒活性;倒置显微镜观察冬凌草甲素注射剂对细胞形态学的影响;流式细胞术测定细胞凋亡率;激光共聚焦显微术检测SGC-7901细胞[Ca2+]i的变化;JC-1单染,激光共聚焦显微术检测SGC-7901细胞中线粒体膜电位的变化。结果冬凌草甲素注射剂对SGC-7901细胞的IC50为21.74μmol/L;作用48 h后,细胞生长密度变疏,细胞皱缩,其中冬凌草甲素注射剂高浓度组大部分细胞破碎。冬凌草甲素注射剂5.5、11、22μmol/L作用24 h后SGC-7901细胞凋亡率分别为7.07%、18.57%、22.96%;钙离子荧光强度高于对照组;线粒体膜电位荧光强度显著低于对照组。结论冬凌草甲素注射剂通过升高SGC-7901细胞[Ca2+]i诱导细胞凋亡。     

贝母素乙增强阿霉素对胃癌多药耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制研究

目的 研究贝母素乙逆转胃癌细胞多药耐药性（MDR）,增强化疗药物对胃癌多药耐药裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其作用机制。方法 制备胃癌耐药SGC7901/VCR细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,随机分组后,ip给药,每2天给药1次,共给药6次。治疗期间观察裸鼠体质量,游标卡尺测量移植瘤体积。治疗结束后处死裸鼠,称取肿瘤质量,计算抑瘤率;Western blotting检测药物治疗后移植瘤耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-gp）、Cleaved Caspase-3表达水平。结果 治疗期间联合用药组移植瘤体积小于模型组,差异显著（P＜0.01）。治疗结束后处死裸鼠,称取移植瘤的质量,联合用药组移植瘤质量和抑瘤率显著低于模型组（P＜0.05）。Western blotting结果显示联合用药组P-gp表达水平较模型组降低,Cleaved Caspase-3表达升高。结论 贝母素乙可以增强胃癌耐药细胞移植瘤对阿霉素的敏感性,能够显著抑制胃癌耐药移植瘤的生长,其机制可能与降低肿瘤组织中P-gp表达和升高Cleaved Caspase-3的表达相关。     

贝母素甲抑制人乳腺癌细胞MCF-7/TAM增殖及其对细胞凋亡的影响

目的:探讨贝母素甲抑制耐三苯氧胺人乳腺癌细胞MCF-7/TAM的增殖及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析法检测贝母素甲作用于MCF-7/TAM细胞后的抑制率;用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;用免疫细胞化学法检测Bcl-2表达变化。结果:贝母素甲对MCF-7/TAM细胞有明显的抑制作用,呈浓度和时间依赖性。作用48h后能诱导细胞凋亡,细胞周期被阻滞于G1期(P0.05)。免疫细胞化学法检测Bcl-2表达减弱(P0.01)。结论:贝母素甲可抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

复方三根制剂对MDR细胞株K562/ADR和K562/VCR逆转作用的研究

目的：研究复方中药——复方三根制剂对多药耐药(MDR)细胞株的逆转作用。方法：应用MTT比色法，观察复方三根制剂对MDR细胞的逆转作用。运用流式细胞仪(FCM)，测定其对耐药细胞积聚和外排阿霉素(ADR)的影响，以及对耐药株细胞表达P=gp的影响。结果：复方三根制剂可部分恢复K562／ADR和K562／VCR耐药细胞对ADR的敏感性，而对VCR抗药性的逆转作用不明显；可增加K562／ADR和K562／VCR耐药细胞内ADR的积聚，并对外排ADR有一定影响；可部分下调p-gp的表达。结论：复方三根制剂可部分逆转耐药细胞的抗药性。     

丹参逆转胃癌耐药细胞的作用及其机制分析

目的探讨丹参对人胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR耐药性的逆转作用及其机制。方法以不同浓度的丹参(SAL)处理耐药系SGC7901/ADR及敏感系SGC7901细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测丹参对两种细胞系的毒性及半数抑制率(IC50),流式细胞仪(FCM)检测丹参对两种细胞内ADM浓度和细胞周期的影响,SP法免疫组化染色检测两种细胞P-糖蛋白(P-gp)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达。结果丹参的非细胞毒性药物剂量为500 mg/L以下;丹参可逆转SGC7901/ADR细胞对ADM的耐药性,逆转倍数为1.89(P<0.01);提高细胞内ADM浓度,ADM增加1.55倍(P<0.05);丹参使细胞周期阻滞于G1、G2期;对细胞膜P-gp的表达轻度下降、TopoⅡ的表达略有增加,但无显著性差异(P均>0.05)。结论丹参对SGC7901和SGC7901/ADR细胞无杀伤作用。其机制是丹参能增加耐药细胞内化疗药物浓度,使DNA合成期(S期)细胞含量下降。     

温郁金醇提物对人耐长春新碱胃腺癌细胞SGC-7901皮下移植瘤的逆转作用及对P糖蛋白表达的影响

目的通过建立人耐长春新碱胃腺癌细胞SGC-7901（vincristine-resistant gastric cancer SGC-7901 cells,SGC-7901/VCR）裸鼠皮下移植瘤模型探讨温郁金醇提物逆转人胃癌多药耐药的作用及可能机制。方法运用四甲基偶氮唑蓝法（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法对SGC-7901/VCR耐药性进行鉴定,50只BALB/c裸小鼠,采用组织块法建立人胃癌SGC-7901/VCR皮下移植瘤模型,2-3周后选取瘤体大小相近裸鼠36只,按随机数字表法分为模型组,长春新碱（vincristine,VCR）组,温郁金低、高剂量组及温郁金低、高剂量联合VCR组,共6组,每组6只。模型组给予生理盐水腹腔注射10m L/kg,2天1次;VCR组给予腹腔注射VCR 0.28 mg/kg,2天1次;温郁金低、高剂量组分别给予灌胃相应药物1.4、2.8 g/kg,1天1次,1次0.2 m L;温郁金低、高剂量联合VCR化疗组分别给予低、高剂量温郁金（1.4、2.8 g/kg）联合VCR（0.28 mg/kg,2天1次）;各组均为14天。观察各组瘤体生长情况,计算抑瘤率,同时采用免疫组化及蛋白印迹法（Western blot）检测瘤体P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的定位及表达。结果 SGC-7901/VCR对VCR、阿霉素（ADM）、5-氟尿嘧啶（5-FU）及顺铂（DDP）均有一定耐药性,其中对VCR耐药性最强。SGC-7901/VCR脱药培养后增殖活性明显增强,各组荷瘤裸鼠随着时间的延长,肿瘤体积逐渐增大,以温郁金高剂量联合VCR组体积最小。与模型组、VCR组比较,温郁金高剂量联合VCR组较瘤体明显缩小（P〈0.05）,其抑瘤率（51.56%）明显增高,差异亦有统计学意义（P〈0.05）。Western blot检测显示：与模型组比较,VCR组灰度值升高（P〈0.05）,温郁金高剂量组、温郁金低、高剂量联合VCR组中P-gp的相对表达量均明显减低（P〈0.05）。与VCR组比较,温郁金低、高剂量组及温郁金低、高剂量联合VCR组P-gp的灰度值均降低（P〈0.05）。免疫组化显示：与模型组比较,温郁金高剂量组、温郁金     

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??OBJECTIVE To investigate the effect and mechanism of juglone on the apoptosis of human gastric cancer SGC-7901 cells. METHODS The antiproliferative effect of juglone on SGC-7901 cells was tested by the MTT assay. The apoptosis rate and intracellular reactive oxygen species(ROS) level were detected by flow cytometry (FCM). The expression of JNK, p-JNK, p38, and p-p38 proteins were examined by Western blot. In order to clarify the role of ROS in the apoptosis induced by juglone on SGC-7901 cells, the combination of the juglone and ROS inhibitor NAC groups were set up in each experiment above. RESULTS Juglone could effectively inhibit the proliferation of SGC-7901 cells (IC₅₀ for 72 h was 24.16 ??mol??L^-1). When combination juglone with NAC, the IC₅₀ raised to 36.91 ??mol??L^-1. After 72 h of exposure to 5-20 ??mol??L^-1 of juglone, the cell apoptosis rate increased gradually with the increase of juglone concentration. After adding NAC, the apoptosis rates declined and the apoptosis rate of 20 ??mol??L^-1 group decreased from 32.06% to 11.56%. After SGC-7901 cells were treated with juglone for 24 h, the ROS level increased and mitochondrial transmembrane potential decreased which were inhibited by the pretreatment of NAC. After 48 h of exposure to different concentration of juglone, the expressions of p-p38 and p-JNK proteins were up-regulated which could also be inhibited by the adding of NAC. Meanwhile, there were no significant changes in p38 and JNK protein expression in all groups. CONCLUSION Juglone can induce apoptosis of human gastric cancer SGC-7901 cells by JNK and P38 pathway mediated by reactive oxygen species.     

圣和散逆转胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药的研究

目的探讨中药圣和散逆转胃癌耐药细胞SGC7901/VCR多药耐药的机制。方法圣和散(浓度2.5、5和10mg/ml)处理胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,用流式细胞技术检测P-糖蛋白(P-gp)表达,免疫组织化学SABC法及图像分析技术检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)。结果实验组SGC7901/VCR细胞Bcl-2表达A值(121.34±0.16)明显高于对照组(104.37±0.089)(P<0.05),Bcl-2表达减少,P-gp表达也明显降低。结论圣和散能逆转胃癌耐药细胞SGC7901/VCR多药耐药,其作用可能与调节Bcl-2和P-gp表达有关。     

EGCG对两株耐药肿瘤细胞的细胞毒增敏作用及抑瘤作用研究

目的:研究EGCG对人耐药肝癌细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒增敏作用及对裸鼠移植瘤的抑瘤作用。方法:MTT法检测药物对体外培养细胞的毒性作用,采用BEL7404/ADR或KBV200细胞种植于裸鼠皮下,建立耐药肿瘤模型,观察用药后对裸鼠体重、抑瘤率、病理改变以及RTPCR和免疫组化法分别检测瘤组织mdr1和P糖蛋白的表达。结果:EGCG在100mg/L以下剂量对两株耐药肿瘤细胞的抑制率均小于10%,EGCG与抗肿瘤药物联合应用可明显提高抗肿瘤药物的细胞毒作用;体内与抗肿瘤药物联合应用对两种肿瘤抑瘤率明显高于单用抗肿瘤药物组,mdr1mRNA和Pgp的表达下降。结论:EGCG与抗肿瘤药物联合应用可增强化疗药物对耐药肿瘤细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒作用,机制可能与降低MDR1mRNA表达、降低Pgp表达有关。     

三氧化二砷诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其部分机制探讨

目的探讨三氧化二砷(AS_2 O3)诱导人胃癌 SGC-7901细胞凋亡的可能机制。方法光学及电子显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidy transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)判定细胞凋亡;免疫组织化学 SABC 法检测凋亡相关基因蛋白 Bcl-2、Bax、c-Myc 及 P53的表述;流式细胞术检测Caspase-3蛋白表达;以二硫代苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)为二硫键还原剂,观察其对 As_2O_3所致的 SGC-7901细胞凋亡的影响。结果 As_2O_3作用后光镜及电镜下观察到典型凋亡细胞的形态学特征;FCM 检测在细胞周期 G_1期前出现亚二倍体凋亡峰,同时见不同程度的 G_2/M 期阻滞;TUNEL 标记发现 DNA 链的断裂;As_2O_3 作用后 Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,c-Myc 蛋白在 As_2O_3处理12、24 h 后表...