JNK/MAPK通路在结核杆菌感染的巨噬细胞凋亡、自噬中的作用机制研究

目的探讨c-Jun N端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在结核杆菌感染的巨噬细胞凋亡、自噬中的作用机制研究。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞建立卡介苗结核分枝杆菌(BCG)细胞感染模型,将BCG感染的RAW264.7细胞使用JNK抑制剂SP600125处理,将细胞随机分为对照组、BCG组、对照+SP600125组、BCG+SP600125组;PCR法检测Bax、Bcl-2、caspase-3表达情况;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色检测各组细胞自噬情况;噻唑蓝法(MTT法)检测各组细胞存活率变化情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞JNK、p-JNK、LC3、Beclin-1、P62蛋白表达变化。结果与对照组相比,BCG组RAW264.7细胞中JNK蛋白及磷酸化表达水平、细胞自噬水平、凋亡率、Bax、caspase-3 mRNA表达水平、LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著升高,细胞存活率、Bcl-2 mRNA表达水平、P62蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与BCG组相比,BCG+SP600125组JNK蛋白及磷酸化表达水平、细胞自噬水平、凋亡率、Bax、caspase-3 mRNA表达水平及LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著降低,细胞存活率、Bcl-2 mRNA表达水平、P62蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论结核杆菌感染可抑制巨噬细胞增殖、诱导巨噬细胞凋亡与自噬,可能与激活JNK/MAPK通路有关。     

间充质干细胞移植干预2-OA/BSA诱导的原发性胆汁性胆管炎小鼠肝内胆管上皮细胞自噬蛋白表达的变化

目的 观察异基因间充质干细胞（MSCs）移植干预原发性胆汁性胆管炎（PBC）小鼠对肝内胆管上皮细胞（IBECs）自噬的调控作用及其分子机制。方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为模型组（n=18）、BSA组（n=6）和未处理组（n=6）。采用2-辛炔酸结合牛血清白蛋白（2-OA-BSA）注射诱导PBC模型。再将PBC模型小鼠随机分为模型组（PBC组,n=4）、MSCs移植干预组（MSCs组,n=6）和转录激活因子3（STAT3）抑制剂干预组（Stattic组,n=6）。采用灌流法分离肝内胆管树纯化IBECs,采用WB法检测IBECs组织STAT3/pSTAT3、p62、LC3、PKR/pPKR、Beclin-1蛋白、eIF2α/peIF2α、LAMP-1表达,采用RT-PCR法检测STAT3、LC3和p62-mRNA,使用电镜观察IBECs内自噬泡形成。结果 模型组肝组织汇管区淋巴细胞浸润并有散在的肉芽肿形成,而MSCs和Stattic干预组小鼠汇管区炎性细胞浸润减少;模型组小鼠IBECs自噬蛋白Beclin-1、STAT3和pSTAT3表达较BSA组增强,而MSCs移植和Stattic干预组上述蛋白表达减弱;模型组和MSCs组p62 mRNA水平较BSA组下降,模型组STAT3 mRNA水平较BSA组下降。结论 我们成功建立了2-OA-BSA诱导的PBC小鼠模型,MSCs移植干预通过下调STAT3表达减轻了PBC小鼠肝组织汇管区损害,可能与调控小鼠体内自噬相关蛋白表达有关。     

针刺通过调节自噬反应对脑卒中大鼠的神经元损伤的影响

目的 探讨针刺通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、UNC-51样自噬激活激酶(ULK)1/2介导的自噬对脑卒中大鼠神经元的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、针刺+5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)组，每组10只，除假手术组其他4组采用中动脉栓塞法构建模型，并给予相应治疗。治疗后24 h,对各组大鼠神经功能缺损程度进行评分。结果 与假手术组比较，模型组治疗后神经功能缺损评分、海马组织AMPK、磷酸化ULK1(p-ULK1)/ULK1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)B/A、Beclin-1表达升高，mTOR表达降低(P<0.05);与模型组比较，针刺组和3-MA组大鼠神经元损伤、自噬减轻，神经功能缺损评分、海马组织AMPK、p-ULK1/ULK1、LC3B/A、Beclin-1表达降低，mTOR表达升高(P<0.05);针刺+AICAR组治疗后神经功能缺损评分、海马组织AMPK、p-ULK1/ULK1、LC3B/A、Beclin-1表达明显高于针刺组(P<0.05),...     

三种细胞因子在肺结核与肺癌胸腔积液中的诊断价值

目的 分析肺结核患者(TB)和肺癌患者胸腔积液中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、孤核受体α(RORα)和孤核受体γ(RORγ)水平的差异,探讨其在肺结核与肺癌鉴别诊断中的价值。 方法 通过简单随机抽样,将已确诊为肺结核和肺癌的冻存胸腔积液样本进行编号,抽取样本各80例,总结研究对象的基本信息,采用酶联免疫吸附法检测各样本中的MIF、RORα及RORγ水平。采用SPSS 20.0软件进行统计学对比分析,本研究中两组计量资料不符合正态分布,采用“Mann-Whitney U检验”,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 肺结核组和肺癌组胸腔积液中的MIF水平中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]分别为5.83(2.41,16.43)、2.79(0.91,11.12)ng/L,差异有统计学意义(U=2314.50,P<0.01);肺结核组和肺癌组胸腔积液中RORα水平[M(Q₁,Q₃)]分别为0.63(0.37,1.66)、0.63(0.57,2.16)ng/L,差异无统计学意义(U=3525.00,P>0.05);肺结核组和肺癌组胸腔积液中RORγ水平[M(Q₁,Q₃)]分别为3.23(1.82,5.26)、3.44(1.94,7.11)ng/L,差异无统计学意义(U=3431.50,P>0.05)。 结论 肺结核患者胸腔积液中MIF水平高于肺癌患者, 检测胸腔积液中MIF水平对肺结核与肺癌的鉴别有一定诊断价值;而胸腔积液中RORα及RORγ水平检测的价值仍有待进一步验证。     

饥饿诱导胃癌细胞自噬发生及Beclin-1表达的变化

目的探讨饥饿诱导胃癌细胞MKN1自噬的发生及自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化。方法培养胃癌细胞MKN1至对数生长期后,以无氨基酸培养液EBSS代替RPMI1640培养液培养细胞,培养12h后收集细胞,应用Western印迹和定量PCR(qRT-PCR)方法分别检测特异性标记自噬的微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)以及自噬相关蛋白Beclin-1的蛋白和mRNA表达。免疫荧光检测饥饿诱导后细胞自噬体的产生。结果饥饿处理12 h后,Western印迹和qRT-PCR检测LC3B和Beclin-1蛋白和mRNA表达与对照组比较均明显增加(P0.05)。免疫荧光下可见点状自噬体。结论饥饿可以诱导胃癌细胞MKN1发生自噬,Beclin-1与饥饿诱导胃癌细胞MKN1的自噬相关,为进一步研究Beclin-1在胃癌细胞自噬中的作用机制奠定了基础。     

流程优化完全电视胸腔镜手术治疗慢性结核性脓胸(附59例报告)

目的 探讨流程优化完全电视胸腔镜手术治疗慢性结核性脓胸的可行性。方法 收集2015年4月至2017年8月在朝阳市第四医院施行电视胸腔镜手术的59例慢性结核性脓胸患者,对本组患者行慢性结核性脓胸清除及纤维板剥脱术的临床资料进行分析,对临床疗效进行评价,并重点阐述了“流程优化”手术方法及效果。流程优化手术方法是笔者通过自身临床实践,为克服电视胸腔镜手术治疗慢性结核性脓胸的诸多技术难点而设计的新的手术方法。主要包括改变胸腔镜手术切口布局顺序,改进胸腔镜操作空间建立技术,统一纤维板剥脱顺序流程,独特的胸腔引流管放置方法等流程优化方法。结果 59例患者均顺利完成电视胸腔镜手术。手术持续时间60~180min,平均[中位数(四分位数),M(Q₁,Q₃)]110(90,140)min;术中出血150~2000ml,平均[M(Q₁,Q₃)]700(550,800)ml;引流管留置时间4~22d,平均[M(Q₁,Q₃)]7(5,10)d;术后住院时间6~24d,平均[M(Q₁,Q₃)] 9(7,12)d。术后并发症发生率为23.3%(14/60):包括切口延期愈合5例、肺持续漏气5例、乳糜胸1例;3例切口再次感染形成慢性窦道,经正确处理切口均得到愈合。术后随访3~36个月,平均随访[M(Q₁,Q₃)]16(8,22)个月,患者均无脓胸复发。结论 采用流程优化完全电视胸腔镜手术方法治疗慢性结核性脓胸效果良好,安全可靠。     

杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导MTB感染巨噬细胞发生自噬的研究

目的 对杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬进行研究,从而探讨杨梅素抗结核作用的机理。方法 用CCK8法检测杨梅素对细胞增殖的影响,确定安全的用药范围;以H37Ra菌株感染的小鼠巨噬细胞Raw 264.7为模型组,并设空白组和药物处理组。按感染复数(MOI,即细菌∶细胞=10∶1)加入模型组、药物处理组,共孵育4h后,磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次以弃掉未进入胞内的MTB。药物处理组分别用不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)的杨梅素作用24h, Western blot法检测自噬相关蛋白即“微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62”表达水平的变化,并以此筛选出杨梅素促进自噬的最佳作用浓度;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,0.1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)冰上裂解细胞10min,菌落形成单位(CFU)法检测巨噬细胞胞内荷菌量;杨梅素作用感染细胞不同时间(30、60、180min)后Western blot测定PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt、mTOR的磷酸化水平。以Image J软件做蛋白定量分析,用GraphPad Prism 7.0制图,采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 杨梅素在100μmol/L浓度以下细胞生存率在90%左右,对细胞毒性较小;Western blot结果显示:与模型组(0.52±0.01)相比,杨梅素不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)处理均能促进LC3Ⅱ的表达(0.59±0.02、 0.65±0.01、 0.71±0.01、 0.83±0.01),差异有统计学意义(t=2.97、P=0.04,t=7.91、P=0.00,t=9.77、P=0.00,t=16.37、P=0.00);而较模型组p62蛋白(0.86±0.02),药物处理亦能抑制p62的表达(0.72±0.01、0.86±0.00、0.60±0.02、0.58±0.01),25μmol/L杨梅素处理组差异无统计学意义(t=0.81、P=0.46),12.5、50、100μmol/L处理组差异均有统计学意义(t=6.50、P=0.00,t=9.53、P=0.00,t=12.01、P=0.00);杨梅素促进自噬的最佳药物浓度为100μmol/L;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,对胞内MTB的抑制率为21.02%;模型组细胞在MTB感染后30、60、180min时,PI3K/Akt/mTOR通路中Akt蛋白的磷酸化(p-Akt)水平(1.23±0.01、1.52±0.01、0.74±0.02)明显增加,而杨梅素作用相同的时间后,可明显抑制Akt蛋白的磷酸化(0.99±0.01、0.96±0.01、0.43±0.01),差异有统计学意义(t=27.60、P=0.00,t=30.06、P=0.00,t=18.60、P=0.00);而模型组磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白水平仅在MTB感染后180min(0.57±0.00)明显增加(t=94.61、P=0.00),杨梅素作用180min亦能抑制mTOR蛋白的磷酸化(0.46±0.01),差异有统计学意义(t=21.60、P=0.00)。结论 杨梅素通过抑制Akt和mTOR蛋白的磷酸化来抑制PI3K/Akt/mTOR通路,从而诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬来杀灭胞内的MTB。     

Pyr1-apelin-13对大鼠心肌成纤维细胞AMPK/mTOR自噬信号和氧化应激损伤的影响

目的探讨Pyr¹-apelin-13对于大鼠心肌成纤维细胞自噬和氧化应激的影响及其作用机制。方法提取新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs),给与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),Pyr¹-apelin-13,雷帕霉素干预,使用Western blot法和免疫荧光技术检测自噬信号分子,使用DHE法检测氧自由基生成,观察Pyr¹-apelin-13在AMPK/mTOR通路中的作用。结果在体外培养的CFs细胞中,AngⅡ刺激通过上调P62和磷酸化mTOR抑制自噬水平,伴有LC3II、Beclin-1和磷酸化AMPK降低及氧化应激水平增高;而Pyr¹-apelin-13或雷帕霉素干预后逆转AngⅡ介导的自噬下调,表现为LC3II/I、Beclin-1和磷酸化AMPK水平上升,P62表达和磷酸化mTOR下降,细胞氧化应激损伤减轻。结论Pyr¹-apelin-13可通过调控大鼠心肌成纤维细胞AMPK/mTOR自噬信号发挥其抗氧化和促自噬的细胞保护功效。     

ATF3转录调控HSP110对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的影响

目的 探讨ATF3调控HSP110表达对低氧刺激下人肺动脉平滑肌细胞增殖及自噬的影响。 方法 体外培养人肺动脉平滑肌细胞，单独感染ATF3沉默腺病毒或共感染HSP110过表达腺病毒，48 h后加入自噬激活剂雷帕霉素预处理3 h，建立缺氧细胞模型，24 h后，CCK-8法检测细胞增殖能力，流式细胞术分析细胞凋亡，Real-time PCR检测ATF3、HSP110 mRNA的表达，Western blot检测ATF3、HSP110、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p62蛋白的表达，免疫荧光观察LC3斑点形成，荧光素酶报告系统鉴定ATF3对HSP110的调控作用。 结果 缺氧组ATF3和HSP110的表达显著增加（P<0.01），ATF3沉默后，细胞增殖能力下降，凋亡率增加（P<0.01），同时自噬蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的表达及LC3荧光斑点显著减少(P<0.01)，自噬降解底物p62的表达明显增加(P<0.01)，而加入雷帕霉素或共感染HSP110过表达腺病毒后，ATF3沉默对细胞增殖和自噬的抑制作用显著减弱(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果显示，ATF3可上调HSP110启动子活性。 结论 ATF3调控HSP110表达增加而促进人肺动脉平滑肌细胞增殖，其机制可能与介导细胞自噬有关。     

PI3K-AKT-mTOR信号通路在大鼠肺性脑病模型神经元自噬中的作用

目的探讨PI3K-AKT-m TOR信号通路在肺性脑病神经元自噬中的作用。方法对36只新生健康SD大鼠乳鼠建立离体培养大鼠皮层神经元,随机分为空白对照组、肺性脑病组、自噬抑制剂3-MA组后进一步建立了大鼠肺性脑病细胞模型,借助该模型运用CCK8法检测神经元活力、MDC染色观察神经元自噬泡数量、Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1及PI3K蛋白表达。结果与空白对照组比较,肺性脑病组神经元活力降低(P0.05);神经元自噬泡数量增多;LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值、Beclin-1及磷酸化PI3K表达水平增加(P0.05)。使用自噬抑制剂3-MA预处理后,神经元活力降低更明显、自噬泡数量明显减少;缺氧诱导的自噬水平明显受到抑制,LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值、Beclin-1及磷酸化PI3K表达水平明显降低。结论缺氧和二氧化碳潴留的信号使Beclin-1表达增加、LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增加,加速PI3K磷酸化,使PI3K-AKT-m TOR信号通路失活,从而激活自噬信号通路,导致大脑神经元自噬增强。     

Ezetimibe improves hepatic steatosis in relation to autophagy in obese and diabetic rats

AIM: To investigate whether ezetimibe ameliorates hepatic steatosis and induces autophagy in a rat model of obesity and type 2 diabetes. METHODS: Male age-matched lean control LETO and obese and diabetic OLETF rats were administered either PBS or ezetimibe(10 mg/kg per day) via stomach gavage for 20 wk. Changes in weight gain and energy intake were regularly monitored. Blood and liver tissue were harvested after overnight fasting at the end of study. Histological assessment was performed in liver tissue. The concentrations of glucose, insulin, triglycerides(TG), free fatty acids(FFA), and total cholesterol(TC) in blood and TG, FFA, and TG in livertissue were measured. m RNA and protein abundance involved in autophagy was analyzed in the liver. To investigate the effect of ezetimibe on autophagy and reduction in hepatic fat accumulation, human Huh7 hepatocytes were incubated with ezetimibe(10 μmol/L) together with or without palmitic acid(PA, 0.5 mmol/L, 24 h). Transmission electron microscopy(TEM) was employed to demonstrate effect of ezetimibe on autophagy formation. Autophagic flux was measured with bafilomycin A1, an inhibitor of autophagy and following immunoblotting for autophagy-related protein expression.RESULTS: In the OLETF rats that received ezetimibe(10 mg/kg per day), liver weight were significantly decreased by 20% compared to OLETF control rats without changes in food intake and body weight(P 0.05). Lipid parameters including TG, FFA, and TC in liver tissue of ezetimibe-administrated OLETF rats were dramatically decreased at least by 30% compared to OLETF controls(P 0.01). The serum glucose, insulin, HOMA-IR, and lipid profiles were also improved by ezetimibe(P 0.05). In addition, autophagy-related m RNA expression including ATG5, ATG6, and ATG7 and the protein level of microtubule-associated protein light chain 3(LC3) were significantly increased in the liver in rats that received ezetimibe(P 0.05). Likewise, for hepatocytes cultured in vitro, ezetimibe treatment significantly decreased PA-induced fat accumulation and increased PA-reduced m RNA and protein expression involved in autophagy(P 0.05). Ezetimibe-increased autophagosomes was observed in TEM analysis. Immunoblotting analysis of autophagy formation with an inhibitor of autophagy demonstrated that ezetimibe-increased autophagy resulted from increased autophagic flux. CONCLUSION: The present study demonstrates that ezetimibe-mediated improvement in hepatic steatosis might involve the induction of autophagy.     

Autophagy is a protective mechanism in normal cartilage,and its aging‐related loss is linked with cell death and osteoarthritis

Objective

Autophagy is a process for turnover of intracellular organelles and molecules that protects cells during stress responses. We undertook this study to evaluate the potential roles of Unc‐51–like kinase 1 (ULK1), an inducer of autophagy, Beclin1, a regulator of autophagy, and microtubule‐associated protein 1 light chain 3 (LC3), which executes autophagy, in the development of osteoarthritis (OA) and in cartilage cell death.

Methods

Expression of ULK1, Beclin1, and LC3 was analyzed in normal and OA human articular cartilage and in knee joints of mice with aging‐related and surgically induced OA, using immunohistochemistry and Western blotting. Poly(ADP‐ribose) polymerase (PARP) p85 expression was used to determine the correlation between cell death and autophagy.

Results

ULK1, Beclin1, and LC3 were constitutively expressed in normal human articular cartilage. ULK1, Beclin1, and LC3 protein expression was reduced in OA chondrocytes and cartilage, but these 3 proteins were strongly expressed in the OA cell clusters. In mouse knee joints, loss of glycosaminoglycans (GAGs) was observed at ages 9 months and 12 months and in the surgical OA model, 8 weeks after knee destabilization. Expression of ULK1, Beclin1, and LC3 decreased together with GAG loss, while PARP p85 expression was increased.

Conclusion

Autophagy may be a protective or homeostatic mechanism in normal cartilage. In contrast, human OA and aging‐related and surgically induced OA in mice are associated with a reduction and loss of ULK1, Beclin1, and LC3 expression and a related increase in apoptosis. These results suggest that compromised autophagy represents a novel mechanism in the development of OA.

     

Ammonia-induced autophagy is independent of ULK1/ULK2 kinases

Autophagy, a lysosome-mediated catabolic process, contributes to maintenance of intracellular homeostasis and cellular response to metabolic stress. In yeast, genes essential to the execution of autophagy have been defined, including autophagy-related gene 1 (ATG1), a kinase responsible for initiation of autophagy downstream of target of rapamycin. Here we investigate the role of the mammalian Atg1 homologs, uncoordinated family member (unc)-51-like kinase 1 and 2 (ULK1 and ULK2), in autophagy by generating mouse embryo fibroblasts (MEFs) doubly deficient for ULK1 and ULK2. We found that ULK1/2 are required in the autophagy response to amino acid deprivation but not for autophagy induced by deprivation of glucose or inhibition of glucose metabolism. This ULK1/2-independent autophagy was not the simple result of bioenergetic compromise and failed to be induced by AMP-activated protein kinase activators such as 5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside and phenformin. Instead we found that autophagy induction upon glucose deprivation correlated with a rise in cellular ammonia levels caused by elevated amino acid catabolism. Even in complete medium, ammonia induced autophagy in WT and Ulk1/2(-/-) MEFs but not in Atg5-deficient MEFs. The autophagy response to ammonia is abrogated by a cell-permeable form of pyruvate resulting from the scavenging of excess ammonia through pyruvate conversion to alanine. Thus, although ULK1 and/or ULK2 are required for the autophagy response following deprivation of nitrogenous amino acids, the autophagy response to the enhanced amino acid catabolism induced by deprivation of glucose or direct exposure to ammonia does not require ULK1 and/or ULK2. Together, these data suggest that autophagy provides cells with a mechanism to adapt not only to nitrogen deprivation but also to nitrogen excess.     

Age-dependent slowing of enteric axonal transport in insulin-resistant mice

AIM:To investigate retrograde tracer transport by gastric enteric neurons in insulin resistant mice with low or high glycosylated hemoglobin(Hb).METHODS:Under anesthesia,the retrograde tracer fluorogold was superficially injected into the fundus or antrum using a microsyringe in KK Cg-Ay/J mice prior to onset of type 2 diabetes mellitus(T2DM;4 wk of age),at onset of T2DM(8 wk of age),and after 8,16,or 24 wk of untreated T2DM and in age-matched KK/HIJ mice.Six days later,mice were sacrificed by CO 2 narcosis followed by pneumothorax.Stomachs were removed and fixed.Sections from fundus,corpus and antrum were excised and mounted on a glass slide.Tracer-labeled neurons were viewed using a microscope and manually counted.Data were expressed as the number of neurons in short and long descending and ascending pathways and in local fundus and antrum pathways,and the number of neurons in all regions labeled after injection of tracer into either the fundus or the antrum.RESULTS:By 8 wk of age,body weights of KKAy mice(n=12,34±1 g) were heavier than KK mice(n=17,29±1 g;F(4,120)=4.414,P=0.002] and glycosylated Hb was higher [KK:(n=7),4.97%±0.04%;KKAy:(n=6),6.57%±0.47%;F(1,26)=24.748,P<0.001].The number of tracer labeled enteric neurons was similar in KK and KKAy mice of all ages in the short descending pathway [F(1,57)=2.374,P=0.129],long descending pathway [F(1,57)=0.922,P=0.341],local fundus pathway [F(1,53)=2.464,P=0.122],local antrum pathway [F(1,57)=0.728,P=0.397],and short ascending pathway [F(1,53)=2.940,P=0.092].In the long ascending pathway,fewer tracer-labeled neurons were present in KKAy as compared to KK mice [KK:(n=34),302±17;KKAy:(n=29),230±15;F(1,53)=8.136,P=0.006].The number of tracer-labeled neurons was decreased in all mice by 16 wk as compared to 8 wk of age in the short descending pathway [8 wk:(n=15),305±26;16 wk:(n=13),210±30;F(4,57)=9.336,P<0.001],local antrum pathway [8 wk:(n=15),349±20;16 wk:(n=13),220±33;F(4,57)=8.920,P<0.001],short ascending pathway [8 wk:(n=14),392±15;16 wk:(n     

白藜芦醇通过调节自噬延缓ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化进展

目的 探讨白藜芦醇在动脉粥样硬化（AS）进展中的作用和机制。 方法 ApoE-/-小鼠60只随机分为4组（每组15只）:对照组、高脂喂养组、白藜芦醇组、高脂喂养+白藜芦醇组。HE染色法观察主动脉斑块病理学改变,生化分析仪检测血脂变化,蛋白质免疫印迹方法（Western blot）测定血管组织微管相关蛋白1轻链3（LC3）以及自噬相关蛋白p62变化。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,随机分为4组:对照组、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤组、白藜芦醇组、ox-LDL损伤+白藜芦醇组。TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白质Western blot测定自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p62的表达。 结果 与高脂喂养组比较,白藜芦醇干预后,AS斑块面积减少（P<0.05）,LC3Ⅱ水平上调（P<0.05）,p62水平下降（P<0.05）,表明白藜芦醇可以诱导自噬;同样,与ox-LDL损伤组比较,白藜芦醇干预后,损伤的巨噬细胞中凋亡水平下降（P<0.05）,LC3Ⅱ水平升高（P<0.05）,p62水平下降（P<0.05）。 结论 AS进展中会伴随自噬水平的下降,给予白藜芦醇处理后,能够延缓AS进展,其机制可能与白藜芦醇调节自噬能力有关。     

树突细胞miR-17调节初始CD4+T淋巴细胞分化Treg/Th17失衡机制的研究

目的:探讨微小RNA-17(miR-17)调节肺结核患者外周血树突细胞(dendritic cells, DC)对初始CD4⁺T淋巴细胞分化为调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)及辅助性T细胞17(T help cell 17,Th17)的作用及分子机制。方法:采集2022年2月1日至4月30日在浙江大学医学院附属杭州市胸科医院收治的肺结核患者20例(肺结核组)和同期的门诊健康体检者20名(健康对照组)的外周血,采用qPCR检测两组DC中miR-17表达水平。将肺结核组患者的成熟DC与健康对照组的初始CD4⁺T淋巴细胞共同培养后分别加入miR阴性对照物(miR阴性对照组)、miR-17模拟物(miR-17模拟物组)和miR-17抑制剂(miR-17抑制剂组)。采用流式细胞仪检测上述3组共同培养细胞中Treg细胞和Th17细胞的分化比例,采用qPCR检测初始CD4⁺T淋巴细胞中的Eos mRNA转录水平,并利用蛋白免疫印迹法检测Eos mRNA表达。结果:肺结核组DC的miR-17基因表达水平(1...     

BET选择性抑制剂38号化合物对急性肝损伤小鼠保护作用研究*

目的 探讨溴域和末端外结构域(BET)选择性抑制剂38号化合物对CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其机制。方法 使用脂多糖(LPS)刺激Raw264.7巨噬细胞,诱导急性细胞炎症模型,设对照组、LPS处理组和LPS与38号化合物共培养组,提取细胞RNA,采用RT-qPCR法检测炎症相关细胞因子mRNA水平。构建CCl₄诱导的ALI模型,将24只小鼠随机分为对照组、模型组和药物干预组。采用免疫组化法检测肝组织抗F4/80 和抗Ly-6G阳性细胞。结果 LPS刺激细胞模型组IL-1βmRNA水平为(23246.0±1185.0),显著高于对照组【(1.1±0.1),P＜0.05】,细胞IL-6 mRNA水平为(7740.0±322.2),显著高于对照组【(1.1±0.4),P＜0.05】,TNF-αmRNA水平为(132.2±2.7),显著高于对照组【(1.0±0),P＜0.05】,而38号化合物干预处理后细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平均显著降低,在80 nM处理组分别为(2409.0±147.6)、(66.0±2.1)和(36.7±1),在40 nM处理组分别为(4790.0±206.4)、(314.1±10.7)和(47.0±1.5),在20 nM处理组分别为(10079.0±500.3)、(1112.0±22.0)和(73.0±1.8),在10 nM处理组分别为[(13794.0±1025.0)、(2576.0±46.3)和(96.8±7.2),P＜0.05],呈现浓度依赖性;ALI小鼠血清ALT和AST水平分别为(8281.0±2710.0)U/L和(5330.0±2435.0)U/L,显著高于对照组[分别为(51.5±7.0)U/L和(215.3±12.4)U/L,P＜0.05],而干预组分别为(3634.0±713.9.0) U/L和(2876.0±667.1)U/L,较模型组显著降低(P＜0.05);ALI小鼠模型肝组织结构紊乱,炎症反应明显,肝细胞大片坏死,大量的炎症细胞聚集,而药物干预组上述病理学变化均较模型组减轻。结论 BET选择性抑制剂38号化合物能减轻由CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤,改善肝功能和肝组织结构的破坏,对小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能与抑制了炎症相关的细胞因子表达,从而减少了炎症细胞的聚集有关。     

Analysis on risk factors associated with false negative results of interferon-gamma release assay in active tuberculosis

目的 分析γ-干扰素释放试验(IGRA)检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的影响因素。方法 搜集2019年6—12月就诊于西安市胸科医院的196例痰涂阳肺结核患者作为研究对象,其中,男145例(74.0%),女51例(26.0%);年龄中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]为38(26,53)岁。按IGRA检测结果分为IGRA检测阳性组(106例)和假阴性组(90例)。收集研究对象一般资料、临床症状、实验室检验资料,以及胸部CT表现,采用多因素logistic回归分析IGRA检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的影响因素。结果 196例研究对象中,IGRA检测阳性106例,阳性率为54.1%。IGRA阳性组白细胞计数的M(Q₁,Q₃)为6.3(5.0,7.5)×10⁹个/L,低于IGRA假阴性组的7.4(5.8,9.2)×10⁹个/L,差异有统计学意义(Z=-3.464,P=0.001);血红细胞沉降率的M(Q₁,Q₃)为34.5(16.0,58.0)mm/1h,低于IGRA假阴性组的53.0(31.8,84.3)mm/1h,差异有统计学意义(Z=-3.492,P=0.000);CD4⁺ T淋巴细胞计数的M(Q₁,Q₃)为553(371,737)个/μl,高于IGRA假阴性组的432(320,645)个/μl,差异有统计学意义(Z=-2.080,P=0.038)。多因素logistic回归分析显示,白细胞计数≥7.0×10⁹个/L[OR(95%CI)=3.003(1.618~5.572)]、ESR≥40mm/1h[OR(95%CI)=2.270(1.228~4.195)]、CD4⁺ T淋巴细胞计数<400 个/μl[OR(95%CI)=2.198(1.155~4.181)]是影响IGRA检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的独立危险因素。结论 白细胞计数升高、血红细胞沉降率升高、CD4⁺T淋巴细胞计数降低是IGRA检测涂阳肺结核患者出现假阴性结果的危险因素,临床应用IGRA辅助结核病诊断时需结合患者情况综合分析。     

初治继发性肺结核患者治疗过程中并发颈部淋巴结结核的危险因素分析

目的 探讨初治继发性肺结核患者治疗过程中并发颈部淋巴结结核的危险因素。方法 收集2018年12月至2020年7月于西安市胸科医院住院确诊的符合纳入标准的357例初治继发性肺结核,其中57例并发颈部淋巴结结核(简称“并发组”); 300例未并发颈部淋巴结结核(简称“未并发组”)。并发组中,年龄中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]为30(26,38)岁,其中14~<44岁年龄组有40例,≥44岁年龄组有17例。未并发组中,年龄M(Q₁,Q₃)为39(32,48)岁,其中14~<44岁年龄组有198例,≥44岁年龄组有102例。对患者年龄、性别、口腔黏膜炎、上呼吸道感染、是否使用免疫抑制剂、肺结核患者病程及痰菌检测情况等7项与颈部淋巴结结核发生情况的相关因素进行分析,分别采用单因素分析及多因素logistic回归分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 357例初治继发性肺结核患者发生颈部淋巴结结核的单因素分析结果显示,未并发组和并发组在上述各因素中,年龄≥44岁者占比分别为34.0%(102/300)、29.8%(17/57);男性占比分别为45.7%(137/300)、40.4%(23/57);发生口腔黏膜炎者占比分别为11.7%(35/300)、45.6%(26/57);发生上呼吸道感染者占比分别为16.3%(49/300)、36.8%(21/57);使用免疫抑制剂者占比分别为8.0%(24/300)、10.5%(6/57);肺结核患病时间>3个月者占比分别为41.0%(123/300)、38.6%(22/57);痰菌阳性者占比分别为19.3%(58/300)、68.4%(39/57)。两组比较,χ²值分别为0.376、0.547、38.963、12.781、0.397、0.115、58.326,P值分别为0.540、0.459、0.000、0.000、0.529、0.735、0.000。多因素logistic回归分析结果显示,发生口腔黏膜炎(Wald χ²=12.279,OR=3.564,95%CI=1.751~7.255,P=0.004)、发生上呼吸道感染(Wald χ²=9.987,OR=3.092,95%CI=1.535~6.227,P=0.002)及痰菌阳性(Wald χ²=26.320,OR=5.880,95%CI=2.989~11.568,P=0.000)是初治继发性肺结核治疗过程中发生颈部淋巴结结核的危险因素。结论 初治继发性肺结核患者在治疗过程中,发生口腔黏膜炎、上呼吸道感染及痰菌阳性的患者易并发颈部淋巴结结核,可作为临床预防的关注因素。