重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的：观察重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养翼状胬肉（初发、复发）成纤维细胞增殖的影响，寻找辅助治疗翼状胬肉和预防翼状胬肉复发的药物。方法：将初发、复发翼状胬肉成纤维细胞行原代和传代培养；用MTT比色法测定重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养初发、复发翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用；采用免疫组化法检测重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养初、复发翼状胬肉成纤维细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。结果：重组人干扰素α1b滴眼液与对照组相比，对初、复翼状胬肉成纤维细胞的增殖影响具有统计上的差异，对细胞的增殖具有抑制作用，同时重组人干扰素α1b滴眼液对初、复发翼状胬肉成纤维细胞PCNA的表达具有抑制作用。结论；重组人干扰素α1b滴眼液作为一种成品滴眼液对初、复发翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用，可望用于临床上对该疾病治疗。     

β-catenin在翼状胬肉成纤维细胞中的表达

目的:β-catenin在正常的细胞粘附和wnt信号通路中发挥重要功能,本文探讨其在翼状胬肉组织及成纤维细胞中的表达及TGF-β1对其的影响。方法:通过组织块培养获取正常球结膜和翼状胬肉成纤维细胞并传至第4代,用10μg/LTGF-β1作用于细胞。抗β-catenin抗体对体内取出组织和培养的细胞行免疫组化染色;免疫印迹法检测培养成纤维细胞中β-catenin的表达情况。结果:免疫组化显示翼状胬肉成纤维细胞中β-catenin阳性着色强于正常结膜成纤维细胞。β-catenin在胬肉组织中较多,且多分布于上皮下纤维血管组织,上皮染色较少。体外培养见翼状胬肉成纤维细胞的生长较正常结膜成纤维细胞快、增殖能力强。免疫印迹法显示在翼状胬肉成纤维细胞蛋白中β-catenin的特异性阳性条带灰度值高于正常球结膜成纤维细胞蛋白。TGF-β1能促进翼状胬肉成纤维细胞中的β-catenin蛋白表达。结论:β-catenin在翼状胬肉组织及其成纤维细胞中的表达增高,提示β-catenin与翼状胬肉的发病有关。     

汉防己甲素抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用并探讨其机制,寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物.方法:(1)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Tet作用下,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞形态的变化,并与丝裂霉素(Mitomycin,MMC)进行比较.(2)MTT比色法测定不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用,并与MMC进行比较.(3)流式细胞仪检测不同浓度的Tet作用48h,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞细胞周期的变化.结果:(1) Tet作用下,细胞胞体收缩,变圆,间隙增宽,药物浓度高时,细胞碎裂,浮起.0.1,0.2g/L MMC作用下大量细胞碎裂,溶解.(2)不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.01);0.1g/L与0.2g/L MMC、4×10-5 mol/L Tet与0.2g/L MMC对翼状胬肉成纤维细胞活性的影响无显著性差异(P＞0.05).Tet的IC50接近10-5mol/L(为0.848×10-5mol/L).(3)Tet作用下,翼状胬肉成纤维细胞周期中S期细胞增多,浓度越高,作用越明显.结论:汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,细胞分裂被阻止在S期(DNA合成期).可望用于对翼状胬肉的治疗.     

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用，寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物。方法用MTT比色法测定不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用，并与丝裂霉素C（MMC）进行比较；用荧光定量PCR检测10^-5mol／L的汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞基质金属蛋白酶（MMP）MMP-3 mRNA的表达的影响。结果不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增生均有明显的抑制作用（P〈0．01）；10^-5mol／L的汉防己甲素作用24h其MMP-3 mRNA的表达量下降了27．12％。结论汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞具有明显的抑制作用，可望用于对翼状胬肉的治疗。     

细胞因子对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的 :探讨细胞因子在翼状胬肉发病机制中的作用。方法 :体外培养翼状胬肉成纤维细胞 ,采用MTT比色法测定肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor,TNF -α)、血小板源生长因子 (platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)和γ -干扰素 (interferon -gamma,IFN -γ)对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。结果 :TNF -α和PDGF可明显促进翼状胬肉成纤维细胞的增殖 ,且均呈剂量依赖效应 ;但IFN -γ对翼状胬肉成纤维细胞的增殖却有明显的抑制作用。结论 :TNF -α和PDGF可促进翼状胬肉成纤维细胞的增殖 ,在翼状胬肉发病机制中起重要作用 ;IFN -γ是一种成纤维细胞增殖的负性调节因子 ,有望在翼状胬肉的防治中发挥重要作用     

小檗碱调节翼状胬肉成纤维细胞增殖能力的机制研究

目的:探讨小檗碱对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖能力的影响及可能的作用机制。方法:通过对手术获取的翼状胬肉组织进行培养,获取翼状胬肉成纤维细胞。采用不同终浓度(0、20、40、80μmol/L)小檗碱对细胞进行诱导,检测小檗碱诱导后翼状胬肉成纤维细胞凋亡水平、线粒体膜电位和凋亡相关因子mRNA与蛋白表达水平变化。结果:小檗碱能够以剂量依赖的方式提高体外培养翼状胬肉成纤维细胞线粒体去极化水平、细胞凋亡比率、促凋亡基因Bax和Bad mRNA与蛋白的表达水平,降低Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平。结论:小檗碱可能通过提高体外培养翼状胬肉细胞线粒体去极化水平诱导胬肉细胞发生凋亡。     

全反式维甲酸对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响,寻找治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:体外培养翼状胬肉患者成纤维细胞;将不同浓度的ATRA作用于成纤维细胞分别达24,48h和72h后,MTT法检测ATRA对HPF的影响,免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性。结果:MTT法显示10-8mmol/LATRA作用24h后能抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。ATRA能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:ATRA能够显著抑制HPF的增殖。     

正常球结膜与翼状胬肉成纤维细胞生长增殖状况的对比观察

目的对比观察相同的培养条件下翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞的生长增殖状况,对两种成纤维细胞的生长增殖特性作出评价。方法用10%胎生牛血清的RPMI1640培养液,在相同的培养条件下分别培养正常球结膜与初发翼状胬肉组织成纤维细胞;倒置相差显微镜下观察培养的两种成纤维细胞的特点及生长增殖状况。对传第3代的两种成纤维细胞,分别于接种后2、5、8d行噻唑蓝[3-（4,5-dimethyl -2thiazol）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromid,MTT]比色试验,检测细胞增殖活力（细胞数）。结果翼状胬肉成纤维细胞较正常结膜成纤维细胞生长快,增殖旺盛;MTT检测结果显示：5d翼状胬肉成纤维细胞的细胞总数多于正常结膜成纤维细胞（P〈0.05）,8d更明显（P〈0.01）。结论体外翼状胬肉成纤维细胞的生长、增殖特性明显强于正常结膜成纤维细胞。提示治疗翼状胬肉药物的筛选和疗效评价的实验研究应直接应用翼状胬肉成纤维细胞为研究对象,才能作出较为符合客观实际的评价。     

初发和复发翼状胬肉成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶的比较及汉防己甲素对其的影响

目的检测培养的初、复发翼状胬肉成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的情况,并作为观察指标了解汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对其的抑制作用。方法相同的条件下培养初、复发翼状胬肉与正常球结膜成纤维细胞,酶联免疫吸附试验检测培养的细胞上清液中MMP-1、MMP-3、MMP-9的含量,同时应用10-5mol·L-1Tet作用于培养的初、复发翼状胬肉成纤维细胞,48h后分析培养液中上述MMPs含量的变化。结果培养的初、复发翼状胬肉成纤维细胞上清中MMP-1含量均较正常球结膜高(均为P<0.05),加入10-5mol·L-1Tet后均明显下降(均为P<0.05),但初发翼状胬肉上清中MMP-1含量仍高于正常球结膜(P<0.05),而复发翼状胬肉上清中MMP-1含量与正常球结膜相比差异无统计学意义(P>0.05);初发翼状胬肉上清中MMP-1含量明显高于复发翼状胬肉,加入Tet后仍较复发翼状胬肉高(均为P<0.05)。培养的初发翼状胬肉成纤维细胞上清中MMP-3含量较正常球结膜高(P<0.05),加入10-5mol·L-1Tet后明显下降(P<0.05),但仍高于正常球结膜(P<0.05);复发翼状胬肉上清中MMP-3含量低于正常球结膜(P<0.05)。培养的初、复发翼状胬肉和正常球结膜成纤维细胞上清中均未检测到MMP-9。结论初、复发翼状胬肉成纤维细胞MMP-1、MMP-3的分泌有明显的差异,Tet对初、复发翼状胬肉成纤维细胞MMP-1及初发翼状胬肉MMP-3的分泌有明显的抑制作用。     

汉防己甲素体外对正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的比较

目的:观察汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对正常结膜和翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的异同。方法:在相同的培养条件下,传第3代的正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞皆加入不同浓度的Tet,分别于加药后1和3d行MTT检测细胞的存活率。结果:用药后1d,4×10-5和2×10-5mol/LTet对正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞存活率无显著性差异(P>0.05),其余各浓度的Tet对翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用大于正常结膜成纤维细胞,正常结膜成纤维细胞的存活率大于翼状胬肉成纤维细胞(P<0.01)。用药后3d,4×10-5mol/LTet组翼状胬肉成纤维细胞的存活率大于正常结膜成纤维细胞(P<0.01);其余各浓度的Tet对两种成纤维细胞存活率无显著性差异(P>0.05)。结论:用药后3d,2×10-5mol/L及半数抑制量(10-5mol/L)以下浓度的Tet对翼状胬肉成纤维细胞起抑制作用,而对正常结膜成纤维细胞的影响较小。     

维生素E琥珀酸酯抑制人翼状胬肉成纤维细胞生长作用的研究

目的: 探讨维生素 E 琥珀酸酯(VES) 对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响, 寻找辅助治疗翼状胬肉和预防翼状胬肉复发的新方法。方法: 翼状胬肉成纤维细胞原代、传代培养,观察 VES 对细胞生长曲线的影响,四甲基偶氮唑盐(MTT) 法检测不同质量浓度 VES 对细胞增殖的影响。结果: 与对照组相比,VES 使细胞生长曲线下移,用10, 20mg/L VES 处理细胞 2, 4, 7d 后,细胞生长抑制率分别为 33.2%和 46.7%、67.9%和 76.8%、81.7%和 89.3%。MTT 法显示 VES 对细胞增殖抑制作用在一定范围内呈剂量 - 效应依赖性。结论: VES 可有效抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖活性。     

Inhibition of human pterygium fibroblasts by vitamin E succinate

To study the antiproliferation of vitamin E succinate (VES) on pterygium fibroblasts in vitro and to find a potential agent for prevention and treatment of primary and recurrence pterygium. · METHODS: Primary culture and subculture of pterygium fibroblasts were established in vitro, and different concentrations of VES (0, 10 and 20mg/L) were added to subcultured fibroblasts, respectively. Influence of VES on the growth curve of fibroblast was observed at day 2, 4 and 7 after treatment of VES. 3-[4,5-Dimethylthiazolzyl]-2,5-Diphenyl Tetrazolium Bromide (MTT) assay at 490nm was used to evaluate the effect of the cells proliferation. · RESULTS: The addition of VES to culture caused the marked descent of growth curve in comparison with the control group, and the inhibiting rate of 10 and 20mg/L of VES was 33.2% and 46.7%, 67.9% and 76.8%, 81.7% and 89.3% at day 2, 4 and 7, respectively. VES could obviously inhibit the fibroblast proliferation in dose-dependent manner by MTT assay. · CONCLUSION: VES can significantly inhibit the proliferation of pterygium fibroblast in vitro.     

丹参酮ⅡA对抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察丹参酮ⅡA对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:用0～320mg/L丹参酮ⅡA作用体外培养的HPF,24～96h后MTT法检测药物对HPF的影响,免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性。结果:80mg/L丹参酮ⅡA作用48h后能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。丹参酮ⅡA在80～320mg/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可显著抑制HPF的增殖。     

粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增生作用的研究(英文)

目的:观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblast,HPF)增殖的影响,研究粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用,寻找辅助治疗翼状胬肉的新方法。方法:用不同浓度(0 ～160μmol/L)Tet作用体外培养的HPF,观察24 ～96h Tet对HPF的影响。MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测Tet干预前后HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:在Tet20, 40, 80, 160μmol/L浓度作用24 ～72h范围内,可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。Tet干预后PCNA蛋白表达下降,当Tet的浓度在20 ～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)结论:Tet可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,在一定浓度和时间范围内抑制作用呈剂量与时间依赖性。但在高浓度时( >160μmol/L)可能存在细胞毒性作用。     

两种选择性环氧化酶-2抑制剂对翼状胬肉成纤维细胞生长影响的对比研究

目的:观察两种选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖和凋亡的影响,并比较两者作用强弱,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:用0～200μmol/L尼美舒利(nimesulide)和美洛昔康(meloxicam)作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度的两种药物对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果:在尼美舒利50μmol/L作用24h后,美洛昔康100μmol/L作用24h后均能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。100μmol/L尼美舒利和美洛昔康分别作用48h后,流式细胞仪检测结果发现,药物作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当尼美舒利的浓度在25～200μmol/L,美洛昔康在50～200μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:两种选择性COX-2抑制剂均能抑制HPF的生长,并诱导其调亡,对COX-2的选择性越高,对HPF的抑制作用越强,尼美舒利的作用强于美洛昔康。     

翼状胬肉中环氧合酶2的表达及其相关研究

目的探讨翼状胬肉中环氧合酶2（COX-2）的表达及其选择性抑制剂尼美舒利的相关抑制作用。方法翼状胬肉组织与对照的正常结膜组织标本分别取自在华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科行手术治疗的患者,采用免疫组织化学法分别检测组织中COX-2的表达情况;原代培养人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）,经鉴定后,分别应用浓度0、1、10、100ng／ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）作用24h,采用Western—blot法分别检测HPF中COX-2蛋白的表达变化;分别应用浓度0、25、50、100、200μmol／L尼美舒利作用于HPF,分别培养24、48、72、96h,四唑氮蓝还原法（MTT）检测不同浓度尼美舒利在不同时间对HPF增殖的影响。结果免疫组织化学结果显示翼状胬肉组织中COX-2阳性表达率为70％。Western blot法显示在不同浓度bFGF刺激下,HPF中COX-2蛋白的表达均呈阳性,且表达呈剂量依赖性;MTT试验证实尼美舒利呈剂量依赖性和时间依赖性抑制成纤维细胞的增殖。用药24h后50μmol／L浓度即开始明显抑制（P〈0．05）。结论bFGF可以刺激HPF的增殖并诱导翼状胬肉中COX-2的表达上调。COX-2可能参与翼状胬肉的形成;而应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利可显著抑制HPF的增殖。     

过氧化物酶体增生物激活受体激动剂对翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用

背景翼状胬肉复发是翼状胬肉手术切除的常见并发症，其发生机制与细胞增生、炎症过程和新生血管形成有关，用抗增生药物控制翼状胬肉复发是目前研究的热点和方向。研究证实罗格列酮具有显著的抗炎、抗肿瘤、抑制新生血管作用，但其对翼状胬肉复发的作用研究较少。目的观察过氧化物酶体增生物激活受体（PPARγ）激动剂罗格列酮对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（HPFs）增生和凋亡的影响，寻求预防和辅助治疗翼状胬肉术后复发的新药物。方法对手术切除的原发性进展期翼状胬肉组织采用组织块培养法进行原代和传代培养，用酶消化法对培养的HPFs进行人工纯化。HPFs培养板中加入终浓度为5、10、25、50、75、100、150、200、400txmol／L的PPARγ激动剂罗格列酮，同时设未加药物干预的对照组和只加培养液的空白对照组。观察不同浓度罗格列酮作用12～72h后对HPFs生长的影响，MTT比色法检测细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期时相和凋亡的变化，实时定量聚合酶链反应（real—timePCR）检测增生细胞核抗原（PCNA）的表达变化。结果培养的HPFs呈长梭形，体积较大，呈铺路石样排列，对波形蛋白呈阳性反应，角蛋白反应阴性。罗格列酮作用后，培养的HPFs形态变圆，色变淡，核固缩或碎裂，局部细胞膜不完整。25～125p,mol／L罗格列酮作用12～72h可抑制HPFs的增生，其作用呈剂量和时间依赖性（剂量：F=158．312，P=0．006；时间：F=1．924，P=0．135）。流式细胞仪检测结果显示，25、75、125μmol／L罗格列酮作用于HPFs24h，随着浓度的增加G0／G1期细胞百分比逐渐上升，S期细胞百分比逐渐下降（P〈0．05），表明细胞阻滞于G0／G1期。罗格列酮组HPFs凋亡率明显高于对照组（P〈0．05），且随罗格列酮浓度的升高、作用时间的延长、HPFs凋亡率上升，差异有统计学意义（P〈O．05）。随着罗格列酮浓度的增加，PCNAmRNA在HPFs中的表达明显降低，差异有统计学意义（F=3244．329，P〈0．05）。结论PPAR3,激动剂以剂量和时间依赖的方式抑制HPFs的增生，并诱导其凋亡。大剂量的PPARγ激动剂可抑制细胞PCNA的合成和表达。     

核心蛋白多糖抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的实验研究

目的　观察核心蛋白多糖对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｔｅｒｙｇｉｕｍｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＦ）增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉切除术后复发的新方法。方法　采用组织块法体外培养ＨＰＦ,将处于对数生长期的细胞用于实验。将０．１ｍｇ?Ｌ－１、１．０ｍｇ?Ｌ－１、１０．０ｍｇ?Ｌ－１的Ｄｅｃｏｒｉｎ分别加入细胞培养基中培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ。ＭＴＴ比色法分别测定不同浓度的Ｄｅｃｏｒｉｎ作用于ＨＰＦ不同时间后的细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期时相变化,免疫组织化学法染色ＰＣ-ＮＡ检测细胞生长活性。结果　ＭＴＴ结果显示不同浓度组Ｄｅｃｏｒｉｎ作用ＨＰＦ２４ｈ细胞生长抑制率分别为（７．８１±１２６）％、（１９５２±２．１４）％、（４２．６９±１．６２）％,作用４８ｈ分别为（１０．１９±２．７４）％、（２２．２８±０．９７）％、（４５．７３±０．８２）％,作用７２ｈ分别为（２０．４９±１．３９）％、（２９．５０±２．４７）％、（５９．４１±１．７１）％。随着药物浓度的逐渐增高和作用时间的延长,细胞生长抑制率逐渐增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测各浓度Ｄｅｃｏｒｉｎ组ＨＰＦ中Ｇ０／Ｇ１期细胞比率均较空白对照组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。当Ｄｅｃｏｒｉｎ浓度在０．１～１０．０ｍｇ?Ｌ－１范围内作用ＨＰＦ７２ｈ,均能够明显抑制细胞表达ＰＣＮＡ（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｄｅｃｏｒｉｎ可以抑制ＨＰＦ的增生,诱导其凋亡,且呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为防治翼状胬肉的药物之一。