壬基酚孕期经口染毒对F1代昆明小鼠卵巢发育的影响

目的:观察壬基酚孕期暴露对F1代昆明小鼠卵巢发育的影响。方法:交配后7d起,对孕鼠分别每日灌胃壬基酚(NP)(分别为1.2mg/kg、12mg/kg、120mg/kg),对照组灌胃花生油,直至交配后17d,每组7只。子代小鼠出生14d时取卵巢组织病理学检查,计数各级卵泡。观察子代雌鼠观察阴道开口时间和规律动情周期出现时间。子代雌鼠成年3月龄后,于动情前期处死,放免法测定血清E2、FSH浓度,酶联免疫吸附法测定血清抑制素B浓度,取卵巢组织行病理学检查,计数各级卵泡。结果:NP低剂量组阴道开口出现时间提前(P<0.05);低、中剂量组规律动情周期出现时间提前并可见动情周期延长(P<0.05);高剂量组性成熟期始基卵泡数减少(P<0.05),血清抑制素B水平降低(P<0.05);各用药组动情前期血清E2水平降低(P<0.05),FSH水平无明显变化。用药组体质量较对照组明显升高(P<0.05)。结论:壬基酚胎仔宫内暴露,在较低剂量时可影响小鼠的动情起始及动情周期,在较高剂量时可降低卵巢储备,并可影响成年后小鼠雌激素水平。     

胰岛素抵抗及子宫内膜增殖大鼠模型中脂肪因子和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达

目的:观察有胰岛素抵抗及子宫内膜增殖大鼠模型中血浆脂联素(Adipo)等脂肪因子的水平,检测Adipo和脂联素受体(AdipoR)在大鼠子宫组织中的表达,并探讨其分子生物学机制。方法:选取8周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠45只(每组9只),分别给予普通饮食(StD组)和高脂饮食(HFD组)40周。将StD组分为对照C组(普通饮食+假去势手术+对照溶剂)、NO组(普通饮食+去势手术+对照溶剂)、NE组(普通饮食+去势手术+17β-雌二醇灌胃),HFD组分为FO组(高脂饮食+去势手术+对照溶剂)和FE组(高脂饮食+去势手术+17β-雌二醇灌胃)。应用酶联免疫吸附(ELISA)检测小鼠血浆中脂肪因子水平,实时荧光定量PCR、Western Blotting和免疫组化检测子宫内膜中脂肪因子的水平,免疫组化检测子宫内膜中PTEN、AMPK和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:①与NE组大鼠相比,FE组大鼠子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞的高度、肌层的厚度显著增加(P<0.05)。②与对照C组相比,子宫内膜增生组(NE组和FE组)大鼠血浆Adipo水平显著降低(P<0.05),FO组大鼠血浆Adipo显著升高(P<0.05)。③在雌激素的作用下(NE组和FE组)子宫组织中Adipo mRNA的表达增多:与NO组大鼠相比,NE组大鼠子宫组织中Adipo mRNA水平显著升高(P<0.05);与FO组大鼠相比,FE组大鼠Adipo mRNA水平也显著升高(P<0.05)。大鼠子宫中AdipoR1 mRNA和AdipoR2 mRNA水平在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与对照C组相比,FE组大鼠子宫组织中Adipo蛋白的表达明显降低(P<0.05)。④FE组子宫PTEN和p-AMPK蛋白的表达显著低于对照C组(P<0.05),PI3Kp85α、p-AKT蛋白表达显著高于对照C组(P<0.05)。结论:长期高脂饮食诱导大鼠的胰岛素抵抗可协同17β-雌二醇刺激子宫内膜增殖;胰岛素抵抗和雌激素影响血浆Adipo的水平;胰岛素抵抗和雌激素的协同作用使大鼠子宫内膜PTEN的表达降低、AMPK通路可能被抑制、PI3K/AKT信号通路可能被激活。     

雌激素通过FTO基因调控子宫内膜癌细胞的增殖活性

目的:探讨雌激素对子宫内膜癌细胞系ishikawa细胞中肥胖相关基因FTO表达的调控机制以及对增殖的影响。方法:RT-PCR及细胞免疫荧光法检测不同浓度雌激素处理后ishikawa细胞中FTO表达水平的变化,PCR方法检测雌激素是否通过PI3K/AKT和MAPK信号通路对FTO进行调控,应用siRNA干扰法和MTT分析法检测FTO基因对细胞增殖的影响。结果:(1)不同浓度雌激素均可上调ishkawa细胞中FTO mRNA的表达,以10-9mol/L作用最明显,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05);(2)E2+LY294002、E2+U0126组FTO mRNA表达水平比单独加雌激素组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),E2+LY294002+U0126联合加通路抑制剂组比E2+LY294002、E2+U0126单独加通路抑制剂组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)siFTO干扰组FTO mRNA表达水平比阴性对照组明显降低,干扰效率达40%(P<0.05),FTO被干扰后,细胞的增殖活性受到明显的抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:雌激素通过受PI3K/AKT和MAPK信号通路调控的FTO基因调控细胞的增殖活性。     

PRDXⅠmRNA在小鼠卵泡发育和排卵及卵巢衰老过程中的表达

目的:探讨过氧化氧化还原蛋白(PRDX)ⅠmRNA在小鼠卵泡发育、排卵及卵巢衰老过程中的重要作用。方法:分别选用不同卵巢功能(形成期、性未成熟期、性成熟期、功能退化期)和不同动情周期(动情前期、动情期、动情后期、动情间期)以及促性腺激素预处理不同时间点[注射0.9%氯化钠液(CON)后、注射孕马血清(PMSG)48小时(P48h)后和注射绒促性素(HCG)后4小时(H4h)至48小时(H48h)]C57BL/6j小鼠的卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测PRDXⅠmRNA在卵巢中的表达。结果:①PRDXⅠmRNA在性未成熟期组、性成熟期组和功能退化期组小鼠卵巢中稳定表达,组间比较,差异无统计学意义(P0.05),但均较形成期组低,差异均有统计学意义(P0.05)。②在性成熟小鼠不同动情周期间表达比较,差异无统计学意义(P0.05)。③在促性腺激素预处理卵巢中,与CON组相比,PRDXⅠmRNA在PMSG作用后48小时(P48h组)表达显著升高(P0.05),而在HCG作用后8小时(H8h组)最低(P0.05),后于48小时(H48h组)升高(P0.05)。结论:PRDXⅠmRNA在卵泡发育、排卵和卵巢衰老中可能发挥调控作用。     

子宫内膜修复法及子宫内膜萎缩法治疗急性重症青春期异常子宫出血的疗效分析

目的比较苯甲酸雌二醇与戊酸雌二醇两种子宫内膜修复法及炔雌醇环丙孕酮子宫内膜萎缩法治疗青春期异常子宫出血(AUB)的疗效。方法对166例青春期AUB患者随机分入苯甲酸雌二醇组、戊酸雌二醇组和炔雌醇环丙孕酮组,对临床资料和止血效果进行比较。结果炔雌醇环丙孕酮与苯甲酸雌二醇止血效果比较,差异无统计学意义(P0.05),但二者均显著优于戊酸雌二醇,差异有统计学意义(P0.05)。炔雌醇环丙孕酮在不良反应发生率方面显著优于其余二者,差异有统计学意义(P0.05)。结论炔雌醇环丙孕酮与苯甲酸雌二醇治疗青春期AUB的止血效果类似,显著优于戊酸雌二醇,而炔雌醇环丙孕酮副反应较少,更易被患者接受。     

动情周期与去卵巢小鼠超声心动图的比较

目的:探讨雌激素对动情周期各阶段和去卵巢小鼠心功能的影响。方法:应用高分辨率超声影像系统,观察小鼠动情周期各阶段和去卵巢小鼠M型超声心动图、二尖瓣血流速度频谱、组织多普勒显像的改变。结果:小鼠动情周期各阶段超声心动图检查的各项指标的差异无统计学意义;而去卵巢小鼠的左心室质量(LVM)增加,左心室短轴缩短率(FS)、射血分数(LVEF)减低;舒张早期最大血流速度(E)降低,舒张晚期最大血流速度(A)增高,E/A比值降低,等容舒张时间(IVRT)延长;舒张早期二尖瓣运动速度(E')及E'与舒张晚期二尖瓣运动速度(A')比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:雌激素正常生理分泌规律变化对心功能无影响,而卵巢摘除,雌激素水平下降,可导致心脏收缩和舒张功能减退。     

GnRHa联合雌激素预防顺铂致小鼠卵巢功能损伤的保护作用

目的:研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)联合雌激素(E2)对顺铂(CDDP)所致小鼠卵巢功能损伤的保护作用。方法:选择具有正常性周期的5～6周龄雌性Balb/c小鼠40只,随机分为正常对照组、CDDP组、GnRHa+E2组、GnRHa+E2+CD-DP组,分别注射生理盐水、CDDP、GnRHa+E2和GnRHa+E2+CDDP。采用放免法测定各组小鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、E2水平。在停药后间期处死小鼠,卵巢称重后组织病理切片HE染色观察各组卵巢组织结构及卵泡数量变化。结果:CDDP组小鼠与Gn-RHa+E2+CDDP组比较,血清FSH明显升高,E2水平明显降低(P0.05)。CDDP组卵巢和子宫湿重明显低于GnRHa+E2+CDDP组(P0.05)。CDDP组与其他3组比较,卵巢卵泡总数最少(P0.05)。经统计学分析,CDDP与GnRHa+E2间有交互作用。结论:GnRHa联合雌激素能够减轻顺铂对卵巢结构及功能的破坏,在一定程度上保护卵巢的储备功能。     

瘦素长受体缺失小鼠生殖功能障碍的分子机制研究

目的:探讨引起瘦素长受体缺失(LR-)小鼠(db/db小鼠)生殖功能障碍的原因,阐明瘦素与生殖功能障碍的直接关系。方法:将LR-的雌性db/db小鼠和其同窝出生的有完整LR(LR+)的雌性野生型C57BL/6J小鼠进行异体卵巢原位移植,构建实验小鼠的LR基因型组合。分别为躯体LR-、卵巢LR+(KO组)和躯体LR+、卵巢LR+(WT组),每组各7只动物。移植后恢复2周然后监测卵巢的周期变化,连续2个周期。于小鼠动情间期取血检测血清性激素水平和糖脂代谢指标;用RT-PCR法检测卵巢组织STAR,CYP17,CYP19,OB-RB,JAK2,STAT3,PIAS3和SOCS3的mRNA表达水平。结果:①卵巢移植术后KO组小鼠无动情周期,WT组小鼠动情周期正常,2组间卵巢、子宫质量、雌二醇、促卵泡生成素水平、体质量、脂肪垫、葡萄糖、胰岛素、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇差异均有统计学意义(P0.01)。②KO组卵巢中甾体激素STAR,CYP17和CYP19的mRNA的表达量均低于WT组。2组卵巢中均有OB-RB mRNA表达,且KO组OB-RB,STAT3,PIAS3和SOCS3的mRNA表达强于WT组。结论:①db/db小鼠机体内分泌环境异常(高血糖高血脂内分泌环境、低促性腺激素)下调卵巢甾体激素合成酶基因的表达,引起卵巢功能减退。②卵巢作为一个较小的内分泌器官并不能影响全身的糖脂代谢。     

免疫抑制剂FK506对雌性大鼠性腺轴的影响

目的:探讨免疫抑制剂FK506对雌性大鼠生殖内分泌功能的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为4组:对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别每日给予生理盐水以及不同剂量FK506灌胃(0.2mg/kg、1mg/kg、2mg/kg)×42d。用药前2周及用药期间每日行阴道涂片检查,观察大鼠动情周期变化;停药后于动情间期处死大鼠,放免法检测血清E2、P、LH水平,免疫组化法检测卵巢、垂体、下丘脑雌激素受体(ER)表达水平。结果:①连续给药42d后,中、高剂量组大鼠动情周期平均天数(5.0d、5.5d)均较对照组(4.1d)显著延长(P<0.05,P<0.01)。②中、高剂量组大鼠平均血清孕酮(P)水平(42.5ng/ml、32.8ng/ml)与对照组(78.9ng/m)相比较明显降低(P均<0.01)。低、中、高剂量组大鼠平均血清雌二醇(E2)水平(9.4pg/ml,7.7pg/ml,8.3pg/ml)也明显低于对照组(14.3pg/ml)(P均<0.05)。各组间黄体生成素(LH)水平无显著差异。③大鼠卵巢、垂体以及下丘脑组织中雌激素受体表达与FK506剂量呈负相关。结论:大鼠用药后血清P及E2水平明显下降,性腺轴各组织器官ER表达也发生不同程度下调,上述作用呈一定的量-效关系。提示FK506长期用药对大鼠生殖内分泌功能可造成一定程度的影响。     

T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导因子l(Tiam1)在动情周期小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导因子l(Tiam1)在动情周期中小鼠子宫内膜的表达规律。方法:采用RT-PCR、免疫组织化学法和Western blotting分别检测小鼠子宫内膜在动情前期、动情期、动情后期和动情间期Tiam1mRNA和蛋白的表达规律。结果:在动情周期中,小鼠子宫内膜mRNA在动情期表达最高,与其它3期相比具有显著性差异,P<0.01;免疫组织化学和Westernblotting的结果也显示Tiam1蛋白在动情期子宫内膜的表达规律与RT-PCR的结果一致。结论:Tiam1在小鼠动情周期子宫内膜中呈动态表达,提示Tiam1可能参与了动情周期子宫内膜变化的调控。     

T淋巴瘤侵袭与转移诱导因子1在早孕小鼠蜕膜的表达动态过程

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(T-lymphoma invasion and metastasisi nducing proteinI,Tiam1)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律。方法:采用RT-PCR和Western blotting方法分别检测早孕小鼠子宫内膜中Tiam1mRNA和蛋白的表达水平。结果:①Tiam1mRNA的表达量随妊娠天数的增加逐渐增高,到妊娠第5日表达量达到峰值,于妊娠第6日、第7日开始逐渐降低;②Tiam1蛋白表达与其mRNA表达规律基本一致。结论:Tiam1在妊娠早期子宫内膜中持续表达,可能参与小鼠胚胎植入过程。     

ΔNp63在早孕小鼠子宫内膜表达规律的研究

目的：初步探讨p53基因家族新成员——截断型 p63(ΔNp63)在小鼠生殖中的作用。方法：收集动情周期各期和早孕2 d、3 d、4 d、5 d小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠。运用RT-PCR技术检测ΔNp63 mRNA的表达规律；免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中ΔNp63蛋白的表达情况。结果：1)RT-PCR：动情前期ΔNp63 mRNA明显高表达；动情间期和动情期表达减弱；动情后期表达极低；早孕期间小鼠子宫内膜ΔNp63 mRNA表达较未孕组高,并逐渐增强,孕5 d达高峰。2)免疫组织化学：ΔNp63蛋白在间质细胞胞浆表达,表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似。结论：ΔNp63在动情前期高表达,可能与子宫内膜间质细胞增殖、生长有关；在早孕期间高表达,说明它很可能进一步促进间质细胞分裂,顺利转化成蜕膜细胞,进而有利于提高窗口期子宫的容受性。     

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1基因在小鼠子宫内膜的动态表达

目的：探讨肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在小鼠胚胎着床过程中的功能。方法：应用RT-PCR和免疫组织化学技术分别观察CD82/KAI1mRNA和蛋白在小鼠动情周期和早孕子宫中的表达。结果：在动情周期中,CD82/KAI1mRNA除在动情期较低外,其余三期的表达量基本相同,但蛋白质却是在动情期表达最丰富,子宫内膜上皮和基质均呈阳性。在早孕子宫中,CD82/ KAI1mRNA的表达逐渐增多,蛋白质表达的量和范围也逐渐增强。结论：CD82/KAI1在小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。     

瘦素在围着床期小鼠子宫组织中的表达

目的:探讨瘦素在围着床期小鼠子宫组织中的表达规律。方法:分别取妊娠d1-6NIH小鼠子宫,提取总RNA,检测子宫以及胚胎着床点和非着床点瘦素mRNA表达规律;同时石蜡包埋、切片,采用免疫组化试验,分别检测妊娠d1-6子宫瘦素蛋白的表达规律。结果:妊娠d1-6小鼠子宫组织均有瘦素mRNA和蛋白的表达。瘦素mRNA呈规律性表达,d1、d2表达微弱,d3开始增强,d4达到高峰,d5、d6仍维持在一定水平;另妊娠d5或d6,着床点瘦素mRNA水平比非着床点显著增强。瘦素蛋白主要定位于腔上皮和腺上皮。结论:小鼠胚胎围着床期,瘦素在子宫组织呈动态表达。提示瘦素可能与胚胎发育、胚胎着床的进程有关。     

Behavioural pattern of tumour cells in mouse uterus

The behavioural pattern of transplantable mouse fibrosarcoma (MFS) cells infused into the pregnant, pseudopregnant and nonpregnant mouse uteri was studied histologically. In some nonpregnant and pseudopregnant uteri, the tumour cells, without colonizing inside the uterus, traverse the endometrium and within 5 days of treatment form tumour nodules outside the myometrium, indicating the presence of an initial and temporary tumour rejection mechanism in these uteri. In later stages MFS cells form large necrotic tumours in these uteri. In the pregnant uterus no tumour nodules are formed outside the myometrium even after 20 days of treatment. Furthermore, the size of the tumour formed in the endometrium of the pregnant uterus is quite small and the tumour cell growth rate is lower than that of the tumour cells in the nonpregnant and pseudopregnant uteri. These results indicate that, in the pregnant mouse uterus, fibrosarcoma cells display an altered pattern of invasion and decreased growth rate compared to those in nonpregnant and pseudopregnant uteri.     

线粒体融合基因2在小鼠卵巢组织中的表达及意义

目的:检测小鼠卵巢组织中线粒体融合基因2(Mfn2)的表达、ATP水平以及卵巢组织的超微结构,探讨Mfn2与卵巢功能的相关性。方法:采用Western blot和real-time PCR分别检测年轻组(8～10周龄,20例)和老龄组小鼠(52～54周龄,20例)卵巢组织中Mfn2蛋白和Mfn2 mRNA的表达;磷钼酸比色法检测小鼠卵巢组织中ATP含量;透射电镜观察卵巢组织的超微结构。结果:老龄组小鼠卵巢组织中Mfn2蛋白的表达水平(0.234±0.120)显著低于年轻组(0.876±0.460),差异有统计学意义(P<0.01)。老龄组小鼠卵巢组织中Mfn2 mRNA相对表达量为(0.0063±0.0034)显著低于年轻组(0.0232±0.0045),差异有统计学意义(P<0.01)。老龄组小鼠卵巢组织中ATP含量[(20.6±7.2)μmol/g]显著低于年轻组[(33.8±11.5)μmol/g]。电镜显示,年轻组小鼠卵巢组织中的线粒体形态规则,轮廓光滑完整,线粒体嵴排列基本规则,老龄组小鼠卵巢组织中线粒体断裂增加,线粒体嵴肿胀,线粒体内出现空泡。结论:老龄组小鼠Mfn2表达水平下降,线粒体出现功能下降和结构损伤。Mfn2表达水平下降可能参与与年龄相关的卵巢功能维持。     

C-AMP concentration in various organs of female rats and in human ovaries with aging (author's transl)

The change in 3',5'-cyclic adenosine monophosphate (c-AMP) concentration was observed in various organs of rats in gonadal cycle in adult group and with aging (30, 70, 100, 120 weeks), and in human ovaries with aging. 1) The average c-AMP concentration of ovaries of rats showed a significant change with estrus cycle and was higher in the following sequence: proestrus, diestrus II, diestrus I and estrus phase. This tendency was also seen in hypothalamus and pituitary, but was not statistically significant, 2) The average c-AMP concentration in tissues began to decline significantly from 70 weeks in cerebral cortex and hypothalamus, and from 80 weeks in ovaries. However, on the other hand the concentrations in pituitary, liver and adrenal declined markedly from 100 weeks. 3) The c-AMP in ovaries of 80 weeks rats by pregnant mare serum (PMS) road increased by 0.5-fold in concentration, and by 0.6-fold in whole tissue relative to that of 30 weeks rats. 4) A significant difference in serum LH and FSH level between ovarian artery and vein was not found in cycling mature group, non-cycling climacteric group and post-menopausal group of women. 5) Both average concentrations and total values of c-AMP in ovaries of non-cycling climacteric and post-menopausal women were lower than those of mature cycling women. This fact may imply a different response by ovarian tissues such as corpus luteum, follicle and other tissues to gonadotropin. From these results of c-AMP in tissues, it is concluded that the decline of ovarian function with aging of rats was relatively earlier than pituitary, although being delayed compared with hypothalamus, and were the ovarian function in humans declined in the premenopausal period.