IL-1ra及地塞米松对IL-1β诱导的人RPE增生的抑制

目的:观察IL-1ra及地塞米松对IL-1β诱导的RPE增生的抑制作用.方法:通过MTT比色实验观察IL-1ra及地塞米松对IL-1β促RPE增生的抑制作用.结果:IL-1ra(20～200 μ g/L)对加入IL-1β(2 μ g/L)培养的人RPE增生有明显的抑制作用,抑制率为9.4%～24.5%(P＜0.05);地塞米松在低浓度(10 mg/L)时刺激RPE增生,而在高浓度(35～70 mg/L)则表现为对IL-1β诱导RPE增生的抑制作用,抑制率为31.2%～43.9%(P＜0.05);IL-1ra(100 μg/L)联合地塞米松(35 mg/L)对IL-1β诱导RPE增生的抑制率40.6%,较两者单独使用的抑制率均高(P＜0.05).结论:IL-1β能促进培养的人RPE的增生,而IL-1ra及地塞米松可以抑制这种促增生作用.     

视网膜色素上皮细胞培养基筛选及其相关生长因子的影响(英文)

目的:通过研究肿瘤坏死因子(TNF-α),血管内皮生长因子(VEGF)、β成纤维细胞生长因子(βFGF)、转移生长因子β2(TGFβ2)、干扰素-γ(IFN-γ)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Casepase-3)在不同浓度胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)与胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠(insulin-transferrin-sodium selenite,ITS)混合培养基中的表达及其对正常视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长的影响以探索维持正常RPE细胞生长的理想培养基。方法:首先分别在不含RPE细胞和DMEM培养基的20,40,100mL/LFBS和10,20,30g/LITS中检测TNF-α,VEGF、βFGF、TGFβ2、IFN-γ及Casepase-3是否存在。然后取四十只C57BL/6系小鼠眼的RPE细胞分别培养于含20,40,100mL/LFBS以及20,40,100mL/LFBS与10g/LITS分别组合的DMEM培养基中。免疫组织化学染色以及细胞计数鉴定、评估RPE细胞的存在与生长状况。采用原代培养48h的第三代、第四代RPE细胞,分别用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及酶联免疫吸附(ELISA)法检测RPE细胞和上清液中TNF-α,VEGF、βFGF、TGFβ2、IFN-γ及casepase-3的表达强弱;用蛋白印记(Western blotting)法检测RPE细胞中Casepase-3的表达。结果:在20,40,100mL/LFBS中检测到了TNF-α,VEGF、βFGF、TGFβ2及casepase-3(IFN-γ没有表达)并且随浓度增加而表达上调。在10,20,30g/LITS中没有检测到上述生长因子。RPE细胞培养成功。在含20,40,100mL/L不同浓度的FBS以及20,40,100mL/LFBS与10g/LITS分别组合的DMEM培养基中随浓度增加,TNF-α,VEGF、βFGF、TGFβ2及casepase-3的表达呈上调趋势,各对应组组间的表达强度没有明显差异,但不同浓度组组内的表达强度有明显差异(P<0.01)。IFN-γ没有表达。上述因子在含20mL/LFBS与20mL/LFBS+10g/LITS的培养基中表达最低,但20mL/LFBS+10g/LITS的培养基中RPE细胞生长良好。结论:在RPE细胞和上清液中有TNF-α,VEGF、βFGF、TGFβ2及casepase-3的表达。20mL/LFBS+10g/LITS的混合培养基可能是维持正常RPE细胞生长的一种理想培养基。     

姜黄素对IL-1β诱导的兔RPE细胞中核因子-κB相关炎性因子表达的抑制作用

背景 白细胞介素-1β(IL-1β)是增生性玻璃体视网膜病变(PVR)早期释放的重要炎性因子,研究证实姜黄素能抑制IL-1β诱导的兔视网膜色素上皮(RPE)细胞的增生,但其是否能够对PVR发挥抗炎作用尚不清楚. 目的 观察姜黄素对IL-1β诱导的兔RPE细胞移行的影响,探讨姜黄素对IL-1β诱导的RPE细胞中炎性因子表达的影响.方法 采用对数生长期原代培养的第4代兔RPE细胞进行实验,在无血清DMEM培养基中分别添加0、0.1、1.0和10.0 μg/L的IL-1β作用于细胞24 h,分别采用Western blot和逆转录PCR法检测细胞中环氧合酶-2(COX-2)蛋白和mRNA的表达以筛选IL-1β最佳质量浓度.将培养的RPE细胞分为IL-1β组和姜黄素+IL-1β组,分别在无血清培养基中添加1.0 μg/L IL-1β和1.0μg/L IL-1β联合10 μg/ml姜黄素作用于细胞24、48和72 h,仅用无血清培养基培养的细胞作为对照组.培养的细胞行苏木精-伊红染色,于光学显微镜下计算进入损伤区的细胞数,比较各组细胞的移行能力;分别采用Western blot法和逆转录PCR法检测各组RPE细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量,采用Western blot法检测并比较各组细胞中核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白和核因子κB抑制蛋白-α(IκB-α)的相对表达量;采用免疫化学染色法检测NF-κBp65、IκB-α和COX-2在各组RPE细胞中的表达和定位. 结果 初分离的兔RPE细胞呈球形,细胞中可见大量黑色素颗粒;第4代细胞色素颗粒明显减少,接近融合的细胞形态为长梭形,呈拉网状分布.免疫细胞化学染色法结果显示,细胞角蛋白(AE1/AE3)在细胞质呈阳性表达.对照组在培养24、48和72 h移行的细胞数分别为(31.93±1.21)、(36.27±2.50)和(38.33±2.40)个,IL-1β组分别为(45.73±2.30)、(71.13±1.92)和(80.60±1.71)个,而姜黄素+IL-1β组分别为(13.13±2.20)、(14.93±1.10)和(12.60±1.51)个,各时间点IL-1β组细胞移行细胞数均明显高于对照组,而姜黄素+IL-1β组移行细胞数均明显低于对照组和IL-1β组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).IL-1β质量浓度为1.0 μg/L时,RPE细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量达峰,以1.0 μg/L IL-1β的剂量进行后续实验.细胞培养后24、48和72 h,姜黄素+IL-1β组细胞中COX-2蛋白及其mRNA的相对表达量均明显低于IL-1β组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).IL-1β作用于细胞后48 h,细胞中NF-κBp65蛋白的相对表达量最高,与IL-1β组相比,各时间点姜黄素+IL-1β组细胞中NF-κBp65蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).IL-1β组药物作用于细胞后48 h细胞中IκB-α降至最低,各时间点姜黄素+IL-1β组细胞中IκB-α值均明显高于IL-1β组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).免疫细胞染色结果显示,IL-1β组RPE细胞的细胞核及细胞质中NF-κBp65呈强阳性表达,对照组表达较弱,姜黄素+ IL-1β组细胞中NF-κBp65的表达强度较IL-1β组明显降低;与对照组相比,IL-1β组细胞的细胞质中IκB-α表达强度明显减弱,而COX-2表达明显增强;与IL-1β组比较,姜黄素+IL-1β组细胞中IκB-α表达明显增强,而COX-2表达明显减弱.结论 姜黄素可抑制IL-1β引起的兔RPE细胞的移行,IL-1β通过激活NF-κB信号通路刺激细胞中COX-2的表达,姜黄素可通过阻断这一途径而抑制炎性因子的表达,从而发挥抗炎作用.     

姜黄素、丹参单体和苦参碱抑制IL-1β诱导下兔RPE细细胞增生的体外实验研究

背景 增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是临床上常见的致盲眼病.视网膜色素上皮(RPE)细胞是PVR发生和发展中的关键细胞,研究中药对体外培养RPE细胞的作用及原理对于防治PVR并揭示其发病机制具有重要意义. 目的 研究姜黄素、丹参单体、苦参碱对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的兔RPE细胞增生的抑制效果.方法 取第3～4代体外培养的有色兔RPE细胞,采用透射电子显微镜鉴定细胞结构.采用MTT法检测2.5、5.0、10.0、20.0 μg/L IL-1β培养后24、48和72 h RPE细胞的增生率;并检测5、10、20 μg/ml姜黄素和丹参单体IH763-4以及100、200、400 μg/ml苦参碱对IL-1β诱导RPE细胞增生的抑制率.采用线性回归分析计算各药物的半数抑制率(IC50)剂量.结果 初分离的兔RPE细胞呈球形,细胞中可见大量黑色素颗粒;第4代细胞色素颗粒明显减少,形态更加狭长.免疫细胞化学染色结果显示,细胞角蛋白(AE1/AE3)在细胞质表达呈阳性.透射电子显微镜下可见细胞顶端有大量的微绒毛,细胞间可见连接复合体.不同质量浓度IL-1β组培养后24、48、72 h细胞增生率总体比较差异均有统计学意义(F时间=30.33,P=0.00;F浓度=9.37,P=0.00);组内相邻培养时间点间细胞增生率比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),同一培养时间点相邻质量浓度IL-1β组间细胞增生率比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).10.0μ,g/LIL-1β培养72 h后细胞增生率达峰值.不同质量浓度姜黄素、丹参单体和苦参碱不同培养时间点细胞抑制率总体比较差异均有统计学意义(姜黄素:F时间=128.75,P=0.00;F质量浓度=334.05,P=0.00.丹参单体:F时间=39.32,P=0.00;F质量浓度=165.57,P=0.00.苦参碱:F时间=267.76,P=0.00;F质量浓度=912.34,P=0.00).3种药物对RPE细胞的抑制作用均呈明显的剂量和时间依赖性,组内相邻培养时间点间细胞抑制率比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),相邻质量浓度药物组间细胞抑制率的比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).培养后24、48及72 h,姜黄素的IC50分别为26.77、19.01和9.45 μg/ml,丹参单体的IC50分别为33.72、23.47和12.56μg/ml,苦参碱的IC50分别为570.96、352.25和97.50 μg/ml. 结论 IL-1β可促进RPE细胞增生,10.0 μg/L IL-1β促增生作用最显著;姜黄素、丹参单体、苦参碱均可抑制IL-1β诱导的RPE细胞增生,其抑制作用均呈时间和剂量依赖性,其中姜黄素抗增生作用最强.     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对RPE细胞趋化因子表达和Ca2+的影响

目的 研究蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)抑制剂染料木黄酮(Genistein)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞趋化因子表达和细胞内Ca2+的影响.方法 应用不同剂量IL-1β对RPE细胞进行刺激,RT-PCR法观察细胞IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaetic protein-1,MCP-1)mRNA表达的变化.应用Genistein对RPE细胞培养进行干预,观察其对IL-1β诱导RPE细胞IL-8和MCP-1 mRNA表达的影响.应用Fura2/AM、荧光分光光度计检测IL-1β和Genistein对RPE细胞内Ca2+的影响.结果 RT-PCR结果显示,0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1IL-1β刺激组IL-8 mRNA相对表达值分别为0.446±0.133、0.727±0.054和0.523±0.106,对照组为0.272±0.088;1μg·L-1、10μg·L-1IL-1β刺激组与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.001、0.015).10μg·L-1IL-1β诱导的RPE细胞MCP-1 mRNA相对表达值与对照组比较,差异有显著统计学意义(P=0.002).10 mg·L-1、50 mg·L-1 Genistein对IL-1β诱导的IL-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01).IL-1β引起细胞内ca2+浓度升高,Genistein对细胞内Ca2+作用与之相反.结论 Genistein对IL-1β诱导的1L-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,其机制可能为抑制IL-1β诱导的细胞内Ca2+增加.     

白介素1受体拮抗剂抑制视网膜色素上皮细胞炎前因子的表达

目的　观察视网膜色素上皮 (retinal pigment epithelium,RPE)细胞白细胞介素 6 (inter-leukine 6 ,IL - 6 )和白细胞介素 8(interleukine 8,IL - 8)的表达及白细胞介素 1受体拮抗剂 (interleukine 1receptor antigonist,IL- 1ra)对 RPE细胞 IL- 6和 IL- 8表达的影响。　方法　培养的人 RPE细胞分为对照组和 IL - 1ra组 (IL - 1ra,1、10、10 0 ng/ ml) ,用酶联免疫吸附、免疫组织化学和原位杂交等方法观察 RPE细胞 IL- 6和 IL- 8的表达。　结果　对照组 RPE细胞培养上清液中 IL- 6、IL- 8分别为 2 0 0 0、5 0 0 0 pg/ ml。与对照组比较 ,IL - 1ra组 IL - 6、IL - 8分别为 30 0 pg/ ml(t=8.0 11,P <0 .0 1)、4 5 0 pg/ ml(t=11.4 4 6 ,P<0 .0 1)。经白细胞介素 1β(interleukine1β,IL- 1β)刺激后 RPE细胞 IL- 6和 IL- 8m RNA表达原位杂交表现为细胞浆中浓淡不一的蓝色着色 ,IL - 1ra作用组细胞染色较淡。　结论　在 IL - 1β刺激下 ,培养的人 RPE细胞可以表达 IL- 6、IL- 8的 m RNA和蛋白质 ,IL- 1ra能有效抑制其 IL- 6、IL- 8m RNA和蛋白质的表达     

白细胞介素-1β促人视网膜色素上皮细胞分泌血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的研究

目的 观察炎前因子白细胞介素-1β(IL-1β)对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法 采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定IL-β浓度为0、1、10、20 ng/ml和时间为24、36、48 h作用下RPE细胞的VEGF和bFGF分泌量变化;采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定10 ng/ml IL-1β作用48 h后RPE细胞的VEGF和bFGFmRNA变化;噻唑蓝(MTT)比色法测定IL-1β刺激后RPE细胞的增生状态.结果 相同刺激时间即36 h作用下,终浓度为1、10 ng/ml的IL-1β促进RPE细胞VEGF的分泌(q=32.79,42.56;P<0.01);10 ng/ml的IL-1β促进bFGF的分泌(q=7.514,P<0.01);与浓度为10 ng/ml的IL-1β刺激相比,增加IL-1β刺激浓度至20 ng/ml使RPE细胞VEGF和bFGF分泌量下降(q=9.35,6.92;P<0.01).相同浓度即10 ng/ml的IL-1β作用下,IL-1β作用时间与RPE细胞VEGF和bFGF分泌量具有正性时间-效应关系;浓度为10 ng/ml的IL-1β作用48 h可促进RPE细胞的VEGF和bFGF mRNA水平;MTT结果 证明IL-1β未明显影响RPE细胞的增生状态(F=0.317,P>0.05).结论炎前因子IL-1β可影响人RPE细胞VEGF和bFGF的分泌量,在一定的作用浓度和作用时间范围内具有显著的促进效应.     

巨噬细胞条件培养液及重组人IL-1β对RPE细胞产生MMP-2及MMP-9的影响

目的 观察巨噬细胞条件培养液（MφM）及白细胞介素-1β（IL-1β）对视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9的影响,探讨巨噬细胞与RPE细胞之间的相互关系.方法 在人RPE细胞培养液中加入50%体积分数的人MφM作用48 h;加入终质量浓度为10、50、100、200 ng/ml重组人IL-1β作用12、24、48 h.用酶谱法检测RPE细胞培养液中MMP-2及MMP-9,凝胶图像扫描分析仪定量.结果 MφCM促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9,促MMP-9分泌尤其明显;48 h内IL-1β促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9具有时间和质量浓度依赖性.结论 MφCM中含有促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9的因子,IL-1β是巨噬细胞产生的主要炎性因子,提示巨噬细胞可能通过分泌细胞因子调节RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9,参与细胞增生、迁移等病理过程.     

姜黄素对兔视网膜色素上皮细胞DNA含量、线粒体膜电位及胞质内钙离子的影响

目的 探讨姜黄素对兔视网膜色素上皮细胞(RPE)DNA含量(凋亡率)、线粒体膜电位(Aψm)和胞质内钙离子(Ca2+)的影响.方法 实验研究.选取体外培养的第4代RPE细胞进行试验,分为姜黄素组和空白对照组(10% FBS-DMEM含二甲基业砜0.5‰),姜黄素组设10、15、20 mg/L 3个质量浓度.噻唑蓝(MTT)法检测姜黄素10、15、20 mg/L 3个质量浓度分别作用24、48、72及96 h后对体外培养的RPE细胞增殖72及96 h后对体外培养的RPE细胞增殖的抑制率.相关回归分析计算24、48、72及96 h的半数抑制率(IC50)剂量.流式细胞仪检测姜黄素15 mg/L作用8、24、48及72 h,后RPE细胞DNA含量(凋亡率)、△Ψm和胞质内Ca2+的变化.对抑制率分别在同浓度不同时间组间、同时间不同浓度组间进行方差分析(多个样本问两两比较);采用相关回归分析计算姜黄素各时间段半数抑制率剂最;对凋亡率、线粒体△Ψm、细胞质内Ca2+等对照组与姜黄素组间进行两独市样本t检验;对凋亡率、线粒体△Ψm、细胞质内Ca2+等姜黄素不同时间组间进行方差分析(多个样本间两两比较).结果姜黄素对RPE细胞有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖件.姜黄素在24、48、72及96 h对RPE细胞的IC50分别是29.31、17.50、13.24及10.99 mg/L.姜黄素作用8、24、48、72 h后,RPE细胞质内Ca2+浓度明显升高与空白对照组相比,差异有统计学意义(t=7.50,10.61,20.74,21.14;P＜0.01)△Ψm明显下降,与对照组相比均有统计学意义(t=7.50,11.74,14.91,15.29;P＜0.01).姜黄素作用8 h DNA含量未见明显下降,24、48及72 h DNA含量明显下降(即凋亡率升高),与空白对照组相比均有统计学意义(t=10.00,14.68,13.68;P＜0.01).结论姜黄素可以使RPE细胞质内Ca2+浓度升高,△Ψm下降,进而使DNA含量明显下降,诱导RPE细胞凋亡.姜黄素可以有效抑制RPE细胞增殖,有望成为防治增生性玻璃体视网膜病变的理想天然药物.(中华眼科杂志.2009,45:210-215)     

LeTx抑制MEK通路对体外血管紧张素诱导的VEGF分泌的影响

目的:体外观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对视网膜色素上皮细胞(retinal pigmented epithelium,RPE)VEGF分泌的影响以及能否通过炭疽毒素致死因子(lethalfactor,LF)通过阻断MEK/MAPK通路对VEGF分泌的影响。方法:体外培养人RPE细胞分为A,L和N组。A组用含100μmol/LAngⅡ及25mL/L小牛血清的低糖DMEM培养液刺激。L组于A组培养液刺激细胞前,先用10μmol/LEF与100nmol/LLF联合处理细胞24h;N组细胞培养于仅含25mL/L小牛血清的DMEM培养液。作用不同时间梯度后收集细胞上清。采用ELISA法测定各组VEGF浓度。结果:AngⅡ刺激RPE45min即能诱导VEGF分泌,这种作用在刺激3h达到最强,约为对照组7.9倍。预先用LeTx处理的RPE细胞并不能够对AngⅡ的刺激产生反应。在任一刺激时段,细胞培养液中VEGF浓度始终维持在较低水平。结论:LeTx通过抑制MEK通路对AngⅡ刺激的VEGF分泌有抑制作用。     

视网膜色素上皮细胞表达IL-1β和IL-6与细胞自噬的关系

目的：研究细胞自噬在缺氧条件下视网膜色素上皮(RPE)细胞表达炎性因子IL-1β和IL-6中的作用。

方法：将体外培养的人RPE细胞系随机分为缺氧组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+缺氧组、氯喹(CQ)+缺氧组和对照组。培养24h后采用Western blot法检测各组细胞的自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、Beclin-1及p62的相对表达水平; 采用ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-6的浓度。

结果：缺氧组IL-1β和IL-6的浓度明显高于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中LC3B-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的相对蛋白表达量均明显高于对照组和3-MA+缺氧组,缺氧组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ的相对蛋白表达量低于CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中p62相对蛋白表达量明显低于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。

结论：缺氧使RPE细胞LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达增强,p62表达减弱,并促进细胞分泌IL-1β和IL-6,自噬抑制剂3-MA和CQ能够减少RPE细胞表达IL-1β和IL-6。     

胰岛素对人RPE细胞增殖及转化生长因子-β2分泌的影响

目的:探讨胰岛素对RPE细胞增殖和分泌转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响。方法:将不同浓度的胰岛素(0.1～10×103U/mL)加入培养基刺激ARPE-19细胞不同时间(0～48h)。采用MTS法检测RPE细胞的增殖情况;采用ELISA法检测各种处理情况下RPE细胞分泌TGF-β2的情况,Real-time PCR法检测TGF-β2mRNA的表达情况。结果:MTS结果显示,作用12h后,各实验组与对照组比较RPE细胞明显增殖(P<0.05)。ELISA结果表明胰岛素可明显促进RPE细胞分泌TGF-β2,并呈时间及剂量依赖性。Real-time PCR结果显示,胰岛素作用24h后,TGF-β2mRNA表达上调(P<0.01),且10×103U/mL胰岛素组TGF-β2mRNA表达明显高于0.1×103U/mL胰岛素组(P<0.01)。结论:RPE细胞是眼内近视信号因子TGF-β2的重要来源,胰岛素可以通过促进RPE细胞增殖并分泌TGF-β2进行信号传递,促进近视发生。     

姜黄素通过抑制PI3K/Akt信号通路改善LPS诱导的视网膜炎症

目的:本研究旨在调查姜黄素是否能减轻动物模型和人视网膜色素上皮细胞(ARPE)-19细胞的视网膜炎症。方法:在体内,雄性C57/B6小鼠腹腔注射姜黄素3d,然后腹腔注射脂多糖(LPS;10mg/kg)诱导视网膜炎症。LPS作用24h后,通过RT-PCR检测促炎细胞因子的mRNA水平。伴刀豆球蛋白凝集素灌注标记技术评估了白细胞对视网膜脉管系统的粘附。用蛋白质定量试剂盒测量前房中的蛋白浓度。在体外,培养ARPE-19细胞。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测量来选择姜黄素的最佳作用浓度。在用5μg/mL LPS刺激之前,将ARPE-19细胞在有或没有姜黄素的情况下孵育1h。通过RT-PCR和ELISA测量促炎细胞因子。通过蛋白质印迹分析PI3K/Akt表达。结果:姜黄素预处理可显著抑制EIU相关白细胞粘附于视网膜血管和前房蛋白渗漏。体内应用姜黄素后,炎症细胞因子(如IL-1β,IL-6和TNF-α)的mRNA表达水平也显著降低。同时,姜黄素在ARPE-19细胞的mRNA和蛋白质水平上均显著减弱IL-6,IL-8和MCP-1的表达。姜黄素抑制LPS激活的ARPE-19细胞中的PI3K/Akt磷酸化以及NF-κB激活。结论:姜黄素对LPS诱导的视网膜炎症具有预防作用,其作用似乎与PI3k/Akt信号传导途径的抑制有关。     

活血散结中药复方含药血浆对PDGF干预下兔RPE细胞增殖的影响

目的：观察活血散结中药复方含药血浆对血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)干预下兔RPE细胞增殖的影响。

方法：酶消化法获取RPE原代细胞,进行RPE细胞的原代培养和传代; 制备活血散结中药复方含药血浆; 选取第4代兔RPE细胞为实验细胞,PDGF低、中、高剂量(5、10、20μg/L)干预48h后,CCK-8法检测并选取适宜细胞实验干预浓度; 建立PDGF干预下RPE细胞增殖模型。实验分组为空白对照组(DMEM)、正常血浆组、PDGF(10μg/L)组、PDGF(10μg/L)+AG1296(10μmol/L)组、PDGF(10μg/L)+10%含药血浆组,PDGF(10μg/L)+20%含药血浆组,分别加入相应处理因素干预24h后,Transwell法测定兔RPE细胞迁移力; 而干预48h后,CCK-8法测定兔RPE细胞的细胞活力OD值。

结果：10%和20%浓度的活血散结中药复方含药血浆能有效抑制PDGF干预下RPE细胞的细胞活力、细胞迁移。

结论：活血散结中药复方含药血浆能够抑制PDGF干预下兔RPE细胞增殖,这可能是其有效治疗增殖性玻璃体视网膜病变的机制之一。     

血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞表达肌动蛋白的影响

目的 观察血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）对培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的影响。 方法 将体外培养的第4～6代人RPE细胞分为无血清组［改良Eagle培养液(Delbecco′s modifi ed Eagle′s medium， DMEM）组］和含有20 g/L小牛血清的DMEM组（2% DMEM组）。每组均分别加入不同浓度（0, 1, 50 ng/ml）的PDGF，采用免疫荧光法定性、定量观察PDGF对人RPE细胞表达α-SMA的影响。 结果 DMEM组中，无PDGF刺激时，α-SMA表达阳性细胞数比率约为40%～50%，荧光强度的平均值为 8.08；加入PDGF（1 ng/ml, 50 ng/ml）刺激后，α-SMA表达阳性细胞数的比率及荧光强度的平均值分别为80%、12.35和90%、17.23。2％DMEM组无PDGF刺激时，α-SMA表达阳性细胞数比率约为85 %，荧光强度的平均值为14.79；经1 ng/ml和50 ng/ml的PDGF刺激后，α-SMA表达阳性细胞数的比率及荧光强度的平均值分别为95%、16.28和100%、21.36。2%DMEM组经50 mg/ml PDGF刺激后的荧光强度约为DMEM组无PDGF刺激的时2.7倍，为2％DMEM组无PDGF刺激时的1.5倍。 结论 PDGF能够促进人RPE细胞表达α-SMA。（中华眼底病杂志，2003，19：201-268）     

细胞因子及苏拉明对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的：研究在血小板源性生长因子（PDGF）和白介素-1β（IL-1β）作用下苏拉明（suramin）对培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞增殖的影响。方法：将不同浓度的（15，150，250mg／L）苏拉明分别加入用PDGF 10μg／L或IL-1 10μg／L培养的RPE细胞培养液中，继续培养3d后采用四甲基偶氮唑盐（tetrazolium，MTT）比色法，细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色（AgNORs）检测在细胞因子作用下不同浓度苏拉明对RPE增殖活力的影响。结果：含有PDGF 10μg／L或IL-1β10μg／L的培养液显著刺激RPE的增殖，苏拉明明显抑制了这两种细胞因子条件下RPE的增殖，在150mg／L时的抑制率分别为26％$H18％，对细胞的形态无明显影响。结论：苏拉明对PDGF或IL-1β刺激的RPE的增殖有显著抑制作用，该作用为非毒性作用。进一步证明苏拉明对增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR）中相关细胞因子的拮抗作用，为临床防治PVR提供了新的用药思路。     

IL-1β和TNF-α对培养的人视网膜色素上皮细胞波形蛋白表达的影响

目的　观察IL 1β和TNF α对培养的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞波形蛋白表达的影响。 方法　采用免疫组织化学和彩色图像分析技术检测IL 1β和 /或TNF α( 2 0ng/mL)对RPE细胞波形蛋白表达的影响。 结果　波形蛋白表达的灰度值分别为 :IL 1β TNF α处理组 76 9± 8 1,IL 1β处理组 78 4± 8 1,TNF α处理组 90 2± 6 7。与对照组 110 2±10 7比较均有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　IL 1β和 /或TNF α可上调波形蛋白的表达 ,在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)中可能参与RPE细胞增殖过程中中间丝的改变。     

IL-1β对兔眼的降眼压作用及不良反应观察

目的观察白细胞介素-1β（IL-1β）一次剂量给药对兔眼的降眼压作用及相关不良反应。方法随机将兔分为A组和B组,分别结膜下注射100ng／mL或400ng／mL的IL-1β 100μL,对侧眼注射等量生理盐水。分别于用药前及用药后0．5、1、2、3、4、5、6h行表面麻醉,采用气眼压计测定眼压。将兔眼按上述B组的剂量和方法,右眼结膜下注射400ng／mL的IL-1β 100μL,左眼注射等量生理盐水,每日1次,连续2周,并行眼前节、眼底、闪光视网膜电图（F—ERG）及组织病理学检查,观察IL-1β对眼部的毒性作用。结果100ng／mL及400ng／mL的IL-1β均可有效降低兔眼的眼压（P〈0．05）,最大降眼压幅度分别为：（1．9±1．0）mmHg及（3．8±1．8）mmHg,在其有效降眼压质量浓度范围内,未见明显不良反应。结论IL-1β可有效降低兔眼的眼压,局部使用具有安全性。     

转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞增殖中NLRP3炎症小体的表达及意义

目的　探讨转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）刺激下Nod样受体蛋白3（nod-like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体在视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）增殖中的表达变化及意义。方法　利用TGF-β刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型，随机分为空白对照组（Sham组）和TGF-β诱导RPE细胞增殖组（TGF-β组），TGF-β组再根据浓度（0.5 μg·L^-1、2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1、12.5 μg·L^-1）分组。利用MTT 微量酶比色法检测RPE细胞增殖情况；Western blot观察NLRP3蛋白的表达变化；利用标准ELISA试剂盒检测白细胞介素（interleukin，IL)-1β和 IL-18表达情况。结果　与Sham组比较，0.5 μg·L^-1 TGF-β组RPE细胞增殖不明显，差异无统计学意义（P>0.05），但NLRP3、IL-1β和 IL-18表达明显提高（均为P<0.01）；2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖明显，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均提高（均为P<0.05）；与0.5 μg·L^-1 TGF-β组相比，2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖显著增加，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　不同浓度TGF-β诱导RPE细胞增殖中NLRP3炎症小体表达变化不同，两者可能相互调控影响RPE细胞增殖，在增生性玻璃体视网膜疾病发生发展中具有重要的作用。     

吡哆胺对AGEs干预的人RPE细胞的保护作用

目的：观察吡哆胺(PM)对高级糖基化终末产物(AGEs)干预的RPE细胞的影响,探讨PM对RPE细胞的保护作用。

方法：取传代至第3代的细胞进行分组：(1)对照组：含100mg/L BSA的DMEM培养基培养48h;(2)AGEs干预组：含200mg/L AGEs的DMEM培养基培养48h;(3)PM组：PM1组：含16mg/L PM+200mg/L AGEs的DMEM培养基培养48h; PM2组：含32mg/L PM+200mg/L AGEs的DMEM培养基培养48h。采用免疫组织化学法检测RAGE蛋白的表达; 荧光染色法观察细胞内ROS的生成; Tunel法检测细胞凋亡情况。

结果：AGEs可明显刺激RPE细胞内RAGE蛋白的表达和ROS的生成,增加细胞凋亡情况,而PM可抑制该过程,且具有一定的浓度依赖性。

结论：PM能够抑制AGEs干预的RPE细胞内RAGE蛋白的表达和ROS生成,减少细胞凋亡,具有一定的细胞保护作用。