反义与正义HSP70mRNA真核表达载体的构建

生物细胞在受热或其它理化因素(如乙醇、氨基酸类似物、DNA损伤、缺氧、重金属离子、病毒感染、胞内出现变性、结构改变蛋白质等)应激时,可启动热休克基因,合成热休克蛋白(heat shock proteins,HSP).按分子量大小,HSP分成五大家族.在大多数生物中,HSP_(70)系含量最多的HSP.HSP70具有     

热休克蛋白对心脏的保护作用

热休克蛋白(heart shock protein,HSP)是由应激反应诱导而产生的一组蛋白质。HSP按分子量的大小以及同源程度可分为HSP90、HSP70、小分子HSP70及泛素4个家族。在非应激状态下,HSP有一定的基础表达,在应激状态下,HSP可迅速合成并成倍增加,以帮助维护细胞正常的新陈代谢及结构完整。HSP可被多种刺激物诱导,如高温、缺血缺氧、压力负荷、氨基酸类似物、重金属离子、氧自由基、病毒感染等。     

热休克蛋白60与冠状动脉病变的联系及经皮冠状动脉介入治疗前后的变化

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）又称应激蛋白（stressprotein）,是一组具有重要生理功能、进化上高度保守的蛋白质分子家族,根据分子量大小和同源程度可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP和泛素等。HSP60作为热激蛋白的重要家族,已成为研究的热点,新近国外报道有致动脉粥样硬化作用,并能促进炎症反应释放各种细胞因子从而引起粥样斑块不稳定。     

热激蛋白对高血压及其内皮细胞的影响

热激蛋白,也称热休克蛋白(HSP),是一种分子伴侣,进化中高度保守,广泛存在于真核及原核生物中。高血压与血管内皮细胞(VEC)功能有关,近年来发现HSP可通过多种途径影响VEC的功能,从而影响血压。本文简述HSP与血管内皮功能、高血压之间的关系,探讨HSP在高血压方面的意义。1HSP的生物学特性1.1基本特性HSP存在于细胞的胞质、内质网和线粒体中,在热应激环境中诱导合成。创伤、饥饿、缺血、低氧、病毒感染及大多数病理状态下都能诱导细胞产生HSP。各种生物体细胞分泌的HSP结构相似,根据其相对分子量大小将其分为不同亚族,分子量从1000…     

慢性乙型肝炎肝组织中主要热休克蛋白的表达及意义

热休克蛋白(HSP)广泛存在于原核、真核细胞中,能保护细胞并促进细胞在各种刺激所造成损伤后自我修复,调节靶蛋白的活性和功能。以及免疫组织化学法对慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织中HSP27、HSP70和HSP90α的表达进行了检测,应用免疫组织化学双重染色技术对HSP70/HBcAg和HSP90α/HBcAg进行了检测,并探讨其意义。     

热休克蛋白异常表达与肝细胞癌变机制的研究进展

热休克蛋白（heatshockprotein，HSP）是细胞受到各种理化因素如病毒感染、氨基酸类似物、缺氧等刺激后诱导合成的蛋白质。按分子量和结构分为HSP60、HSP70、HSP90等家簇，其功能是在应激状态下保护细胞生命活动必需的蛋白质以维持细胞的生存，与具有不同功能的多种蛋白质在细胞中形成复合体，并通过其形成和解离而参与有关蛋白的折叠、亚基组成、细胞内运输及降解等过程，     

热休克蛋白27与肿瘤的研究进展

热休克蛋白(1aeat shock protein,HSP)又称应激蛋白,是指细胞在应激原特别是高温环境下所产生的一组序列高度保守的蛋白质,广泛存在于原核和真核生物中,应激状态下可被诱导表达.HSP家族作为"分子伴侣"参与蛋白质的折叠、装配和修饰,使其维持正常的蛋白空间结构,增强细胞对应激的耐受性.     

热休克蛋白对动脉壁的病理生理学意义

热休克蛋白（heatshockproteins，HSP）是由20余种蛋白质组成的蛋白质家族的总称。从原生细胞、动物到人类，不同种属的HSP的氨基酸序列具有高度同源性［1］。根据HSP分子量不同，分为HSP90（分子量90kDa）、HSP70（分子量70kDa）、HSP60和小分子量的HSP族。由于不同种属INHSP的氨基酸序列具有高度同源性，宿主对病原体的HSP和对自身的HSP可产生交叉免疫反应，因此HSP具有抗原性。某些疾病，如动脉粥样硬化（atherosclerosis，As），系统性硬化症等与HSP的抗原性有关[2]在各类HSP中，对哺乳动物的HSP70的研究最为广泛。…     

HBsAg与结核杆菌热休克蛋白70融合质粒在真核细胞中的表达

目的 探讨HBsAg与结核杆菌热休克蛋白（70（Mt.HSP70)融合表达质粒在真核细胞中的表达。方法 用真核表达质粒pCI-neo作为载体构建HBsAg及其与Mt.HSP70的融合表达质粒（pCI-S,pCI-S-HSP70)；用脂质体介导的转染法将重组质粒转染HepG2细胞，48h后，采用RT－PCR，免疫细胞化学和ELISA检测重组质粒在HepG2细胞中的表达。结果 质粒pCI-S和pCI-S－HSP70转染的HepG2细胞总RNA用RT－PCR可检测到目的基因mRNA的表达；pCI-S和pCI-S－HSP70转染的HepG2细胞用免疫细胞化学检测，结果显示在胞浆及核周有大量的阳性颗粒；ELISA检测pCI-S转染的细胞培养上精液HBsAg为阳性，而pCI-S－HSP70转染的细胞培养上清液HBsAg为阴性；在细胞裂解液中，二者转染的细胞均为阳性。结论 HBsAg与Mt.HSP70的融合表达质粒可在HepG2细胞中表达，但表达的融合蛋白不分泌出细胞外。     

人消化道癌组织HSP70的检测及其多肽复合物的分离研究

目的 分析人消化道癌组织蛋白表达谱的差异并分离纯化食管癌组织中HSP70-多肽复合物.方法 提取人食管、胃及大肠的癌组织、癌旁组织和正常组织的蛋白质,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行电泳分析;同时以食管癌组织为材料,通过层析柱分离纯化HSP70-多肽复合物.结果 相同器官的不同组织中不同分子量蛋白的种类基本一致,但丰度则表现出差异;同时分离到食管癌细胞的HSP70-多肽复合物.结论 不同分子量的蛋白质在不同组织中表达的丰度不同,可能与组织细胞生命活动状态相关.HSP70-多肽复合物的分离为提取肿瘤HSPT0-多肽复合物提供了具体方法,为深入研究和利用HSP70蛋白奠定了基础.     

大鼠脑缺血再灌注损伤中星形胶质细胞活化与热休克蛋白70表达上调的关系

业已证实 ,脑缺血性损伤可诱导热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达上调。HSP70作为分子伴侣参与了细胞修复过程 ,在脑缺血损伤中具有神经保护作用。以往认为 ,HSP70主要由神经元及小胶质细胞产生 ,近年来研究发现 ,脑缺血时 ,活化的星形胶质细胞也可表达HSP70。但有关二者关系的报道极少 ,我们观察了可逆性大脑中动脉阻塞后再灌注不同时点HSP70与星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达变化 ,初步探讨二者在脑缺血再灌注损伤中的关系及意义。　　一、材料和方法　　 1 动物分组 :健康雄性Sprague Dawley大鼠共 4 2只 ,体重 2 …     

粉尘螨 HSP16-1 原核表达体系构建与温度应激响应功能鉴定

目的 建立原核表达体系,在蛋白水平确认粉尘螨 HSP16-1 蛋白的温度应激响应功能。 方法 基于前期RNA-seq 获得的粉尘螨 HSP16-1 基因序列,设计特异性引物,PCR 扩增克隆测序;利用生物信息学软件,分析理化性质,预测亚细胞定位和三维结构;通过构建 pET32a / HSP16-1 原核表达质粒,转化大肠杆菌感受态细胞 BL21;采用 1 mmol / L IPTG 在 16、28 和 37 ℃ 三个温度诱导 HSP16-1 重组蛋白表达,分别在 2、4、6 和 8 h 取样进行 SDSPAGE 分析;绘制热胁迫和冷胁迫下重组菌与空载菌生长曲线。 结果 测序获得粉尘螨SP16-1 完整 CDS 为462 bp,编码 153 个氨基酸;BLAST 比对显示粉尘螨与近缘物种屋尘螨核苷酸和氨基酸序列相似度分别为 84. 63%和 87. 58%;亚细胞定位在细胞核;保守区预测含有 α 晶体 HSP23 超家族保守区。 菌落 PCR 及双酶切鉴定 pET32a /HSP16-1 重组质粒构建成功。 SDS-PAGE 分析显示,HSP16-1 蛋白被成功诱导表达,37 ℃ 诱导 6 h 是最佳诱导条件。 细菌生长曲线显示,pET32a / HSP16-1 重组菌在热胁迫下的生长均优于 pET32a 空载菌,而冷胁迫下则相反,空载菌生长要优于重组菌。 结论 粉尘螨 HSP16-1 蛋白仅在热胁迫下发挥应激响应功能,而在冷胁迫未表现出相似的功能。     

人肾小球足细胞表达Nephrin的体外研究

目的：观察人足细胞在体外表达Nephrin的分子量大小、细胞内分布。方法：体外培养人肾小球足细胞，采用间接免疫荧光法、免疫蛋白印迹研究原代培养人足细胞表达Nephrin的分布、蛋白质的分子量，逆转录PCR(RT-PCR)法检测Nephrin的mRNA表达等，RT-PCR产物进行序列分析加以确定。结果：体外原代培养的人足细胞可以表达Nephrin，间接免疫荧光显示其沿足细胞的细胞膜、细胞骨架和细胞核分布，并且在细胞内有一聚集中心。免疫蛋白印迹示人足细胞表达2种分子量的Nephrin，其中135kD的分子量与预期分子量一致，180kD的分子量与肾小球蛋白提取物一致，RT-PCR从基因水平确定了该蛋白的表达。结论：人足细胞在体外培养的条件下表达不同分子量的Nephrin，并且在细胞内分布具有一定的规律，为进一步研究其在自身细胞和肾脏病中的作用提供了可靠的实验方法。     

热休克蛋白70减轻帕金森病细胞模型中α-突触核蛋白毒性的作用

目的 探讨HSP70在因α-突触核蛋白过表达或突变所致的帕金森病(PD)细胞模型中的作用及其机制.方法 构建过表达野生型和PD相关突变型(A53T)α-突触核蛋白质粒,转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞后得PD细胞模型;然后在细胞模型中转染表达HSP70的质粒.采用免疫印迹检测转染HSP70细胞模型中α-突触核蛋白表达量的改变;采用MTT法检测转染HSP70后细胞模型活力的变化.结果 转染HSP70后,细胞模型α-突触核蛋白表达减少,细胞活性增加.结论 HSP70通过降低α-突触核蛋白表达水平对PD细胞模型发挥保护作用.     

热休克蛋白27抗细胞凋亡的分子机制

热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)是存在于细胞内的一种主要分子伴侣，在生理和应激条件下均能表达。它们是在结构上拥有高度保守晶体蛋白序列的一组多肽，按分子量可以分为HSP100、HSP90、HsP70、HSP60和分子量为20000～30000的小分子量HSPs(small HSPs，sHSPs)、泛肽等几个亚家族。HSP25／27(啮齿动物25000，     

沉默热休克蛋白70-2基因经线粒体依赖通路介导肝癌细胞凋亡

目的 探讨沉默热休克蛋白(HSP)70-2对肝癌细胞生长、凋亡的影响,以及诱导肝癌细胞凋亡的详细作用机制. 方法 Westem blot、免疫细胞化学法检测HSP70-2在4种肝癌细胞和正常肝细胞中的表达.设计合成针对HSP70-2基因的特异性短发夹状RNA(shRNA),构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70-2 shRNA2.转染肝癌细胞后,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖,膜联蛋白/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡情况,罗丹明染色检测细胞线粒体跨膜电位变化,Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶、caspase-3、caspase-9蛋白切割情况,以及细胞色素C、Bax,Bcl-2蛋白的表达变化. 结果 HSP70-2在4种肝癌细胞中均高表达,在L02细胞中仅有微量表达.HSP70-2 shRNA1、shRNA2均能有效抑制肝癌细胞中HSP70-2的表达.沉默HSP70-2基因显著抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,转染48 h后,shRNA1和shRNA2诱导HepG2细胞的凋亡指数分别为55.8%±1.8%和57.1%±1.6%,诱导Huh细胞凋亡指数分别为54.9%±1.1%和60.2%±2.6%,与对照组相比,差异均有统计学意义,P值均＜0.01.转染HSP70-2 shRNA 48 h后,肝癌细胞线粒体跨膜电位显著下降,细胞色素C从线粒体释放到胞质中,caspase-3、caspase-9激活,多聚ADP核糖聚合酶被剪切降解,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax表达明显增加.结论 沉默HsP70-2能通过激活线粒体凋亡通路导致肝癌细胞凋亡.     

HSP70在颅脑损伤后的神经保护作用研究进展

细胞在受到各种应激刺激（高温、缺血、缺氧、损伤、感染等）时产生应激性反应,诱导一些高度保守蛋白的合成,其中一类最先在热休克的果蝇体内合成后发现,因而称为热休克蛋白（HSP）.HSPs被认为是损伤后脑组织产生的一种重要的内源性保护蛋白,它对于维持细胞的正常生理机能,提高对应激损伤的耐受性以及对损伤细胞的修复和保护有重要意义.HSP70是HSP家族中最保守和最主要的一类,在细胞应激反应后合成最为显著.近年来,大量研究证实,HSP70在哺乳类动物脑损伤后迅速诱导产生,对机体和脑部都有明显的保护作用.HSP70在脑损伤后的神经保护作用是当今神经生物学的研究热点之一,现将近年来有关HSP70对颅脑损伤后神经元的保护作用及机制综述如下.     

HSP70,HSP90在结肠癌中表达及其和生物学行为的相关性

目的:探讨HSP70,HSP90在人结肠癌中的表达情况及其和结肠癌细胞生物学行为的相关性.方法:结肠癌患者手术标本40例,分别以癌组织、癌旁2cm组织和远离癌灶的正常黏膜组织作为病例组和对照组.用亲和免疫组织化学技术方法检测HSP70和HSP90,并收集该40例患者的临床Duke's分期,分析HSP70和HSP90蛋白的阳性程度和结肠癌临床分期是否存在相关性.结果:癌组织HSP70和HSP90的表达明显增高,癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织三组之间HSP70和HSP90表达率有明显差异(HSP70:82.5%vs52.5%vs25%,χ2=26.58,P=0.000;72.5%vs42.5%vs22.5%,χ2=20.41,P=0.000);HSP70和HSP90蛋白的阳性程度和结肠癌临床分期存在相关性(HSP70:tau_b=0.392,P=0.006;HSP90:tau_b=0.396,P=0.006).结论:结肠癌细胞存在HSP70和HSP90蛋白的过度表达,HSP70,HSP90和结肠癌细胞的生物学行为存在相关性.     

热休克蛋白70系列与应激性溃疡之间的相互关系

生物细胞在受到各种理化因素刺激后,可以产生一系列的应激反应,诱导热休克蛋白(heat shock protein,HSP)表达.在众多的HSP中,HSP70家族是生物进化过程中最为保守也是目前人们研究最多的一组蛋白.应激可以诱导机体胃黏膜的损伤并可以降低胃黏膜的屏障保护作用,进而导致应激性溃疡的产生,同时加速热休克蛋白的合成,而热休克蛋白反过来又可预防应激性溃疡的发生,抑制胃黏膜细胞凋亡,促进胃溃疡的愈合.本文综述了主要的热休克蛋白分子的分类、调节以及在应激性溃疡中的表达和应用,并简要论述了通过诱导热休克蛋白表达而作为胃黏膜保护剂的几种药物.     

pEGFP-C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选

目的 构建表达热休克蛋白27( HSP27)的携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核载体,建立稳定表达HSP72的人胰腺癌SW1990细胞株.方法 采用RT-PCR法从SW1990细胞中扩增出带有BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位点的HSP27基因片段,插入真核表达载体pEGFP-C1,鉴定正确后用重组质粒转染SW1990细胞,并筛选稳转细胞株.荧光显微镜观察HSP72的定位,RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染细胞HSP27的表达.结果 双酶切法鉴定和测序证实重组载体pEGFP-C1 -HSP27的DNA序列完全正确,并成功转染SW1990细胞,筛选获得稳转细胞株.荧光显微镜见EGFP主要分布在胞质中,转染细胞的HSP27mRNA表达明显增加(1.458±0.160比0.897 ±0.051,P＜0.05),且表达HSP27与EGFP的融合蛋白.结论 成功构建真核表达载体pEGFP-C1-HSP27,并筛选获得稳转的细胞株.