基于LC/Q-TOF-MS整合网络药理学探讨潜阳育阴颗粒防治高血压肾损害的药效物质基础与作用机制

目的 系统研究潜阳育阴颗粒的化学成分,探讨其发挥药效的主要活性成分和作用机制。方法 采用液相色谱/四级杆-飞行时间质谱法（LC/Q-TOF-MS）对潜阳育阴颗粒中的化学成分进行全面分析,检测条件为Agilent Poroshell 120 SB-C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm,2.7 μm）,流速0.4 mL·min^-1,电喷雾离子源（ESI）,正、负离子模式扫描,扫描范围m/z 25~1 000;正离子模式的流动相A为水+10 mmol·L^-1甲酸铵+0.125%甲酸+0.1%甲醇,B为乙腈-水（9∶1）+10 mmol·L^-1甲酸铵+0.125%甲酸;负离子模式的流动相A为水+10 mmol·L^-1甲酸铵+0.1%甲醇,B为乙腈-水（9∶1）+10 mmol·L^-1甲酸铵;梯度洗脱程序均设定为0~3.5 min,5%B;3.5~4 min,5%~10%B;4~9 min,10%~25%B;9~18 min,25%~30%B;18~25 min,30%~50%B;25~27 min,50%~90%B;27~32 min,90%B;32~33 min,90%~5%B;33~39 min,5%B。根据化合物的一级、二级质谱信息,与对照品或文献数据比对,快速识别化学成分。结合网络药理学方法对潜阳育阴颗粒的化学成分进行靶标分析、功能富集,初步筛选出主要药效物质,并探讨其作用机制。结果 从潜阳育阴颗粒中共识别出99个化学成分,从中筛选出43个与高血压肾损害相关的活性成分及48个核心靶点。核心成分包括山柰酚,槲皮素,阿魏酸,木樨草素,咖啡酸甲酯,肉桂酸,芦荟大黄素,大黄素,N-反式-阿魏酰酪胺,没食子酸,异红草素,8-O-阿魏酰基哈巴苷,咖啡酸乙酯,异奥卡宁,杯苋甾酮,二苯乙烯苷,马钱苷,23-乙酰泽泻醇B和哈巴苷;核心靶点包括血管内皮生长因子A（VEGFA）,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）,Jun原癌基因（JUN）,G蛋白β₁（GNB1）,肿瘤蛋白p53（TP53）,β-淀粉样前体蛋白（APP）,丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）等。结论 潜阳育阴颗粒主要从调控血管内皮、血管生成、炎症反应、氧化应激及免疫应答等方面发挥清肝补肾、化瘀通络的功效。     

灯盏细辛中吡咯里西啶生物碱的含量分析及其肝毒性风险评估

目的 测定灯盏细辛中吡咯里西啶生物碱的含量,根据测定结果对其肝毒性进行初步的风险评估。方法 灯盏细辛样品经过固相萃取法提取后,采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定印美定、石松胺、印美定-N-氧化物和石松胺-N-氧化物的含量。根据含量测定结果,采用暴露限制（MOE）法对其肝毒性风险进行评估。结果 8批灯盏细辛样品中印美定、石松胺、印美定-N-氧化物和石松胺-N-氧化物质量分数分别为15.14～66.72、11.32～42.55、26.32～98.34、19.82～55.23 μg·kg^–1。MOE值为4787～12 130。结论 灯盏细辛中吡咯里西啶生物碱的含量超过欧洲药品管理局的规定,经初步风险评估显示部分批次存在一定的安全风险。     

基于UHPLC-QqQ-MS和网络药理学的二冬汤潜在活性成分含量测定及作用机制分析

目的 建立二冬汤中活性成分含量测定的超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法（UHPLC-QqQ-MS），并对该方进行抗胰岛素抵抗作用靶点和通路的预测。方法 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~3 min，90%~87%A；3~6 min，87%~86%A；6~9 min，86%~83%A；9~11 min，83%~75%A；11~18 min，75%~70%A；18~19 min，70%~52%A；19~22 min，52%A；22~25 min，52%~5%A；25~27 min，5%~90%A；27~30 min，90%A）；利用电喷雾离子源（ESI），多反应监测（MRM）模式，正、负离子模式检测其含量。在此基础上，运用网络药理学方法预测二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用的靶点和通路。结果 二冬汤中20个活性成分在一定质量浓度范围内线性关系良好，精密度、稳定性、重复性及加样回收率良好。含量测定结果显示，15批样品中高质量浓度的成分为黄芩素（1 259.39~1 635.78 mg·L^-1）、黄芩苷（1 078.37~1 411.52 mg·L^-1）；中质量浓度的成分为知母皂苷BⅡ（245.10~604.89 mg·L^-1）、芒果苷（148.59~217.04 mg·L^-1）、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（89.30~423.26 mg·L^-1）、芦丁（46.91~1 553.61 mg·L^-1）、甘草酸（55.97~391.47 mg·L^-1）、新芒果苷（37.45~127.03 mg·L^-1）、荷叶碱（0.89~63.48 mg·L^-1）、金丝桃苷（6.96~136.78 mg·L^-1）、甘草苷（30.89~122.78 mg·L^-1）、甘草素（26.64~110.67 mg·L^-1）、原薯蓣皂苷（58.57~284.26 mg·L^-1）；低质量浓度的成分为伪原薯蓣皂苷（5.49~22.96 mg·L^-1）、汉黄芩素（7.16~20.74 mg·L^-1）、人参皂苷Rb₁（7.31~23.87 mg·L^-1）、人参皂苷Rg₁（10.78~28.33 mg·L^-1）、甲基麦冬黄烷酮A（0.74~1.67 mg·L^-1）、人参皂苷Re（7.78~24.76 mg·L^-1）、麦冬皂苷D（2.08~4.29 mg·L^-1）。网络药理学结果表明，二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路有关。结论 建立的UHPLC-QqQ-MS可为二冬汤复方制剂的开发奠定基础。网络药理学研究结果可为二冬汤治疗2型糖尿病的作用机制研究提供参考。     

赤箭和天麻调节免疫功能和肠道菌群作用比较

目的 对赤箭（天麻地上部分）和天麻中腺苷、天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、巴利森苷B和A 的成分含量,以及赤箭水提液和天麻水提液调节免疫功能和肠道菌群作用进行比较,评价赤箭进一步研究和开发的可行性。方法 采用超高效液相色谱法（UPLC）测定6种成分的含量,流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~4 min,0.5%B; 4~5 min,0.5%~2%B;5~10 min,2%~15%B;10~12 min,15%~20%B; 12~15 min,20%~95%B;15~17 min,95%B;17~17.5 min,95%~0.5%B;17.5~20 min,0.5%B）,流速0.5 mL·min^-1,检测波长270 nm。采用环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型,测定廓清指数、校正廓清指数及外周血象,采用体外淋巴细胞转化试验测定B淋巴细胞增殖,基于16S rDNA技术测定肠道菌群并进行生物信息学分析,对赤箭水提液和天麻水提液进行药理活性比较。结果 赤箭粉末、醇提液中6个成分总量分别高于天麻粉末,醇提液,赤箭水提液和天麻水提液中6个成分含量总和相近,且赤箭粉末和天麻粉末中天麻素和对羟基苯甲醇总量均符合2020年版《中华人民共和国药典》的相关要求。与空白组比较,赤箭水提液中剂量（10 g·kg^-1）组和天麻水提液中、低剂量（10,5 g·kg^-1）组可明显增加免疫功能低下小鼠的廓清指数（P<0.05）;赤箭水提液、天麻水提液高剂量组（20 g·kg^-1）均可明显增高外周血中红细胞和红细胞压积水平（P<0.05,P<0.01）;400 g·L^-1天麻水提液和100 g·L^-1赤箭水提液对脂多糖诱导的B淋巴细胞增殖具有促进作用。肠道菌群研究显示,与空白组比较,在门水平上,赤箭水提液和天麻水提液增加拟杆菌门的相对丰度,降低厚壁菌门的相对丰度;在属水平上,赤箭水提液、天麻水提液均可增加Prevotellaceae_UCG-001和Ruminococcaceae_UCG-005的相对丰度,降低厌氧棍状菌属,unclassified_f_Erysipelotrichaceae和Candidatus_Stoquefichus的相对丰度,这些肠道菌与免疫系统、细胞增殖、调节代谢等相关。结论 赤箭粉末、醇提液、水提液所测腺苷、天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、巴利森苷B和A总量高于或者接近于天麻相应样品;赤箭水提液与天麻水提液药理活性相似,提示赤箭值得进一步研究与开发。     

主动脉弓缩窄术建立心力衰竭大鼠模型的病理过程观察与非靶向代谢组学分析

目的 研究主动脉弓缩窄（TAC）致大鼠心力衰竭的病理过程与心肌组织代谢产物变化规律。方法 对大鼠进行TAC术，术后分为TAC-30 d组与TAC-60 d组，另设立同时段的假手术组作对照。对各组大鼠进行超声心动图和心肌组织病理染色；利用酶联免疫吸附测定法检测血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）和三磷酸腺苷（ATP）含量；液相色谱-质谱联用技术观察心肌组织代谢产物与关联通路的变化特征，流动相水（A，含25 mmol·L^-1乙酸铵和25 mmol·L^-1氨水）-乙腈（B）梯度洗脱（0~0.5 min，95%B；0.5~7 min，95%~65%B；7~8 min，65%~40%B；8~9 min，40%B；9~9.1 min，40%~95%B；9.1~12 min，95%B），电喷雾离子源，正、负离子检测模式，采集范围m/z 70~1 050。结果 与假手术30 d组比较，TAC-30 d组的左室收缩末期内径（LVIDs）显著下降（P<0.01），左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（FS）、左室后壁舒张末期厚度（LVPWd）、左室后壁收缩末期厚度（LVPWs）显著上升（P<0.01）；心肌细胞排列紊乱、水肿，胶原纤维增生；NT-proBNP含量显著上升、ATP含量显著下降（P<0.01）；15种代谢产物表达异常，涉及嘧啶代谢通路、泛酸和辅酶A生物合成通路。与假手术60 d组比较，TAC-60 d组的LVEF、FS显著下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、LVIDs、LVPWd明显上升（P<0.05，P<0.01）；心肌细胞水肿明显增大，肌纤维变性，出现凝固性坏死，大量胶原纤维沉积；NT-proBNP含量显著上升、ATP含量显著降低（P<0.01）；21种代谢产物表达异常，涉及嘧啶代谢通路、淀粉和蔗糖代谢通路。结论 TAC术后30 d为心肌肥厚阶段，脂代谢障碍，嘧啶代谢紊乱，能量失衡；TAC术后60 d为心力衰竭阶段，脂代谢障碍加重，糖代谢过度激活，嘧啶代谢持续紊乱。     

不同热风干燥方式对瓜蒌化学成分的影响

目的 比较不同干燥方式对瓜蒌化学成分的影响。方法 采用常温晾干、晒干,热风干燥（40,60,80 ℃）,变温干燥（50~80,80~50 ℃）等方式干燥瓜蒌,通过高效液相色谱法（HPLC）比较不同方式处理后瓜蒌皮、籽中核苷类成分和黄酮类成分的含量差异,流动相乙腈-0.2%乙酸水溶液（3∶7）（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~15 min,97%~95%B;15~30 min,95%~90%B;30~35 min,90%~87%B;35~40 min,87%~86.5%B;40~48 min,86.5%~97%B;48~50 min,97%B）,检测波长选择260 nm,流速设定0.4 mL·min^-1。采用气相色谱-离子迁移谱法（GC-IMS）比较不同方式处理后样品中挥发性成分变化,SE-54毛细管色谱柱（0.32 mm×30 m,0.25 μm）,于80 ℃,500 r·min^-1孵育15 min,进样针温度85 ℃,进样量400 μL,分析时间35 min,载气为高纯氮气,载气流速2.0 mL·min^-1,漂移气体流速150 mL·min^-1,IMS探测器温度45 ℃。结果 尿苷、腺苷、腺嘌呤在50 ℃以上的热风干燥处理后含量较高,较低温度干燥有利于保持胞苷、胞嘧啶、芦丁、木犀草苷和2?-脱氧腺苷的稳定。GC-IMS技术可较好地实现不同方式处理后瓜蒌样品的分析和识别,80 ℃热风干燥和变温干燥后具有更多的挥发性成分。结论 40 ℃和60 ℃热风干燥能较好地保留核苷类和黄酮类成分,并且挥发性成分与传统干燥方式下相似,具有高效可控、适宜工业化生产等优势。     

芍药甘草汤药渣中资源性成分的再利用

目的 针对经典名方芍药甘草汤药渣，开展小分子资源性成分提取及定性、定量研究，明确该药渣中残留小分子化学成分情况，探讨其可资源化利用途径。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-QTOF-MS/MS）定性分析芍药甘草汤药渣中残留的小分子化学物质，使用Agilent C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm，2.7 μm），流速0.4 mL·min^-1，进样量5 μL，流动相0.05%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~1 min，14%~17.5%B；1~3 min，17.5%~19%B；3~4 min，19%~20%B；4~5 min，20%B；5~6 min，20%~21%B；6~9 min，21%B；9~22 min，21%~36%B；22~23 min，36%B；23~32 min，36%~43%B），电喷雾离子源（ESI），负离子模式扫描，扫描范围m/z 50~1 200；对其主要成分建立高效液相色谱法（HPLC）定量分析方法，使用Agilent C₁₈反相色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），检测波长235 nm，流速0.8 mL·min^-1，流动相0.05%磷酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~1 min，14%~19%B；1~4 min，19%B；4~18 min，19%~50%B）；比较有机溶剂提取、酶法提取2种不同技术处理前后芍药甘草汤药渣中主要成分含量变化。结果 定性分析了芍药甘草汤药渣中16个化学成分，定量分析发现药渣中化学成分残留较多，其中芍药苷、甘草苷等6个指标成分残留量达到原饮片中的70%以上；药渣经纤维素酶酶解后，甘草苷可转化为甘草素；酶法提取药渣中粗多糖含量是空白组的6倍，质量分数高达12%。结论 芍药甘草汤药渣仍存在较多的小分子资源成分，有较大开发潜力，可利用有机溶剂对药渣中目标成分进行再提取，亦可采用生物酶解技术将甘草苷转化为甘草素，还可通过酶法提取药渣中粗多糖后开发动物饲料。该研究可为芍药甘草汤制剂及配方颗粒等生产带来的药渣提供资源再利用参考依据和途径，以实现芍药甘草汤药渣的高值化利用。     

基于UPLC-Q-TOF/MS和模式识别技术阐释樟帮特色黄连水炒吴茱萸的炮制科学内涵

目的 分析黄连水炒吴茱萸炮制前后的化学成分变化，为深入阐明该饮片的炮制机制提供科学依据。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF/MS），Titank C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）进行梯度洗脱（正离子模式：0~0.01 min，5%B；0.01~20 min，5%~35%B；20~25 min，35%~45%B；25~50 min，45%~95%B；50~52 min，95%B；52~52.1 min，95%~5%B；52.1~55 min，5%B。负离子模式：0~0.01 min，5%B；0.01~25 min，5%~30%B；25~40 min，30%~55%B；40~45 min，55%~95%B；45~47 min，95%B；47~47.1 min，95%~5%B），柱温40 ℃，流速0.25 mL·min^-1；电喷雾离子源（ESI），分别在正、负离子模式下扫描，扫描范围均为m/z 50~1 250。采用对照品比对、数据库匹配和文献参照对黄连水炒吴茱萸炮制前后化学成分进行鉴定，并通过MarkerView? 1.2.1软件对所得数据归一化处理，应用SIMCA-P 14.1软件对生品和炮制品的MS数据进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA），筛选炮制前后差异性成分。结果 共鉴定出50种化合物，其中黄连水炒吴茱萸48种、生品44种，炮制后新增了丹参素、降氧化北美黄连次碱、氧化小檗碱、原阿片碱、13-methylberberrubine、canadine共6种化合物，（S）-7-hydroxysecorutaecarpine、wuchuyuamide Ⅱ在炮制后未被检出，酚酸类和黄酮类成分在炮制后总体含量明显下降，柠檬苦素类成分含量总体有所上升，生物碱类成分含量总体下降不明显。PCA及OPLS-DA结果表明吴茱萸炮制前后化学成分的组成和含量存在明显差异，共筛选得到槲皮素、二氢吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱等12个炮制差异性成分。结论 黄连水炒吴茱萸中主要含有酚酸、黄酮、柠檬苦素及生物碱类成分，其炮制前后化学成分的组成和含量均发生了一定变化，炮制辅料的加入和热水浸泡是造成这一差异的主要原因，可为该樟帮特色炮制品种的炮制机制阐释提供实验依据。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的酸枣仁汤颗粒化学成分分析

目的 建立一种全面、深度分析市售酸枣仁汤颗粒化学成分的检测方法。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）,检测条件设定为流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~8 min,5%~17%B;8~10 min,17%B;10~11 min,17%~18%B;11~12 min,18%~20%B;12~17 min,20%~23%B;17~22 min,23%~33%B;22~30 min,33%~60%B;30~32 min,60%~100%B;32~36 min,100%B）,流速0.3 mL·min^-1,电喷雾离子源（ESI）,在正、负离子模式下分别进行扫描并采集高质量MS/MS数据;扫描范围m/z 50~1 500。利用SCIEX OS软件建立酸枣仁汤中单味中药材化学成分的本地数据库。借助高分辨质谱仪提供的化合物精确相对分子质量和二级质谱等信息,与本地数据库匹配,并结合文献和对照品的相应信息,完成对目标化合物的筛查。结果 在正、负离子模式下共推断和鉴别出134个化合物,主要为黄酮类、三萜类、苯酞类、甾体皂苷类、生物碱类和有机酚酸类,并对所有化合物的药材来源进行了归属,其中41个化合物来源于酸枣仁,11个化合物来源于茯苓,22个化合物来源于知母,28个化合物来源于川芎和35个化合物来源于甘草。结论 该方法能系统、快速、准确地鉴定酸枣仁汤颗粒中的化学成分,可为经典名方酸枣仁汤的物质基础研究和新药研发提供实验依据,还可为其他中成药的化学成分分析提供参考。     

含款冬花和紫草的中成药制剂中吡咯里西啶生物碱的鉴定和含量分析

目的 采用可同时测定32个吡咯里西啶类生物碱（PAs）的液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对紫草药材及含款冬花和紫草的中成药制剂中的PAs成分进行鉴定和含量分析。方法 药材和中成药制剂经提取后用阳离子交换固相萃取小柱净化富集;富集后的样品采用Phenomenex Prodigy 5μ ODS3 100A色谱柱（150 mm×3.2 mm,5 μm）梯度洗脱后,使用电喷雾离子源、正离子多反应监测模式进行检测。结果 14种含款冬花的中成药制剂所含PAs主要为克氏千里光碱,PAs的总检出量为0.059~5.330 μg·g^–1或μg·mL^–1,按药品说明书计算的PAs日摄入量为2.24~95.92 μg;紫草药材主要含有蓝蓟定、石松胺、印美定及其氮氧化物等PAs,8批药材的PAs总检出量为0.60~140.69 μg·g^–1;在10种含紫草的中成药制剂中,PAs日摄入量为0.38~25.20 μg。结论 大多数紫草药材PAs含量相对较低,有望通过控制紫草药材中PAs含量,使含紫草的中成药制剂中PAs含量满足欧盟限量要求;而对于含款冬花的中成药制剂中,大多数（8/14）PAs检出量超过了欧盟限量的10倍,提示含款冬花的中成药制剂有必要开展克氏千里光碱的质量控制及其摄入所致的潜在安全风险评价。