军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应检测技术的建立及应用

为建立军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法 ,根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌毒力基因KatB的特异引物,采用PCR方法 对2005-2007年天津市中央空调冷却塔分离的嗜肺军团菌、杜氏军团菌、博氏军团菌、长滩军团菌等菌株进行了军团菌毒力基因KaLB的检测.结果 显示,本室分离的16株致病军团菌中有9株嗜肺军团菌和1株杜氏军团菌扩增出了2.7 kb的KatB基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.本研究成功建立了军团菌毒力基因KatB的PCR检测方法 ,为军团菌的毒力研究奠定了基础.     

福建省公共场所中央空调冷却塔水嗜肺军团菌污染影响因素分析

目的对福建省2008年公共场所中央空调冷却塔水嗜肺军团菌污染影响因素进行调查,为防控提供依据。方法采集5个设区市114家场所116份空调冷却塔水进行嗜肺军团菌的培养和鉴定,并用PCR检测KatB基因,对影响因素进行分析。结果嗜肺军团菌污染率为40.4%（46/114）,冷却塔水检出率40.5%（47/116）;KatB基因的检出率为33.3%（5/15）;冷却塔水水质处理频率以每月3～4次的检出率最低（16.0%）。结论福建省公共场所嗜肺军团菌污染较严重,冷却塔水水质处理频率和此菌的污染存在关联性,应采取综合措施,降低嗜肺军团菌污染的潜在危险性。     

工业循环冷却塔水嗜肺军团菌分离株分子生学特性研究

目的 了解钢铁企业工业循环冷却塔水中的嗜肺军团菌污染状况及菌株分子生物学特性.方法 于2011年3月-2012年9月对邯郸某钢铁厂相对固定的车间冷却塔水进行连续监测,进行嗜肺军团菌的定量分离培养,对分离到的菌株进行血清分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因序列分型、毒力基因(lvh、rtxA)检测.结果 共检测117份水样,其中20份水样检出嗜肺军团菌,检出率为17.1％;菌落总数为100～50000 CFU/L,中位数为12000 CFU/L;共分离到嗜肺军团菌23株,血清型包括Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp8,并以Lp1为主(占36.1％,9/23).23株嗜肺军团菌PFGE分型得到19种不同带型,其中15种带型为国内首次发现.23株嗜肺军团菌分成20个SBT型别,有12个型别为本研究新发现.23株菌中,lvh、rtxA基因阳性的分别有20、22株,两种毒力基因全部阳性的有19株.结论 钢铁企业的冷却塔水存在嗜肺军团菌污染,菌型呈现基因多态性,同时具有独特的基因组成,并普遍具有毒力.     

漳州市嗜肺军团菌KatB与rcp毒力基因检测

目的了解漳州市公共场所中央空调冷却塔水及冷凝水分离的嗜肺军团菌的Kat B与rcp毒力基因携带状况,为军团菌病的防控提供基础研究资料。方法采用PCR法对40株嗜肺军团菌菌株进行Kat B与rcp基因检测。结果 40株嗜肺军团菌中Kat B毒力基因阳性11株,阳性率为27.50%(11/40);rcp毒力基因阳性27株,阳性率为67.50%(27/40)。Kat B基因阳性的11个菌株rcp基因均为阳性。Kat B基因阳性菌株中LP1血清型5株,LP7型4株,LP13型2株;rcp基因阳性菌株中LP1血清型13株,LP7型8株,LP13型6株。在检测的17株LP1血清型中,Kat B基因阳性率为29.41%(5/17),rcp基因阳性率为76.47%(13/17);12株LP7血清型中Kat B基因阳性率为33.33%(4/12),rcp基因阳性率为66.67%(8/12);6株LP13血清型中Kat B基因阳性率为33.33%(2/6),rcp基因阳性率为100.00%(6/6)。结论漳州市公共场所中央空调冷却塔水及冷凝水分离的嗜肺军团菌的Kat B与rcp毒力基因携带率较高。     

罕见非嗜肺军团菌的鉴定

目的对非嗜肺军团菌进行分离培养和分子分型鉴定。方法依据《公共场所集中空调通风系统卫生规范》(2006),对广州市海珠区公共场所集中空调冷却塔水进行军团菌检测。用常规分离培养法检测军团菌,进一步运用生化和血清学凝集试验、实时荧光PCR技术及16S rRNA基因、mip基因测序对菌株进行种属鉴定。结果在BCYE平板上生长,在L-半胱氨酸缺失的BCYE平板及血平板中均不生长的菌株,通过实时荧光PCR技术及16S rRNA基因、mip基因测序鉴定为菲氏军团菌4株和釜山军团菌1株,这是本区首次从集中空调冷却塔水中检出的非嗜肺军团菌。结论运用常规分离培养方法和分子生物技术相结合检测出菲氏军团菌和釜山军团菌(国内罕见)等多种军团菌种,同时提示海珠区公共场所集中空调冷却塔水存在非嗜肺军团菌污染;16S rRNA基因、mip基因核酸测序鉴定有助于发现军团菌新种。     

山东省济南市公共场所集中空调冷却塔水军团菌污染状况调查

目的 了解2013-2022年山东省济南市公共场所集中空调冷却塔水的军团菌污染状况,分析菌株毒力基因携带情况,为军团菌污染防控提供科学数据。方法 参照《公共场所集中空调通风系统卫生规范》,2013-2022年对山东省济南市113家公共场所集中空调冷却塔水进行军团菌分离,通过生化培养及飞行时间质谱对疑似菌株进行鉴定。使用诊断血清对嗜肺军团菌进行分型。采用PCR方法扩增菌株的毒力基因lvh和rtxA,产物通过毛细管电泳判读。结果 2013-2022年采集山东省济南市113家公共场所集中空调冷却塔水样216份,47份分离到军团菌,检出率为21.8%(47/216)。获得军团菌81株,其中嗜肺军团菌占90.1%(73/81)。73株嗜肺军团菌中,有84.9%(62/73)同时携带lvh和rtxA两种毒力基因,1.1%(8/73)仅携带一种毒力基因。其余3株嗜肺军团菌及8株非嗜肺军团菌均未检出lvh和rtxA。结论 济南市公共场所集中空调冷却塔水军团菌污染较为严重,存在公共卫生危害。分离的嗜肺军团菌大多数均携带lvh和rtxA两种毒力基因,可能导致军团菌病。     

工业循环冷却塔水嗜肺军团菌分离株分子生物学特性研究

目的了解钢铁企业工业循环冷却塔水中的嗜肺军团菌污染状况及菌株分子生物学特性。方法于2011年3月—2012年9月对邯郸某钢铁厂相对固定的车间冷却塔水进行连续监测,进行嗜肺军团菌的定量分离培养,对分离到的菌株进行血清分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因序列分型、毒力基因(lvh、rtx A)检测。结果共检测117份水样,其中20份水样检出嗜肺军团菌,检出率为17.1%;菌落总数为100~50 000 CFU/L,中位数为12 000 CFU/L;共分离到嗜肺军团菌23株,血清型包括Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp8,并以Lp1为主(占36.1%,9/23)。23株嗜肺军团菌PFGE分型得到19种不同带型,其中15种带型为国内首次发现。23株嗜肺军团菌分成20个SBT型别,有12个型别为本研究新发现。23株菌中,lvh、rtx A基因阳性的分别有20、22株,两种毒力基因全部阳性的有19株。结论钢铁企业的冷却塔水存在嗜肺军团菌污染,菌型呈现基因多态性,同时具有独特的基因组成,并普遍具有毒力。     

钢铁厂冷却塔水嗜肺军团菌分离株分子流行病学研究

目的调查某钢铁企业冷却塔水嗜肺军团菌的污染状况及分子流行病学特征,为预防控制军团菌病的传播提供科学依据。方法 2011年3月—2012年9月,对石家庄市某钢铁厂车间冷却塔水进行监测,分离培养嗜肺军团菌,对得到的菌株进行血清分型、毒力基因检测(lvh、rtxA)和多位点序列分型研究。结果 182份冷却塔水中有67份检出嗜肺军团菌,检出率为36.8%;共分离培养得到菌株84株,包括7种血清型,其中LP1型占63.1%(53/84)、LP6型占19.0%(16/84)。lvh和rtxA基因检测阳性的分别有79株和83株,二者均为阳性的有78株。多位点序列分型可分为32个型,SBT1型占36.9%(31/84),为主要优势型别,有21个型别为首次发现。结论钢铁企业冷却水存在嗜肺军团菌污染,携带有毒力基因,血清型和SBT型呈多样性分布。     

福建省40株军团菌毒力基因lvh及rtxA携带情况分析

目的了解福建省中央冷却塔水分离的40株军团菌毒力基因lvh及rtx A携带情况。方法 40株军团菌菌株均经过常规培养分离鉴定、乳胶凝聚实验及血清凝聚实验,并用军团菌属特异性基因16S rRNA以及嗜肺军团菌特异性诊断基因mip进行PCR复核鉴定,然后进行lvh及rtx A基因扩增。结果 lvh的总阳性率为60.0%,rtx A的总阳性率为65.0%,lvh+rtx A+占52.5%,lvh+rtx A-占7.5%,lvh-rtx A+占12.5%,lvh-rtx A-占27.5%。不同亚型的菌株存在不同的毒力基因携带模式。结论本省环境分离菌株具有比较高的潜在感染性,应加强外环境中军团菌的监测,防控军团菌病的发生。     

临床与环境中分离菌株的耐消毒剂基因qacA/B和qacEΔ1-sull检测

目的了解临床与环境中分离菌株中耐消毒剂基因的携带情况,为进一步改良现有的消毒剂或消毒方法提供依据。方法收集从临床及环境中分离的菌总计168株,用PCR法检测耐消毒剂基因qacA/B及qacEΔ1-sull。结果在临床分离的115株菌中,qacEΔ1-sull基因检出率58.3%(67/115),qacA/B基因检出率20.0%(23/115)。其中39株不动杆菌检到qacEΔ1-sull基因35株,阳性率89.7%;检测到qacA/B基因4株,阳性率10.3%;25株耐甲氧西林葡萄球菌(MRS),两种基因的检出率分别为12.0%(3/25)、68.0%(17/25)。在环境中分离的53株菌中,qacEΔ1-sull基因检出率17.0%(9/53),qacA/B基因检出率11.3%(6/53)。其中15株不动杆菌两种基因检出分别为:5和2株;16株葡萄球菌两种基因检出为:3株。结论临床与环境分离的菌株中均检测到耐消毒剂基因,其中临床菌株的检出率高于环境菌株。革兰阴性杆菌携带qacEΔ1-sull基因为主,革兰阳性球菌携带qacA/B基因为主。     

深圳市6家医院集中空调冷却水军团菌污染状况及其管理对策

目的了解深圳市福田区医院集中空调冷却水军团菌污染现况,为医院集中空调管理提供依据。方法根据《公共场所集中空调通风系统卫生规范》,采集辖区内6家医院16个大型空调冷却塔共32份冷却塔水进行军团菌检测。结果所调查的医院空调冷却塔水中军团菌检出率为50.0%,共分离出16株军团菌,均为LPl型嗜肺军团菌。结论军团菌广泛存在于医院空调冷却塔水中,对医院内的易感人群的健康造成潜在威胁,对这一潜在传染来源应采取有效防范措施。     

2009—2012年上海口岸空调及供水系统军团菌监测结果分析

目的调查上海口岸公共场所及入出境交通工具水系统军团菌污染情况。方法2009—2012年,在上海口岸逐步开展军团菌(Legionella)监测工作,采集空调水、管网水,进行浓缩培养、菌种鉴定、血清分型,并用SPSS进行统计分析。结果4年来于上海各类口岸采集水样共计435份,军团菌检测总阳性率为5.52%(24/435),空调冷却水阳性率为15.62%(15/96)。24份阳性样本共分离培养军团菌26株,血清分型分类为嗜肺军团菌(L.pneumophila,LP)1型、LP4型、LP6型、LP7型、LP8型、非1型LP。结论我国国境口岸水系统军团菌检测阳性率低于国内其他公共场所。空调冷却水军团菌污染风险最高。口岸卫生监督工作应重视军团菌监测,严格规范清洗消毒有利于控制水系统军团菌的滋生。     

龙岩市2006-2010年公共场所水体军团菌污染调查

目的 了解龙岩市公共场所水体军团菌污染状况,为防制提供依据.方法 采集2006-2010年部分公共场所79份水样进行军团菌培养及鉴定.结果 共检出嗜肺军团菌37株,阳性率46.8％(37/79),1型占94.6％(35/37).中央空调系统阳性率73.7％(14/19),尤其是冷却塔水样污染严重(76.2％);中央空调系统使用单位(酒店、宾馆、超市和医院)该菌阳性率70.6％(12/17).结论 龙岩市公共场所水体嗜肺军团菌污染情况较严重,需加强监测,督促定期消毒和清洗,以预防军团菌病发生.     

2007年上海市部分嗜肺军团菌血清1型菌株PFGE分型研究

[目的]研究2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的嗜肺军团菌1型（L01）的基因特征。[方法]从空调冷却塔水中检测到26株Lp1嗜肺军团菌后,使用脉冲场凝胶电泳（pulsed－field gel electrophorefiifl,PFGE）技术对酶切后的L01军团菌全染色体DNA进行电泳获得指纹图谱,并用BioNumerics软件对其进行聚类分析。[结果]26株LO1军团菌可分为15个PFGE型。菌株间相似性系数在30．00％～100．00％之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。大部分PFGE型别的菌株来源场所单一;而大部分同一场所来源的军团菌菌株为相同的PFGE型。[结论]2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的Lp1军团菌呈现基因多样性。     

Legiolert酶底物法与传统培养法对公共场所水体样本中嗜肺军团菌检出结果的比较

目的比较Legiolert酶底物法与传统培养法对公共场所水体样本中嗜肺军团菌的检出效果。方法分别利用Legiolert酶底物法与传统培养法对采集于公共场所的冷却水、淋浴水样本进行嗜肺军团菌检测,并对分离株进行验证及血清分型。结果共采集并检测样品68份,传统培养法与Legiolert酶底物法的检出率分别为5.88%(4/68)及35.29%(24/68),差异有统计学意义(χ2=16.41,P<0.01)。两种方法的检测符合率为64.71%(44/68),检测效果的差异有统计学意义(配对χ2=16.41,P=0.000)。分离出的25株嗜肺军团菌血清型以LP1为主(14/25)。结论Legiolert酶底物法对公共场所水体样本中嗜肺军团菌的检出率高于传统培养法。     

影响冷却水中嗜肺军团菌生长的环境因素探讨

目的探讨影响冷却水中嗜肺军团菌生长的环境因素。方法按标准方法调查冷却塔周围环境因素、检测冷却水中理化和微生物指标，运用二分类logistic回归法进行分析。结果2008年和2009年冷却塔池水中军团菌检出率均高达76％，2年均检出军团菌的冷却塔占78．9％；公共场所淋浴水、水箱水及自来水中军团菌检出率分别为46．5％、73．7％和69．0％。军团菌的生长与季节温度和集中空调使用年限有关（P=0．043），另外冷却水的混浊度亦对军团菌的生长产生一定影响。结论该地区公共场所冷却水等水体中军团菌污染严重；主要影响因素包括季节温度、空调使用年限及浊度等。     

Sampling and detection of Legionella pneumophila aerosols generated from an industrial cooling tower

Cooling tower water has frequently been cited as a source of infection in outbreaks of Legionnaires' disease. However, there have been few reports on the presence of legionellae in aerosols from cooling towers. This paper describes our use of an impinger or a six-stage microbial impactor for detecting legionellae in air around a cooling tower contaminated with L. pneumophila (1.2+/-0.3x10(5) CFU/100 ml). Phosphate-buffered saline, Page's saline, 2% yeast extract solution and buffered yeast extract (BYE) broth were tested to evaluate their collection efficiency. These solutions were compared in laboratory experiments using an aerosol of L. pneumophila serogroup (SG) 1. Because BYE broth was the most efficient and storable collecting fluid among them, it was used for outdoor air sampling. In the outdoor air sampling, aerosolized L. pneumophila SG 6 was detected in the air around the cooling tower by the impinger (0.09 CFU/l. air). No legionellae were detected by the impactor with Legionella-selective agar plates (WYOalpha) because the plates were overgrown with fungi. Repetitive element PCR (rep-PCR) and arbitrarily primed PCR (AP-PCR) were employed to assess the epidemiological relationship among Legionella isolates from the air sample and the cooling tower water samples. L. pneumophila SG 6 isolated from the aerosols produced rep-PCR and AP-PCR fingerprints identical to those of L. pneumophila SG 6 strains from the cooling tower water, suggesting that the bacterium was aerosolized from the cooling tower.     

浙江省61株嗜肺军团菌血清1型菌株的SBT序列分型

目的了解浙江省空调冷却塔/冷凝水中嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的序列分型特征。方法选取2005～2011年间浙江省10个地区空调冷却塔/冷凝水中分离的61株Lp1型嗜肺军团菌菌株,采用欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)军团菌序列分型(SBT)方法,PCR扩增7对管家基因,对扩增产物进行测序、比对、递交,以获取等位基因号以及SBT序列型,运用DNAsp 5.0软件对测序结果进行核苷酸多态性分析,采用SplitsTree及eBURST软件对分型结果进行聚类分析。结果 61株Lp1型嗜肺军团菌可分为11种SBT序列型,其中5株(5/61)均为新发现序列型;ST-1型在10个地区(市)的冷却塔/冷凝水中均有分布,该序列型菌株占81.9%(50/61)。7个管家基因的核苷酸多态性(Pi)范围为0.01095(mip)～0.05355(pilE)。聚类分析显示,浙江省Lp1型菌株分属多个克隆系,但主要分属ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149三大序列群,另有1株为不属于任何序列群的单体。结论聚类分析表明浙江省空调冷却塔/冷凝水中分离的Lp1型嗜肺军团菌存在遗传多样性,序列群分布与国内部分省份的结果相似,以ST-1序列型为主。     

2006年-2010年广州市公共场所军团菌污染状况分析

目的:掌握广州市公共场所中嗜肺军团菌的污染情况和菌型分布,为预防空气传播疾病提供科学依据。方法:于2006年-2010年对广州市部分公共场所进行连续性监测调查,检测集中空调冷却塔水、冷凝水、洗浴用水等样品中嗜肺军团菌,对结果进行分析。结果:连续5年监测的1193件样品,在185份阳性中分离出202株嗜肺军团菌,检出率为15.51%。其中以血清型LP1型为主(45.05%),共检出LP7(20.29%)和LP14(17.32%)等10个血清型。同一份水样同时检出两种不同血清型嗜肺军团菌的占样品量的9.18%。公共交通的集中空调冷却塔水检出率(21.38%)和夏季的检出率(20.43%)最高。结论:广州存在多菌型嗜肺军团菌污染,需加强卫生监督和采取综合措施以保障公共卫生安全。