补气益精生血法治疗β地中海贫血的疗效及对红系反式作用因子的影响

目的:观察补气益精生血法对中间型β地中海贫血(β地贫)患儿疗效及对红系反式作用因子的影响。方法:采用随机对照双盲双模拟法将入选的β地贫患儿38例分为中药组19例及对照组19例,中药组口服黄芪、党参、龟板、当归颗粒及安慰剂片,对照组口服羟基脲片及安慰剂颗粒,疗程12周。观察两组血常规及胎儿血红蛋白(HbF)比例等指标,并以Western Blot方法检测红系反式作用因子BCL11A、SOX6、Myb、KLF1蛋白表达水平。结果:治疗后两组血红蛋白值、HbF比例与治疗前相比均有显著差异(P0.01);治疗后中药组与对照组相比无显著差异(P0.05),中药组能显著降低BCL11A、SOX6、Myb蛋白表达水平,羟基脲则对上述蛋白水平无显著影响。结论:补气益精生血法治疗小儿β地贫具有较好疗效,其分子机制可能与抑制BCL11A、SOX6、Myb蛋白表达水平从而诱导胎儿血红蛋白生成有关。     

补气益精生血法治疗β地中海贫血11例及对BCL11A影响

目的观察补气益精生血方药对中间型β地中海贫血(β地贫)患儿疗效及对关键红系反式作用因子的影响。方法采用随机对照双盲双模法将入选的β地贫患儿24例分为中药组11例及对照组10例,中药组口服黄芪、党参、龟板、当归颗粒及安慰剂片,对照组口服羟基脲片及安慰剂颗粒,疗程12周。观察2组血常规及胎儿血红蛋白(Hb F)比例等指标,并以实时荧光定量PCR反应检测BCL11A基因的转录表达水平。结果治疗后中药组血红蛋白值为(8.90±1.57)g/d L,对照组为(9.06±1.73)g/d L,2组比较无显著性差异(P0.05),但2组治疗后Hb F均较治疗前有显著提升(P均0.01)。中药组能显著下调BCL11A基因表达水平,由治疗前(0.34±0.11)copies下降至(0.18±0.13)copies(P0.05),下调程度亦优于对照组(P0.01)。结论补气益精生血法治疗小儿β地贫具有较好疗效,其分子机制可能与抑制BCL11A从而诱导胎儿血红蛋白生成有关。     

补气益精生血方药治疗儿童β地中海贫血随机对照研究

目的评价补气益精生血方药对儿童β地中海贫血的临床疗效。方法采用随机对照双盲双模拟临床研究,将64例β地中海贫血患儿随机分为中药组和对照组,中药组口服黄芪、党参及龟甲颗粒,对照组口服安慰剂颗粒,疗程12周。观察治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、胎儿血红蛋白比例(Hb F)等血液学指标及中医四诊症状。结果疗程结束时,中间型患儿中药组Hb为(9.02±0.98)g/d L,对照组为(7.27±0.95)g/d L,组间比较差异有统计学意义(t=6.729,P=0.003);中药组Hb F较治疗前显著升高(t=-3.341,P=0.011),RBC、MCH及中医四诊症状均有一定改善;中药组总有效率为59.1%(13/21),对照组为4.5%(1/21),中药组显著优于对照组(P0.01)。重型患儿有类似疗效,但逊于中间型患儿。结论补气益精生血方药治疗儿童β地中海贫血具有较好疗效。     

祛风宣痹方对哮喘豚鼠p38 MAPK信号通路的影响

目的:探讨祛风宣痹方对支气管哮喘的作用机理。方法:用卵蛋白致敏豚鼠复制支气管哮喘动物模型,经祛风宣痹方治疗,运用免疫组化法及Western Blot法检测各组豚鼠肺组织匀浆中p38 MAPK磷酸化蛋白表达量;结果:两种检测方法均显示,p38 MAPK磷酸化蛋白水平在模型组中有明显的增加,地塞米松组、中药高剂量组和低剂量组p38 MAPK磷酸化蛋白水平低于模型组,且高剂量组蛋白水平低于低剂量组(P0.05);结论:祛风宣痹方有效治疗哮喘的作用与抑制哮喘豚鼠p38 MAPK信号通路的表达密切有关,且其抑制作用呈现剂量依赖性。     

益母草碱对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大p38 MAPK信号通路和miRNA-1表达的影响

目的:研究益母草碱对血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的作用,并分析其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路和微小RNA-1(microRNA-1,miRNA-1)表达的影响。方法:以AngⅡ(0. 1μmol·L~(-1))诱导肥大心肌细胞。实验分为空白组,模型组,p38 MAPK抑制剂组(SB203580,10μmol·L~(-1))以及益母草碱低、中、高浓度组(5,10,20μmol·L~(-1))。以图像分析软件测量心肌细胞表面积; Folin-酚试剂法(Lowry)检测心肌细胞蛋白含量;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞miRNA-1 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞内皮素-1(endothelin-1,ET-1),p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK),肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor 2,MEF2),β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量明显升高(P 0. 05),ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平明显上调(P 0. 05),α-MHC蛋白及miRNA-1 mRNA的表达水平明显下调(P 0. 05)。与模型组比较,益母草碱高浓度组明显减少肥大心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量(P 0. 05);下调ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平(P 0. 05);上调α-MHC蛋白及miRNA-1的表达水平(P 0. 05)。结论:益母草碱高浓度组(20μmol·L~(-1))可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化和上调miRNA-1的表达有关。     

血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的研究

目的:探讨血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的实验研究。方法:通过酶消化法获得原代子宫内膜细胞,脂多糖(LPS)诱导炎症模型,后实验随机分为5组,正常对照组,模型组(100μg·m L~(-1)LPS),血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组(10、30、100μg·m L~(-1)血府逐瘀胶囊)。MTT法检测各组细胞活力,酶联免疫吸附法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL~(-1)β)、IL-6、IL-8蛋白含量,免疫印迹法检测各组细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9),环氧化二酶(COX-2)蛋白表达量及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平,反转录聚合酶连锁反应检测p38 MAPK mRNA含量。结果:与正常组比较,模型组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8、MMP-9及COX-2蛋白表达量都显著提高(P0.01),p38 MAPK磷酸化水平提高(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著提高(P0.01);与模型组比较,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8水平都显著降低(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著降低(P0.01);血府逐瘀胶囊中、高剂量组中MMP-9及COX-2蛋白表达量及p38 MAPK磷酸化水平下调(P0.01)。结论:血府逐瘀胶囊能显著抑制LPS诱导的子宫内膜细胞炎症,与降低炎症因子表达及p38 MAPK信号通路有关。     

雪莲强筋壮骨方对膝骨关节炎软骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的影响

目的:探讨雪莲强筋壮骨方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路的影响。方法:将24只3月龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、p38阻断剂组及含药血清组,每组6只。除空白组外,其余各组均采用改良Hulth法行KOA造模。造模成功后含药血清组以雪莲强筋壮骨方水煎剂灌胃(10 g·kg~(-1)),其余各组均以等量生理盐水灌胃,每天2次,连续干预7 d后静脉采血,分别制成10%含药血清和10%空白血清的DMEM培养液保存备用。血清制备完成后处死动物,分离膝关节软骨进行软骨细胞培养。空白组和模型组以空白血清进行干预,p38阻断剂组以空白血清和SB203580进行干预,含药血清组以含药血清进行干预。血清干预结束后,分别采用免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法检测各组软骨细胞磷酸化p38MAPK水平。结果:免疫荧光检测结果显示,模型组磷酸化p38MAPK表达呈强阳性,p38阻断剂组和含药血清组次之,空白组最弱。蛋白免疫印迹检测结果显示,空白组磷酸化p38MAPK表达最弱,模型组磷酸化p38MAPK表达最强,p38阻断剂组和含药血清组磷酸化p38MAPK表达水平相当,介于空白组和模型组之间。经扫描定量检测,空白组、模型组、p38阻断剂组和含药血清组条带的光密度值分别为0.31±0.06、0.83±0.11、0.58±0.45、0.55±0.56,差异有统计学意义(F=3.872,P=0.034)。空白组的光密度值小于模型组、p38阻断剂组及含药血清组(P=0.007,P=0.031,P=0.038);模型组的光密度值大于p38阻断剂组和含药血清组(P=0.038,P=0.028);p38阻断剂组和含药血清组的光密度值比较,差异无统计学意义(P=0.066)。结论:雪莲强筋壮骨方能阻滞KOA软骨细胞p38MAPK信号传导通路,其效果与p38MAPK阻断剂SB203580相当。     

电针“内关”对心肌肥厚模型大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路的影响

目的:探讨电针“内关”穴治疗心肌肥厚的作用机制.方法:SD大鼠40只用随机数字表法分为正常组、模型组、模型+p38抑制剂组、模型十电针组,每组10只.采用皮下注射盐酸异丙肾上腺素3 mg/(kg·d)建立心肌肥厚大鼠模型,模型+p38抑制剂组在造模基础上每日皮下注射0.3 mg/kg p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)特异性抑制剂SB 203580;模型十电针组电针“内关”穴,采用连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电20 min,1次/d,共14 d.其他两组不予治疗干预.放射免疫法技术检测心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量,免疫印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)含量.观察电针“内关”穴对TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK的影响.结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均显著升高(均P＜0.01);经抑制剂和电针处理后,模型+p38抑制剂组和模型十电针组大鼠TNF-α、IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均明显降低,与模型组比较差异有统计学意义(均P＜0.05),与正常组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);模型+p38抑制剂组和模型十电针组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针“内关”可以明显抑制心肌肥厚p38 MAPK的磷酸化,这种保护作用可能通过抑制TNF-α、IL-1β等炎性因子的表达实现对p38 MAPK信号通路调节.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素的干预研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化中的作用及大黄素的干预效应。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)分为对照组、IL-1β诱导组、IL-1β+SB 203580组和IL-1β+大黄素组。培养48 h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白(CK)、p38MAPK及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况。结果IL-1β可诱导部分NRK52E由卵圆形转变为梭形,同时CK表达减弱,α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达增强。SB 203580阻断p38MAPK通路后可显著抑制IL-1β诱导的细胞形态改变,同时上调CK表达,下调α-SMA及p-p38MAPK的表达。大黄素对IL-1β诱导的细胞形态改变及α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达也有明显抑制作用,其抑制作用与SB 203580的阻断作用相比无显著性差异。结论p38MAPK参与介导IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化过程,大黄素可通过干扰p38MAPK信号通路抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

高静水压下益气活血汤通过p38MAPK信号通路对兔椎体终板软骨细胞的调控作用

目的观察益气活血汤含药血清在高静水压下对兔终板软骨细胞p38MAPK信号通路的调控作用,探讨益气活血汤治疗椎间盘退行性病变的可能作用机制。方法选用3月龄新西兰白兔制备益气活血汤含药血清,体外分离培养第3代兔椎体终板软骨细胞,建立体外高静水压加载干预模型,确定益气活血汤含药血清最佳干预条件。将体外培养的第3代终板软骨细胞随机分为空白组、模型组及含药血清组,空白组无任何干预,其余2组分别施加1 MPa静水压干预24 h后收集终板软骨细胞,运用Western Blot法检测各组终板软骨细胞p38、磷酸化p38蛋白表达情况。结果持续高静水压干预下,1μg/μL含药血清促终板软骨细胞增殖作用最明显。各组终板软骨细胞p38蛋白表达量比较差异无统计学意义;模型组磷酸化p38蛋白表达量显著高于空白组,而含药血清组磷酸化p38蛋白表达量显著低于模型组(P0.05)。结论益气活血汤可以提高持续高静水压下终板软骨细胞增殖率,抑制软骨细胞凋亡,可能与其降低磷酸化p38蛋白表达水平,抑制p38MAPK信号通路的激活有关,推测益气活血汤可能通过调控p38MAPK信号通路发挥延缓椎间盘退行性病变的作用。     

归芍地黄汤联合PDT对CNV大鼠模型视网膜脉络膜p38 MAPK抑制作用研究

目的:p38丝裂原活化蛋白激酶(Motigen-activated Protein Kinase,MAPK)信号通路是参与新生血管形成的重要途径之一,通过观察治疗前后视网膜脉络膜中p38 MAPK变化,探讨中药治疗是否可以加强光动力疗法抑制脉络膜新生血管(Choroidal Neovascularization,CNV)的作用。方法:将50只BN大鼠分为五组,除正常对照组外,余均在全网膜镜下光凝造成CNV模型,造模2周后FFA、OCT证明CNV形成,各组给予相应处理。持续到造模后5周测定视网膜脉络膜中p38 MAPK的表达。结果:造模后5周检测显示:每组大鼠视网膜脉络膜组织中都有p38 MAPK表达,正常对照组p38 MAPK表达高于阴性对照组,三个治疗组中p38 MAPK表达低于正常对照组(P 0.01);三个治疗组中p38 MAPK均低于阴性对照组(P 0.01);中药联合PDT治疗组p38 MAPK表达低于PDT治疗组(P 0.01)和中药治疗组(P 0.01)。结论:可能通过下调p38 MAPK磷酸化水平,以加强光动力疗法抑制新生血管的作用。     

补气益精生血方对地中海贫血患儿氧化损伤及造血细胞因子的影响

目的:探讨中药方补气益精生血方辅助治疗地中海贫血患儿的疗效及对造血细胞因子、抗氧化损伤指标的影响。方法:选取2012年6月—2016年6月在医院治疗的100例地中海贫血患儿,采用EXCEL生成随机数字表分为中医组、对照组各50例,两组均采用一致的基础疗法,中医组加用补气益精生血方,疗程12周。结果:治疗后,中医组的Hb、RBC、MCH、Hb F水平均高于对照组(t=7.209,t=4.418,t=3.426,t=3.009,P0.05),中医组的SOD、SCF、GM-CSF水平均高于对照组(t=6.192,t=3.118,t=5.591,P0.05);中医组治疗有效率58.00%高于对照组的38.00%,差异具有统计学意义(Z=-1.992,P0.05)。结论:中药方补气益精生血方辅助治疗地中海贫血患儿能够减轻抗氧化损伤及升高造血细胞因子水平,对提高临床治疗效果具有一定的帮助。     

养阴润目丸对干眼症大鼠结膜上皮细胞IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK的影响

目的:探讨养阴润目丸对干眼症大鼠结膜上皮细胞白介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p-p38MAPK)的影响。方法:将健康雄性SD大鼠60只随机分成正常组、假手术组、养阴润目丸组、新泪然组、模型组,分别用A、B、C、D、E组表示,每组12只。A组不作处理;B组只切开阴囊,不切除睾丸;C、D、E 3组切除睾丸及附睾制备干眼症大鼠模型。造模成功7d后,各组分别给药治疗。采用Western blot方法观察给药3个月后干眼症大鼠结膜上皮细胞IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK的表达。结果:A、B组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、pp38MAPK蛋白含量低,即无阳性表达,而C、D、E组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量较多,呈阳性表达;C、D组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量明显低于E组(P0.01);C、D组两组间差异不显著(P0.05)。结论:养阴润目丸能够下调干眼症大鼠结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量;干眼症的发病机制与炎症及p38MAPK信号通路相关。     

清热解毒中药外敷治疗外伤感染创面的疗效观察及作用机制研究

目的:观察清热解毒中药外敷治疗外伤感染创面的疗效并探讨其作用机制。方法:将100例外伤感染创面患者随机分为2组,每组50例,分别采用清热解毒中药外敷和呋喃西林外敷治疗,连续治疗至创面愈合。比较治疗前及治疗第7天和第14天2组患者感染创面面积、外周血单个核细胞表面Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)的表达情况及外周血血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin~(-1) beta,IL~(-1)β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的表达情况,并于治疗开始后2周比较2组患者的临床疗效。结果:清热解毒中药组的感染创面愈合时间短于呋喃西林组[(16.10±3.15)d,(18.26±3.72)d,t=3.133,P=0.002]。治疗前后不同时间点感染创面面积比较,差异有统计学意义,存在时间效应,治疗后创面面积逐渐缩小(F=13.250,P=0.002);2组患者感染创面面积比较,差异有统计学意义,存在分组效应(t=2.040,P=0.044);治疗前2组患者感染创面面积比较,差异无统计学意义[(12.80±1.61)cm~2,(13.00±2.21)cm~2,t=0.517,P=0.606];治疗第7天和第14天清热解毒中药组的感染创面面积均小于呋喃西林组[(6.50±0.97)cm~2,(8.30±0.94)cm~2,t=9.422,P=0.000;(3.00±0.66)cm~2,(5.70±0.67)cm~2,t=20.300,P=0.000];时间因素与分组因素存在交互效应(F=6.830,P=0.003)。治疗前后不同时间点TLR4表达量比较,差异有统计学意义,存在时间效应,治疗后TLR4表达量逐渐减少(F=6.864,P=0.017);2组患者TLR4表达量比较,差异有统计学意义,存在分组效应(t=2.185,P=0.031);治疗前2组患者TLR4表达量比较,差异无统计学意义[(5.81±0.78)ng·m L~(-1),(5.79±0.73)ng·m L~(-1),t=0.132,P=0.890];治疗第7天和第14天清热解毒中药组的TLR4表达量均低于呋喃西林组[(4.10±0.33)ng·m L~(-1),(4.69±0.27)ng·m L~(-1),t=9.784,P=0.000;(2.82±0.55)ng·m L~(-1),(3.80±0.59)ng·m L~(-1),t=8.591,P=0.000];时间因素与分组因素存在交互效应(F=6.012,P=0.005)。治疗前后不同时间点TNF-α表达量比较,差异有统计学意义,存在时间效应,治疗后TNF-α表达量逐渐减少(F=38.313,P=0.000);2组患者TNF-α表达量比较,差异有统计学意义,存在分组效应(t=2.195,P=0.030);治疗前2组患者TNF-α表达量比较,差异无统计学意义[(97.55±6.27)ng·m L~(-1),(97.66±7.07)ng·m L~(-1),t=0.082,P=0.934];治疗第7天和第14天清热解毒中药组的TNF-α表达量均低于呋喃西林组[(52.46±6.84)ng·m L~(-1),(74.10±4.49)ng·m L~(-1),t=18.701,P=0.000;(25.72±3.95)ng·m L~(-1),(40.43±2.42)ng·m L~(-1),t=22.454,P=0.000];时间因素与分组因素存在交互效应(F=38.812,P=0.000)。治疗前后不同时间点IL~(-1)β表达量比较,差异有统计学意义,存在时间效应,治疗后IL~(-1)β表达量逐渐减少(F=28.000,P=0.000);2组患者IL~(-1)β表达量比较,差异有统计学意义,存在分组效应(t=2.361,P=0.020);治疗前2组患者IL~(-1)β表达量比较,差异无统计学意义[(61.13±5.60)pg·m L~(-1),(61.90±5.35)pg·m L~(-1),t=0.703,P=0.483];治疗第7天和第14天清热解毒中药组的IL~(-1)β表达量均低于呋喃西林组[(31.03±3.06)pg·m L~(-1),(38.69±4.40)pg·m L~(-1),t=10.106,P=0.000;(12.44±1.36)pg·m L~(-1),(21.91±2.05)pg·m L~(-1),t=27.210,P=0.000];时间因素与分组因素存在交互效应(F=7.431,P=0.002)。治疗前后不同时间点IL-6表达量比较,差异有统计学意义,存在时间效应,治疗后IL-6表达量逐渐减少(F=24.492,P=0.001);2组患者IL-6表达量比较,差异有统计学意义,存在分组效应(t=2.078,P=0.040);治疗前2组患者IL-6表达量比较,差异无统计学意义[(127.92±10.51)pg·m L~(-1),(123.56±11.45)pg·m L~(-1),t=1.983,P=0.050];治疗第7天和第14天清热解毒中药组的IL-6表达量均低于呋喃西林组[(52.56±3.59)pg·m L~(-1),(68.93±4.88)pg·m L~(-1),t=19.106,P=0.000;(31.37±2.37)pg·m L~(-1),(42.64±2.89)pg·m L~(-1),t=21.324,P=0.000];时间因素与分组因素存在交互效应(F=10.670,P=0.000)。治疗开始后2周,采用自拟标准评价临床疗效,清热解毒中药组痊愈27例、显效11例、有效12例,呋喃西林组痊愈12例、显效10例、有效23例、无效5例;清热解毒中药组的临床疗效优于呋喃西林组(Z=2 026.000,P=0.000)。结论:清热解毒中药外敷治疗外伤感染创面可以减小创面面积、缩短创面愈合时间,其临床疗效优于呋喃西林外敷;其作用机制可能是通过抑制外周血单个核细胞表面TLR4的表达,使TNF-α、IL~(-1)β及IL-6的表达受到抑制,从而减轻了炎症反应。     

知母皂苷对Aβ25-35引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及其机制探讨

目的 观察知母皂苷对淀粉样β蛋白25-35( Aβ25-35)激活小鼠巨噬细胞引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及探讨其作用机制.方法 小鼠小脑颗粒细胞与腹腔巨噬细胞联合培养及腹腔巨噬细胞单独培养,损伤组加入Aβ25-35( 20μmol/L),保护组同时加入不同质量浓度知母皂苷(10、30、100μmol/L).联合培养的细胞通过免疫组化染色观察微管相关蛋白-2( MAP-2)的表达和测定乳酸脱氢酶(LDH).单独培养的巨噬细胞用ELISA法和Griess法分别测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO).Western blot检测巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平.结果 知母皂苷组可使MAP-2表达阳性的小脑颗粒细胞数目较Aβ25-35组明显增加,LDH漏出量减少;巨噬细胞培养液中IL-1β和NO生成量减少以及巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平明显降低.SB203580也能抑制Aβ25-35引起的IL-1β和NO生成量增加.结论 知母皂苷通过抑制Aβ25-35激活巨噬细胞p38MAPK通路,使IL-1β和NO表达水平降低,从而对小脑颗粒细胞起到保护作用.     

野黄芩苷对LPS诱发巨噬细胞炎症模型中MAPK信号通路及细胞因子基因表达的影响

目的通过构建巨噬细胞炎症模型,研究中药单体野黄芩苷对MAPK信号通路及细胞因子基因表达的影响。方法培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,并在不同时间收集细胞。Western blot与RT-PCR法分别检测野黄芩苷对MAPK信号通路及细胞因子基因表达的影响。结果野黄芩苷能够显著抑制细胞炎症模型中JNK/SAPK与p38 MAPK信号通路的磷酸化水平,并且能够降低炎症因子TNF-α的基因表达水平,及提高抗炎细胞因子IL-10、TGF-β的基因表达水平来发挥其抗炎作用。结论野黄芩苷主要是通过抑制JNK/SAPK与p38 MAPK信号通路的磷酸化水平及提高抗炎细胞因子的基因表达水平来发挥其抗炎作用。     

金复康口服液诱导肺癌细胞A549凋亡的机制

目的:研究金复康口服液(JFK)诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法:取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549,随机分为空白组和药物组,采用溴化四甲基偶氮(MTT)比色法,考察不同质量浓度JFK(0.3,1.5,3,7.5,15,30 g·L~(-1))对A549细胞体外增殖能力的影响。通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响,利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)考察JFK对裂解DNA修复酶(cleaved PARP),活化型半胱天冬酶-3(actived Caspase-3),Wnt/β-联蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,实验中设置空白组和药物组,药物组为A549细胞加入15,30 g·L~(-1)JFK,分别干预24 h,30 min。结果:JFK在1.5~30 g·L~(-1)呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖(P0.01)。JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15~30 g·L~(-1),其中JFK 30 g·L~(-1)时抑制A549细胞的平板克隆最显著(P0.01)。与空白组比较,JFK 15~30 g·L~(-1)可提高AnnexinⅤ和PI双阳细胞率,诱导A549细胞凋亡(P0.05),且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达,并抑制β-catenin和cyclin D1在蛋白水平的表达(P0.05,P0.01)。JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平(P0.05),同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平(P0.05)。结论:金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡,部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路,抑制β-catenin和cyclin D1,同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达。     

冠心止痛胶囊阻断MAPK信号通路改善棕榈酸诱导血管内皮细胞损伤的研究

为了研究冠心止痛胶囊(GXZT)对血管内皮细胞脂毒性损伤的影响,探索GXZT防治动脉粥样硬化可能的作用机制,该实验用棕榈酸(palmitic acid, PA)刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)复制脂毒性损伤模型,将细胞分为正常对照组(NC,15%正常血清)、模型组(PA,0.6 mmol·L~(-1) PA+15%正常血清)、GXZT高剂量组(GXZT-H,0.6 mmol·L~(-1) PA+15%GXZT血清)、中剂量组(GXZT-M,0.6 mmol·L~(-1) PA+10%GXZT血清+5%正常血清)和低剂量组(GXZT-L,0.6 mmol·L~(-1) PA+5%GXZT血清+10%正常血清)。用CCK-8法检测不同组HUVEC的细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1荧光探针标记后用激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP),Western blot检测丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)信号通路关键蛋白p38、ERK1/2、JNK1/2总蛋白和磷酸化蛋白表达,并计算蛋白的磷酸化水平。实验结果显示,与NC组相比,PA组的细胞活力和MMP显著降低(P0.01,P0.01),细胞凋亡率显著增加(P0.01),MAPK信号通路p38、ERK1/2、JNK1/2的磷酸化水平显著增加(P0.01,P0.01,P0.01)。与PA组相比,GXZT-H、GXZT-M、GXZT-L的细胞活力和MMP均显著升高(P0.01,P0.01,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),p38、ERK1/2、JNK1/2 MAPK信号通路的磷酸化蛋白表达减少,磷酸化水平显著降低(P0.01,P0.01,P0.01)。综上所述,GXZT 3个剂量组均可改善PA诱导的HUVEC脂毒性损伤,其机制可能是通过阻断MAPK信号通路减少内皮细胞凋亡而发挥作用。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK蛋白的影响

目的:探讨补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠体内血小板活化信号通路中酪氨酸激酶(Src),蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白及其磷酸化表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、硫酸氢氯吡格雷组(7.81 mg·kg-1)和补阳还五汤高、中、低剂量组(29.69,14.84,7.42 g·kg~(-1))。连续灌胃ig给药14 d后,大脑中动脉线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,并神经功能缺损评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测算脑梗死体积;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测血小板活化信号通路中Src,Akt和p38 MAPK蛋白及其磷酸化表达情况。结果:与模型组比较,补阳还五汤各组及硫酸氢氯吡格雷组能明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积比(P0.05);补阳还五汤不同剂量明显降低Src,Akt和p38 MAPK磷酸化水平(P0.05);硫酸氢氯吡格雷明显降低Src和Akt磷酸化水平(P0.05);各组大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK总蛋白表达水平无统计学差异。结论:补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织保护作用,一定程度上是发挥抗血小板活化的作用,且可能与抑制Src家族激酶,PI3K-Akt和p38 MAPK信号通路有关。     

糖尿病肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的调节机制及中药的干预作用

在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发展过程中,炎症相关信号通路——p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路与肾组织损伤密切相关。一方面,高血糖、血流动力学异常、氧化应激以及前炎症因子等多种因素在上游激活p38MAPK信号通路;另一方面,活化的p38MAPK信号通路进一步诱导下游炎症细胞活化,促进炎症介质表达,增加炎症因子产生,最终,导致肾组织炎症性损伤。中药对p38MAPK信号通路的干预作用是通过多途径实现的,主要包括抑制炎症因子表达、调节磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表达、减少致纤维化因子表达等。