异体垂体移植诱发ICR小鼠子宫腺肌病动物模型的建立

目的探索用ICR小鼠建立子宫腺肌病实验动物模型的可行性和有效性。方法24只7周龄已达到性成熟但未曾受孕的雌性ICR小鼠开腹行异体脑垂体子宫内移植手术,小鼠分别在垂体移植术4个月后(20只)、6个月后(4只)处死,取出子宫和卵巢称重,计算小鼠子宫湿重/终末体重的比值,同时计数子宫表面突出的子宫腺肌病结节,联合组织切片HE染色检查评估子宫腺肌病的严重程度,并与未行垂体移植雌性ICR小鼠(4只)比较。结果垂体移植术后4个月,95%的小鼠(19/20)可诱发形成子宫腺肌病。术后6个月100%小鼠(4/4)诱发形成子宫腺肌病。对照组4只小鼠即使在术后6个月也不能自发发生子宫腺肌病。术后6个月小鼠终末体重、子宫湿重以及子宫湿重/终末体重的比值垂体移植组分别为37.33±2.21g、93.00±5.66mg和2.49±0.12;未做垂体移植组分别为36.25±2.48g、79.25±9.58mg和2.18±0.13。虽然两组小鼠终末体重和子宫湿重差异均无统计学意义(P>0.05),但垂体移植组的子宫湿重/终末体重比值显著高于未行垂体移植组(t=-3.698;P=0.034)。垂体移植术后6个月,平均子宫腺肌病突起结节数为11.50±2.38个;HE染色的平均分数为3.25±0.32。结论选择ICR小鼠经垂体移植手术建立子宫腺肌病实验动物模型是行之有效的。     

母兔卵巢异体异位移植的实验研究

目的:建立雌兔异体卵巢组织移植模型,探索非血管吻合卵巢组织移植的可行性。方法:以雌兔为实验动物,A组:阳性对照,不做任何处理;B组:阴性对照,切除双侧卵巢;C组:卵巢组织异体异位移植组,分离卵巢组织,切成约1mm×1mm×1mm大的组织块,移植于异体颈部皮下,术后观察阴道脱落细胞涂片变化,同时于移植后第18、25、35、45、55天检测血清E2及P水平,60天处死母兔,对移植物及子宫内膜进行组织学检查。结果:(1)C组3只雌兔阴道呈红色或粉红色、湿润、肿胀,进入发情期;(2)A、C组术后25天血清E2及P水平均高于B组,并逐渐下降,35天达到最低水平,随后又呈上升趋势,至55天已明显高于B组(P<0.05),B组则始终维持在较低水平,未出现升高趋势;(3)A、C组卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡。结论:兔卵巢组织异体异位移植后移植物可存活,并释放内源性激素,对靶器官产生作用。     

hUCMSCs移植提高围绝经期大鼠血清雌激素水平的持续时间及对卵巢P450arom表达的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)移植提高围绝经期大鼠血清雌激素(E2)水平的持续时间及其对卵巢细胞色素P450芳香化酶(P450arom)表达的影响。方法:阴道脱落细胞涂片法筛选出30只SPF级12~14月龄的围绝经期SD大鼠,随机分为A、B组;同时筛选出15只SPF级3~5月龄具有生育能力的青年雌性SD大鼠,作为C组。B组:尾静脉移植浓度为1×10~6cells/ml的h UCMSCs单细胞悬液1ml,隔日1次,共两次;A组:与B组在相同时间相同方式移植等量PBS液;C组:不予处理。于移植前所有大鼠经眼眶采血检测血清E2水平,并于末次移植后14d、21d、28d每组随机选取5只大鼠采血并取双侧卵巢组织,ELISA法检测血清E_2水平、免疫组化及Western blot法检测卵巢P450arom表达水平。结果:末次移植后14d、21d、28d,B组大鼠血清E_2水平、卵巢P450arom表达与移植前及A组相比均明显升高,差异有统计学意义(P0.05),B组3个时间段的E_2水平、P450arom表达无明显差异(P0.05)。结论:h UCMSCs移植提高围绝经期大鼠血清E_2水平可至少持续至移植后28d;h UCMSCs移植可促进围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶表达,是其提高E_2水平的可能途径。     

紫杉醇与多烯紫杉醇对小鼠卵巢储备能力的影响

目的:探索多次重复小剂量紫杉醇与多烯紫杉醇对小鼠卵巢储备功能的影响。方法:30只昆明雌性小鼠随机分组,即对照组(生理盐水0.2 ml/d×20 d)、紫杉醇组[紫杉醇注射液6.0 mg/(kg·d)×20 d]、多烯紫杉醇组[多西他赛注射液1.5 mg/(kg·d)×13 d],每组10只,用药期间每日观察小鼠的一般情况、动情周期,用药结束后观察小鼠血清FSH、E2水平、卵巢质量、形态结构和各级卵泡数的变化。结果:用药结束后紫杉醇组FSH水平(54.59±12.73 pg/ml)高于对照组(31.85±9.82 pg/ml),E2水平(27.39±9.36 pg/ml)低于对照组(55.26±13.41 pg/ml),差异有统计学意义(P0.05);而多烯紫杉醇组FSH(33.27±5.91 pg/ml)、E2(49.56±3.57 pg/ml)变化较对照组不明显,差异无统计学意义(P0.05);紫杉醇组FSH、E2水平变化较多烯紫杉醇组差异有统计学意义(P0.05)。紫杉醇组小鼠的总卵泡数(598±159个)和卵巢质量(7±2 mg)与对照组小鼠(1 243±137个,27±6 mg)比较,差异均有统计学意义(P0.05);多烯紫杉醇组小鼠的总卵泡数(1 143±130个)和卵巢质量(22±5 mg)与对照组小鼠比较,差异均无统计学意义(P0.05);小鼠的总卵泡数和卵巢质量组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论:多次重复小剂量紫杉醇与多烯紫杉醇对卵巢储备功能均有不同程度的影响,其中紫杉醇影响更为严重。     

亮丙瑞林对顺铂所致大鼠卵巢毒性保护的实验研究

目的:探讨亮丙瑞林(GnRH-a)对大鼠顺铂所致卵巢功能损伤的保护作用。方法:选择SPF级别12周龄SD雌鼠96只,随机分为4组,每组24只。A组为正常对照组,腹腔注射生理盐水2ml/d。B组为顺铂组,C组为亮丙瑞林(GnRHa)+顺铂组,D组为单用亮丙瑞林组。于间情期C、D组皮下注射亮丙瑞林0.25mg/只(单次给药)。B、C组腹腔注射顺铂2mg/(kg.d),连续用药10天。用药结束后及结束后30天分别每组处死8只;每组剩余的雌鼠按2:1与雄鼠交配,产仔后处死。称体重、卵巢及子宫重量,统计卵泡数量和各级卵泡直径,观察卵巢和子宫病理学变化。测雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)。观察孕鼠产仔数量及外观。结果:用药结束后B、C组大鼠精神及饮食状况差,体重及子宫重量下降(P<0.05),以B组最为明显(P<0.05)。用药结束后30天4组大鼠体重增加,B组体重恢复得最慢(P<0.05)。用药结束后B、D组子宫黏膜层变薄,纤维成分多,子宫腺体少。C组子宫黏膜层变薄,但腺上皮细胞比B组清晰,有顶浆分泌现象。C、D组原始卵泡较多,生长卵泡、成熟卵泡数减少,各级卵泡的粒细胞层明显减少(P<0.05)。B组成熟卵泡减少明显(P<0.05)。用药结束后30天,B、C、D组子宫内膜厚度及腺体量均有所改善。B组成熟卵泡数减少(P<0.05)。C组和D组成熟卵泡数增多(P<0.05)。用药结束后B、C、D组FSH升高,E2下降(P<0.05),B组与C、D组相比,FSH升高,E2下降更明显(P<0.05)。用药结束后30天,C、D组FSH降低,E2升高(P<0.05)。4组鼠仔未见畸形,B组产仔数减少。结论:顺铂对大鼠卵巢有毒性作用。亮丙瑞林可使原始卵泡数增多,卵泡处于静止期,降低顺铂对卵巢的毒性作用。     

儿茶酚邻位甲基转移酶基因在小鼠动情周期和早孕期间的表达及调控

目的:探讨儿茶酚邻位甲基转移酶(Comt)基因在小鼠动情周期中的表达调控规律,为其参与调节生殖过程的作用机制提供新的证据。方法:采用RT-PCR和实时定量PCR的方法检测成年小鼠动情周期中不同时相以及孕d7的子宫、卵巢组织Comt mRNA水平变化;性成熟前小鼠分别用E2(苯甲酸雌二醇)、P4(孕酮)、E2+Tam(苯甲酸雌二醇+他莫昔芬)、P4+RU486(孕酮+米非司酮)处理,检测其子宫和卵巢组织的mRNA水平。结果:成年小鼠动情期子宫、卵巢组织ComtmRNA水平较高,与动情前期、动情后期、动情间期相比,差异有统计学意义(P<0.05);虽然性成熟前小鼠子宫组织的各处理组与对照组间无显著性差异(P>0.05),但卵巢组织的处理组与对照组间有统计学差异(P<0.05)。卵巢组织中Comt mRNA水平E2处理组显著低于对照组,而E2+Tam组显著高于E2处理组(P<0.05)。妊娠组子宫中Comt mRNA水平显著低于未孕组(P<0.05),而卵巢组织的组间差异不显著(P>0.05)。结论:小鼠Comt mRNA水平随动情周期变化,且与妊娠有关;雌激素对Comt的生物合成具有负调节作用,而且这种作用可能是通过雌激素受体依赖性方式进行的;但是孕激素的作用不显著。     

GnRHa联合雌激素预防顺铂致小鼠卵巢功能损伤的保护作用

目的:研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)联合雌激素(E2)对顺铂(CDDP)所致小鼠卵巢功能损伤的保护作用。方法:选择具有正常性周期的5～6周龄雌性Balb/c小鼠40只,随机分为正常对照组、CDDP组、GnRHa+E2组、GnRHa+E2+CD-DP组,分别注射生理盐水、CDDP、GnRHa+E2和GnRHa+E2+CDDP。采用放免法测定各组小鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、E2水平。在停药后间期处死小鼠,卵巢称重后组织病理切片HE染色观察各组卵巢组织结构及卵泡数量变化。结果:CDDP组小鼠与Gn-RHa+E2+CDDP组比较,血清FSH明显升高,E2水平明显降低(P0.05)。CDDP组卵巢和子宫湿重明显低于GnRHa+E2+CDDP组(P0.05)。CDDP组与其他3组比较,卵巢卵泡总数最少(P0.05)。经统计学分析,CDDP与GnRHa+E2间有交互作用。结论:GnRHa联合雌激素能够减轻顺铂对卵巢结构及功能的破坏,在一定程度上保护卵巢的储备功能。     

免疫抑制剂FK506对雌性大鼠性腺轴的影响

目的:探讨免疫抑制剂FK506对雌性大鼠生殖内分泌功能的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为4组:对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别每日给予生理盐水以及不同剂量FK506灌胃(0.2mg/kg、1mg/kg、2mg/kg)×42d。用药前2周及用药期间每日行阴道涂片检查,观察大鼠动情周期变化;停药后于动情间期处死大鼠,放免法检测血清E2、P、LH水平,免疫组化法检测卵巢、垂体、下丘脑雌激素受体(ER)表达水平。结果:①连续给药42d后,中、高剂量组大鼠动情周期平均天数(5.0d、5.5d)均较对照组(4.1d)显著延长(P<0.05,P<0.01)。②中、高剂量组大鼠平均血清孕酮(P)水平(42.5ng/ml、32.8ng/ml)与对照组(78.9ng/m)相比较明显降低(P均<0.01)。低、中、高剂量组大鼠平均血清雌二醇(E2)水平(9.4pg/ml,7.7pg/ml,8.3pg/ml)也明显低于对照组(14.3pg/ml)(P均<0.05)。各组间黄体生成素(LH)水平无显著差异。③大鼠卵巢、垂体以及下丘脑组织中雌激素受体表达与FK506剂量呈负相关。结论:大鼠用药后血清P及E2水平明显下降,性腺轴各组织器官ER表达也发生不同程度下调,上述作用呈一定的量-效关系。提示FK506长期用药对大鼠生殖内分泌功能可造成一定程度的影响。     

干细胞因子和白血病抑制因子对冻融后人原始卵泡体外生长发育的研究

目的:探讨干细胞因子(stem cell factor,SCF,又称KIT配体)和白血病抑制因子(leukaemiainhibitory factor,LIF)对冻融后人原始卵泡体外培养生长发育的影响。方法:收集18例卵巢良性肿瘤手术患者的正常卵巢皮质,采用直接覆盖玻璃化冷冻法保存卵巢组织,冻融后分离卵泡,随机分成5组:对照组(A组)、10 ng/ml SCF组(B组)、10 ng/ml LIF组(C组)、10 ng/ml SCF+10 ng/ml LIF组(D组)和100 ng/ml SCF+10 ng/ml LIF组(E组),行体外培养,比较SCF和/或LIF对人原始卵泡生长发育的影响。结果:①随培养天数的增加,对照组卵泡直径增长缓慢,明显小于各实验组(P<0.05);D、E组中卵泡直径增长迅速,较B、C组差异有统计学意义(P<0.05)。②随着培养天数的增加,各组卵泡均能分泌激素。4 d后对照组卵泡激素水平增长缓慢,明显低于各实验组(P<0.05),而D、E组中卵泡激素分泌增长迅速,较B、C组差异有统计学意义(P<0.05),D、E组中卵泡激素增长速度相差不大,但在第4日差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在体外培养液中添加SCF或LIF以及两者联合添加有利于促进卵泡的生长发育,提高E2分泌功能,且SCF和LIF联合其作用更加明显。     

两种玻璃化法冻存小鼠卵巢的研究

目的:探讨2种玻璃化法对小鼠卵巢组织、器官形态和功能保存作用的影响。方法:以改良的DMEM-F12为玻璃化液,分别采用常规玻璃化法(A组)和超速玻璃化法(B组)冻存小鼠卵巢组织及器官,解冻后通过组织学观察、卵巢组织异体、卵巢器官自体肾被膜下移植,观察动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况,并分别以新鲜卵巢组织异体移植、卵巢器官自体移植(C组)为对照,评价2种玻璃化法的冻存效果。结果:①A组、B组、C组卵巢组织异体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别10.5±5.4d、8.0±2.2d、6.3±1.0d。A组与C组比,差异显著(P<0.05);B组与C组无差异,A组与B组间也无差异(P均>0.05)。②A组、B组、C组卵巢器官自体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别为9.4±0.9d、6.9±1.1d、6.1±1.1d,A组与B、C组相比有统计学差异(P<0.05),而B组与C组间无差异(P>0.05)。移植存活的卵巢组织、器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常。结论:2种玻璃化法可有效地冻存卵巢组织及器官,但超速玻璃化法效果较优。     

Heterotopic ovarian transplantation without vascular pedicle in syngeneic Lewis rats: six-month control of estradiol and follicle-stimulating hormone concentrations after intraperitoneal and subcutaneous implants.

OBJECTIVE: To assess the recovery, maintenance, and quality of ovarian function by comparing the success of autotransplantation in intraperitoneal (IP) and SC locations over a 6-month period in syngeneic Lewis rats. DESIGN: Experimental animal study. SETTING: Unit of Experimental Research at the Barcelona University School of Medicine. ANIMAL(S): Female syngeneic Lewis rats. INTERVENTION(S): The animals were randomized to one of three groups: group A, control group with ovariectomy (n = 15); group B, ovariectomy and IP autologous heterotopic transplant of ovarian tissue without vascular pedicle (n = 14); and group C, ovariectomy and SC autologous heterotopic transplant (n = 15). MAIN OUTCOME MEASURE(S): Serum levels of FSH and 17beta-E2 and vaginal cytology. RESULT(S): In groups B and C, E2 serum concentrations from day 7 and day 10 onward remained comparable to basal levels, and significantly higher than in group A, throughout the 6-month period. In group B from day 7 after surgery onward, and in group C from day 10 after surgery onward, FSH concentrations remained low (comparable to basal levels) throughout the follow-up period. Vaginal cytology of groups B and C showed trophic maturation between days 4 and 10 after ovariectomy and insertion of the ovarian tissue implant, whereas the control group remained atrophic. There were no statistically significant differences between IP and SC implants. CONCLUSION(S): A heterotopic autotransplant of ovarian tissue without vascular pedicle in syngeneic Lewis rats is successful for > or =6 months.     

Heterotopic ovarian transplantation without vascular pedicle in syngeneic Lewis rats: long-term evaluation of effects on ovarian structure and function

OBJECTIVE: To assess the long-term efficacy of intraperitoneal (IP) and subcutaneous (SC) ovarian autotransplantation in rats. DESIGN: Experimental animal study. SETTING: Unit of Experimental Research, Barcelona University School of Medicine. ANIMAL(S): Female syngeneic Lewis rats aged 14 weeks. INTERVENTION(S): Group A, control group undergoing ovariectomy (n = 15); group B, undergoing ovariectomy and IP autologous heterotopic transplant (n = 15); and group C, ovariectomized with SC autologous heterotopic transplant (n = 15). In groups B and C, five animals were killed and their ovaries removed for morphometric analysis at 30 days after transplantation; five additional animals were killed at 180 days, and the remaining five animals were killed at 360 days. MAIN OUTCOME MEASURE(S): Ovarian morphometric analysis and serial measurement of E(2) and FSH serum levels. RESULT(S); The mean number of antral follicles in the control group A was significantly higher than that observed in the ovarian grafts collected and examined 30 days after grafting in rats from groups B and C, but the mean granulosa cell area was significantly higher in both transplantation groups than in controls because of ovarian follicular hyperplasia. Histological examination of ovaries removed at 6 and 12 months after grafting in groups B and C showed increasing degrees of fibrosis, loss of primordial follicles, and the presence of epithelial cysts. In groups B and C, from day 30 after surgery onward, serum E(2) was significantly higher and FSH significantly lower, respectively, than in group A. E(2) and FSH patterns in groups B and C were similar throughout the study period. CONCLUSION(S): Heterotopic ovarian transplantation without vascular pedicle in rats is characterized by follicular hyperplasia endocrinologically functional, followed by progressive loss of follicles in heterotopic ovarian autografts.     

阴道超声评估不孕妇女子宫内膜容受性的价值研究

目的:探讨阴道超声评估子宫内膜容受性的价值。方法:对1680例处于排卵期的不孕症患者,应用阴道超声检测卵泡大小、内膜厚度,并按照内膜超声图像分为A、B、C3型,将子宫内膜厚度、类型与妊娠结局进行对照分析。结果:A型内膜占66.07%,妊娠率12.61%;B型内膜占25.00%,妊娠率9.52%;C型内膜占8.93%,妊娠率6.67%。各组成功妊娠的内膜类型以A型为主,占73.68%(140/190)。不同子宫内膜类型的妊娠率差异有统计学意义,两两比较表明,A型妊娠率高于C型(χ2=4.4546,P=0.0348),差异有统计学意义,A型与B型及B型与C型的妊娠率均无统计学差异(χ2值及P值分别为2.8005、0.0942及2.2883、1.1275)。按A型子宫内膜厚度不同分为5组,其中厚度在8～10.9mm妊娠率最高,妊娠例数占总妊娠例数的92.86%(130/140),高于厚度<8mm组和>11mm组,差异有统计学意义。按B型子宫内膜厚度不同分为5组,其中7～8.9mm组妊娠率高于其余各组,差异有统计学意义。结论:子宫内膜适合着床的理想厚度是8～10.9mm,A型内膜更适合着床。阴道B超监测子宫内膜类型与厚度在评估内膜容受性、指导临床调整用药及自然受孕或人工助孕等方面有主要价值。     

长方案使用短效GnRHa未完全降调节联合应用长效GnRHa的体外受精-胚胎移植结局分析

目的:探讨长方案控制性超排卵(COH)短效醋酸曲普瑞林(Gn-RHa,0.1mg/支)未完全降调节,联合应用长效GnRHa对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局影响。方法:回顾性分析本中心采用IVF-ET助孕长方案降调节治疗96个周期,根据用药后是否达到降调节标准,分为达标组(A组,n=72例)、未达标组(B组,n=24例);未达标组为避免取消周期,继续采用长效GnRHa(3.75或1.875mg)再降调节16～18天后行超促排卵治疗,分析两组超促排卵情况以及妊娠结局。结果:B组短效GnRHa降调节14天后FSH、E2、P、内膜厚度未达到降调节标准,结果均高于A组及B组补救长效GnRHa降调节后(P<0.05);B组(补救后)LH、E2低于A组,差异有显著性(P<0.05)。B组Gn天数、用量高于A组(P<0.05);B组HCG日LH、E2、≥14mm卵泡数、平均获卵数均低于A组(P<0.05);两组MⅡ率、受精率、优胚率、种植率、临床妊娠率、流产率,取消周期率,OHSS率无显著性差异(P>0.05)。结论:长方案短效GnRHa降调节未达标准者,于本周期内行长效GnRHa再次降调节,降低了周期取消率,仍可达到较高妊娠率。     

维生素D与不孕女性卵巢储备标志物的相关性分析

目的探讨血清维生素D水平与卵巢储备标志物抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)和窦卵泡数(antral follicle count,AFC)之间的关系。方法回顾性分析2016年5月—2017年6月第一次接受辅助生殖助孕技术治疗的不孕症患者共2 391例,根据患者血清25(OH)D_3水平分为≤30 nmol/L组(A组,n=417)、30.1~49.9 nmol/L组(B组,n=626)和≥50 nmol/L组(C组,n=1 348)。分析患者血清25(OH)D_3水平与不孕女性卵巢储备标志物血清AMH水平和AFC之间的相关性。结果 (1)各组患者间的年龄、体质量指数(BMI)、基础FSH、不孕原因构成比及不同季节的维生素D水平的差异均无统计学意义(P0.05);(2)3组患者的AMH水平分别为(4.07±3.53)ng/mL、(4.12±3.43)ng/mL和(4.10±3.18)ng/mL;AFC分别为14.0±6.7、13.7±5.9和14.1±6.1,组间差异均无统计学意义(P0.05);(3)调整潜在的混杂因素后,运用相关因素多重线性回归分析显示,血清AMH水平的偏回归系数(B)=-0.005,标准误差(sx)=0.007,P=0.506;AFC的B=-0.122,sx=0.019,P=0.214,与血清25(OH)D_3水平之间均无相关性(P0.05)。结论不孕女性维生素D和卵巢储备标志物血清AMH水平及AFC之间不存在相关性,对维生素D缺乏的不孕女性通过补充维生素D以改善卵巢储备功能可能没有作用。     

Effects of previous ovarian surgery on the follicular response to ovulation induction in an in vitro fertilization program

This study examined the effects of previous ovarian surgery on the clinical response to ovulation induction with clomiphene citrate-human menopausal gonadotropin in an in vitro fertilization program. Patients were divided into five clinical groups: group A (n = 63), no previous ovarian surgery; B (n = 9), unilateral cystectomy; C (n = 6), unilateral oophorectomy with no contralateral ovarian surgery; D (n = 7), bilateral ovarian surgery with both ovaries present; and E (n = 4), unilateral oophorectomy and contralateral cystectomy. Patients in group E demonstrated significantly lower serum estradiol on cycle days 9-11 (P less than or equal to .05) and fewer follicles on cycle days 11-12 (P less than or equal to .05) than did patients in groups A-D. The percentage of cancelled cycles increased with increasing amounts of ovarian surgery (P less than or equal to .03). The study suggests that one cause of a poor response to ovulation induction for in vitro fertilization may be prior extensive ovarian surgery.