四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移、钾通道蛋白及膜电位的影响

目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移及多胺调控信号通路钾通道蛋白和膜电位的影响,探讨四君子汤修复胃肠黏膜损伤的作用机制。方法:划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察正常培养及α-二氧甲基乌氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)或4-氨基吡啶(4-AP,钾通道抑制剂)负荷下四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移的影响;分别以荧光定量PCR法和Western blot法检测四君子汤多糖对IEC-6细胞钾通道蛋白kv1.1 mRNA和蛋白表达的影响;流式细胞仪检测四君子汤多糖对IEC-6细胞膜电位的影响。结果:与空白对照组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可促进IEC-6细胞迁移,提高IEC-6细胞kv1.1 mRNA和蛋白表达水平及细胞膜电位超极化水平(P0.05或P0.01);与DFMO模型组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可逆转DFMO所致细胞迁移数减少、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低以及细胞膜电位去极化(P0.05或P0.01);与4-AP模型组比较,四君子汤多糖(20、40、80 mg/L)可逆转4-AP所致细胞迁移的抑制、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低(P0.05或P0.01)。结论:四君子汤多糖可促进IEC-6细胞迁移,作用机制与影响多胺调控信号通路钾通道蛋白表达和细胞膜电位有关。     

黄芪多糖调控多胺介导的Ca~(2+)-RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白Rho A表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖,运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖I、II、III、IV,黄芪多糖I以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖V。Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量,流式细胞仪检测[Ca2+]cyto水平,Western blotting法检测Rho A蛋白表达。考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)]和多胺耗竭IEC-6细胞(加入DFMO)迁移、多胺水平、[Ca2+]cyto的量及Rho A蛋白表达的影响。结果黄芪粗多糖、黄芪多糖I、黄芪多糖V(50、100、200 mg/L)均能促进IEC-6细胞迁移(P0.01),并且可逆转多胺合成抑制剂DFMO所致的细胞迁移抑制效果(P0.01);在正常(未加DFMO)或多胺耗竭情况(加DFMO),黄芪多糖V均可提高迁移过程细胞内多胺的量(P0.01);黄芪多糖V可提高细胞迁移过程[Ca2+]cyto水平(P0.01),并且可逆转DFMO所致的[Ca2+]cyto水平下降(P0.01);黄芪多糖V(100、200 mg/L)可明显提高Rho A蛋白表达,同时可逆转DFMO所导致的Rho A蛋白表达抑制作用。结论黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程,其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量,提升[Ca2+]cyto,从而提高Rho A蛋白表达,进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关。     

黄芪和白术提取物对IEC-6细胞迁移的影响

目的 筛选益气健脾中药黄芪和白术促进小肠上皮细胞(IEC-6)迁移的有效提取部位.方法 以系统溶剂分离法从黄芪、白术药材分别得到糖复合物、正丁醇萃取物、醇沉上清液以及大孔树脂吸附后70%乙醇洗脱部位作受试药.IEC-6细胞接种于6孔板并培养24 h,划痕法造细胞迁移模型,划痕后加入各受试药,24 h后观察细胞迁移情况;并进一步观察具有促进细胞迁移的有效部位对二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致细胞迁移抑制的影响.结果 50 mg·L-1的黄芪糖复合物或白术糖复合物能促进细胞迁移(P＜0.01);黄芪、白术的正丁醇萃取物、醇沉上清液、大孔树脂吸附后醇洗脱部位对细胞迁移均无明显影响;2.5 mmol·L-1的DFMO能抑制细胞迁移(P＜0.01),加入DFMO同时加入100 mg·L-1黄芪糖复合物或200 mg·L-1白术糖复合物能使细胞迁移恢复至接近正常水平.结论 黄芪糖复合物和白术糖复合物能促进IEC-6细胞迁移,还能使DFMO所致的细胞迁移抑制恢复至接近正常水平.     

甘草糖提取物对小肠上皮细胞迁移及多胺含量影响的研究

目的:观察甘草糖提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及细胞内多胺(腐胺、精脒和精胺)含量的影响。方法:划痕法造细胞损伤后迁移模型,柱前衍生-高效液相色谱法测定细胞内多胺含量。观察甘草糖复合物对细胞迁移及细胞内多胺含量的影响;观察甘草糖复合物对二氟甲基鸟氨酸(DFMO)致细胞迁移抑制和多胺合成抑制的影响。结果:甘草糖提取物(50、100 mg/L)能促进细胞迁移;可逆转由DFMO所致的细胞迁移抑制;可提高细胞迁移过程中细胞内多胺含量;可逆转由DFMO所致的多胺含量降低。结论:甘草对胃肠黏膜损伤的修复作用可能与其提高细胞多胺含量、促进细胞迁移有关。     

甘草与白术配伍对IEC-6细胞p53,p21基因表达的影响

通过研究不同剂量甘草与白术配伍对DFMO模型小肠上皮细胞(IEC-6)增殖及p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,探讨甘草与白术配伍对细胞增殖影响的分子基础.采用流式细胞术分别检测药物对IEC-6细胞分裂速度及细胞周期的影响,qRT-PCR检测药物对IEC-6增殖相关基因p53,p21 mRNA的影响,Western blot检测药物对IEC-6细胞p53,p21蛋白表达的影响.白术颗粒可上调DFMO模型IEC-6细胞内p53,p21 mRNA和蛋白的表达水平;而甘草颗粒与白术颗粒不同比例配伍均能显著下调单独白术颗粒作用对DFMO模型IEC-6细胞p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,促进IEC-6细胞的增殖.对于DFMO模型IEC-6细胞,配伍用药甘草能调和白术对小肠上皮细胞的影响.     

白术提取物对IEC-6细胞迁移过程Rho GTPaes及肌球蛋白II表达的影响

目的观察白术提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移多胺介导钾通道激活信号通路指标Rho GTPaes(Rho A、Rac1和Cdc42)表达的影响,对肌球蛋白II(myosinⅡ)分布和表达的影响,以探讨益气健脾中药白术对胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法荧光定量PCR法检测Rho A、Rac1和Cdc42 mRNA表达;Western blot法检测Rho A、Rac1和Cdc42蛋白表达;免疫荧光法检测myosinⅡ蛋白分布和表达。结果白术提取物能提高细胞迁移过程Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达,逆转多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达抑制;提高细胞迁移过程myosinⅡ表达,从而增加细胞骨架应力纤维形成,改善DFMO所致的myosinⅡ蛋白表达和分布的抑制。结论白术提取物促进IEC-6细胞迁移的作用机制,与其影响多胺介导钾通道激活信号通路有关。     

白术多糖对IEC-6细胞迁移及细胞生长的影响

目的:观察3种白术多糖提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及生长的影响,为研究调节细胞迁移药效物质基础提供参考。方法:从白术药材提取得到白术水提醇沉部位("白术多糖1"),去蛋白并经DEAE-纤维素柱层析得到"白术多糖2",再以Sephadex LH-20凝胶柱层析得到"白术多糖6"。在细胞迁移模型观察此3种样品调节IEC-6细胞迁移的活性;在实时细胞分析仪观察3种样品对IEC-6细胞生长的影响。结果:3种白术多糖样品(50μg/ml或100μg/ml或200μg/ml)能逆转DFMO(二氟甲基鸟氨酸)所致细胞迁移抑制,药效以"白术多糖6"最优。3种白术多糖样品需要更高剂量(200μg/ml或300μg/ml或400μg/ml)才有促进IEC-6细胞生长的作用。结论:调节细胞迁移是白术多糖的主要药效作用,其促进细胞生长的作用则相对较弱,实验结果为后续选择"白术多糖6"研究其结构表征提供了参考。     

黄芪总皂苷对IEC-6细胞增殖及相关蛋白表达的影响

目的观察黄芪总皂苷对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移和增殖的影响,并从多胺及其调控的细胞增殖相关蛋白(转录因子c-Myc、Rho-GTP酶RhoA和细胞周期依赖激酶Cdk2)表达角度研究其作用机制。方法从黄芪中提取黄芪总皂苷(皂苷含量88.8%)作为受试药,高效液相色谱仪蒸发光检测(HPLC-ELSD)获得受试药色谱图;移液器吸头划痕法检测细胞迁移率;MTT法检测细胞增殖;Western Blot法检测相关蛋白表达。结果黄芪总皂苷(25、50、100 mg·L~(-1))对细胞迁移无明显影响(与空白组比较,P0.05)。黄芪总皂苷(50 mg·L~(-1)或100 mg·L~(-1))有促进细胞增殖作用(与空白组比较,P 0.05),且能逆转二氟甲基鸟氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)所致的细胞增殖抑制;可提高c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达,逆转DFMO所致的c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达抑制。结论黄芪总皂苷可促进IEC-6细胞增殖,其作用机制与影响多胺调控的增殖相关蛋白表达有关。     

白术多糖调控钙离子以促进细胞迁移及E-钙黏蛋白表达的研究

目的观察白术多糖对大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)钙离子水平、细胞迁移和E-钙黏蛋白表达的影响,探讨益气健脾中药白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:流式细胞仪检测白术多糖对细胞游离钙离子水平([Ca~(2+)]cyt)的影响;划痕法复制细胞迁移模型,观察白术多糖对细胞迁移的影响;Western blot法和免疫荧光法检测白术多糖对细胞E-钙黏蛋白表达的影响。结果白术多糖(25,50,100 mg·L~(-1))可增加细胞[Ca~(2+)]cyt、促进细胞迁移、提高E-钙黏蛋白表达,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);可逆转多胺合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的[Ca~(2+)]cyt降低、细胞迁移抑制和E-钙黏蛋白表达减少,与DFMO组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论白术多糖可通过提高细胞钙离子水平以促进细胞迁移和E-钙黏蛋白表达,为探讨益气健脾中药白术修复胃肠黏膜损伤的作用机制提供参考。     

甘草黄酮提取物对小肠上皮细胞IEC-6迁移及多胺的影响

目的 观察甘草黄酮提取物对小肠隐窝上皮细胞IEC-6迁移及迁移过程细胞内多胺量的影响。方法 划痕法制备细胞迁移模型,观察在多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）及钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-AP）存在情况下,甘草黄酮提取物对细胞迁移的影响;柱前衍生-高效液相色谱法检测IEC-6细胞在正常及DFMO存在条件下,给予甘草黄酮提取物12、24 h后细胞内多胺（精脒）的量。结果 甘草黄酮提取物可逆转DFMO或4-AP所致IEC-6细胞迁移抑制;其给药12、24 h后可提高细胞内精脒的量,并逆转DFMO对多胺合成的抑制。结论 甘草黄酮提取物促进细胞迁移的作用与影响细胞内多胺调控信号通路有关。     

甘草对小肠隐窝干细胞增殖中p53mRNA稳定性及其表达的影响

目的研究甘草对小肠隐窝干细胞IEC-6细胞增殖及p53表达的影响。方法采用二氟甲基鸟氨酸（DFMO）耗竭细胞内多胺的方法诱导IEC-6细胞生长抑制模型,实验分4组,即对照组、DFMO组、甘草低剂量组和甘草高剂量组。对照组为正常细胞,其他3组均加入5 mmol/L DFMO,同时甘草低剂量组与甘草高剂量组分别添加40、80μg/mL甘草配方颗粒,均连续培养6天。利用流式细胞术检测各组细胞数量及存活率,Western blot检测p53蛋白水平,荧光定量RT-PCR检测p53 mRNA水平及mRNA稳定性。结果与对照组比较,第4天DFMO组IEC-6细胞生长明显受到抑制（P〈0.05）;第6天甘草低剂量组及甘草高剂量组细胞数量较DFMO组明显增加（P〈0.05）,且2个剂量的甘草组间具有量效依赖性。处理IEC-6细胞6天后,DFMO组p53蛋白及mRNA表达水平较对照组显著升高（P〈0.05）;与DFMO组比较,2个剂量的甘草组能够明显下调p53蛋白及mRNA的表达水平（P〈0.05）。对照组细胞的p53 mRNA降解最快,DFMO组细胞的降解速度最慢。结论甘草通过下调p53 mRNA的稳定性来降低p53表达,从而促进小肠隐窝干细胞的增殖,可能是甘草的肠黏膜保护和修复作用的机制之一。     

补肾活血汤石油醚提取物对BMSCs迁移过程中Wnt5a/PKC通路的影响

目的探讨补肾活血汤(熟地黄、菟丝子、补骨脂,等)石油醚提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的迁移作用及相关机制。方法全骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用于实验,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,细胞划痕、Transwell实验观察补肾活血汤石油醚提取物0、25、50、100、200μg/m L剂量组的细胞迁移能力,Western blot和RT-PCR检测Wnt5a、蛋白激酶C(PKC)表达情况。结果第3代BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD44表达阳性,而CD45表达阴性;细胞划痕6 h及12 h后,药物各剂量组细胞迁移速度明显高于空白组(P0.05,P0.01);Transwell实验中100μg/m L补肾活血汤石油醚提取物为促细胞迁移最佳剂量,差异有统计学意义(P0.01);RT-PCR结果显示与空白对照组比较,药物各剂量组的Wnt5a mRNA水平均升高(P0.05,P0.01),而与空白对照组的PKC mRNA水平比较,药物只有100μg/m L剂量mRNA表达水平升高(P0.01);Western blot结果表明药物组各剂量的Wnt5a、PKC蛋白表达较空白对照组都明显升高(P0.01),均且以100μg/m L剂量最高(P0.01)。结论补肾活血汤石油醚提取物可以促进BMSCs体外迁移,其作用机制可能与Wnt5a/PKC信号通路有关。     

南蛇藤提取物对人肝癌细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子-C表达的影响

目的 探讨南蛇藤提取物抑制人肝癌转移的分子机制.方法 人肝癌HCCLM6细胞生长于培养液中进行传代,取对数生长期细胞进行实验.南蛇藤提取物组共分为10、20、40、80、160 mg/L 5个浓度,阳性对照组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射液180 mg/L,阴性对照组不做处理.分别观察南蛇藤提取物对HCCLM6细胞增殖和迁移能力的影响,并检测南蛇藤提取物对HCCLM6细胞及其培养上清中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)蛋白表达的影响.结果 南蛇藤提取物组作用24、48h时160 μg/ml对细胞增殖的抑制率最高(P＜0.01).南蛇藤提取物组和阳性对照组穿膜细胞数较阴性对照组明显减少(P＜0.01);南蛇藤提取物组10、20、40、80μg/ml浓度穿膜细胞数多于阳性对照组,并呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01).南蛇藤提取物组各浓度和阳性对照组VEGF-C蛋白水平均低于阴性对照组(P＜0.05或P＜0.01). 结论 南蛇藤提取物能抑制HCCLM6细胞的增殖、迁移及下调VEGF-C蛋白的表达水平,这可能是其抑制肝癌转移的部分机制.     

银杏叶提取物对高糖环境下系膜细胞血小板源性生长因子-B表达的影响

目的:观察银杏叶提取物对高糖培养条件下系膜细胞外基质产生及血小板源性生长因子-B(PDGFB)表达的影响。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,分为对照组(葡萄糖终浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖终浓度为30 mmol/L)、银杏叶提取物干预组(12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L),采用实时定量PCR检测系膜细胞PDGF-B m RNA的表达、Western blot检测系膜细胞PDGF-B蛋白表达、ELISA检测上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(Fn)含量。结果:高糖组刺激24 h后,细胞上清液中Fn、ColⅣ含量、系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均高于对照组(P0.05);银杏叶提取物干预组(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用24 h后,细胞上清液Fn、ColⅣ含量均低于高糖组,系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均低于高糖组(P0.05);且银杏叶提取物浓度越高,该作用越明显。结论:银杏叶提取物可以呈浓度依赖性抑制系膜细胞PDGF-B的合成,从而达到减少细胞外基质聚集、保护肾脏的作用。     

党参黄酮提取部位对小肠上皮细胞迁移及多胺的影响

目的 观察党参黄酮提取部位对小肠上皮细胞（IEC-6）迁移及迁移过程细胞内多胺（精脒）含量的影响。方法 划痕法复制细胞迁移模型,观察在多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）及钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-AP）负荷下,党参黄酮提取部位对细胞迁移的影响;柱前衍生-高效液相色谱法检测给予党参黄酮提取部位12 h和24 h后细胞内精脒的含量。结果 党参黄酮提取部位可促进IEC-6细胞迁移,逆转DFMO或4-AP所致细胞迁移抑制;党参黄酮提取部位给药12 h和24 h后可提高细胞内精脒含量。结论 党参黄酮提取部位促进细胞迁移的作用与影响多胺调控信号通路有关。     

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P0.05,P0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。     

小肠隐窝细胞株(IEC-6):中药生物活性成分筛选的药理模型

目的利用小肠隐窝细胞株(IEC-6)作为模型,筛选党参的生物活性成分.方法IEC-6 细胞以1×104的密度接种于96孔培养板,加入200μL含有50ml/L 超滤胎牛血清、10mg/L胰岛素及 50mg/L庆大霉素的DMEM培养液,24小时后,分别用胃泌素、党参提取物A、B、C、D治疗,对照组用D-PBS.细胞培养24小时后,用MTT法观察细胞增殖,细胞培养12小时后,分别用RT-PCR方法、放射技术和高效液相色谱方法检测细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC) mRNA水平、ODC活性及细胞内腐胺含量.结果与对照组比较,胃泌素明显促进IEC-6细胞增殖,明显增加ODC mRNA 水平、ODC活性及细胞内腐胺含量.党参提取物 A、B、C、D以剂量依赖方式作用于IEC-6细胞,提取物A 250mg/L～2000mg/L、提取物 B 125mg/L～2000mg/L、提取物 C 2000mg/L及提取物D 250mg/L～2000mg/L明显促进细胞增殖,而提取物C 30mg/L和125mg/L抑制细胞增殖.结论 通过检测中药对细胞增殖的调节作用,IEC-6 细胞可以作为黏膜损伤修复药物筛选的药理模型,方法简单,结果准确.     

小肠隐窝细胞株(IEC-6):中药生物活性成分筛选的药理模型

目的:利用小肠隐窝细胞株(IEC-6)作为模型,筛选党参的生物活性成分。方法:IEC-6细胞以1×104的密度接种于96孔培养板,加入200μL含有50m l/L超滤胎牛血清、10mg/L胰岛素及50mg/L庆大霉素的DMEM培养液,24小时后,分别用胃泌素、党参提取物A、B、C、D治疗,对照组用D-PBS。细胞培养24小时后,用MTT法观察细胞增殖,细胞培养12小时后,分别用RT-PCR方法、放射技术和高效液相色谱方法检测细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA水平、ODC活性及细胞内腐胺含量。结果:与对照组比较,胃泌素明显促进IEC-6细胞增殖,明显增加ODC mRNA水平、ODC活性及细胞内腐胺含量。党参提取物A、B、C、D以剂量依赖方式作用于IEC-6细胞,提取物A 250mg/L~2000mg/L、提取物B 125mg/L~2000mg/L、提取物C 2000mg/L及提取物D250mg/L~2000mg/L明显促进细胞增殖,而提取物C 30mg/L和125mg/L抑制细胞增殖。结论:通过检测中药对细胞增殖的调节作用,IEC-6细胞可以作为黏膜损伤修复药物筛选的药理模型,方法简单,结果准确。     

基于巨噬细胞极化观察白术内酯Ⅱ对胃癌细胞的作用

目的:研究白术内酯Ⅱ对巨噬细胞极化的影响并探讨其发挥抗肿瘤的作用机制。方法:用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度白术内酯Ⅱ作用不同时间,对巨噬细胞生长的影响,筛选出白术内酯Ⅱ的安全给药浓度。不同浓度白术内酯Ⅱ作用24 h,巨噬细胞与胃癌细胞共培养,光镜下观察2种细胞的存活状态,MTT比色法检测胃癌细胞的增殖变化,筛选出白术内酯Ⅱ的有效给药浓度。将细胞分为空白组、模型组、白术内酯Ⅱ(200,100,50 mg·L~(-1))组。划痕实验观察不同浓度白术内酯Ⅱ作用后巨噬细胞对胃癌细胞迁移及形态的影响。流式细胞术(FCM)检测M1,M2型巨噬细胞表面标志CD86,CD206表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测M1,M2型巨噬细胞相关肿瘤坏死因子(TNF)-α,人类白细胞抗原2(HLA-DRA),CD80,转化生长因子-β(TGF-β),白细胞介素(IL)-10和IL-6 mRNA和蛋白表达;Western blot检测巨噬细胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和磷酸化(p)-PI3K蛋白表达。结果:当白术内酯Ⅱ质量浓度为1,10,50,100,200 mg·L~(-1)时,对巨噬细胞生长无抑制作用;与模型组比较,50,100,200 mg·L~(-1)白术内酯Ⅱ作用的巨噬细胞可显著抑制胃癌细胞增殖(P0.01);与模型组比较,白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L~(-1))组胃癌细胞迁移率降低(P0.05);白术内酯Ⅱ(200,100,50 mg·L~(-1))组M1型巨噬细胞表面标志CD86表达增高(P0.05,P0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L~(-1))组M2型巨噬细胞表面标志CD206表达下降(P0.05);白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L~(-1))组M1型巨噬细胞相关细胞因子TNF-α,HLA-DRA,CD80 mRNA表达增高(P0.05,P0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L~(-1))组TNF-α蛋白表达增高(P0.05);白术内酯Ⅱ(50 mg·L~(-1))组M2型巨噬细胞相关细胞因子TGF-βmRNA表达显著降低(P0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L~(-1))组IL~(-1)0,IL-6蛋白表达降低(P0.05,P0.01);白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L~(-1))组p-PI3K蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。结论:白术内酯Ⅱ通过减少巨噬细胞内p-PI3K的表达,诱导巨噬细胞向M1型极化,进而抑制胃癌增殖和迁移。     

白术糖复合物对IEC-6细胞分化及绒毛蛋白表达的影响

目的:观察白术糖复合物对小肠隐窝细胞(IEC-6)细胞分化及分化标志物之一绒毛蛋白(villin)表达的影响。方法:IEC-6细胞分为空白对照组、阳性对照药胃泌素组(250μg/L)、白术糖复合物组(62.5、125、250、500、1000 mg/L),经相应处理后。光镜下观察细胞大体形态;透射电镜下观察细胞超微结构;RT-PCR法检测villin mRNA表达;免疫荧光法检测villin蛋白表达。结果:①给药7 d,光镜下空白对照组细胞处于幼稚状态;胃泌素和白术糖复合物组细胞处于分化状态;②给药20 d,电镜下空白对照组胞核较大,常染色质比例较高,细胞边缘仅见少量微绒毛;胃泌素和白术糖复合物组胞核较小,常/异染色质比例协调,细胞边缘生成大量微绒毛;③给药6 h,空白对照组细胞villin mRNA表达非常少,胃泌素组和白术糖复合物组villin mRNA表达均明显高于空白对照组;④给药7 d,免疫荧光检测发现空白对照组细胞仅有很少villin蛋白表达;胃泌素组表达非常强烈;白术糖复合物组表达稍弱于胃泌素组,但有特异性绒毛蛋白聚集点。结论:白术糖复合物有通过上调IEC-6细胞绒毛蛋白表达及分布而促其分化的作用。