粉尘螨 HSP16-1 原核表达体系构建与温度应激响应功能鉴定

目的 建立原核表达体系,在蛋白水平确认粉尘螨 HSP16-1 蛋白的温度应激响应功能。 方法 基于前期RNA-seq 获得的粉尘螨 HSP16-1 基因序列,设计特异性引物,PCR 扩增克隆测序;利用生物信息学软件,分析理化性质,预测亚细胞定位和三维结构;通过构建 pET32a / HSP16-1 原核表达质粒,转化大肠杆菌感受态细胞 BL21;采用 1 mmol / L IPTG 在 16、28 和 37 ℃ 三个温度诱导 HSP16-1 重组蛋白表达,分别在 2、4、6 和 8 h 取样进行 SDSPAGE 分析;绘制热胁迫和冷胁迫下重组菌与空载菌生长曲线。 结果 测序获得粉尘螨SP16-1 完整 CDS 为462 bp,编码 153 个氨基酸;BLAST 比对显示粉尘螨与近缘物种屋尘螨核苷酸和氨基酸序列相似度分别为 84. 63%和 87. 58%;亚细胞定位在细胞核;保守区预测含有 α 晶体 HSP23 超家族保守区。 菌落 PCR 及双酶切鉴定 pET32a /HSP16-1 重组质粒构建成功。 SDS-PAGE 分析显示,HSP16-1 蛋白被成功诱导表达,37 ℃ 诱导 6 h 是最佳诱导条件。 细菌生长曲线显示,pET32a / HSP16-1 重组菌在热胁迫下的生长均优于 pET32a 空载菌,而冷胁迫下则相反,空载菌生长要优于重组菌。 结论 粉尘螨 HSP16-1 蛋白仅在热胁迫下发挥应激响应功能,而在冷胁迫未表现出相似的功能。