长链非编码RNA LOC101927019在PM_(2.5)致16HBE细胞炎症反应中的作用

目的探讨长链非编码(lnc)RNA LOC101927019在大气PM_(2.5)致人支气管上皮细胞(16HBE细胞)炎症反应中的作用。方法将采集的广州市大气PM_(2.5)制备成混悬液染毒16HBE细胞,以荧光定量PCR检测不同浓度(25~100μg/ml)PM_(2.5)染毒细胞炎症因子IL-1β基因及lnc RNA LOC101927019的表达水平。采用RNA干扰技术敲低16HBE细胞中LOC101927019的表达,检测100μg/ml PM_(2.5)染毒si RNALOC101927019-16HBE细胞中IL-1β基因的表达水平。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒16HBE细胞IL-1β及LOC101927019的表达上调(P0.01);与对照组比较,16HBEsi RNALOC101927019细胞LOC101927019的表达明显下降(P0.05);与PM_(2.5)染毒转染阴性对照组相比,PM_(2.5)染毒16HBE-si RNALOC101927019细胞IL-1β基因的表达明显下降(P0.01)。结论 lnc RNALOC101927019在PM_(2.5)暴露染毒的细胞中高表达,敲低lnc RNALOC101927019表达可抑制IL-1β的分泌,lnc RNALOC101927019可能在PM_(2.5)致细胞炎症反应中起促炎作用。     

百草枯对人胚胎神经干细胞分化过程中Wnt通路分子表达的影响

[目的]通过对神经干细胞Wnt信号通路中关键分子β-catenin/D VL2基因表达的研究,探讨百草枯对分化中的神经干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响. [方法]以人胚胎神经干细胞为研究对象,观察体外诱导分化情况,并采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度百草枯对细胞活力的影响,选取未观察到细胞毒性的浓度为0.10、1.00、10.00 μmol/L的百草枯染毒,在分化2、4、8、12d利用实时荧光定量多链聚合反应技术检测Wnt信号通路关键分子β-catenin和DVL2 mRNA的表达情况. [结果]百草枯在100.00 μmol/L时可明显抑制细胞活力(P＜0.01).百草枯在神经干细胞分化期2、8、12d明显下调β-catenin mRNA的表达,除10.00μmol/L染毒组在分化期8d以外,其余各剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).百草枯在神经干细胞分化期2、12d DVL2 mRNA的表达明显下调,除0.10μmol/L染毒组在分化期12d该基因mRNA表达升高外,其余各剂量组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01);在分化期4dDVL2 mRNA的表达明显上升,各剂量组与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01). [结论]百草枯抑制Wnt信号通路中关键分子β-catenin和DVL2基因mRNA的表达,最终可影响神经干细胞的分化过程.     

大气PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用及氧化损伤研究

目的研究大气PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用。方法人卵巢颗粒细胞体外培养48 h后,分别用100、200、300μg/ml PM_(2.5)溶液染毒24 h,检测细胞活力,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、雌二醇、孕酮、丙二醛(MDA)、caspase-3水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力、活性氧(ROS)含量。结果随着PM_(2.5)染毒浓度的增加,人卵巢颗粒细胞活力下降,细胞培养液中雌二醇和孕酮含量下降,300μg/ml PM_(2.5)染毒组培养液中LDH含量高于对照组和100μg/ml PM_(2.5)染毒组,300μg/ml PM_(2.5)染毒组caspase-3表达高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。300μg/ml PM_(2.5)染毒组细胞MDA含量、ROS含量均高于对照组,各浓度PM_(2.5)染毒组SOD活力均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用随染毒浓度的升高而增加,同时可诱导细胞氧化损伤。     

大气细颗粒物对SH-SY5Y细胞能量代谢的影响

[目的]研究大气细颗粒物(PM_(2.5))对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞能量代谢的影响。[方法]用不同质量浓度(下称浓度)PM2.50、20、40、80、160、320mg/L)染毒SH-SY5Y细胞24h,MTT法检测细胞存活率,丙二醛(MDA)试剂盒检测MDA的含量,XFp细胞能量代谢分析仪检测细胞线粒体呼吸功能及糖酵解功能。[结果]PM_(2.5)各浓度组SH-SY5Y细胞存活率均低于对照组(均P0.05);80、160、320mg/LPM_(2.5)组细胞内MDA含量高于对照组(均P0.05)。PM_(2.5)各浓度组细胞基础耗氧率、ATP偶联的有氧呼吸速率低于对照组(P0.05),分别下降了13.8%、19.7%、25.1%、35.8%、45.2%和17.0%、21.9%、28.3%、39.2%、47.9%;40、80、160、320mg/LPM_(2.5)组细胞有氧呼吸最大值较对照组下降了19.0%、24.2%、28.5%、40.7%(均P0.05)。80、160、320mg/LPM_(2.5)组细胞糖酵解水平和糖酵解最大值低于对照组(均P0.05),分别下降了15.9%、22.1%、26.1%和16.5%、19.6%、21.5%。SH-SY5Y细胞基础耗氧率、ATP偶联的有氧呼吸速率、质子漏耗氧速率、有氧呼吸最大值、糖酵解水平及糖酵解最大值与细胞存活率呈正相关(r在0.65~0.86之间,P0.01),与MDA值呈负相关(r为-0.53~-0.86,P0.05或P0.01)。[结论]PM_(2.5)可引起SH-SY5Y细胞的氧化损伤,降低细胞线粒体呼吸功能及糖酵解功能。     

交通相关PM2.5不同组分对哮喘大鼠肺部炎症及外周血中Treg细胞比例的影响

目的研究交通相关PM_(2.5)不同组分对哮喘大鼠肺部炎症、Treg细胞及其相关细胞因子分泌水平的影响,以探讨PM_(2.5)不同组分诱导哮喘加重的机制。方法通过卵清蛋白腹腔注射致敏、雾化吸入激发构建大鼠哮喘模型,激发后分别予以3 mg/kg PM_(2.5)和1.8、7.2 mg/kg PM_(2.5)水溶组分及0.6、2.4 mg/kg PM_(2.5)有机组分气管滴注染毒,每3 d一次,共5次。观察肺组织病理改变,以流式细胞术检测外周血Treg细胞的比例。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以ELISA法检测BALF中IL-10和TGF-β1的含量。结果与生理盐水对照组、哮喘组、哮喘+PM_(2.5)组、哮喘+1.8 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组相比,哮喘+7.2 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组外周血中Treg细胞比例明显降低(P0.05);哮喘+0.6 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组外周血中Treg细胞比例明显低于哮喘+DMSO溶剂对照组和哮喘+PM_(2.5)组(P0.05)。与生理盐水对照组、哮喘组、哮喘+PM_(2.5)组相比,哮喘+7.2 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组BALF中IL-10的含量明显升高(P0.05);哮喘+0.6 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组BALF中IL-10的含量低于哮喘+PM_(2.5)组(P0.05)。哮喘+PM_(2.5)组BALF中TGF-β1表达明显高于哮喘组和哮喘+1.8 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组(P0.05);与哮喘+DMSO溶剂对照组相比,哮喘+PM_(2.5)组、哮喘+0.6 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组、哮喘+2.4 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组BALF中TGF-β1表达明显升高(P0.05)。结论交通相关PM_(2.5)水溶组分和有机组分可抑制哮喘大鼠Treg细胞的增殖分化,引起其分泌的相关细胞因子的改变,进而加重哮喘肺部炎症反应。     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对小鼠胚胎干细胞多能性相关转录因子表达的影响

[目的]研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法]不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(m ESCs)4 d,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡指标;应用碱性磷酸酶染色法、real-time PCR及Western blot分别检测其分化情况、胚胎干细胞多能性相关转录因子SOX2、OCT4基因及其蛋白表达水平。[结果]随着MEHP染毒浓度的增加,m ESCs克隆的细胞团逐渐缩小,且数量也出现减少,以1 000μmol/L组尤为明显;细胞凋亡检测结果发现,随着染毒浓度增加,凋亡率呈增加趋势,与对照组相比,仅1 000μmol/L组m ESCs总细胞凋亡率[(9.58±2.02)%]的升高有统计学意义(P0.05)。碱性磷酸酶染色结果显示,1 000μmol/L组m ESCs着色较浅,甚至未着色,即出现分化倾向,而其他组m ESCs均被染成深蓝色或蓝紫色。与对照组相比,100、1 000μmol/L组中SOX2、OCT4基因表达降低(均P0.05);1 000μmol/L组SOX2、OCT4蛋白表达降低(均P0.05)。[结论]一定浓度MEHP对m ESCs存在细胞毒性,抑制m ESCs正常生长,降低m ESCs中多能性相关转录因子SOX2、OCT4的表达,进而影响胚胎早期发育。     

PM2.5致大鼠肾脏氧化损伤效应研究

目的通过建立大鼠PM_(2.5)经呼吸道亚慢性染毒模型,探讨PM_(2.5)对大鼠肾脏的氧化损伤效应。方法将SPF级雄性大鼠20只随机分为对照组(生理盐水)和PM_(2.5)染毒组(染毒剂量10 mg/kg),每组10只。采用气管注入法染毒,每周1次,连续染毒24周。采用试剂盒测定肾脏丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,采用免疫组织化学方法检测肾脏Bcl-2、Bax蛋白表达水平,采用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,采用HE染色对肾组织进行病理形态学检测。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏SOD及GSH-Px活力均降低,MDA含量升高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。TUNEL检测结果显示,PM_(2.5)染毒组肾脏细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);PM_(2.5)染毒组肾脏出现明显的病理形态学改变。结论 PM_(2.5)可致大鼠肾脏发生明显的氧化损伤效应。     

氯乙烯对肝细胞周期G_1/S关卡相关蛋白表达影响

目的探讨氯乙烯(VCM)对细胞周期G1/S关卡功能影响及可能的机制。方法将人正常肝细胞HL-7702暴露于VCM气体(体积分数为0.8%、2.5%、7.5%、15.0%和30.0%)和空气(对照组)48 h后用流式细胞仪检测HL-7702细胞周期;Western blot测定细胞中G1/S关卡相关蛋白表达水平。结果染毒48 h后,在7.5%剂量时,HL-7702细胞G0/G1期细胞百分数随染毒剂量增加呈上升趋势,与对照组[(73.35±1.56)%]比较,7.5%剂量组G0/G1期细胞百分比[(78.52±4.46)%]升高,差异有统计学意义(P0.01);与对照组[(12.85±0.02)%]比较,2.5%剂量组S期细胞百分比[(10.97±0.17)%]下降,差异有统计学意义(P0.05);细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK 4)和P16蛋白表达量均呈上升趋势,与对照组比较,7.5%剂量组HL-7702细胞CDK 4、P16表达[分别为(1.43±0.51)、(0.80±0.30)]均升高,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论低剂量VCM染毒可使肝细胞发生G1期阻滞,高剂量时G1期阻滞作用消失;其机制主要与上调P16、CDK 4蛋白表达有关。     

大气颗粒物PM_(2.5)对大鼠心肌组织氧化损伤及炎症因子蛋白表达的影响

目的探讨大气PM_(2.5)染毒对大鼠心肌组织氧化应激损伤及炎症因子蛋白表达水平的影响。方法将32只健康成年SPF级雄性SD大鼠按体重随机分为对照(生理盐水)组和5、10、20 mg/kg的PM_(2.5)染毒组,每组8只。采用气管注入方式进行染毒,每周1次,连续12周。测定大鼠心肌组织谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平以及白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与对照组比较,仅20 mg/kg PM_(2.5)染毒组大鼠心肌组织GSH含量和GSH-Px活力降低,而10、20 mg/kg PM_(2.5)染毒组大鼠心肌组织TNF-α蛋白的表达水平及20 mg/kg PM_(2.5)染毒组大鼠心肌组织IL-6蛋白的表达水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05);而T-SOD活力与MDA含量及NO含量和NOS活力均无明显改变。随着PM_(2.5)染毒剂量的升高,大鼠心肌组织GSH-Px、T-SOD活力和GSH、MDA含量均呈现先升高后降低的趋势,NO含量和NOS活力及TNF-α和IL-6蛋白的表达水平均呈逐渐上升的趋势。结论大气PM_(2.5)可导致大鼠心肌组织发生氧化应激损伤,其作用机制可能与IL-6和TNF-α蛋白表达水平升高有关。     

CHIP和Hsp70在三氯化铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化中的作用

[目的]探究热休克蛋白70羧基末端结合蛋白(CHIP)和热休克蛋白70(Hsp70)在三氯化铝致小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)tau蛋白异常磷酸化中的作用。[方法]以低、中、高剂量三氯化铝溶液(铝离子浓度分别为0.5、1.0、2.0 mmol/L)染毒N2a细胞,以不含三氯化铝溶液染毒者作为对照组,染毒48 h后显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,用Western blot法测定细胞tau-5蛋白、磷酸化蛋白(pThr181、pThr231、pSer262、pSer396)以及CHIP和Hsp70蛋白表达情况。[结果]随着染毒剂量增加,细胞数量逐渐减少,突触回缩,胞体变圆。中、高剂量组细胞活力百分比[(91.37±0.03)%和(78.45±0.10)%]明显低于对照组[(100.00±0.00)%](P0.05,P0.01)。高剂量组tau-5蛋白表达水平明显高于对照组(P0.01);中、高剂量组pThr231蛋白表达水平明显高于对照组(P0.01);各染毒组pSer396蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05或P0.01);各组pThr181、pSer262蛋白表达水平的差异无统计学意义(P0.05)。各染毒组CHIP、Hsp70表达水平均高于对照组(P0.05或P0.01)。[结论]三氯化铝可以导致N2a细胞pThr231、pSer396表达增高,其作用机制可能与CHIP和Hsp70表达变化有关。     

circRNA002144在PM_(2.5)诱导人正常支气管上皮细胞炎性反应中的机制研究

目的研究circRNA002144在PM_(2.5)暴露人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的表达及其下游靶基因的差异表达情况,并探讨circRNA002144在PM_(2.5)诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能的调控机制。方法分别以0、30、60、90、120、150μg/ml的PM_(2.5)暴露BEAS-2B细胞48 h,收集细胞上清液用酶联免疫(ELISA)实验检测白细胞介素-6(IL-6)的分泌量;收集细胞,以Trizol试剂裂解细胞后提取总RNA,以实时定量PCR(q RT-PCR)检测不同浓度PM_(2.5)染毒BEAS-2B细胞中circRNA002144表达水平的变化;然后利用RegRNA和Target Scan预测与circRNA002144相互作用的miRNAs以及靶向的下游mRNA,选择炎症相关的mRNA进一步检测。结果与对照组相比,不同浓度的PM_(2.5)染毒组BEAS-2B细胞炎性细胞因子IL-6的表达均升高,且有剂量依赖关系;circRNA002144的表达水平均升高,且随着PM_(2.5)染毒浓度的增加呈高表达,在120μg/ml染毒组,相对表达量增高4.79倍,差异均有统计学意义(P0.01);结合生物信息学预测分析和q RT-PCR检测发现,相比于对照组,与circRNA002144相互作用的hsa-mi R-608和hsa-mi R-92a-2-5p在PM_(2.5)染毒组细胞呈现低表达的趋势,这两个miRNAs共同靶向的STAT3则呈现高表达,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 circRNA002144在PM_(2.5)诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能发挥促炎的作用,可能通过下调hsa-mi R-608和hsa-mi R-92a-2-5p促进IL-6分泌,进而激活STAT3炎症通路。     

Ca2+-JAK1-STAT1信号通路在PM2.5诱导16HBE细胞炎症介质改变中的调控作用

目的探讨PM_(2.5)通过Ca~(2+)-JAK1/STAT1信号通路调控人支气管上皮细胞(16HBE)炎症因子释放,为PM_(2.5)引起呼吸系统炎症疾病发病机制提供参考。方法分别设置生理盐水对照组、100μg/ml肝素钠组、10μmol/L姜黄素(Cur)组、50μg/ml PM_(2.5)组、100μg/ml PM_(2.5)组、50μg/ml PM_(2.5)+100μg/ml肝素钠组、100μg/ml PM_(2.5)+100μg/ml肝素钠组、50μg/ml PM_(2.5)+10μmol/L Cur组、100μg/ml PM_(2.5)+10μmol/L Cur组,作用16HBE细胞3、6和24 h后,用qRT-PCR和Western blot技术分别测定JAK1、STAT1基因和蛋白表达水平,ELISA法分别检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和人高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达水平。结果染毒3、6和24 h后,在50μg/ml PM_(2.5)染毒组和100μg/ml PM_(2.5)染毒组细胞内JAK1、STAT1基因表达水平较生理盐水对照组有升高趋势,仅24 h组JAK1基因差异有统计学意义(P0.05);且细胞内p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均高于生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P0.05);染毒3和6 h后PM_(2.5)+肝素钠染毒组STAT1基因和蛋白表达水平与各自PM_(2.5)染毒组相比出现降低趋势,而染毒24 h后的100μg/ml PM_(2.5)+肝素钠染毒组STAT1基因和蛋白表达水平与其PM_(2.5)染毒组相比出现增高趋势;细胞上清液中,50μg/ml PM_(2.5)和100μg/ml PM_(2.5)染毒组TNF-α、HMGB1和ICAM-1的含量分别不同程度地高于生理盐水对照组、肝素钠组和Cur组;加入干扰剂肝素钠和姜黄素后,TNF-α、HMGB1和ICAM-1的表达水平较各自单独PM_(2.5)染毒组均有一定程度的降低。结论 PM_(2.5)可通过Ca~(2+)-JAK1-STAT1信号通路调控人支气管上皮细胞TNF-α、ICAM-1和HMGB1等炎症因子水平。     

PM2.5致大鼠肝脏氧化损伤效应研究

目的通过建立PM_(2.5)染毒模型,探讨PM_(2.5)对大鼠肝脏的氧化损伤效应。方法将SPF级雄性大鼠20只随机分为PM_(2.5)染毒组和对照组,每组10只。采用气管注入法染毒,PM_(2.5)染毒组给予20 mg/kg的PM_(2.5)混悬液,对照组给予等体积的生理盐水,每周染毒1次,共染毒24周。染毒结束后测定两组大鼠肝脏系数,测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肝脏丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,并采用HE染色观察肝脏病理形态学改变。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肝脏系数升高,差异有统计学意义(P0.05)。PM_(2.5)染毒组大鼠血清ALT及AST水平均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肝脏SOD及GSH-Px活力降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(P0.05)。PM_(2.5)染毒组大鼠肝细胞排列紊乱,间质重度充血,细胞固缩,双核增加,可见大量散在性炎细胞浸润。结论 PM_(2.5)可致大鼠肝脏发生明显的氧化损伤效应。     

苯并[a]芘暴露的小鼠原代支气管上皮细胞中miR-320对细胞周期的影响

目的检测miR-320在苯并[a]芘(B[a]P)暴露的小鼠原代支气管上皮细胞的表达水平,探讨B[a]P染毒的小鼠支气管上皮细胞中miR-320对细胞周期的影响。方法以1.00μmol/LB[a]P染毒原代培养小鼠支气管上皮细胞。以定量PCR检测染毒细胞中miR-320的表达。以FACSArray流式液相芯片分析仪检测细胞周期和细胞周期素依赖性激酶6(CDK6)的表达水平。结果 miR-320在B[a]P染毒细胞中表达上调。染毒细胞出现G1期阻滞现象,与溶剂对照组的[(62.70±1.54)%]G1期细胞比例相比,(84.28±0.36)%的细胞停留在G1期。抑制miR-320表达后G1期阻滞现象缓解。染毒细胞中的CDK6表达降低,抑制miR-320表达后,与B[a]P组相比,CDK6的表达量有(2.0±0.3)倍的升高。结论 miR-320在一定程度上通过对CDK6表达的调控影响B[a]P暴露的细胞的细胞周期。     

苦味素受体对PM_(2.5)染毒诱导支气管上皮细胞炎症反应的调节机制

目的探讨苦味素受体(T2Rs)对PM_(2.5)染毒诱导气道炎症反应的调节机制。方法将支气管上皮细胞HBE16分为对照组、PM_(2.5)组(40μg/ml PM_(2.5))、PM_(2.5)+桔梗皂苷组(200 mg/L桔梗皂苷+40μg/ml PM_(2.5))、桔梗皂苷组(200 mg/L桔梗皂苷),经过处理或染毒后,分别采用细胞免疫荧光法、ELISA法和RT-PCR法检测各组支气管上皮细胞T2R14、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果 PM_(2.5)组细胞IL-4、TNF-α的蛋白表达和mRNA水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);T2R14的蛋白表达和mRNA水平变化不明显。桔梗皂苷组细胞IL-4、TNF-α的蛋白表达和mRNA水平明显低于PM_(2.5)组,T2R14的蛋白表达和mRNA水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论中药的苦味成分可引起支气管上皮细胞T2R14激活,抑制慢性炎症气道的炎症因子产生和释放,提示T2R14可能参与苦味物质的抗炎过程。     

PM_(2.5)对支气管上皮细胞凋亡基因表达水平的影响

目的探讨PM_(2.5)对支气管上皮(HBE)细胞凋亡基因表达的影响。方法用PM_(2.5)低剂量10μg/m L和高剂量50μg/mL对HBE细胞染毒,用未染毒的细胞作为对照组,10μg/mL的Cr~(6+)为阳性对照组,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)检测凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平变化情况,Western blot检测凋亡基因的蛋白质表达变化情况。结果 qRT-PCR结果显示,与对照组比较,PM_(2.5)10μg/mL和50μg/mL染毒以及阳性对照组染毒后,Caspase-3基因表达量分别升高193.0%、340.0%、214.0%,Caspase-8基因表达分别升高50.0%、84.0%、71.0%,Caspase-9基因表达分别升高94.0%、177.0%、117.0%,Bax基因表达分别升高8.0%、38.0%、57.0%,Bcl-2基因表达水平分别下降26.0%、46.0%、57.0%。Western blot结果显示,与对照组比较,Caspase-3蛋白在PM_(2.5)10μg/mL和50μg/mL染毒和Cr6+染毒后表达水平分别升高22.4%、48.6%、21.8%,Caspase-8蛋白表达水平分别升高54.7%、77.8%、64.3%,Caspase-9蛋白表达水平分别升高16.1%、82.7%、25.1%,Bax蛋白表达水平分别升高54.7%、90.4%、42.8%,Bcl-2蛋白表达量分别下降20.5%、41.8%、27.6%。结论 PM_(2.5)染毒引起HBE细胞中凋亡基因表达升高,抑凋亡基因表达下降,提示雾霾对凋亡基因表达水平具有明显影响。     

circRNA 404524在PM_(2.5)致BEAS-2B细胞炎症过程中的功能及机制研究

目的研究circRNA 404524在PM_(2.5)致永生化人支气管上皮样细胞(BEAS-2B)炎症过程中表达改变,探索circRNA在PM_(2.5)致气道炎症过程中的功能及机制。方法 BEAS-2B细胞分为6组:NT组(DMSO),PM_(2.5)组(75μg/ml PM_(2.5)),NC组(转染空载体质粒+DMSO),NC+PM_(2.5)组(转染空载体质粒+75μg/ml PM_(2.5)),OE组(转染circRNA 404524+DMSO),OE+PM_(2.5)组(转染circRNA 404524+75μg/ml PM_(2.5))。使用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测circRNA 404524在75μg/ml PM_(2.5)染毒BEAS-2B细胞中的表达水平,同时通过转染circRNA 404524的过表达载体联合75μg/ml PM_(2.5)染毒后检测circRNA404524、IL-6及IL-8的表达水平。检测circRNA 404524在BEAS-2B细胞胞浆/胞核的表达水平,分析其表达位置。通过KEGG生物信息学软件分析circRNA 404524可能参与调控的基因通路,而后检测NF-κB炎症通路关键基因的表达水平。结果与NT组相比,circRNA 404524在PM_(2.5)组表达下调,相对变化倍数为2.63,差异有统计学意义(P0.01)。转染circRNA 404524过表达载体后,通过检测发现,相比于NC组,OE组中circRNA 404524上调154.74倍,差异有统计学意义(P0.01)。检测炎症因子表达水平发现,与NC组相比,OE组中IL-6及IL-8表达均下调,差异均具有统计学意义(P0.05),NC+PM_(2.5)组中IL-6和IL-8表达均上调,差异均具有统计学意义(P0.01)。胞浆胞核定位结果显示circRNA 404524主要在胞核表达,检测NF-κB炎症通路关键基因的表达水平发现,相比于NC组,OE组中IKK-alpha、IKB-alpha及NFKB1表达均下调,NC+PM_(2.5)组中表达均上调,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 circRNA 404524在PM_(2.5)染毒的BEAS-2B细胞中低表达,将其过表达后,PM_(2.5)引起的炎症水平降低,提示其在PM_(2.5)染毒致BEAS-2B细胞炎症过程中发挥抑炎基因的作用,并可能通过对NF-κB炎症通路的调控发挥功能。     

大气细颗粒物染毒致C57BL/6和C3H/He品系小鼠基因表达的差异

[目的]染毒大气细颗粒物(PM_(2.5))后,比较C57BL/6(B6)和C3H/He(C3)品系小鼠肺部基因表达是否存在差异。[方法]采用气管滴注的染毒方法,对C57BL/6(B6)和C3H/He(C3)小鼠均予PM_(2.5)连续染毒2d,末次染毒24h后,处死小鼠,取肺组织并且立即置于液氮中。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析肺部基因的表达情况。[结果]Cxcl2,C4,Hc和Cp是表达上调的基因,图像分析结果表明,基因表达量在B6染毒组肺部分别为:1.03±0.02、1.02±0.01、1.07±0.02和1.05±0.01;在C3染毒组肺部则分别为:0.98±0.02、0.98±0.02、1.05±0.02和1.04±0.01;而基因Igh-6和Capl是表达下调的基因,基因表达量在B6染毒组肺部分别为:0.93±0.03和0.92±0.01;在C3染毒组肺部则分别为:1.35±0.01和1.02±0.02。[结论]暴露于PM_(2.5)后,B6和C3小鼠肺部基因表达存在着差异,可能是导致两种品系小鼠对PM_(2.5)敏感程度不同的原因之一。     

PM_(2.5)暴露对肺组织和H1299细胞Twist1、Zeb1表达影响

目的探讨细颗粒物(PM_(2.5))暴露对大鼠肺组织及H1299细胞中Zeb1、Twist1的表达和细胞增殖影响。方法体内实验:40只大鼠分别给予PM_(2.5)混悬液和生理盐水,于暴露后2和4周收集肺组织;体外实验:分别用0、50、100、200μg/mL PM_(2.5)混悬液培养H1299细胞48 h,收集细胞;采用免疫印迹法法检测小鼠肺组织和H1299细胞中Zeb1、Twist1蛋白表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测H1299细胞增殖率。结果体内实验:与对照组[(0.68±0.19)、(0.99±0.11)]比较,PM_(2.5)暴露大鼠4周后肺组织中Zeb1、Twist1蛋白表达量[分别为(0.27±0.18)(0.44±0.15)]明显下调(P 0.05)。体外实验:与对照组[(1.34±0.38)、(1.05±0.11)]比较,200μg/mL PM_(2.5)染毒组H1299细胞中Zeb1、Twist1蛋白表达量[分别为(0.17±0.08)、(0.20±0.05)]明显下调(P 0.05);200μg/mL PM_(2.5)处理H1299细胞72 h,H1299细胞生存率为(25.26±1.84)%,明显低于对照组(P 0.05)。结论 PM_(2.5)暴露后,小鼠肺组织及人肺腺癌细胞H1299中Zeb1、Twist1表达明显降低,并且肺癌细胞(H1299)呈现增殖抑制现象。     

PM_(2.5)暴露BEAS2B细胞lncRNA FENDRR的表达及其分子机制

目的探讨PM_(2.5)激活人正常支气管上皮细胞(BEAS2B)lncRNA FENDRR基因表达的分子机制。方法将BEAS2B细胞分为4组,PBS对照组(磷酸盐缓冲液),PM_(2.5)组(300μg/ml PM_(2.5)染毒48 h),PM_(2.5)+5-氮杂胞苷(5-Aza C,DNA甲基化转移酶抑制剂)组(300μg/ml PM_(2.5)+5.0μmol/L 5-Aza C),PM_(2.5)+曲古抑菌素A(TSA,组蛋白去乙酰化酶抑制剂)组(300μg/ml PM_(2.5)+0.2μmol/L TSA)。用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测lncRNA FENDRR基因的表达情况,蛋白印迹法(Western Blot)检测HDACs相关蛋白的表达。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组的BEAS2B细胞lncRNA FENDRR表达上调5.36倍,差异有统计学意义(P0.05),HDAC1和HDAC2的表达均下降。与PM_(2.5)组比较,PM_(2.5)+TSA组lncRNA FENDRR表达上调2.59倍,差异有统计学意义(P0.05),HDAC1和HDAC2表达下降。结论 PM_(2.5)通过抑制HDAC1和HDAC2表达,从而激活lncRNA FENDRR基因的表达。