基于Nrf2/HO-1信号通路探讨山楂叶总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠卵巢氧化应激的影响

目的 探讨山楂叶总黄酮对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢氧化应激的影响及其作用机制。方法 大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及山楂叶总黄酮低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg),每组10只。采用高脂饲料喂食联合灌胃来曲唑法建立PCOS大鼠模型,灌胃给药21 d后测定大鼠子宫、卵巢质量,FINS、FBG水平并计算HOMA-IR值,通过全自动生化仪检测血清TC、TG、HDL、LDL水平,ELISA法检测血清T、AMH、E₂水平和FSH、LH活性,HE染色观察卵巢组织病理形态变化,采用试剂盒检测卵巢组织SOD、GSH-Px活性和MDA水平,Western blot法检测卵巢组织Nrf2、HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,山楂叶总黄酮各剂量组大鼠子宫质量,血清FSH活性和E₂水平,卵巢组织SOD、GSH-Px活性和Nrf2、HO-1蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01);卵巢质量,FBG、FINS水平和HOMA-IR值,血清LH活性和T、AMH、LDL、TC、TG水平,卵巢组织MDA水...     

探讨防风通圣散对多囊卵巢综合征大鼠血清激素及卵巢组织学影响

目的探讨防风通圣散对于多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠的血清激素及卵巢组织形态的影响及其原理。方法选用36只雌性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、中药组,每组12只,对模型组和中药组建立PCOS大鼠模型。造模成功后(每组剩余10只)观察各组大鼠灌胃前后血清激素水平及卵巢组织形态变化。结果中药组黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平、LH/FSH水平、睾酮(testostertone,T)水平低于PCOS模型组(P<0.05),中药组T水平低于空白组(P<0.05),中药组促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平、LH水平、LH/FSH水平与空白组差异无统计学意义。中药组大鼠发育中卵泡和黄体数量较模型组略有增加,囊性扩张卵泡明显减少,颗粒细胞层增厚,排列较紧密。结论防风通圣散可明显降低多囊卵巢综合征大鼠的T水平,对改善PCOS大鼠LH水平、FSH水平以及LH/FSH水平有明显的作用,并可有效改善多囊卵巢综合征大鼠的卵巢卵泡生长状态。     

加减益经汤对卵巢功能减退大鼠性激素与卵巢组织形态学的影响

目的:研究加减益经汤对环磷酰胺(CTX)所致卵巢功能减退(DOR)大鼠性激素与卵巢组织形态学的影响。方法:成年雌性SD大鼠随机选出10只作为空白对照组,其余大鼠采用CTX 75 mg/kg腹腔单次注射造模,造模成功后将大鼠分为模型对照组、补佳乐组和加减益经汤高、中、低剂量组,每组10只。加减益经汤高、中、低组予加减益经汤,生药剂量分别为23.58、11.79、5.895 g/kg;补佳乐组予补佳乐,0.09 mg/kg;模型对照组与空白对照组灌胃10 mL/kg蒸馏水。造模当日开始予灌胃给药,1次/d,连续28 d。模型对照组在造模后2周,其余各组在给药结束后,于动情间期处死。观察大鼠的一般情况、动情周期、卵巢指数、卵巢组织形态变化,检测血清FSH、LH、E2值。结果:与模型对照组比较,加减益经汤与补佳乐可恢复DOR大鼠动情周期,升高卵巢指数(P<0.01),降低血清FSH、LH(P<0.05或P<0.01),升高血清E2(P<0.01),改善卵巢组织形态,增加原始、成熟卵泡数(P<0.05或P<0.01),降低初级、次级、闭锁卵泡数(P<0.01)。结论:加减益经汤可明显改善CTX所致DOR大鼠的性激素与卵巢组织形态学,其中中剂量是最适宜剂量。     

来曲唑联合细菌内毒素法建立PCOS肾虚血瘀大鼠模型评价

目的:采用来曲唑灌胃法联合细菌内毒素(LPS)腹腔注射构建PCOS肾虚血瘀病证结合大鼠模型,并对模型进行评价。方法:6周龄清洁级SD雌性大鼠分为模型组和空白组。模型组大鼠首先采取来曲唑灌胃法模拟肾虚PCOS模型,评估后选取成功模型大鼠继续给予细菌内毒素(LPS)腹腔注射,构建PCOS肾虚血瘀病证结合动物模型。空白组同环境下正常饲养。观察大鼠形态、体质量、动情周期变化、卵巢形态学和组织学;检测大鼠血清性激素水平、炎性因子、血脂、凝血功能及血液流变学。结果:PCOS模型大鼠体质量增加高于空白组,阴道上皮细胞失去周期性变化(P0.05);血清性激素(LH、T)、空腹胰岛素(INS)浓度明显高于空白组(P0.05),血清FSH、E2水平明显低于空白组(P0.05);注射LPS后,大鼠表现出了体质量增加减慢、活动减少、皮毛失去光泽、爪甲干枯、大便臭秽、舌质由淡红变紫暗干涩,舌下静脉增粗变长;模型组大鼠血清甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平均高于空白组(P0.05),总胆固醇(TC)显著高于空白组(P0.01);模型组大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)浓度均高于空白组(P0.05);模型组大鼠血浆凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)含量高于空白组(P0.05);两组凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)差异无统计学意义(P0.05);模型组血小板聚集率高于空白组(P0.05),全血黏度、血浆黏度均显著高于空白组(P0.01)。模型组大鼠卵巢表面苍白,卵巢体积增大,可见大量囊状卵泡形成;空白组卵巢色泽红、表面光滑。模型组卵巢组织颗粒细胞减少,囊状扩张卵泡易见;空白组大鼠卵巢颗粒细胞呈多层,囊状扩张卵泡不易见。结论:来曲唑联合细菌内毒素(LPS)所构建动物模型符合PCOS肾虚血瘀证特征。     

三种卵巢早衰大鼠造模方法比较研究

目的?探讨建立简洁稳定高效的卵巢早衰（POF）的大鼠模型。方法?将40只具有规律动情周期的SD大鼠按随机数字表法分为正常组、环磷酰胺（CTX）组、二氧化乙烯基环己烯（VCD）组、雷公藤（TG）组，每组10只。大鼠适应性喂养1周后，分别采用CTX、VCD、TG造模。在造模过程中观察大鼠的一般情况和动情周期，每周检测大鼠体重，采用HE染色在光镜下观察卵巢组织形态变化；采用TUNEL法检测卵巢颗粒细胞凋亡情况；采用ELISA检测大鼠血清促卵泡激素（FSH）、雌二醇（E2）含量；采用实时荧光定量PCR法（RT-PCR）和Western Blot检测卵巢组织B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、促凋亡蛋白 Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 assaciated X protein，Bax）mRNA及蛋白表达水平。结果?与正常组比较，各模型组大鼠出现动情周期紊乱，卵巢组织缺血苍白伴不同程度的萎缩，卵泡数减少、卵巢颗粒细胞凋亡率均升高（P<0.05，P<0.01），血清FSH含量（除TG组外）均明显升高（P<0.01），血清E2含量均明显降低（P<0.01），Bcl-2/Bax mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05，P<0.01）；与VCD、TG组比较，CTX组大鼠体重减轻（P<0.05），成熟卵泡率明显减少（P<0.01），FSH含量显著降低（P<0.05）。结论?CTX诱导建立POF大鼠模型，造模方法简便易行，成功率较高，造模效果优于VCD和TG，是更为理想的POF造模方法。     

基于Akt/mTOR信号通路探讨养精种玉汤对卵巢早衰大鼠的作用

目的 探讨养精种玉汤对顺铂所致卵巢早衰大鼠的作用及其对Akt、mTOR、GnRHR表达的影响。方法 大鼠随机分为空白组(7只)和造模组(35只),空白组不予处理，造模组腹腔注射4.0 mg/kg顺铂水溶液，每周1次，共2次。将造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组(0.01 mg/mL戊酸雌二醇片水溶液)和养精种玉汤低、中、高剂量组(0.34、0.68、1.35 g/mL),每组7只，各给药组给予相应药物，连续给药21 d。观察大鼠动情周期变化，计算卵巢指数，ELISA法检测血清E₂、FSH、AMH及GnRH水平，HE染色观察大鼠卵巢组织病理形态，免疫组化法检测大鼠卵巢组织Akt、mTOR、GnRHR蛋白表达，RT-qPCR法检测大鼠卵巢组织Akt、mTOR、GnRHR mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠血清E₂、AMH水平降低(P<0.01),FSH、GnRH水平升高(P<0.01),卵巢组织Akt、mTOR、GnRHR蛋白和mRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较，各给药组大鼠卵巢内成熟卵泡数量增多，闭...     

补肾疏肝针药结合对卵巢早衰大鼠卵巢储备力的影响研究

目的:观察补肾疏肝针药结合对卵巢早衰(POF)模型大鼠卵巢储备力的影响。方法:将60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、中药组、针药组、西药组,除空白组外其余各组大鼠采用雷公藤多苷片50mg/kg灌胃联合束缚建立卵巢早衰动物模型。造模成功后,中药组予具有补肾疏肝作用的中药复方灌胃,电针组予电针三阴交、关元、太冲穴,针药组同时予中药灌胃及电针治疗,西药组予戊酸雌二醇溶液灌胃,疗程均为30d。造模前与治疗后称重大鼠计算体质量增量,处死后摘取卵巢称湿重,计算卵巢指数,酶联免疫吸附法测定大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏激素(AMH)水平,HE染色观察卵巢组织形态学变化,光镜下计数各级卵泡数目。结果:模型组大鼠体质量增量、卵巢质量和卵巢指数均明显低于空白组(P0.01),西药组、中药组和针药组大鼠治疗后上述指标均明显高于模型组(P0.05,P0.01),电针组大鼠卵巢质量明显高于模型组(P0.05),电针组体质量增量、卵巢质量明显低于针药组(P0.05,P0.01)。模型组大鼠卵巢体积缩小,生长卵泡数减少,还可见大量闭锁卵泡和间质腺,黄体纤维化;各治疗组大鼠卵巢情况明显改善。模型组大鼠卵巢生长卵泡、成熟卵泡、黄体数目均明显低于空白组(P0.01),闭锁卵泡数目明显高于空白组(P0.01);各治疗组上述指标均较模型组有不同程度的改善;针药组较其他治疗组改善程度更有优势,其中生长卵泡、成熟卵泡数目明显高于西药组(P0.05),闭锁卵泡与黄体数目与西药组相当。模型组大鼠血清E2、AMH含量显著低于空白组(P0.01),FSH含量显著高于空白组(P0.01);与模型组相比,各治疗组大鼠性激素水平均有不同程度的改善,针药组FSH、AMH含量与西药组相当。结论:补肾疏肝针药结合治疗POF模型大鼠疗效显著,可改善大鼠低雌激素高促性腺激素状态,促进卵泡生长发育及成熟,抑制卵泡过度闭锁,提高卵巢储备力。     

槲皮素对多囊卵巢综合征大鼠的改善作用

目的 探究槲皮素对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠的改善作用及其机制。方法 54只大鼠给予高脂饲料进行喂养，并连续灌胃来曲唑(1 mg/kg)23 d建立PCOS模型；另取10只纳入空白对照组，给予普通饲料。将造模成功的大鼠随机分为模型组、盐酸二甲双胍组(50 mg/kg)及槲皮素低、高剂量组(15、30 mg/kg),灌胃给予相应药物，连续4周。血糖仪检测大鼠血糖水平，ELISA法检测大鼠空腹胰岛素水平和血清TGF-β₁、E₂、FSH水平，HE染色计数卵巢内各级卵泡数量，RT-qPCR法检测卵巢组织GLUT4 mRNA表达，Western blot法检测卵巢组织AGEs、RAGE、p-Akt、Akt、p-PI3K、PI3K蛋白表达。结果 与模型组比较，各给药组大鼠空腹胰岛素和血糖水平降低(P<0.01),血清TGF-β₁水平降低(P<0.01),原始卵泡和初级卵泡数量增加(P<0.01),卵巢组织GLUT4 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);槲皮素高剂量组、盐酸二甲双胍组大鼠血...     

从脂代谢角度探讨苍附导痰汤治疗肥胖型多囊卵巢综合征大鼠的作用机制

目的 探讨苍附导痰汤对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)的血脂的影响及可能作用机制。方法 采用来曲唑联合高脂乳剂制备肥胖型PCOS模型，并将造模成功的48只SD大鼠随机分为模型组，苍附导痰汤低、中、高剂量组。另设空白组。苍附导痰汤低、中、高剂量组分别给予苍附导痰汤4.9,9.8,19.6g/(kg·d)灌胃，模型组和空白组给予等体积蒸馏水灌胃，各组每日1次，共灌胃21d。观察各组大鼠肝脏油红O情况，ELISA法检测大鼠血清T、FFAs、TG、TC浓度，Western blot检测肝脏组织Leptin、AMPKα、ACC1、CPT1A蛋白的表达的水平。结果 油红O染色后发现空白组大鼠肝脏未见脂滴，模型组大鼠肝脏显现出明显的脂肪变性，苍附导痰汤低剂量组大鼠肝脏仍可见数量较多的脂滴，中剂量、高剂量组大鼠肝脏未见脂滴；与空白组比较，模型组T、TC、TG、FFAs、Leptin水平、ACC1显著升高，Leptin、AMPKα、CPT1A蛋白表达量显著降低(P<0.05);与模型组比较，苍附导痰汤低、中、高剂量组TC、T水平显著降低，且随着中药剂量的增加逐渐降低(P<0.05),苍附导痰...     

电针对多囊卵巢综合征大鼠干细胞因子及肿瘤坏死因子-α表达的调节

目的观察电针干预对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵子成熟度的影响及对干细胞因子(SCF)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的调节,并探讨其机理。方法 24日龄SD雌性大鼠30只,10只为空白组,予普通饲料喂养,不予任何干预;20只予高脂饲料喂养,予脱氢表雄酮造模,造模成功后大鼠分为电针组与模型组。电针组予电针干预,取穴"肾俞"、"气海"、"内关"、"足三里"、"三阴交"、"子宫",采用疏密波,每日1次,每次30 min。模型组不予任何处理。观察3组大鼠成熟卵子数量、血清激素水平、颗粒细胞悬液SCF及TNF-α的表达。结果对PCOS大鼠模型进行成功造模。模型组与电针组卵巢湿重明显高于空白组(P<0.05)。空白组雌二醇明显高于模型组(P<0.05),略高于电针组,但差异无统计学意义(P>0.05);模型组睾酮明显高于电针组、空白组(P<0.05,P<0.01),后两者比较无明显差异。电针组成熟卵子数及优卵率高于模型组,但均低于空白组,且模型组与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3组SCF及TNF-α比较差异有统计学意义(P<0.01)。电针组PCOS大鼠恢复动情周期。结论电针刺激可通过改善卵巢局部微环境SCF与TNF-α水平来刺激PCOS大鼠卵子的发育及成熟。     

菟丝子总提物对雷公藤多苷POF大鼠模型影响的探讨

目的:探讨菟丝子总提物对雷公藤多苷POF大鼠模型卵巢功能修复作用,为临床治疗POF提供药效学依据,并初步探讨其作用机制。方法:采用雷公藤多苷75mg/(kg·30d)建立POF大鼠模型,共44只,随机分成4组:对照组、模型组、补佳乐组及菟丝子总提物组(TSZ组)。30d造模成功后,TSZ组以菟丝子总提物水溶液、补佳乐组予补佳乐水溶液灌胃;对照组及模型组予同等量纯净水灌胃,日一次,连续30d。灌胃期间每日观察大鼠动情周期的变化;实验结束后选择非动情期大鼠处死,检测血清E2、FSH、LH、AMH以及观察卵泡计数、卵巢病理切片。结果:造模至10d开始除对照组外各组开始出现动情周期紊乱、延长。与模型组,两治疗组E2水平升高,FSH、LH、AMH升高(P0.01或0.05);两治疗组生长卵泡及黄体增多(P0.01或0.05),闭锁卵泡减少(P0.05);两治疗组组间比较无显著性差异(P0.05);治疗组大鼠卵巢镜下各级卵泡较模型组明显增多,可见成熟卵泡,黄体数量增加,可见少量闭锁卵泡,间质未见明显纤维组织增生。结论:菟丝子总提物可显著提高卵巢储备能力,修复卵巢组织损伤。     

艾灸对卵巢储备功能减退大鼠Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:观察艾灸对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响,探讨艾灸对卵巢储备功能的保护效应机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、艾灸组、激素组,每组10只。模型组、艾灸组、激素组均采用雷公藤多苷片混悬液灌胃制备DOR大鼠模型,空白组灌胃等体积的0.9%氯化钠溶液,每日1次,连续灌胃14 d。激素组在造模即日起采用激素序贯疗法连续干预14 d;艾灸组在造模即日起每日给予双侧"肾俞"或"关元""中脘"艾灸治疗,两组穴隔日交替,每次10 min,连续14 d。每日采用阴道脱落细胞涂片观察大鼠的动情周期,统计各组大鼠动情周期紊乱率。干预结束后,采用HE染色观察各组大鼠卵巢组织学形态;ELISA法检测各组大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;免疫组化法检测各组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白水平;实时PCR(TaqMan探针法)检测各组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1 mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠血清FSH、LH、MDA含量增多(P<0.01),血清E2、AMH、SOD含量减少(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠血清FSH、LH、MDA含量减少(P<0.01,P<0.05),血清E2、AMH、SOD含量增多(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达减少(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达增多(P<0.01)。结论:艾灸可以降低DOR大鼠的动情周期紊乱率,改善血清性激素水平和抗氧化应激能力,其机制可能与调控Nrf2/HO-1信号通路有关。     

养精种玉汤对卵巢储备功能减退模型大鼠RNA-m6A修饰的影响

目的 观察养精种玉汤对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠RNA-m⁶A修饰的影响,探讨其改善卵巢储备功能的机制。方法 选取60只动情周期正常的SD雌性大鼠,采用雷公藤甲素诱导DOR模型,将大鼠分为空白组、模型组、脱氢表雄酮(DHEA)组和养精种玉汤低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组),每组10只,给药组分别灌胃相应药液,连续2周。HE染色观察卵巢组织形态,ELISA检测血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗米勒管激素(AMH)含量,Western blot、qPCR测定卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白和基因表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织皮质区损伤,颗粒细胞脱落,各级卵泡数量明显减少,闭锁卵泡及黄体数量增加(P<0.05);血清E2、AMH含量减少,FSH、LH含量增加(P<0.05),卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白及m RNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组大鼠卵巢组织损伤明显改善,各级卵泡数量增加,闭锁卵泡及黄体数量减少(P<0.05);血清E2...     

加味芍药甘草汤对多囊卵巢综合征模型大鼠的干预作用

目的:探究加味芍药甘草汤对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的干预作用及机制。方法:SD雌性大鼠随机分为正常组,模型组,加味芍药甘草汤低、中、高剂量(12.5,25.0,50.0 g·kg-1·d-1)组,达英-35组(0.001 g·kg-1·d-1),每组6只。除正常组给予蒸馏水外,其余各组利用来曲唑(0.001 g·kg-1·d-1)灌胃给药21 d制备PCOS大鼠模型,造模后加味芍药甘草汤及达英-35组分别以相应剂量灌胃给药2周,正常组及模型组灌胃给予等体积的蒸馏水。采用阴道涂片观察动情周期;卵巢组织切片观察形态变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测甾类激素(睾酮,雌二醇,孕酮,促黄体生成素)水平;并用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定大鼠卵巢组织中水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP-9)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠动情周期发生紊乱;体质量与卵巢质量明显增加;卵巢组织中存在大量初级囊性扩张卵泡,颗粒细胞疏松,成熟卵泡内未见卵母细胞,放射冠消失;血清睾酮和促黄体生成素的水平均显著升高(P0.05),而雌二醇和孕酮水平显著降低(P0.05)。与模型组大鼠比较,加味芍药甘草汤可以剂量依赖性地减轻体质量和卵巢质量,降低血清中雄激素和促黄体生成素水平,提高血清中雌激素及孕激素水平,并且与卵巢中AQP-9的表达呈相关性。结论:加味芍药甘草汤可能通过增加卵巢颗粒细胞中AQP-9表达干预PCOS大鼠卵巢多囊样变和高雄激素血症。     

黄连素对痰湿型多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用及疗效机制研究

目的:探讨黄连素对痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠的治疗作用及疗效机制。方法:雌性SD大鼠颈后皮下注射INS+HCG构建痰湿型PCOS大鼠模型。PCOS模型大鼠随机均分为模型组和黄连素组(n=10),另选取10只正常SD大鼠作为空白组,黄连素组予黄连素2次/d灌胃给药,空白组及模型组予等体积生理盐水灌胃,连续30 d。观察动情周期,间期取材称重,检测血清甾体激素、糖脂代谢水平及糖耐量试验,RT-PCR法测定卵巢CYP17和CYP19mRNA表达及子宫Glut4 mRNA表达水平。结果:(1)与空白组比较,模型组大鼠动情周期明显延长,体质量、卵巢、子宫和性腺旁脂肪重量明显增加,血清甾体激素LH、T、E2水平及LH/FSH比值明显升高,脂代谢指标TG、LDL水平明显升高,OGTT结果显示各时段血糖、FINS水平、HOMA-IR指数均显著增高;(2)与模型组比较,黄连素组大鼠动情周期明显缩短,大鼠体质量、卵巢、子宫和性腺旁脂肪重量明显降低,血清中LH、T、E2水平及LH/FSH比值明显降低,血清TG、LDL水平明显降低,OGTT结果显示各时段血糖、FINS水平、HOMA-IR指数均明显降低。(3)与空白组比较,模型组大鼠卵巢中CYP17a1 mRNA表达明显升高,CYP19a1mRNA表达明显降低,子宫中Glut4mRNA表达明显降低;与模型组比较,黄连素组大鼠卵巢中CYP17a1 mRNA表达明显降低,CYP19a1mRNA表达明显升高,子宫中Glut4mRNA表达明显升高。结论:黄连素能够改善痰湿型PCOS模型大鼠糖脂代谢异常,调控血清甾体激素水平,起到治疗PCOS生殖障碍与代系异常的作用;其改善生殖障碍的分子机制为上调卵巢CYP19a1基因及子宫Glut4基因的表达,下调卵巢CYP17a1基因的表达。     

基于TGFβ/Smads信号通路探讨补肾促排卵汤治疗PCOS大鼠卵巢纤维化的分子机制

[目的] 探讨补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠的治疗效果,并研究其调节卵巢纤维化TGF-β/Smads信号通路的分子机制。[方法] 将40只SD雌性大鼠随机分为空白组8只及脱氢表雄酮（DHEA）给药组32只,DHEA给药组每日颈部皮下注射DHEA（60 mg/kg）,连续给药35 d;将造模成功的大鼠随机分为模型组、补肾促排卵汤低、中、高剂量组（5.58、11.16、22.32 g/kg）。补肾促排卵汤分别用生理盐水配成适当浓度,连续灌胃给药4周,每日1次;同时空白组与模型组大鼠予等量生理盐水进行灌胃。阴道涂片观察大鼠动情周期,HE法观察补肾促排卵汤对各组大鼠卵巢中卵泡发育的影响,天狼猩红染色法观察大鼠卵巢纤维化情况,酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测大鼠血清雌二醇（E2）、睾丸酮（T）、黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）含量,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、Smad7 mRNA的表达,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测大鼠TGF-β1、p-Smad3、Smad7的蛋白表达。[结果] 与空白组比较,模型组大鼠丧失规律的动情周期,大鼠卵巢中囊状扩张卵泡增多,卵巢纤维化阳性面积明显增多,血清T、LH水平显著升高,同时TGF-β1、p-Smad3蛋白及mRNA表达显著增多,Smad7蛋白及mRNA表达显著减少（P<0.01）。与模型组比较,补肾促排卵汤中、高剂量组可明显改善大鼠的动情周期,减少囊状扩张卵泡的形成,降低卵巢纤维化阳性面积（P<0.01）,下调卵巢TGF-β1蛋白及mRNA的表达（P<0.05,P<0.01）,显著下调p-Smad3蛋白及mRNA的表达（P<0.01）,上调Smad7蛋白及mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。[结论] 补肾促排卵汤能有效治疗PCOS模型大鼠,可能是通过调节纤维化TGF-β/Smads信号通路上重要分子TGF-β1、p-Smad3、Smad7的表达从而发挥作用。     

补肾活络方对PCOS大鼠促排卵及卵巢IGF-2表达影响的研究

目的:探讨补肾活络方对促进肾虚血瘀型不孕症大鼠卵泡发育及促排卵的可能机制.方法:建立PCOS大鼠不孕模型,光镜下连续观察阴道脱落细胞涂片1个性周期,观察动情周期变化及排卵率,并运用免疫组化和显微形态学等技术,对正常组、模型组、中药组、西药组SD雌性大鼠卵巢细胞IGF-2基因表达水平进行检测.结果:中药组、西药组与模型组在动情周期变化及排卵率比较差异有统计学意义(P＜0.05);中药组、西药组与正常组在动情周期变化比较差异无统计学意义(P＞0.05);中药组与西药组动情周期变化及排卵率比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组IGF-2的表达强度上都不及正常组、中药组和西药组(P＜0.05);中药组与正常组IGF-2表达强度比较无差异(P＞0.05);中药组与西药组IGF-2比较有差异(P＜0.05).结论:中药补肾活络方能诱导PCOS大鼠的动情周期,增加PCOS大鼠排卵率.     

雷公藤多苷通过PI3K/AKT信号通路影响大鼠卵泡发育的实验研究

目的:基于PI3K/AKT信号通路探索雷公藤多苷片致大鼠卵泡发育障碍的分子机制。方法:将动情周期正常的7⁸周、体重2008周、体重200²20g的雌性SD大鼠18只,随机分为对照组和模型组,每组9只,模型组以雷公藤多苷40mg/kg剂量灌胃,对照组以等量的蒸馏水灌胃,灌胃第8周始行阴道脱落细胞检查观察大鼠性周期变化,当模型组所有大鼠出现动情周期延长甚至紊乱时,称重、采血后处死大鼠,摘取双侧卵巢。观察大鼠体重、卵巢湿重、卵巢指数、动情周期、血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平、大鼠卵巢组织形态学以及大鼠卵巢组织p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K表达的变化。结果:模型组大鼠动情周期较对照组明显延长,体重,卵巢湿重,卵巢指数,血清E2、P水平均明显低于对照组;模型组次级卵泡、窦状卵泡占总卵泡百分比均明显低于对照组,闭锁卵泡占总卵泡百分比明显高于对照组,始基卵泡占总卵泡百分比无明显变化;模型组大鼠卵巢组织p-AKT、p-mTOR、pp70S6K表达水平明显低于对照组。结论:雷公藤多苷可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制大鼠卵泡发育。     

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠始基卵泡募集因子GDF-9、AMH表达的影响

目的:研究补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢功能的调节,探讨补肾调冲方通过调控卵巢始基卵泡募集因子GDF-9及AMH调节卵巢功能及治疗POF的机制。方法:建立半乳糖致POF大鼠模型,将造模成功的POF大鼠随机分为模型组与治疗组,每组各20只,另设正常对照组。于PND80开始,治疗组大鼠每日灌服补肾调冲方水溶液,模型组及空白组大鼠每日灌服等体积生理盐水,共4周。实验结束后光镜下计数各组大鼠卵巢内各级卵泡数目,ELISA法检测各组大鼠血清FSH、LH及E2水平,Real-time PCR法检测各组大鼠卵巢内GDF-9及AMH mRNA表达水平。结果:①补肾调冲方可使POF大鼠动情周期趋于正常,并能明显降低血清FSH、LH水平(P<0.05),提高E2水平(P<0.05),从而改善POF大鼠血清高促性腺激素低雌激素状态;组织形态学检测结果显示治疗组大鼠卵巢体积较POF模型组增大,各级卵泡生长较好,颗粒细胞层次多,黄体数目明显增多;始基卵泡、窦前卵泡及窦状卵泡数目均较模型组增多,闭锁卵泡数目则明显减少。②与正常组比较,POF大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平均明显降低(P<0.01),而治疗组大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾调冲方治疗POF的作用机制之一可能是通过上调卵巢局部始基卵泡募集因子GDF-9及AMH的表达,促进卵泡的生长发育,抑制卵泡的过度耗竭与闭锁,恢复始基卵泡的正常募集状态,从而抑制卵巢功能的过早衰竭。     

祛痰化瘀方对脱氢表雄酮诱导PCOS模型大鼠性激素及卵巢纤维化相关因子的影响

目的:观察补肾化痰方对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠性激素及卵巢纤维化相关因子的影响。方法:采用表皮下注射脱氢表雄酮法建立PCOS模型后,祛痰化瘀方高、低剂量组依次给以4.54,2.27 g/m L生药灌胃,二甲双胍组以0.2 g/kg灌胃,空白对照组、模型对照组灌胃等体积生理盐水,1 d 1次,连续28 d。观察阴道脱落细胞涂片10 d,判断动情周期,ELISA法检测血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T),SABC法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)在卵巢中的表达。结果:与二甲双胍组对比,祛痰化瘀方高剂量组的FSH降低,差别有统计学意义(P0.05),低剂量组的FSH较之差别无统计学意义(P0.05);祛痰化瘀方高、低剂量组的LH水平均高于二甲双胍组(P0.01或P0.05)。祛痰化瘀方高剂量组大鼠的TGF-β1与二甲双胍组对比差别有统计学意义(P0.01);而祛痰化瘀方低剂量组与二甲双胍组对比,差别无统计学意义(P0.05)。结论:祛痰化瘀方可以降低PCOS模型大鼠血清LH、T水平,恢复大鼠动情周期,恢复排卵功能,且高剂量较低剂量降低LH效果更理想,能升高PCOS大鼠血清FSH水平,降低TGF-β1在PCOS大鼠卵泡模细胞及间质细胞中的表达,使包膜增厚、间质纤维化的卵巢趋于正常。