重铬酸钾处理人胚肺细胞A549的Hormesis效应及对某些修复基因表达的影响

目的研究重铬酸钾(K2Cr2O7)对A549细胞的低剂量兴奋效应和修复基因的表达变化。方法 K2Cr2O7作用浓度为0.156、0.312、0.625、1.250、2.500和5.000μmol/L;对照纽K2Cr2O7浓度为0μmol/L;作用时间均为24 h。K2Cr2O7作用浓度为0.312μmol/L时,作用时间分别为12、24、36和48 h;对照组K2Cr2O7作用浓度为0μmol/L,作用时间为0 h。MTT法测人胚肺A549细胞的增殖活性,半定量RT-PCR检测修复基因转录水平。结果 K2Cr2O7浓度在0~0.312μmol/L之间可促进细胞增殖,K2Cr2O7浓度在0.625~5.000μmol/L之间对细胞的增殖抑制率有增大的趋势,各组与对照组和0.312μmol/L组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。K2Cr2O7浓度在0~0.312μmol/L之间可促进修复基因hOGG1与hMTH1 mRNA的表达,Cr(Ⅵ)浓度在0.625~5.000μmol/L之间可抑制hOGGl及hMTHlmRNA的表达。K2Cr2O7作用浓度为0.312μmol/L时,随着时间的延长,最终将抑制细胞的增殖和修复基因的转录。结论低剂量K2Cr2O7作用于A549细胞可引起低剂量兴奋作用(Hormesis)效应,并导致hOGGl及hMTHl基因的表达变化。     

CYP1A2基因在三氯乙烯毒性中的作用研究

[目的]应用分子克隆技术,建立CYP1A2基因沉默细胞株和CYP1A2基因高表达细胞株,研究CYP1A2基因对三氯乙烯毒性的影响.[方法]将三氯乙烯分别染毒L02肝细胞、CYP1A2基因沉默细胞和CYP1A2基因高表达细胞,染毒剂量分别为0.25 mmol/L、0.50 mmol/L、1.00 mmol/L、2.00 mmol/L和4.00 mmol/L,以DMSO作为对照溶剂,染毒12 h,观察凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、k-ras、P53)表达水平.[结果]三氯乙烯染毒CYP1A2基因沉默细胞后,Bcl-2的mRNA表达水平高于对照组(P＜0.01),三氯乙烯部分剂量组凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和癌基因c-fos、c-myc表达水平低于对照组(P＜ 0.05或P＜0.01).三氯乙烯染毒CYP1A2基因高表达细胞后,Bcl-2的mRNA表达水平相比对照组下降(P＜0.01),Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达水平相比对照组升高(P＜0.01); CYP1A2高表达细胞中癌基因c-fos、c-myc、k-ras表达水平高于对照组(P＜0.01),P53表达水平低于对照组(P＜0.01).[结论]在体内代谢与CYP1A2存在密切关系,沉默CYP1A2基因可以减少三氯乙烯在肝细胞内代谢活化,导致三氯乙烯对凋亡基因和癌基因表达水平下降;三氯乙烯在CYP1A2基因高表达细胞中,表现出对凋亡基因和癌基因的促进表达作用.     

CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响

目的 构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1 A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定.分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmoL/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA 序列一致.CYP1A2沉默细胞的CYP1A2mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9％和82.4％(P＜0.01).TCE染毒后,0.25 ～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P＜0.01);部分0.25 ～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用.     

cdk5、p35和p53基因在砷诱导的神经细胞凋亡中的改变

目的 研究cdk5、p35和p53基因表达量在As2O3诱导的神经细胞凋亡中的改变,为探讨As2O3神经毒性的机制提供基础资料.方法 将原代培养的大鼠神经元分为未处理对照组,DMSO溶剂对照组,1、5、10 μmol/L As2O3染毒组,分别用1、5、10 μmol/L As2O3溶液染毒,未处理对照组只加入培养液.染毒8h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测神经细胞活力,用流式细胞仪检测神经细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测cdk5、p35、p53基因的表达.结果 1、5、10 μmol/L As2O3染毒组神经细胞活力抑制率分别为16.77％、19.72％、27.81％.与未处理对照组和溶剂对照组相比,5和10μmol/L As2O3染毒组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).各染毒组cdk5、p35、p53基因的表达量随着染毒剂量的增加而升高,各组间p35基因表达量的差异无统计学意义(P＞0.05);cdk5和p53基因表达量的组间差异有统计学意义(P＜0.05),5和10 μmol/L As2O3染毒组cdk5基因表达量明显高于未处理对照组和溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);1、5和10 μmol/L As2O3染毒组p53表达量明显高于未处理对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);其中10 μmol/L As2O3染毒组p53基因表达量明显高于DMSO溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 cdk5、p35和p53可能参与了As2O3诱导的神经细胞凋亡过程.     

亚砷酸钠对人永生化皮肤角质形成细胞组蛋白H3K9me2及组蛋白去甲基化酶JHDM2A和JHDM2B表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)组蛋白H3K9me2及组蛋白去甲基化酶JHDM2A、JHDM2B表达的影响。方法将对数生长期HaCaT细胞暴露于含终浓度分别为0.00 (对照)、2.50、5.00、10.00μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基染毒24 h。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中的JHDM2A、JHDM2B mRNA表达水平,采用免疫印迹法检测H3K9me2修饰水平和JHDM2A、JHDM2B蛋白表达水平。结果与对照组比较,5.00、10.00μmol/L亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞H3K9me2蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05),且亚砷酸钠剂量与H3K9me2蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.898)。各亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞中JHDM2A和JHDM2B mRNA和蛋白的表达水平与对照组比较无明显变化,差异均无统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可以诱导组蛋白H3K9me2表达降低,但不能改变组蛋白去甲基化酶JHDM2A和JHDM2A的表达水平,JHDM2A、JHDM2B可能不参与砷致HaCaT细胞组蛋白H3K9me2的去甲基化作用。     

石家庄地区PM2.5诱导A549细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨石家庄地区PM2.5染尘A549细胞对细胞凋亡的影响及其分子机制.方法 PM2.5作用于体外培养的A549细胞后,检测细胞存活率、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,细胞凋亡及凋亡相关基因的表达水平.结果 PM2.5暴露可显著降低A549细胞存活率和MMP水平,且两者间存在相关性(R2 =0.749,P=0.037).同时,PM2.5作用24 h可诱导A549细胞发生凋亡,并观察到凋亡相关基因p53、EZH2和Sox2ot的表达上调.结论 短期暴露于PM2.5后,lncRNA Sox2ot可能通过激活转录因子EZH2,与抑癌基因p53共同参与调控细胞线粒体功能,进而诱导细胞凋亡进程.     

激活蛋白-1与p53基因启动子结合的染色质免疫沉淀技术分析

目的 检测肺腺癌A549细胞内的转录因子激活蛋白-1(AP-1)与p53基因调控区的结合情况.方法 采用染色质免疫沉淀技术,用c-jun特异性抗体沉淀DNA,聚合酶链反应(PCR)技术检测p53基因5'端特异性序列.结果 在c-jun特异性抗体免疫沉淀的DNA片段中扩增出p53 5'端的特异性序列.结论 AP-1在A549细胞内结合于p53基因的调控区,参与该基因的表达调控.     

TP53INP1高表达在砷剂杀伤肺腺癌细胞中的增敏作用

目的构建TP53INP1高表达的肺腺癌A549细胞,初步研究提高TP53INP1的表达能否提高砷剂对肺腺癌细胞的杀伤作用。方法构建TP53INP1重组真核表达质粒,以慢病毒为载体将其转染到A549细胞,建立稳定高表达TP53INP1基因的A549-TP53INP1细胞株,以流式细胞术和MTT实验检测As_2O_3处理后A549-TP53INP1细胞的凋亡和存活率。结果成功构建稳定A549-TP53INP1细胞株。流式细胞术结果显示,相同剂量As2O3作用下(5~40μmol/L),A549-TP53INP1细胞凋亡率[(15.6±3.5)%]显著高于A549细胞[(10.0±2.5)%](P<0.05)。MTT实验显示,As_2O_3处理后A549-TP53INP1细胞的IC50值[(44.64±6.84)μmol/L]显著低于A549细胞[(54.25±6.13)μmol/L](P<0.05)。结论 TP53INP1高表达可增加砷剂对肺腺癌细胞的杀灭作用,提示TP53INP1可作为砷剂治疗肺癌的增敏靶点。     

饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞周期的影响

目的研究p53基因和chk1基因在饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞周期阻滞过程中的影响。方法以二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(Hep G2细胞)为对照组,分别以低、高浓度(50、400μmol/L)DCAN染毒Hep G2细胞24 h。采用碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p53基因和chk1基因mRNA表达的改变。结果与对照组比较,400μmol/L处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P0.05);400μmol/L DCAN作用于Hep G2细胞后下调了p53的表达,差异有统计学意义(P0.05),而对chk1的表达没有影响。结论高浓度的DCAN能明显延长HepG2细胞的G2期,并可抑制p53的mRNA表达水平,但对chk1的mRNA表达水平无影响。     

低氧条件下γ射线对Hep-2细胞p53表达的影响

目的 模拟在体肿瘤细胞微环境,体外建立不同氧供状态下的细胞模型,探讨乏氧再氧合条件下60 Coγ,射线照射对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响.方法 将体外培养的人喉鳞癌细胞分为3组:A组(常氧组)、B组(低氧组)、C组(低氧再氧合组).流式细胞仪检测HIF-1α、p53蛋白表达及细胞凋亡;细胞爬片免疫组化检测各组细胞HIF-1α、p53蛋白表达;RT-PCR检测各组细胞HIF-1amRNA.结果 低氧能明显增加Hep-2细胞HIF-1α蛋白及其mRNA表达,同时p53蛋白表达相应上调.再氧合之后HIF-1α蛋白及其mRNA表达均呈现下调趋势,p53蛋白表达下调.同低氧(B组)相比再氧合之后(C组)Hep-2细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论 低氧降低60Coγ射线照射对Hep-2细胞的诱凋亡作用,再氧合之后其诱凋亡作用明显提高.但在Hep-2细胞凋亡率明显升高的同时却并未出现p53蛋白表达的增强,提示低氧再氧合之后60Coγ射线诱导Hep-2细胞凋亡作用可能是通过p53以外的其它促凋亡途径实现的.     

过氧化氢溶液消毒效果的评价

本文报告国产1.5%过氧化氢作用5分钟,能灭活10⁶/毫升金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、浸泡2分钟,能消除皮肤上100万/毫升的大肠杆菌,擦拭15秒钟,消除皮肤上细菌总数98.31%,与75%酒精无差异。3%溶液作用10分钟,结核杆菌菌落由融合无法计数,降至2个,30分钟,能灭活H₃₇RV结核杆菌。在预防接种中,比较1.5%过氧化氢和75%酒精消毒皮肤(观察16,000左右人次),两组各项特征均衡可比,经随访观察,都未发现炎症或过敏反应。某院3年来,在病房门诊随访观察1.5%溶液消毒注射病员近百万人次,尚未发现各类反应。本制剂价廉,如能取代酒精,具有一定的经济效益和实用价值。     

UPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

目的:建立免疫亲和柱超高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2含量的方法。方法:试样经过甲醇-水提取、稀释后经过免疫亲和柱层析净化,应用超高液相色谱法检测。结果:试验结果表明:空白样品分别按照0.2μg/kg、0.8μg/kg、2.0μg/kg添加黄曲霉毒素混合标准,回收率为75.0%～90.4%,精密度<5%,黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2的检测灵敏度分别为0.2μg/kg,0.2μg/kg,0.4μg/kg,0.2μg/kg。结论:免疫亲和柱净化超高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2含量,是一种简单、快速和准确的方法。     

Relative concentrations of 25-hydroxyvitamin D2/D3 and 1,25-dihydroxyvitamin D2/D3 in maternal plasma at delivery

Quantitation of circulating 25-OH-D₂, 25-OH-D₃, 1,25-(OH)₂-D₂ and 1,25-(OH)₂-D₃ was performed on the plasma from 10 women collected at delivery following full term pregnancies. These data indicate that approximately 50% of the circulating 25-hydroxyvitamin D and 1,25-dihydroxyvitamin D in these women are in the vitamin D₂ form. Further, they demonstrate that vitamin D₂ contributes significantly to the total vitamin D status of these individuals and cannot be considered of trivial importance. It is apparent from this study that assay techniques which specifically quantitate vitamin D₂, as well as D₃ must be employed when measuring the total vitamin D status of individuals who are consuming significant quantities of dietary vitamin D₂.     

HPLC柱后衍生同时测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的探讨

目的:建立黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的高效液相色谱柱后衍生检测方法。方法:样品通过高效液相色谱柱分离后,进入柱后衍生装置与碘溶液发生反应,最后进入荧光检测器进行检测。结果:该方法的检出限AFB1、AFG2为0.03μg/kg、AFB2为0.01μg/kg、AFG1为0.05μg/kg。结论:方法灵敏度高,准确度好,操作简单,实用性强,可用于黄曲霉毒素的检测。     

Effects of prostaglandin E2 (PGE2) on the male reproductive system

A single dose of PGE₂ (100μg per animal) was injected unilaterally into the scrotal cavity or directly into the testis of adult rats. The animals were killed at either 4 hours or 24 hours after the injections. Both treatments resulted in damage to germ cells at certain stages of development. Residual bodies were found in the caput epididymis. No change in the testicular weight was recorded.     

MAMMALIAN PRODUCTION OF N2

Mammalian production of nitrogen gas has been postulated, but experimental results are open to alternative explanations.     

HNO3-H2O2氧化体系同时消解测定化妆品中的铅砷汞

［目的］探讨测定化妆品中Pb、As、Hg的样品同时消解法。［方法］采用RD-100型压力消解罐,以HNO3-H2O2为氧化体系,在130～140℃条件下进行消解。［结果］Pb、As、Hg测定的变异系数分别为3.72%、2.37%、4.63%,回收率为99.9%、96.4%、98.3%。［结论］本方法简单、快速、低消耗、污染少,是较理想的消解方法。     

微波消解—火焰原子吸收法测定聚氯化铝中氧化铝

目的:建立微波消解-火焰原子吸收法测定聚氯化铝中氧化铝的方法。方法:样品经HCl-H2O2微波消解后,添加水溶性有机化合物2-吡啶甲酸作增感剂,用空气-乙炔火焰原子吸收法测定聚氯化铝中氧化铝。结果:经微波消解后的样品溶液中添加2-吡啶甲酸可使铝的测定灵敏度提高10倍,铝的含量在0.02 g/L～1.50 g/L范围内呈线性关系,相关系数r=0.9992,检出限为0.02 g/L,样品加标回收率为95.6%～100.8%,RSD为2.0%(液体聚氯化铝)、2.9%(固体聚氯化铝)。结论:本方法精密度和准确度较好,使用化学试剂较少,污染较少,空白值低,定量测定准确,完全满足样品检测的要求。