不同压力CO_2气腹对宫颈癌细胞侵袭黏附能力的影响

目的:体外模拟腹腔镜手术CO2气腹方法,研究不同压力CO2环境对人宫颈癌Hela细胞黏附和侵袭能力的影响。方法:培养人宫颈癌Hela细胞株,模拟CO2气腹压力12 mmHg、16 mmHg处理4 h,以培养于常规条件下的人宫颈癌Hela细胞为对照,通过MTT法检测细胞活性,通过细胞基质黏附试验检测细胞基质黏附能力改变,应用免疫组织化学方法检测人宫颈癌Hela细胞中E-钙黏素(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达变化。结果:与对照组相比,CO2气腹处理组生长曲线上移(P<0.05)、随压力增加生长速度加快;气腹组与对照组相比,细胞基质黏附能力增强(P<0.05)、E-钙黏素表达减少(P<0.05)、MMP-9表达增加(P<0.05)。但不同压力条件下E-钙黏素和MMP-9表达水平无统计学差异(P>0.05),细胞基质黏附能力无明显增加。结论:CO2气腹环境增加了宫颈癌的侵袭和转移的风险,其机制可能与人宫颈癌Hela细胞的E-钙黏素的表达降低,MMP-9的表达增加有关,不同压力的CO2气腹对宫颈癌的侵袭和转移能力无明显影响。     

E-钙黏素在复发性流产孕妇妊娠早期滋养层细胞中的表达与HPV感染的相关性分析

目的探讨复发性流产孕妇妊娠早期滋养层细胞中E-钙黏素表达状况,并分析E-钙黏素与人乳头状瘤病毒(HPV)感染间的相关性。方法选取医院2016年1月-12月120例妊娠早期复发性流产孕妇临床诊治资料,设为观察组,另选取120例同期于医院行人工流产的正常早期妊娠孕妇作为对照组,采集两组绒毛标本,检测两组绒毛滋养细胞中E-钙黏素表达状况,同时统计两组HPV-DNA感染情况。结果两组切片中均可见E-钙黏素阳性表达,其中观察组E-钙黏素阳性者69例,阳性率为57.50%显著低于对照组E-钙黏素阳性者111例,阳性率92.50%(P<0.05)。观察组HPV感染者42例,感染率35.00%,显著高于对照组HPV感染者15例,感染率12.50%(P<0.05);观察组HPV感染中HPV16感染占85.71%,显著高于对照组40.00%(P<0.05)。HPV感染孕妇中E-钙黏素阳性者为15例,E-钙黏素阳性率35.71%显著低于对照组E-钙黏素阳性者为15例,E-钙黏素阳性率100.00%(P<0.05)。E-钙黏素表达与HPV感染进行相关性分析,两者呈负相关性(P<0.05)。结论 E-钙黏素在妊娠早期孕妇滋养层细胞中存在阳性表达,而E-钙黏素阳性表达下降可能参与到复发流产过程中;孕妇感染HPV尤其是HPV16感染则可能会致E-钙黏素异常表达。     

E-钙黏素和β-连环素在妊娠滋养细胞疾病的表达与临床意义

目的:探讨E-钙黏素和β-连环素在妊娠滋养细胞疾病的表达与临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测22例正常早孕绒毛和55例妊娠滋养细胞疾病石蜡包埋组织中E-钙黏素和β-连环素的表达情况,结合临床资料进行分析。结果:E-钙黏素和β-连环素在正常早孕绒毛和非恶变葡萄胎的表达差异无统计学意义(P0.05);恶变葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达量明显低于正常早孕绒毛和非恶变葡萄胎(P0.05);侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达量低于恶变葡萄胎(P0.05)。妊娠滋养细胞肿瘤中E-钙黏素的表达与临床分期呈负相关(P0.05);β-连环素的表达与WHO预后评分呈负相关(P0.05)。结论:E-钙黏素和β-连环素的表达下调可能是滋养细胞恶性转化的早期事件,在妊娠滋养细胞疾病的恶化进展中起重要作用;E-钙黏素和β-连环素可作为葡萄胎恶变预测以及妊娠滋养细胞疾病预后评估的参考指标。     

复发性流产孕妇早期妊娠滋养细胞中E-钙黏素的表达与HPV感染的相关性

目的探讨E-钙黏素在复发性流产孕妇妊娠早期滋养层细胞中的表达与人乳头状瘤病毒(HPV)感染的相关性,以分析E-钙黏素在复发性流产中的作用。方法选取2012年1月-2013年6月妊娠早期复发性流产孕妇(研究组)与拟行人工流产术的早期妊娠妇女(对照组)各40例,取绒毛标本采用免疫组化法及PCR法分别检测绒毛滋养细胞中E-钙黏素的表达及HPV-DNA感染率,数据采用SPSS16.0统计软件进行分析。结果 E-钙黏素阳性率研究组为57.50%,对照组为92.50%,差异有统计学意义(P<0.05);HPV感染率研究组为35.0%,对照组为12.5%,HPV感染率研究组高于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05),研究组中HPV感染以HPV16为主占85.71%,对照组HPV16感染占40.00%,差异有统计学意义(P<0.05);HPV感染阳性的孕妇E-钙黏素阳性率研究组为35.71%,对照组为100.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在妊娠早期滋养细胞中存在E-钙黏素的阳性表达,E-钙黏素表达下调可能与复发性流产相关,推测HPV感染,特别是HPV16感染可能是引起E-钙黏素的异常表达的因素之一。     

上皮性卵巢癌中Survivin表达与肿瘤侵袭性的关系

目的用不同浓度的拓扑替康作用于卵巢癌细胞株浆液性卵巢癌细胞系,探讨Survivin蛋白的表达差异及浆液性卵巢癌细胞系侵袭能力的改变。方法用不同浓度的拓扑替康作用于浆液性卵巢癌细胞系细胞,应用免疫组化的方法检测细胞中Survivin蛋白的表达,同时应用体外侵袭系统(Transwell小室),并通过明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9的表达来检测浆液性卵巢癌细胞系细胞的体外侵袭能力。结果随着拓扑替康浓度的增加,浆液性卵巢癌细胞系细胞的侵袭率降低,各组浆液性卵巢癌细胞系细胞的侵袭率比较具有显著性差异(F=385.885,P<0.05),并且各组基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9的表达减少,各组基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的比较具有显著性差异(F分别为263.302、184.378,均P<0.05)。结论拓扑替康可抑制卵巢癌细胞株中Survivin蛋白的表达,从而使细胞侵袭能力下降,这为拓扑替康应用于卵巢癌的治疗提供了一定的理论依据。     

COX-2、MMP-9在宫颈癌中的表达及临床意义

目的 探讨子宫颈癌组织中环氧合酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达及其与临床分期、病理分级、组织学类型、淋巴结转移的关系,并研究二者的相关性.方法 以62例宫颈癌患者的宫颈癌组织作为研究组,35例因其他原因行子宫切除术患者的正常宫颈组织作为对照组.应用免疫组化SP法检测宫颈癌及正常宫颈组织中环氧合酶-2、基质金属蛋白酶-9的表达情况.结果 环氧合酶-2、基质金属蛋白酶-9在宫颈癌和正常宫颈组织中的表达差异有显著性意义(P＜0.05).环氧合酶-2、基质金属蛋白酶-9的表达与淋巴结转移显著相关(P＜0.05),而与年龄、临床分期和组织学类型无关(P＞0.05);环氧合酶-2与病理分级无关(P＞0.05),而基质金属蛋白酶-9与病理分级有关(P＜0.05).环氧合酶-2与基质金属蛋白酶-9的表达之间呈正相关(r=0.3220,P＜0.05).结论 环氧合酶-2与基质金属蛋白酶-9表达与宫颈癌的侵袭转移相关,对宫颈癌的淋巴结转移起重要作用.     

奈达铂对宫颈癌Hela及Siha细胞的作用

目的:比较奈达铂(NDP)体外对人宫颈腺癌细胞Hela细胞及鳞癌细胞Siha的抑制作用并探讨其作用机制。方法:以2.5～40μg/ml NDP分别作用于Hela及Siha细胞24 h,48 h,72 h,MTT法检测抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);利用流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡率及周期变化;半定量PCR法分析基因半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Caspase 9)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化。结果:NDP对宫颈癌Hela细胞及Siha细胞均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性,NDP对Hela细胞的抑制率大于Siha细胞;FCM显示,随时间、浓度增加,Hela及Siha细胞凋亡率增加,相同浓度和作用时间下,Hela细胞的凋亡率大于Siha细胞(P<0.05),S期细胞的比例增加,G0/G1期比例减少,G2/M期比例变化不明显;与对照组相比,Caspase 3,Caspase 9表达增加,MMP-2表达减少。结论:NDP可抑制宫颈腺癌细胞Hela及鳞癌细胞Si-ha的增殖,NDP体外对Hela细胞的抑制作用更强。NDP的作用机制与诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞、上调Caspase3和Caspase9的表达有关;下调MMP-2的表达可能有利于降低宫颈癌细胞的侵袭力。     

川陈皮素通过诱导细胞自噬抑制宫颈癌细胞侵袭能力

目的了解川陈皮素(nobiletin)对宫颈癌Si Ha细胞侵袭能力及自噬水平的影响。方法选择宫颈癌SiHa细胞作为实验对象,用不同浓度的川陈皮素(0、25、50、100 mg/L)在体外处理SiHa细胞,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;蛋白质印迹法检测细胞EMT标志物(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin)蛋白、自噬相关基因蛋白(Atg5、LC3-II和Beclin1蛋白)和金属基质蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达变化情况。结果 Transwell侵袭实验结果显示,川陈皮素处理24 h后可抑制宫颈癌SiHa细胞侵袭能力,25、50、100 mg/L川陈皮素组的穿膜细胞数分别为(318.6±12.9)、(221.5±11.3)和(109.8±13.7)个,与对照组的穿膜细胞数[(423.4±16.6)个]比较,差异有统计学意义(P0.05);蛋白质印迹结果显示,川陈皮素可促进Si Ha细胞EMT标志物蛋白E-cadherin的表达,同时抑制Vimentin、Fibronectin蛋白的表达,且抑制MMP-9蛋白表达;川陈皮素也可上调自噬相关蛋白Atg5、LC3-II和Beclin1的表达。结论川陈皮素可抑制宫颈癌SiHa细胞侵袭能力,其机制可能通过诱导Si Ha细胞自噬并抑制EMT形成来实现。     

脉冲电场对宫颈癌Hela细胞黏附和侵袭能力影响的实验研究

目的:探讨脉冲电场对肿瘤细胞黏附侵袭能力的影响及其可能的作用机制.方法:分别将场强为0 V/cm、500 V/cm、1 000 V/cm和1 500 V/cm的脉冲电场作用于宫颈癌Hela细胞,采用基质胶黏附实验观察脉冲电场对Hela细胞黏附能力的影响;采用Transwell小室实验观察脉冲电场对Hela细胞侵袭能力的影响;采用免疫荧光法检测脉冲电场作用后Hela细胞中MMP-2、TIMP-2的表达情况.结果:经脉冲电场作用后,Hela细胞黏附能力下降,侵袭能力受到抑制,MMP-2的表达水平下调,TIMP-2的表达水平上调.结论:脉冲电场能抑制Hela细胞的黏附和侵袭能力,这种抑制作用可能与其下调MMP-2的表达水平和上调TIMP-2的表达水平有关.     

miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

MTT法检测Hela细胞对化疗药物敏感性的研究

目的:分析宫颈癌Hela细胞对化疗药物顺铂的体外敏感性。方法:采用MTT法测定宫颈癌Hela细胞对4种不同浓度顺铂的体外敏感性。结果:不同浓度的顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长均有一定的抑制作用。结论:MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果,减少副作用,具有重要的临床应用价值。     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其对细胞周期影响的研究

目的:观察顺铂对人宫颈癌Hela细胞凋亡及细胞周期的影响,以揭示顺铂治疗宫颈癌的机理。方法:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的人Hela细胞72 h,用流式细胞仪分析其凋亡率及细胞周期。结果:顺铂能以浓度依赖的方式诱导Hela细胞凋亡,并呈现出G0/G1期阻滞作用。结论:顺铂能诱导Hela细胞凋亡并改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期,这可能是顺铂抗宫颈癌作用的重要机制之一。     

线粒体分裂融合基因在氧化应激诱导宫颈癌Hela细胞损伤中的作用

目的:利用维生素K3(VitaminK3,Vk3)复制子宫颈癌Hela细胞损伤模型,观察线粒体融合分裂基因的变化,探讨线粒体融合分裂基因在Vk3诱导Hela细胞凋亡过程中的作用。方法:MTT法检测各组Hela细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡,RT-PCR方法检测各组Hela细胞中线粒体融合基因Mfn1、Mfn2和Opa1及线粒体分裂基因Drp1、Fist1和MTP18mRNA表达。结果:Vk3能够降低Hela细胞存活率,并且Hoechst33258染色结果显示细胞呈现凋亡形态变化,凋亡率增加,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显下降(P<0.05);而与Vk3单独作用组比较,Vk3+NAC联合作用组Hela细胞存活率增加(P<0.05),凋亡率降低,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显增加(P<0.05)。结论:线粒体融合和分裂基因表达的降低都有可能参与了氧化应激诱导的细胞损伤作用。     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

宫颈腺癌综合治疗后HRT对预后影响的研究

目的:探讨激素替代治疗(HRT)对宫颈腺癌预后的影响。方法:①体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测两种激素对Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测细胞生长周期和凋亡率的影响;免疫组化方法测定其雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达。②对24例宫颈腺癌治疗后的妇女给予HRT,通过患者主观症状的变化了解替代效果;通过阴道宫颈涂片、B超、胸片、ECT等检查了解病情变化,最终总结其疗效及对预后的影响,判断其可行性。结果:①雌二醇(E2)+孕酮(P)对Hela细胞生长有抑制作用(P<0.05);E2+P组Hela细胞S期细胞比例下降,凋亡率上升;E2和P对人宫颈腺癌细胞ER和PR的表达无显著影响。②复发情况:研究组中复发转移占29.17%(7/24),对照组中复发转移占40.00%(8/20),两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:E2对宫颈癌Hela细胞具有促进生长,抗凋亡作用,而P抑制其生长,诱导凋亡,P能有效抵消E2对Hela细胞生长的刺激作用。宫颈腺癌患者的复发与病理类型、临床分期有密切关系,与是否采用HRT关系不大。     

5-ALA光动力对人子宫颈癌Hela细胞的杀伤作用及剂量研究

目的研究不同剂量氨基酮戊酸(5-ALA)光动力对人宫颈癌Hela细胞的杀伤作用,为宫颈癌的治疗提供有价值的参考。方法对人宫颈癌细胞株Hela培养、传代后分为两组,观察组给予不同剂量5-ALA光动力,对照组不给予5-ALA光动力,比较两组细胞增殖抑制率、Her-2/neu表达、凋亡率情况。结果观察组早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率均高于对照组(P0.05)。随着5-ALA光敏剂浓度增加,早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也随之增加(P0.05)。观察组Her-2/neu阳性表达率为12.5%,明显低于对照组(P0.05)。光动力能量密度5、10、20 J/cm2细胞增殖抑制率明显大于1 J/cm2;10、20 J/cm2细胞增殖抑制率明显大于5 J/cm2;光敏剂浓度1、4 mmol/L细胞增殖抑制率明显大于0.1 mmol/L(P0.05)。光动力能量密度10、20 J/cm2细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P0.05);光敏剂浓度1、4 mmol/L细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 5-ALA光动力对人宫颈癌Hela细胞具有明显的抑制作用,还可诱导细胞凋亡,5-ALA浓度为1 mmol/L,光动力能量密度10 J/cm2是最佳杀伤剂量。     

人IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的影响

目的 研究含人IL-21基因的重组腺病毒(Ad-IL-21)联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。方法 重组腺病毒Ad-IL-21于体外转染子宫颈癌Hela细胞,转染后6 h进行6Gy ¹³⁷Cs γ射线照射,用MTT方法和流式细胞仪测定Hela细胞的生长曲线、抑制率及细胞周期。结果 Ad-IL-21基因组、照射组和基因联合照射组对Hela细胞生长均具有抑制作用,联合照射组的抑制效应最强(44%),明显高于Ad-IL-21组和照射组。联合照射组Hela细胞出现明显的G1期阻滞,G1期细胞所占比例最高,达到88.9%,S期细胞最少(1%)。结论 IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌的抑瘤作用具有协同效应,有效地抑制肿瘤细胞的生长。     

miR-32与PTEN在宫颈癌中表达关系

目的：研究宫颈癌中miR-32与PTEN之间的关系。方法：通过qRT-PCR检测miR-32、Western blot检测PTEN在宫颈癌组织和癌旁宫颈组织中的表达，并分析PTEN表达与宫颈癌发病的关系；miR-32 mimics、inhibitors、阴性对照序列（NC），分别转染宫颈癌Hela细胞，qRT-PCR检测miR-32，Western blot检测PTEN表达。结果：宫颈癌组织中miR-32高表达，而癌旁组织中miR-32低表达；宫颈癌组织中PTEN低表达，而癌旁组织中高表达，差异均有显著性意义（P＜0.05）。miR-32表达下调后，导致PTEN表达增高，提高miR-32表达后，PTEN蛋白水平下调。结论：miRNA-32和PTEN与宫颈癌发生发展有关，PTEN可能是miR-32的靶基因。     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。