Fn14在上皮性卵巢癌细胞转移中的作用

目的:探讨成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)在上皮性卵巢癌转移中的作用。方法:选取人上皮性卵巢癌细胞株HO8910及其配对高转移能力细胞株HO8910-PM。Western blot法检测HO8910、HO8910-PM细胞株中Fn14表达,以及Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞株后Fn14、Slug、MMP-9蛋白的表达情况。Transwell实验检测细胞株体外迁移和侵袭能力。结果:HO8910-PM细胞的迁移和侵袭细胞数均多于HO8910细胞(P0.05)。HO8910-PM细胞中Fn14表达水平明显低于HO8910细胞(P0.05)。Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞后,细胞内Fn14表达水平上调(5.4±0.314)倍(P0.05),细胞的迁移和侵袭能力明显降低,同时细胞中侵袭转移相关蛋白Slug和MMP-9表达明显下降(P0.05)。结论:Fn14可能通过下调Slug和MMP-9表达进而抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭转移,Fn14可能为临床治疗上皮性卵巢癌提供新靶标。     

卵泡刺激素对上皮性卵巢癌细胞株的增殖及E-钙粘素表达的影响

目的 :研究在上皮性卵巢癌细胞株中卵泡刺激素 (FSH)受体的不同表达并通过不同浓度的FSH作用 ,观察FSH刺激后各卵巢癌细胞株的增殖与上皮钙粘素 (E -cadherin)在各细胞株中的表达情况。方法 :应用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)及免疫细胞化学方法研究体外培养上皮性卵巢癌细胞株HO - 8910、HO - 8910PM及SKOV3中FSH受体表达 ,免疫组化半定量研究各细胞株中E -cadherin表达及其在FSH作用后的表达情况 ,噻唑蓝染色法了解FSH作用后各细胞株的细胞增殖程度。结果 :在卵巢癌细胞株HO - 8910及HO - 8910PM中存在着FSH受体 ,SKOV3细胞株中的FSH受体表达阴性。用不同浓度FSH培养 4 8小时后 ,HO - 8910及HO - 8910PM的细胞增殖指数高于SKOV3。当FSH浓度为 4 0U/L时细胞增殖指数最高 (P <0 .0 5 )。E -cadherin在 3株细胞中的表达随试验中细胞株转移程度的不同而具有差异 ,FSH培养后 ,FSH受体阳性细胞株HO - 8910及HO - 8910PM的E -cadherin表达均减弱。结论 :FSH是FSH受体阳性卵巢癌细胞增长的促进因素并可引起受体阳性肿瘤细胞E -cadherin表达的下调 ,从而增强卵巢癌细胞的转移能力。     

miR-199a在卵巢癌中表达下调及其对卵巢癌生物学功能的影响

目的:检测mi R-199a在上皮性卵巢癌组织中的表达水平以及在卵巢癌中参与的功能,初步探讨mi R-199a在卵巢癌发生、发展中的作用和机制。方法:通过实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)检测上皮性卵巢癌20例、良性上皮性卵巢肿瘤组织15例以及正常卵巢上皮细胞IOSE和1组具有不同侵袭能力的卵巢癌细胞株中mi R-199a的表达;构建mi R-199a的逆转录病毒质粒p MSCVpuro-mi R-199a并筛选稳定过表达mi R-199a的SKOV3细胞株;分别用CCK8和Transwell小室法检测过表达mi R-199a的SKOV3细胞在增殖、侵袭及迁移方面的改变。结果:mi R-199a在卵巢癌组的表达低于良性卵巢肿瘤组(P=0.001),mi R-199a在卵巢癌细胞中的表达低于正常卵巢上皮细胞IOSE(P<0.05),且在SKOV3中表达最低(P<0.01);与转染空载质粒SKOV3细胞相比,稳定转染p MSCVpuro-mi R-199a质粒的SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移力均降低(P<0.000 1)。结论:mi R-199a在卵巢癌组织中表达降低,并在卵巢癌细胞增殖、侵袭及迁移过程中起抑癌基因的作用。     

Nanog介导FSH诱导卵巢癌转移和侵袭的研究

目的:探讨Nanog在FSH诱导的卵巢癌转移和侵袭中的作用。方法:采用Western blot法检测永生化卵巢上皮细胞Moody,良性卵巢肿瘤细胞Mcv152和卵巢癌细胞Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达。使用FSH以浓度梯度和时间梯度的方式处理SKOV3细胞,Western blot法检测Nanog蛋白表达。使用FSH处理si-Con或si-Nanog转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分组:0.1%DMSO+转染空白干扰RNA组(Con+si-Con)、FSH+转染空白干扰RNA组(FSH+si-Con)、0.1%DMSO+转染Nanog干扰RNA组(Con+siNanog)和FSH+转染Nanog干扰RNA组(FSH+si-Nanog)。使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测4组细胞的转移和侵袭能力,Western blot法分析4组细胞中Nanog蛋白表达。应用免疫组化法检测卵巢癌组织中Nanog蛋白表达情况。结果:卵巢癌细胞系Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达明显高于永生化和良性卵巢上皮细胞系(P0.05)。FSH上调Nanog表达以浓度和时间依赖的方式。对照组(Con+si-Con,Con+si-Nanog)的迁移和侵袭能力明显低于实验组(FSH+si-Con,FSH+si-Nanog)(P0.05)。卵巢癌组织中Nanog表达水平明显高于正常卵巢组织(P0.05),Nanog蛋白表达与卵巢癌转移相关。结论:Nanog是FSH重要的下游靶基因,介导FSH诱导的卵巢癌转移作用。     

SphK2促进人卵巢癌细胞侵袭转移及其机制探讨

目的:研究鞘氨醇激酶2(SphK2)对人卵巢癌细胞系SKOV3和HO8910细胞侵袭和迁移能力的影响,探讨其可能调控机制。方法:设计并体外合成靶向SphK2的shRNA(short hairpin RNA)序列(shRNA SphK2)及阴性对照序列(shRNA NC),并与LV3(H1/GFPPuro)慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒后分别转染SKOV3和HO8910细胞系。分别用Real-time PCR和Western blot法检测shRNA SphK2病毒颗粒转染后在mRNA及蛋白水平的沉默效率。Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力变化;Western blot法检测SphK2敲降后细胞中MMP-9蛋白表达。结果:用构建的shRNA慢病毒颗粒感染SKOV3和HO8910细胞后,SphK2 mRNA和蛋白表达水平显著下降。SKOV3和HO8910细胞中,shRNA SphK2转染组的迁移和侵袭细胞数均显著少于shRNA NC组和未转染组,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,转染后48h,shRNA SphK2转染组中MMP-9蛋白表达明显下降(P0.05)。结论:SphK2可促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,其分子机制可能与调节MMP-9表达有关,提示SphK2在卵巢癌的发展转移中起着重要的作用。     

~(131)I-Herceptin对卵巢癌细胞的体外作用

目的:研究~(131)I标记抗HER-2/neu单克隆抗体Herceptin(~(131)I-Herceptin)体外对高表达HER-2/neu卵巢癌细胞的生物学作用,探讨将其用于卵巢癌放射免疫治疗的可行性。方法:(1)流式细胞仪检测人卵巢癌SKOV3和HO8910细胞株HER-2/neu的表达。(2)Iodogen法~(131)I标记Herceptin,测定其标记率、放化纯度、稳定性及免疫活性。(3)MTT比色法检测~(131)I-Herceptin对人卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910的抑制作用。(4)流式细胞法检测SKOV3在~(131)I-Herceptin作用下细胞周期改变和凋亡情况。结果:(1)SK-OV3细胞株HER-2/neu表达率为92.67%;HO8910表达率为9.59%。(2)~(131)I-Herceptin标记率为89.8%,放化纯度为98.4%,24h后仍大于80%,标记物免疫活性较好。(3)131I-Her-ceptin对SKOV3细胞株的抑制作用明显高于HO8910(P<0.001),且明显高于~(131)I组﹑Her-ceptin组以及~(131)I+Herceptin组(P<0.01)。(4)流式细胞检测~(131)I-Herceptin组SKOV3细胞的凋亡率明显高于~(131)I+Herceptin、Herceptin和~(131)I组(P<0.05),各干预组均检测到细胞周期阻滞,~(131)I-Herceptin组G0-G1期细胞比例明显高于其它三组(P<0.05)。结论:~(131)I-Herceptin对高表达HER-2/neu的人卵巢癌细胞SKOV3有明显的抑制和杀伤作用。     

KDM5B基因在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌耐药能力的影响

目的:检测组蛋白去甲基化转移酶KDM5B(JARID1B/PLU-1)在正常卵巢、卵巢癌组织及细胞株中的表达,以及其对卵巢癌细胞株耐药能力的影响。方法:RT-q PCR法检测KDM5B在36例卵巢癌、15例正常卵巢、6例术后化疗耐药复发患者组织及卵巢上皮细胞株IOSE和5株卵巢癌细胞中的表达情况;构建p MSCVpuro-KDM5B过表达质粒和p GIPZ-sh1、p GIPZ-sh2干扰质粒,并筛选得到稳定过表达的SKOV3和稳定干扰的Caov3细胞株,RT-q PCR和Western blot法鉴定调控效果;用浓度梯度递增的顺铂处理SKOV3过表达和Caov3干扰细胞株,CCK-8法检测顺铂半抑制浓度(IC50)变化。结果:RTq PCR结果示,正常卵巢组织中KDM5B相对表达量(1.950±0.3003)低于卵巢癌组织(4.924±0.2989),差异有统计学意义(t=5.909,P0.0001)。KDM5B表达量与卵巢癌患者的FIGO分期、病理分级、转移和耐药发生明显相关,与患者年龄、CA125水平不相关。6例复发患者中,5例KDM5B表达明显升高(P0.001)。KDM5B的mRNA和蛋白水平在卵巢上皮性细胞株IOSE中最低,在卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910、ES-2、A2780、Caov3中表达逐渐增加。RT-q PCR结果示,SKOV3过表达组的KDM5B表达量为对照组的27.4倍,Caov3干扰sh1和sh2组分别为对照组的0.38和0.41倍,Western blot也显示过表达和干扰有效。用浓度梯度递增的顺铂处理Caov3细胞株,KDM5B表达量随顺铂浓度增加而逐渐升高;检测SKOV3细胞株KDM5B过表达组IC50为3.666(95%CI为3.067~4.382)μg/ml高于对照组[1.676(95%CI为1.553~1.810)μg/ml],Caov3细胞株干扰sh1组和sh2组分别为3.359(95%CI为2.875~3.925)μg/ml、2.881(95%CI为2.49~3.324)μg/ml,均低于对照组[6.972(95%CI为6.182~7.864)]。结论:组蛋白去甲基化转移酶KDM5B在卵巢癌中表达升高,并且具有促进卵巢癌细胞株耐药的作用。     

柠檬酸合成酶对卵巢癌线粒体DNA相对拷贝数的影响

目的:探讨柠檬酸合成酶(CS)对卵巢癌线粒体DNA(mtDNA)相对拷贝数的影响。方法:Real-time PCR法检测卵巢良性肿瘤组织、卵巢癌组织及人正常卵巢上皮细胞(HOSE)和卵巢癌细胞株SKOV3、A2780中CS mRNA水平,Western blot法检测标本中CS蛋白水平。siRNA干扰SKOV3和A2780中CS表达,Real-time PCR检测干扰前后mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和线粒体转录因子A(TFAM)的变化,Western blot法检测p-ERK和p-p38水平。结果:卵巢癌组织中CS、mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和TFAM水平高于良性卵巢肿瘤组织;SKOV3和A2780细胞株中CS高于正常卵巢上皮细胞。siRNA干扰SKOV3、A2780中CS后,mtDNA相对拷贝数和TFAM水平降低,p-ERK和p-p38也降低。结论:CS在卵巢癌组织和卵巢癌细胞株中呈高表达,其水平影响卵巢癌细胞中mtDNA相对拷贝数,其机制可能与ERK/p38通路相关。     

microRNA-622在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的探讨microRNA-622(miR-622)在卵巢上皮性癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株迁移和侵袭能力的影响。方法收集2003年1月至2016年12月在南方医科大学附属东莞人民医院手术切除的卵巢上皮性癌组织125例、卵巢良性上皮性肿瘤组织45例、正常卵巢组织25例。采用实时荧光定量PCR检测miR-622的表达水平;利用脂质体将miR-622模拟物瞬时转染至SKOV3卵巢癌细胞株,通过Transwell小室装置检测上调miR-622的表达对卵巢癌细胞株迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-622在卵巢上皮性癌组织中的表达水平高于卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织,差异具有统计学意义(P0.05)。miR-622表达水平与卵巢上皮性癌FIGO分期和是否发生淋巴结转移相关(P0.05)。体外细胞实验显示,上调miR-622表达可增强SKOV3卵巢癌细胞株的迁移和侵袭能力。结论 miR-622在卵巢上皮性癌组织中的表达增高,其可能通过促进癌细胞迁移和侵袭,参与卵巢癌的恶性演进。     

长链非编码RNA PVT1抑制miR-31表达并促进卵巢癌细胞侵袭转移的实验研究

目的:探讨长链非编码RNA PVT1能否抑制卵巢癌细胞侵袭转移,明确其影响可否通过抑制miR-31的方式实现。方法:qRT-PCR法检测长链非编码RNA PVT1及miR-31在卵巢癌组织及卵巢癌细胞系SKOV3中的表达,同时分别设定正常卵巢组织和卵巢正常上皮细胞系IOSE80作为对照。研究PVT1表达水平与卵巢癌患者临床病理参数的相关性。SKOV3细胞中转染PVT1 siRNA下调PVT1表达,qRT-PCR检测PVT1表达对miR-31表达的影响,Transwell实验检测PVT1表达对SKOV3侵袭转移能力的影响。"反义"实验验证下调miR-31能否逆转PVT1 siRNA对SKOV3侵袭转移能力的抑制效应。荧光素酶报告基因实验检测miR-31与PVT1的靶向结合作用。结果:卵巢癌组织及细胞系中,PVT1表达显著增高,miR-31表达显著降低,两者表达呈明显负相关。PVT1高表达与卵巢癌患者的高临床分期及腹膜后转移密切相关。转染PVT1 siRNA可明显下调SKOV3中PVT1表达,促进miR-31表达,抑制SKOV3细胞的侵袭转移能力;转染miR-31 inhibitor可明显逆转PVT1 siRNA对SKOV3侵袭转移能力的抑制效应;荧光素酶报告基因实验证实miR-31可与PVT1靶向结合。结论:PVT1可通过抑制miR-31的方式促进卵巢癌细胞侵袭转移。     

组织蛋白酶L基因与卵巢上皮性癌细胞侵袭及转移的关系

目的 构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的真核表达质粒,通过体外实验研究CTSL基因与卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭、转移的关系.方法 采用逆转录(RT)-PCR技术从卵巢癌组织总RNA中扩增CTSL基因的cDNA全长,克隆至pMD18-T载体上;酶切、纯化CTSL基因后与pcDNA3.1载体连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CTSL.应用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒转染卵巢癌HO8910细胞,RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检验CTSL mRNA和蛋白的表达情况,细胞增殖能力测定分别采用四甲基偶氮唑蓝法和集落形成实验,细胞周期检测、细胞体外侵袭、转移、黏附能力测定分别采用流式细胞仪、细胞体外侵袭重建基底膜实验、穿膜小室(transwell小室)实验、体外黏附实验.结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果证实,HO8910细胞转染pcDNA3.1-CTSL质粒后有CTSL基因和蛋白的表达.HO8910-CTSL细胞的生长速度加快,但与对照的HO8910-pcDNA3.1及HO8910细胞分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的S+G2+M期细胞比例为37.9%,与HO8910-pcDNA3.1细胞及HO8910细胞(分别为32.9%、31.8%)比较虽有增加,但差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的侵袭、转移能力增加(分别为0.34±0.18、1.252±0.114),与HO8910-pcDNA3.1细胞(分别为0.17±0.04、0.486±0.027)及HO8910细胞(分别为0.16±0.05、0.459±0.674)分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HO8910-CTSL细胞的黏附能力(0.16±0.04)与HO8910-pcDNA3.1细胞(0.19±0.04)及HO8910细胞(0.19±0.03)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CTSL基因真核表达质粒转染使卵巢癌细胞的体外侵袭和转移能力增加,有可能成为抗卵巢癌侵袭和转移的分子靶点.     

miR-410对上皮性卵巢癌生物学行为影响及调控作用的实验研究

目的:探讨miR-410对上皮性卵巢癌生物学功能的影响及调控作用。方法:检测上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织,以及卵巢癌SKOV3细胞和对照IOSE80细胞中miR-410表达水平。建立过表达miR-410瞬转SKOV3细胞体系,MTT法检测卵巢癌细胞增殖能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,Western blot法测定细胞中CCNB1蛋白表达水平。通过OncoLnc数据库评估卵巢癌患者的miR-410表达数据,分析miR-410对卵巢癌患者预后的影响。结果:卵巢癌组织中miR-410表达水平显著低于正常组织(P<0.05);SKOV3细胞中miR-410表达水平显著低于正常卵巢上皮IOSE80细胞(P<0.05)。转染后第2、3、4天,过表达miR-410组的SKOV3细胞增殖能力明显受到抑制(P<0.05);转染48h后,对照组和过表达组的穿膜细胞数分别为292.157±19.069、103.874±11.253,差异有统计学意义(P<0.05);划痕48h后,对照组与过表达miR-410组的迁移指数(MI)分别为(91.05±17.22)%和(59.36±11.29)%,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-410后,SKOV3细胞中CCNB1蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。miR-410低表达组卵巢癌患者与高表达组相比,总生存时间显著降低(P<0.05)。结论:上调miR-410表达可通过调控CCNB1抑制卵巢癌细胞的增殖与侵袭,低表达miR-410卵巢癌患者的总生存时间显著降低。     

HER2蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及曲妥珠单抗对卵巢癌SKOV3细胞的影响

目的:探索HER2蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及新型HER2靶向治疗药物曲妥珠单抗(赫赛汀)对卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法:1采用免疫组化SP法、实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测HER2蛋白在58例上皮性卵巢癌组织(恶性组),20例卵巢良性上皮性肿瘤组织(良性组)、10例正常卵巢组织(正常组)中的表达情况;2体外培养人上皮性卵巢癌SKOV3细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测不同浓度赫赛汀对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响;采用蛋白印迹法检测SKOV3细胞早期相关凋亡蛋白Caspase-3的表达水平。结果:1HER2蛋白在恶性组的阳性表达率显著高于良性组及正常组(P0.05),且随临床分期及肿瘤组织学分级的升高而增加(P0.05),有淋巴结转移的阳性表达率高于无转移者(P0.05)。2随赫赛汀浓度的升高,卵巢癌SKOV3细胞G0、G1期比例明显增高(P0.05),而G2、M期和S期的细胞比例明显降低(P0.05),不同浓度赫赛汀组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);细胞凋亡率随赫赛汀的药物浓度增加而逐渐增高,赫赛汀组与对照组比较及不同浓度赫赛汀组间细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P0.05)。3各浓度赫赛汀组Caspase-3蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P0.01);各浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:HER2蛋白在上皮性卵巢癌中呈高度表达,且表达与肿瘤分期、细胞分化程度及淋巴结转移相关。周期阻滞、凋亡诱导可能是赫赛汀抗肿瘤机制之一。     

LAIR-1通过影响线粒体生物能量代谢抑制卵巢癌HO8910细胞生长

目的:研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)对卵巢癌细胞HO8910线粒体能量代谢的影响。方法:利用低氧模拟剂CoCl_2处理细胞,分析缺氧对LAIR-1表达的影响;利用LAIR-1慢病毒RNAi干扰载体(LAIR-1-RNAi-lentivirus),下调LAIR-1在卵巢癌HO8910细胞中的表达。Western blot、qRT-PCR法鉴定HO8910慢病毒感染后LAIR-1的表达水平;通过CCK-8实验和细胞克隆形成实验,验证下调LAIR-1表达对HO8910细胞生长的影响;通过Seahorse生物能量分析仪,检测下调LAIR-1表达后对HO8910细胞生物能量代谢的影响。结果:在低氧环境下,HO8910细胞的LAIR-1表达显著上调;LAIR-1-RNAi-lentivirus转染后,HO8910细胞的LAIR-1表达显著下调,细胞生长能力明显增强(P0.01);LAIR-1表达显著下调的HO8910细胞,ATP产生明显改善(P0.001),同时其基础呼吸(P0.001)和最大呼吸能力(P0.001)均明显提高。结论:LAIR-1分子可能通过影响线粒体生物能量代谢抑制人卵巢癌HO8910细胞的生长。     

AQP4,5在卵巢上皮性肿瘤的表达及意义

目的:探讨水通道蛋白4,5(AQP4,5)在卵巢上皮性肿瘤的表达及意义。方法:原位杂交和免疫组化染色检测AQP4 mRNA及蛋白在10例正常卵巢组织、15例卵巢良性上皮性肿瘤、15例卵巢交界性上皮性肿瘤及50例卵巢恶性上皮性肿瘤的分布和表达。结果:AQP4,5 mRNA及蛋白主要于交界性及恶性上皮性肿瘤细胞的胞质和胞膜表达。AQP4,5在恶性及交界性上皮性肿瘤的表达量明显高于良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(P0.05),良性上皮性肿瘤与正常卵巢组织间的表达差异无统计学意义(P0.05)。卵巢癌有腹水者AQP4,5表达量明显高于无腹水者(P0.05)。组织学分级为G2、G3的卵巢癌组织中AQP4,5表达高于G1;Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌AQP4表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P0.05);伴淋巴转移者AQP4明显高于无淋巴转移者(P0.05)。AQP4,5蛋白及mR-NA表达有相关性(P0.05,r=0.487)。结论:AQP4,5高表达可能通过增加肿瘤细胞对水的通透性,在卵巢上皮性肿瘤的发生及进展中起重要作用,并且可能参与卵巢癌腹水的形成。     

BMP-2对人卵巢浆液性囊腺癌HO8910细胞浸润能力的影响及机制研究

目的 检测骨形态发生蛋白-2（BMP-2）对人卵巢浆液性囊腺癌HO8910细胞的浸润能力有无影响,并探讨其可能的影响机制。方法 2008至2009年于中国医科大学盛京医院应用细胞黏附实验、cross-river实验和matrigel-transwell实验观察BMP-2对HO8910细胞浸润能力的影响,并检测BMP-2作用后HO8910细胞中MMP-2、TIMP-2的变化。结果 BMP-2作用后HO8910细胞黏附能力增强,cross-river时间延长,穿过matrigel-transwell侵袭模型的细胞数量减少,且MMP-2表达较前减弱,TIMP-2表达较前增强。结论 BMP-2抑制HO8910卵巢癌细胞浸润能力。     

siRNA阻断PRKCι表达对人卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭的影响

目的:探讨PRKCι在卵巢癌迁移和侵袭中的作用。方法:生物信息学分析PRKCι在卵巢癌中的表达,Real-time PCR和Western blot法检测卵巢癌细胞株中PRKCι的表达情况,设计针对PRKCι的siRNA并转染SKOV3卵巢癌细胞,观察转染后SKOV3细胞中PRKCι基因表达情况,以及SKOV3细胞的迁移、侵袭能力的变化,并检测PRKCι基因敲减后其下游转移相关效应分子MMP10的表达。结果:PRKCι在卵巢癌芯片(TCGA和GDS3592)中的表达与正常卵巢组织比较,表达差异>2倍(P<0.0001和P=0.0078)。与HOSE细胞相比,ES2、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、A2780卵巢癌细胞株中存在PRKCιmRNA和蛋白水平的高表达,其中SKOV3细胞中PRKCι表达水平最高。PRKCι特异性的siRNA-1和siRNA-2均能有效抑制SKOV3细胞中PRKCιmRNA和蛋白表达,mRNA水平抑制效率分别为(80.5±10.23)%、(74.6±12.48)%(P<0.01),在蛋白水平抑制效率分别为(71.37±11.34)%、(68.22±12.19)%(P<0.05)。细胞划痕实验显示,PRKCιsiRNA明显降低了SKOV3细胞的迁移能力,抑制效率分别为(54.31±12.87)%、(45.25±14.02)%(P<0.05);Transwell实验显示,PRKCιsiRNA明显降低了SKOV3细胞的侵袭能力,分别降低了57.48%和38.38%(P<0.05);PRKCιsiRNA明显抑制了转移相关效应分子MMP10在mRNA和蛋白水平表达,mRNA水平分别下调(56.76±13.83)%、(52.99±14.38)%(P<0.05),蛋白水平分别下调(35.65±9.10)%、(37.14±14.26)%(P<0.05)。结论:PRKCι在卵巢癌中高表达,是参与卵巢癌转移的重要基因,可能作为抑制卵巢癌转移的新的靶向分子。     

与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在卵巢上皮性癌浸润转移中的作用

目的 筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA),并分析其在卵巢癌浸润转移中的作用.方法 (1)实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移能力的卵巢癌细胞系SKOV3和SKOV3ip细胞、HO-8910和HO-8910PM细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达差异,选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SKOV3和SKOV3ip细胞)用于以下实验.(2)用miRNA芯片筛选SKOV3和SKOV3ip细胞中差异表达miRNA,然后用生物信息学工具[三大数据库,即TARGETSCAN(http://www.targetscan.org)、MICROCOSM(http://www.ebi.ac.uk/enright-srv/microcosm/htdocs/targets/v5/)和PICTAR(http://www.pictar.mdc-berlin.de)数据库]预测并比对miRNA芯片的筛选结果,筛选出与ezrin基因表达相关的miRNA,并采用实时RT-PCR技术验证.将筛选出来的miRNA转染SKOV3ip细胞,用蛋白印迹法和实时RT-PCR技术检测其对SKOV3ip细胞中ezrin mRNA和蛋白表达的调控作用,以未做任何处理者为空白对照.结果 (1)SKOV3ip细胞中ezrin mRNA的表达水平是SKOV3细胞的(81.74±5.34)倍,HO-8910PM细胞中ezrin mRNA的表达水平是HO-8910细胞的(2.61±0.14)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);蛋白印迹法检测显示,SKOV3ip细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SKOV3细胞,HO-8910PM细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HO-8910细胞.选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系,即SKOV3和SKOV3ip细胞用于以下实验.(2)将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析,筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异miRNA,即miR-183和miR-22;实时RT-PCR技术检测显示,miR-183和miR-22在SKOV3和SKOV3ip细胞中的表达差异,与miRNA芯片筛选结果一致,SKOV3细胞中miR-183和miR-22的表达水平分别是SKOV3ip细胞的(5.84±0.66)和(6.67±0.67)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).miRNA转染SKOV3ip细胞后,其ezrin mRNA的表达水平是空白对照的(1.03±0.10)倍,两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照.结论 侵袭力强的卵巢癌细胞中ezrin mRNA和蛋白均高表达,与ezrin基因表达相关的miRNA--miR-183和miR-22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezrin蛋白的表达水平,它们可能具有ezrin基因介导的抑制卵巢癌细胞浸润转移的潜在功能.     

白细胞介素-1α对卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞11β类固醇脱氢酶基因表达的影响

目的探讨白细胞介素1α(IL1α)对正常人卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞株11β类固醇脱氢酶(11βHSD)基因表达的影响。方法体外培养人卵巢上皮细胞(HOSE)及卵巢癌细胞株SKOV3、PEO4和PEO14,应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(realtimePCR)方法比较上述4种细胞中11β类固醇脱氢酶1(11βHSD1)、11β类固醇脱氢酶2(11βHSD2)和白细胞介素1受体(IL1R)mRNA水平的表达及加入不同浓度的IL1α后,4种细胞中11βHSD1和11βHSD2mRNA表达水平的变化。结果正常卵巢上皮细胞中11βHSD1和IL1RmRNA表达水平较高,11βHSD2mRNA表达水平较低;而卵巢癌细胞株SKOV3和PEO4中11βHSD1和IL1RmRNA表达水平较低,11βHSD2mRNA表达水平较高。加入不同浓度的IL1α后,正常卵巢上皮细胞11βHSD1mRNA表达水平明显升高(P<0.01);PEO14细胞11βHSD1mRNA表达水平也升高(P<0.05);SKOV3和PEO411βHSD1mRNA表达水平无明显变化;正常卵巢上皮细胞11βHSD2mRNA表达水平无明显变化,卵巢癌细胞株PEO4、SKOV3及PEO1411βHSD2mRNA表达水平不同程度升高(P<0.05)。结论卵巢癌细胞丧失了对炎性细胞因子白细胞介素1反应的能力;11β类固醇脱氢酶异构体表达形式的不同是肿瘤细胞转化的一种特征,它可能与卵巢上皮细胞的恶性转化有关。     

血管内皮生长因子与血小板源性生长因子在卵巢上皮性癌淋巴管形成中的作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和血小板源性生长因子(PDGF)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)淋巴管形成中的作用.方法 RT-PCR技术检测淋巴管内皮细胞核标志物Proxl和淋巴管形成相关因子VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D及PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D在卵巢癌细胞株SKOV3、70例卵巢上皮性肿瘤(卵巢良性肿瘤15例、卵巢交界性肿瘤10例、卵巢癌45例)和20例正常卵巢组织中的表达情况.实时定量PCR技术检测卜述90例卵巢组织中Proxl、VEGF-A、-C、-D及PDGF-A、-B、-C、-D的表达水平,并进行相关性分析.结果 (1)Proxl在各种卵巢组织中均有表达,而在SKOV3细胞中无表达;VEGF-A、-C、-D及PDGF-A、-B、-C、-D在SKOV3细胞和各种卵巢组织中均有表达.(2)卵巢癌组织中Proxl(2.2±1.3)、VEGF.A(3.5±1.5)、VEGF-C(19 ±14)、VEGF-D(3.0±1.8)及PDGF-A(3.3±3.3)、PDGF-C(6.9±4.6)的表达水平高于卵巢良性肿瘤和交界性肿瘤(P均＜0.05).(3)Proxl、VEGF-A和PDGF-A在卵巢癌Ⅲ～Ⅳ期(Proxl:2.6±1.3,VEGF-A:4.0± 1.4.PDGF-A:4.1±3.7)、淋巴结转移阳性(Proxl:3.0±1.4,VEGF-A:4.1±1.7,PDGF-A:4.9±4.1)及腹膜转移阳性(Proxl:2.8±0.9,VEGF-A:4.0±1.8,PDGF-A:4.5±4.0)的组织中的表达水平,分别高于Ⅰ～Ⅱ期、淋巴结转移阴性和腹膜转移阴性者(P均＜0.05);VEGF-C、VEGF-D在淋巴结转移阳性卵巢癌组织中的表达水平(VEGF-c:24± 13,VEGF-D:3.9±2.0)高于淋巴结转移阴性者(P均＜0.05).(4)卵巢癌组织中Proxl的表达水平与VEGF-D(r=0.62,P＜0.01)、PDGF-C(r=0.91,P＜0.01)、PDGF-D(r=0.61,P＜0.01)的表达水平呈正相关关系.结论 VEGF-A、VEGF-C和PDGF-A可能通过参与淋巴管形成之外的机制促进卵巢癌的淋巴结转移;VEGF-D可以促进卵巢癌的淋巴管形成及淋巴结转移;PDGF-B与卵巢癌的淋巴管形成及淋巴结转移无关;PDGF-C、PDGF-D参与卵巢癌淋巴管形成,但无促进淋巴结转移的作用.