六安地区结核分枝杆菌耐药基因katG 和rpoB 的突变特征

目的 分析临床分离的结核分枝杆菌katG 和rpoB 基因的突变情况与耐药之间的关系,了解六安地区耐药结核分枝杆菌的基因突变特征。方法 采用比例法对六安地区65 株结核分枝杆菌临床分离株进行药敏试验;通过特异性引物,对目的基因片段katG 和rpoB 进行扩增、测序后进行分析。结果 60 株结核分枝杆菌中分别有有9 株耐异烟肼和14 株耐利福平,其中同时耐异烟肼和利福平的6株。9 株耐异烟肼菌株中,4 株katG 在315（Ａ GC→ACC 或ACA）位点发生突变,占44.4％;14 株耐利福平菌株中,11 株rpoB 分别在516（GAC→GTC）、526(CAC→CGC 或TAC)和531(TCG→TTG)位点发生突变,占总耐药菌株的78.6％;6 株同时对利福平和异烟肼耐药,其中5 株katG 或rpoB 基因发生突变,占83.3％。结论 六安地区结核分枝杆菌耐异烟肼和耐利福平分别主要是由katG 和rpoB 基因突变引起,其中耐异烟肼主要在315（AGC→ACC 或ACA）位,而耐利福平在516（GAC→GTC）、526(CAC→CGC或TAC)和531(TCG→TTG)位,都发生了突变。     

对利福平耐药的结核分枝杆菌rpoB基因突变与耐药程度关系的探讨

目的　探讨对利福平耐药结核分枝杆菌的rpoB基因的突变位置与耐药程度的关系。方法　 32株对5 0 μg·mL-1的利福平耐药 (R5 0 )、2 2株对 2 5 0 μg·mL-1的利福平耐药 (R2 5 0 )、10株对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素敏感的结核分枝杆菌株 (R0 )和 1株H3 7Rv结核分枝杆菌株包括核心区域在内的rpoB基因片段进行了DNA序列分析。结果　 (1) 10株 (R0 )对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素敏感的结核分枝杆菌株和 1株H3 7Rv结核分枝杆菌株未检测到rpoB基因易突变区的改变 ;(2 )耐利福平的低耐药 (R5 0 )结核分枝杆菌突变 2 5株 (78 1% ) ;耐利福平的高耐药 (R2 5 0 )结核分枝杆菌突变 2 1株 (95 5 % ) ,两者差异无显著性 (P =0 170 ) ;(3)耐利福平的低耐药 (R5 0 )结核分枝杆菌突变点呈散在分布 ;(4 )耐利福平的高耐药 (R2 5 0 )结核分枝杆菌突变以 5 31位氨基酸突变为主 (5 7 1% )以及联合突变较多见 (2 3 8% ) ,与R5 0相比两者差异有显著性。结论　大部分对利福平耐药的结核分枝杆菌均有rpoB基因突变。在对利福平低耐药结核分枝杆菌的rpoB基因中 ,其突变位置呈散在分布。在对利福平高耐药结核分枝杆菌的rpoB基因中 ,5 31位密码子突变及多个密码子联合突变是其主要突变特征。     

耐多药结核分枝杆菌基因突变分析

目的对临床分离的耐多药结核分枝杆菌株进行基因突变分析。方法对耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株进行耐药基因的PCR检测,利用基因序列测定方法分析耐药基因突变情况。结果从耐多药结核病（MDR-TB）患者临床分离菌株中快速检测到rpoB、katG、rpsL、embB基因及其突变。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测rpoB基因点突变,突变位点主要为第516、526和531常见密码子,1例MDR-TB出现第479位和第531位密码子同时突变。耐多药菌、全耐菌及单耐异烟肼的菌株均检测有katG基因点突变,突变位点均为第2066位碱基C突变为Go全耐菌和对乙胺丁醇（EMB）耐药的耐多药菌株均检测有embB基因点突变,突变位点均为第306位密码子ATG突变为ACG。全耐菌和对链霉素（SM）耐药的MDR-TB菌株均检测有rpsL基因点突变,突变密码子为CCT突变为CTT,其中从1株对SM敏感的MDR-TB中也检测到突变。全敏感株、标准株及利福平（RIF）、异烟肼（INH）或EMB敏感的耐药株均无rpoB、katG或embB基因突变。结论PCR及基因序列测定可快速检测耐多药结核基因,结核分枝杆菌耐多药性与多个基因突变相关。     

耐利福平作为筛选耐多药结核病指标的评估

目的探讨耐利福平作为耐多药结核病筛选指标的可行性。方法对结核分枝杆菌临床分离株采用美国BD公司BACTEC MGIT 960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪进行药敏试验,并对数据进行分析。应用诊断性试验评价指标评价耐利福平作为耐多药结核病筛选指标的科学性。结果在621株结核分枝杆菌临床分离株中,177株对利福平菌耐药,其中172株至少同时对异烟肼耐药,结核分枝杆菌的耐多药率为27.7%。若以至少同时耐异烟肼和利福平作为诊断MDR-TB的参考标准,以耐利福平作为MDR-TB筛选指标的敏感性为100%、特异性为98.9%、准确度为99.2%、阳性预测值为97.2%、阴性预测值为100%、阳性似然比为34.4、阴性似然比为0。结论我市耐多药结核病发生率高;耐利福平可以作为耐多药结核病的初步筛选指标。     

耐药基因检测在预测肺结核患者预后中的作用

目的 运用GenoType MTBDRplus线性探针法鉴定结核分枝杆菌耐药情况,与传统药物敏感试验进行比较,评估其在预测耐药结核患者预后中的作用.方法 收集浙江省诸暨市人民医院2011年2月到2012年1月基线痰涂片阳性的肺结核患者标本275份,进行结核分枝杆菌的分离培养及药物敏感试验.同时采用GenoType MTBDRplus线性探针法检测异烟肼及利福平耐药情况.对所有入组结核患者进行随访,包括痰培养和胸部X线片.结果 GenoType MTBDRplus线性探针法和传统药物敏感试验均为耐药者有192株.传统药物敏感试验发现14株耐多药菌株,21株异烟肼单耐药株和2株利福平单耐药株,而GenoType MTBDRplus线性探针法分析结果分别为14、18和2株.以传统药物敏感试验作为金标准,线性探针分析利福平耐药性一致;21株耐异烟肼株中,5株未检测出.GenoType MTBDRplus线性探针法检测耐药的患者中,131株敏感菌治疗成功10例,占84.0％;15株异烟肼单耐药、11株多重耐药株中,治疗成功分别有9例和3例.2例单耐利福平,其中1例治愈,1例失败.分子耐药检测对异烟肼单耐药患者治疗失败的预测值为40.0％;对异烟肼敏感患者治疗成功的预测值为83.5％;对利福平单耐药患者治疗失败的预测值为50.0％,对利福平敏感患者治疗成功的预测值为81.5％;对耐多药结核患者治疗失败的预测值为72.7％,对非耐多药患者治疗成功的预测值为81.1％.结论 GenoType MTBDRplus线性探针法是检测结核分枝杆菌耐药性的一项快速、可靠的方法,其耐药检测结果可用于临床耐药结核预后的预测.     

结核分枝杆菌异烟肼耐药性——一个不容忽视的问题

异烟肼是控制结核病的主要药物之一。2018年WHO报告的结核病初治病人中利福平敏感的异烟肼耐药率明显高于2017年的耐多药/利福平耐药率。我国结核病人的异烟肼总耐药率明显高于利福平总耐药率。异烟肼耐药容易导致治疗失败或复发。异烟肼耐药机制复杂,多个基因的突变均与异烟肼耐药有关,然而这些基因突变与表型的关系尚未完全清楚,直接影响了分子药敏快速诊断方法的建立。基因组学数据证明异烟肼耐药相关基因突变先于利福平耐药性相关基因突变发生。异烟肼耐药结核分枝杆菌容易诱发菌株获得额外耐药性,其机制可能与外排泵以及氧化应激机制有关。总之,结核分枝杆菌异烟肼耐药问题不容忽视,因此应该加强异烟肼作用机制、耐药机制、协同作用机制等方面的研究。     

耐多药结核病流行与控制

一、概念单耐药(monoreslstance):结核病患者感染的结核分枝杆菌对一种以上的一线抗结核药物耐药。多耐药(polyresistance):结核病患者感染的结核分枝杆菌对一种以上的一线抗结核药物耐药(不包括同时耐异烟肼、利福平)。耐多药(multidrugresistance):结核病患者感染的结核杆菌至少对异烟肼、利福平耐药。     

基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价

目的评价基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床应用效果。方法利用基因芯片技术对涂阳肺结核患者的痰标本和临床分离株进行利福平和异烟肼耐药基因位点检测,比较痰标本与菌株检测结果的差异;并以BACTEC MGIT 960药敏试验结果为对照评价基因芯片的检测性能。另外,通过对999株鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株进行rpoB、katG和inhA基因耐药相关区域扩增产物测序,以验证基因芯片对核酸序列检测的准确性。结果在涂阳的1 108例标本中有100例经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌。其余的1 008例痰标本基因芯片结果与BACTEC MGIT960培养阳性的菌株基因芯片结果比较仅有9例结果不一致,符合率为99.1%。以BACTEC MGIT960培养法药敏结果为对照,999株菌株基因芯片法检测利福平耐药性的符合率为98.1%,异烟肼的耐药性的符合率为94.5%。与DNA测序法相比,基因芯片法检测利福平和异烟肼耐药性的准确率分别为99.6%和99.8%。结论基因芯片技术能够快速、准确地进行结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性检测,并能直接用于痰标本检测。     

北京地区耐多药结核分枝杆菌抗性相关基因突变频率的评价

目的探讨北京地区耐多药结核分枝杆菌(MDRMTB)中与异烟肼(INH)和利福平(RFP)抗性相关基因突变的分布和频率。方法对173株MDR-MTB菌株中和INH耐药相关的基因katG、inhA和inhA启动子区,和RFP耐药相关基因rpoB进行测序分析;并对全部MDR-MTB菌株进行基因分型,对不同基因型菌株中抗性相关基因突变的比例进行分析。     

19952004年芬兰耐药结核分枝杆菌分离株分子基因学分析

背景：利用现代分子生物学来帮助我们理解结核分枝杆菌的传播和流行病学机理。目的：分析耐药结核分枝杆菌分子流行病学和1995--2004年芬兰耐异烟肼及利福平相关突变菌株。设计：对3959株新结核分枝杆菌菌株进行了药物敏感性试验，如有必要，所有的耐药性表型菌株都进行了IS6110限制性片段长度多态性和间隔寡核苷酸分型分析。对耐异烟肼及利福平菌株分别进行了katG315位密码子和rpoB耐性基因测序。结果：在测试的3959（92．4％为培养阳性）株分离株中，183个（4．6％）对至少一种一线抗结核药耐药；14（0．4％）株为耐多药。37株（20．4％）耐性菌株属于17个簇，其中最大的簇包括4个分离株。北京家族占所有耐药菌株的8．8％（16株）。在异烟肼耐药菌株中，katG的Ser315Thr突变占46．7％（56株）；在利福平耐药菌株中rpoB突变占85．7％（18株）。结论：耐药结核病在芬兰传染率很少，尤其在本地和外来人口间。如果存在产生耐多药的危险因素，筛查异烟肼和利福平耐药相关突变是可行的。     

广州地区5年间耐多药结核分枝杆菌药物敏感试验结果分析

目的总结耐多药结核分枝杆菌药物敏感试验结果,为制定耐多药治疗方案提供依据。方法回顾分析过去5年广州市胸科医院收治的肺结核患者,其中痰液培养结核分枝杆菌药物敏感性试验结果为耐多药的菌株共605株,按年度和除异烟肼和利福平外的其他抗结核药物的种类进行统计,比较分析,分析各种抗结核药物的耐药率以及对比五年间耐药率的变化情况。结果阿米卡星的耐药率16.86%,克拉霉素的耐药率12.89%,对氨基水杨酸异烟肼的耐药率25.29%。乙胺丁醇的耐药率63.64%,链霉素的耐药率87.27%和利福布汀的耐药率73.06%。左氧氟沙星的耐药率41.15%,莫西沙星的耐药率40.49%,丙硫异烟胺的耐药率42.81%。结论在广州地区中,阿米卡星、克拉霉素和对氨基水杨酸异烟肼的耐药率比较低。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药相关基因突变研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与GeneBank中结核分枝杆菌标准序列进行比较。结果(1)耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,81株耐药株(80.2%)katG存在点突变、缺失或插入,其中16个突变位点未见报道;39株(38.6%)耐药株第315位点突变,低耐药菌株(1μg/ml)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10μg/ml;χ2=9.31,P<0.05);58株(57.4%)耐药株第463位点突变。23株(53.3%)敏感株第463位点突变。(2)5株(4.9%)耐药株inhA发生突变。敏感株inhA无突变。(3)3株(2.9%)耐药株ahpC发生突变。敏感株ahpC无突变。(4)17株(16.8%)耐药株kasA发生突变。敏感株中3株菌株Gly312Ser突变。(5)在全部菌株中未发现oxyR基因突变。(6)综合本项研究中各基因的突变情况,共有91株耐异烟肼菌株发生与异烟肼耐药相关的突变。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG、inhA、ahpC及kasA基因突变之间的关系,并且提示还有其他机制参与异烟肼耐药。     

388例患者结核分枝杆菌耐药情况分析

目的回顾性分析陕西省结核病防治院肺结核病人中结核分枝杆菌耐药状况并分析耐药形成原因。方法分析2008年分离培养388株结核分枝杆菌药物敏感试验结果,包括异烟肼（H）,利福平（R）,盐酸乙胺丁醇（E）,硫酸链霉素（S）。结果 388株结核分枝杆菌中,至少耐一种药物耐药率为64.43%,同时对4种药物耐药率为4.12%,耐多药率为10.31%。结论结核病人耐药情况比较严重,需要更严格执行结核病控制策略,防止耐药病人及耐药菌株的产生和传播。     

国产试剂检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药基因临床价值的探讨

目的比较进口试剂和国产试剂在检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药基因差异,探讨国产试剂的临床使用价值方法 152株经罗氏培养阳性的菌株,分别用德国Hain life science Gmb H生产的Geno TypeMTBDRplus、亚能生物技术(深圳)有限公司生产的基因探针试剂检测利福平、异烟肼耐药基因,并与传统的药敏结果作比较。结果 152例菌株中有148株纳入比较,其中进口试剂、国产试剂和罗氏培养法对利福平、异烟肼耐药的检出率分别为47.30%(70/148),43.24%(64/148);50%(74/148),41.89(62/148);48.65%(72/148),47.30%(70/148),国产试剂与进口试剂、罗氏培养法相比,对利福平、异烟肼耐药检出率均无统计学差异(P0.05).以罗氏培养的药敏结果为金标准,国产试剂和进口试剂对利福平、异烟肼耐药的检出敏感性和特异性均无统计学差异(P0.05)。结论国产试剂检测异烟肼和利福平耐药的敏感性与特异性与进口试剂相接近,且操作简便,价格便宜,适合基层医院对结核分枝杆菌耐药性的快速检测。     

耐利福平结核分枝杆菌30株对利福喷丁的药敏试验

利福喷丁 (RFT)为利福平 (RFP)的环戊衍生物 ,又名环戊基哌嗪利福霉素 ,理论上与利福平有交叉耐药。我们对 30例株耐利福平结核分枝杆菌进行利福喷丁药敏试验 ,结果如下。1.菌株来源30株结核分枝杆菌菌株由本院细菌室提供 ,取自 2 0 0 0年1月至 2 0 0 1年 3月 30例患者痰标本 ,经改良罗氏培养基培养阳性为耐利福平菌株 ,鉴定为人型结核分枝杆菌 ,其耐药浓度为目前国家暂行规定的 5 0 ug～ 2 5 0 ug/ ml[1 ] 。30例患者在治疗期中 ,均有 RFP用药史 ,用药时间 3个月至 1年。但无 RFT用药史。2 .材料与方法(1)该试验用 RFP及 RFT均为原…     

耐多药结核病——预防和控制的关键步骤

<正>耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)被定义为,由至少对异烟肼(isoniazid)和利福平(rifampicirn)治疗耐药的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的疾病。广泛耐药结核病(extensively drug-resistant,tuberculosis,XDR-TB)是指导疾病的多重耐药菌株还对使用任     

结核分枝杆菌耐异烟肼菌株与敏感菌株的比较蛋白质组学研究

目的研究结核分枝杆菌耐异烟肼菌株与敏感菌株间蛋白质表达的差异。方法应用双向电泳技术比较9株耐异烟肼菌株与7株敏感菌株的全菌蛋白表达图谱，采用基质辅助激光解吸及电离飞行时间质谱仪进行质谱分析，通过蛋白质数据库对耐药菌株和敏感菌株差异表达蛋白质相应的基因进行序列分析。结果耐异烟肼结核分枝杆菌中有20个蛋白质斑点表达量显著增加，质谱分析获得5个明确的肽质量指纹图谱，分别为Rv1446c、Rv3028c、Rv0491、Rv2971和Rv2145。结论差异表达蛋白的发现可能对新型抗结核药物靶点和耐异烟肼结核病诊断的分子标志物研究提供依据。     

利用荧光偏振技术检测耐异烟肼结核分枝杆菌KatG 315点突变

目的 应用模板指导的荧光染料终止物掺入反应-荧光偏振检测技术(templatedirected dye-terminator incorporation with fluorescence polarization detection，TDI-FP)分析结核分枝杆菌KatG 315点突变与异烟肼耐药性的关系，并建立一种准确、快速的诊断结核分枝杆菌异烟肼耐药性的新方法。方法 对临床82例耐多药结核病患者所感染的结核分枝杆菌菌株进行常规培养和药敏实验；提取结核分枝杆菌DNA，并经聚合酶链反应(PCR)扩增271bp的KatG基因片段，PCR产物经消化处理清除残余dNTPs和引物，进行TDI反应，应用Victor2测定荧光偏振值，分析所有样品的KatG基因315位点的基因型。结果 29例异烟肼高度耐药患者的结核分枝杆菌中有15例发生KatG 315的G→C突变，其中4例为KatG 315突变和未突变的混合感染，突变率为52％；32例异烟肼低度耐药患者的结核分枝杆菌中有15例为KatG 315突变和未突变的混合感染，突变率为47％；21例异烟肼敏感患者的结核分枝杆菌未发现KatG 315突变。结论 KatG 315突变与结核分枝杆菌对异烟肼产生耐药性密切相关；应用TDI-FP技术检测KatG 315突变具有准确、快速、简便以及高通量等优点，在结核分枝杆菌耐异烟肼的临床诊断中有着广阔的应用前景。     

124例耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析

目的对临床分离的耐多药结核分枝杆菌相关基因的突变特征进行分析。方法对124例耐多药结核分枝杆菌以及50株敏感株的耐药相关基因(包括异烟肼inh A、kat G、oxyR-ahp C间隔区以及利福平rpo B)进行序列测定,分析其基因突变情况。结果异烟肼耐药inh A基因突变率为14.5%;kat G基因突变率为70.2%(87/124),主要位于315位;oxyR-ahp C间隔区突变率为15.3%;inh A、kat G两种基因同时突变率75.0%,三种基因同时突变率为89.5%。利福平rpo B基因突变的检出率高达95.2%,突变主要发生在531、526、516位点。结论我省耐多药菌异烟肼耐药相关基因最常见突变为kat G 315、inh A C-T(-15)、axyR-ahp C间隔区(-10)C-T,利福平为rpo B531、526、516。结合MDR-TB耐药相关基因的特征分析,可以建立一种快速、准确、特异的适合于我省的检测结核菌耐多药性的新方法。     

结核耐药基因rpoB/katG/inhA早期筛查MDR-TB的临床研究

目的评估结核耐药基因rpo B/kat G/inh A筛查耐多药结核的可行性及临床意义。方法对2016年1月至2017年5月我科住院的228例肺结核患者分别采用结核耐药基因检测法和改良罗氏培养比例法检测利福平、异烟肼是否耐药,比较两种检验方法诊断的一致性。结果以改良罗氏培养比例法为金标准,228例患者中结核耐药基因检测法利福平耐药的灵敏度为88. 24%,特异度为97. 63%,异烟肼耐药的灵敏度为92. 31%,特异度为99. 01%。两法有较高的一致性(无统计学差异)。结论结核耐药基因rpo B/kat G/inh A可早期、快速、准确检测利福平、异烟肼的耐药性,可作为耐多药结核早期筛查的方法,对结核病防与治有重要意义。