DEHP对CHO细胞凋亡基因和癌基因表达水平的影响

目的探讨DEHP对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)的细胞毒性和凋亡基因癌基因表达水平的影响。方法不同剂量DEHP对CHO细胞进行染毒24 h和48 h,应用CCK8试剂盒测定DEHP对CHO细胞的半数抑制浓度IC50,荧光定量PCR检测凋亡基因(Bcl-2、caspase-8、caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)表达水平改变。结果DEHP染毒CHO细胞24 h的IC50为612μM,染毒48 h的IC50为336μM。DEHP较高剂量(150μM和300μM)染毒条件下,凋亡基因Bcl-2表达水平比对照组显著降低,300μM DEHP染毒时caspase-8和caspase-9表达水平比对照组显著增加;150μM和300μM DEHP染毒条件下c-fos表达水平增加;300μM DEHP染毒条件下k-ras基因表达水平升高;p53表达水平无明显变化。结论 DEHP可通过激活caspase通路引起CHO细胞凋亡,也引起癌基因表达水平升高。     

3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究

目的构建3β-HSD高表达细胞株,研究3β-HSD高表达对塑化剂DEHP致凋亡的影响。方法根据GenBank上3β-HSD基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒载体pLVX-CMV-ZSgreen-PGK-Puro,然后转染至MCF-7细胞中,对细胞株进行鉴定。用不同剂量DEHP对3β-HSD高表达细胞和MCF-7细胞染毒24h,在基因和蛋白表达水平上检测Bax、Caspase-3、Caspase-8的变化。结果基因测序验证本文构建的3β-HSD基因高表达载体基因序列与GenBank中的序列一致,荧光定量PCR结果显示3β-HSD基因表达水平升高105倍,western blot结果显示3β-HSD蛋白表达水平升高80%。DEHP染毒MCF-7细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高28%~54%、13%~49%、21%~70%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高28%~61%、40%~48%、31%~84%。DEHP染毒3β-HSD高表达细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高39%~75%、22%~30%、32%~45%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高8%~33%、19%~32%、10%~21%。结论本文成功构建3β-HSD基因高表达细胞株;DEHP可引起MCF-7细胞和3β-HSD高表达细胞凋亡基因及蛋白发生改变,本文结果提示3β-HSD基因在一定程度上促进DEHP的致凋亡作用。     

p38MAPK基因对PM2.5染毒HK-2细胞部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨p38MAPK基因对PM_2.5染毒人肾上皮细胞（HK-2）部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法：根据GenBank提供的p38MAPK mRNA序列,设计合成干扰序列,将重组慢病毒载体转染HK-2细胞,构建p38MAPK基因沉默细胞株。分别采用实时荧光定量PCR （qPCR）和Western blot法检测p38MAPK mRNA和蛋白的表达水平鉴定沉默效果。用50 μg/mL的PM_2.5混悬液分别染毒正常HK-2细胞和p38MAPK基因沉默细胞24 h,利用荧光定量PCR和Western blot检测癌基因c-myc,c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果：qPCR和Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞比较,p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK mRNA的表达下降了58.50%,p38MAPK蛋白表达水平下降了51.33%（P<0.01）。PM_2.5混悬液对HK-2细胞和p38MAPK基因沉默HK-2细胞染毒后,qPCR检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_2.5染毒组中c-myc、c-fos、Caspase-8和Casepase-9基因表达分别升高39.89%、15.12%、19.47%和15.45%,p53和Bcl-2基因表达分别下降21.54%和31.77%,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与正常HK-2细胞PM_2.5染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_2.5染毒组中c-myc、c-fos、p53、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达分别下降了84.55%、63.55%、34.49%、37.19%和54.97%,差异均具有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_2.5染毒组中的c-myc和Caspase-8蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;与正常HK-2细胞PM_2.5染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_2.5染毒组中的c-myc、Caspase-8和Bcl-2蛋白表达减少（均为P<0.05）。结论：成功构建了p38MAPK基因沉默细胞株,PM_2.5可引起HK-2细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平升高,p38MAPK基因可能参与PM_2.5对HK-2细胞的毒性作用过程。     

三氯乙烯染毒对豚鼠肝功能与凋亡基因表达的影响

目的探讨使用三氯乙烯(TCE)染毒对豚鼠肝功能和肝细胞凋亡基因(BAX、BAD、Bc1-2)表达的影响。方法将24只豚鼠随机分为3组,采用豚鼠最大值法(GPMT),设立TCE实验组、阴性对照组、阳性对照组,用皮内注射的方式分别注射TCE、橄榄油、2,4-二硝基氯苯(DNCB),实验结束后观察动物皮肤改变,应用自动生化分析仪检测动物肝功能指标,用荧光定量PCR检测肝细胞凋亡基因表达水平。结果 TCE实验组和阳性对照组动物出现明显皮肤损害。TCE实验组动物血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力明显高于阴性对照组(P0.05或P0.01)。肝细胞BAX、BAD的mRNA表达水平比阴性对照组显著升高,Bc1-2表达水平下降(P0.05或P0.01)。结论三氯乙烯可诱导豚鼠产生明显的皮肤变态反应,引起实验动物肝功能指标改变和肝细胞凋亡基因表达水平明显改变。     

CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响

目的 构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1 A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定.分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmoL/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA 序列一致.CYP1A2沉默细胞的CYP1A2mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9％和82.4％(P＜0.01).TCE染毒后,0.25 ～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P＜0.01);部分0.25 ～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用.     

职业性砷中毒

砷是一个古老的毒物 ,其应用在我国至今有两千多年的历史。砷危害无论是职业接触或环境污染 ,对人类都可造成严重的影响。现就职业性砷中毒问题综述如下。1　砷的理化性质和职业接触砷广泛存在于自然界 ,多以硫化物形式存于多种金属的矿石中 ,含量一般为 1 2 %～ 9 8%。重要的矿石有信石[(Ａｓ)Ｓ]、雄磺 (Ａｓ4 Ｓ4 )、雌磺 (Ａｓ2 Ｓ3)、黄铁矿 (ＦｅＡｓＳ)。砷元素有灰、黄和黑色三种不同异形体 ,相对原子质量 74 92 ,密度5 73ｋｇ/ｍ3(14℃ ) ,熔点 817℃ ,沸点6 15℃ ,可升华 ,不溶于水。砷在潮湿的空气中易被氧化生成三氧化二砷(Ａ…     

DNA氧化性损伤修复酶MTHl及0GGl和MUTYH及其交互作用

化学物质在机体内诱导产生活性氧自由基能攻击:DNA,主要生成8-羟基鸟嘌呤(7,8.dihydr0-8-oxoguanine,8-oxo-Gua),它可导致DNA链空间构象的改变,在DNA复制过程中引起G:C-T:A颠换,形成点突变,该点突变被认为与肿瘤的发生发展、机体细胞的老化和某些退行性疾病均有密切的关系[1].     

氯化镉对NRK肾细胞DNA损伤及细胞凋亡作用

目的 观察氯化锅对大鼠肾细胞(NRK)DNA损伤和细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度氯化镉(0,2.5,5,10,20 μmol/L)染毒NRK细胞12 h,应用Hoechst/PI双荧光活性染色检测镉致NRK细胞的凋亡率;单细胞凝胶电泳法检测镉对NRK细胞DNA的损伤.结果 Hoechst/PI双染检测2.5,5,10和20μmol/L镉染毒组的细胞凋亡率分别为5.9%,12.4%,24.6%和46.2%,与对照组比较明显升高.单细胞凝胶电泳检测5,10和20μmol/L染镉组的尾部DNA含量和尾长,比对照组明显增加,且各染镉组与尾部DNA含量和尾长存在剂量-效应关系.结论 氯化镉可诱发大鼠NRK细胞凋亡,DNA损伤是镉致NRK细胞凋亡的主要原因.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对大鼠卵巢病理和超微结构的影响

目的： 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对大鼠卵巢病理和超微结构的影响,评价DEHP对雌性大鼠的生殖毒性作用。方法：SPF级5周龄雌性SD大鼠40只,随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100 mg/kg)、DEHP中剂量组(500 mg/kg)和DEHP高剂量组(1 500 mg/kg),每组10只,每天灌胃1次,每周5次,连续染毒6周。染毒结束后称量大鼠体质量及卵巢质量,计算卵巢脏器系数;光镜下观察大鼠卵巢病理改变;电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构的变化。结果：各染毒组大鼠体质量与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),高剂量组卵巢质量和脏器系数较对照组明显增加(P<0.01);普通光学显微镜检查发现DEHP处理后卵巢组织卵泡结构受损,电镜观察发现DEHP处理后颗粒细胞线粒体肿胀、线粒体嵴减少、胞浆空泡化、核染色质完全凝聚、出现凋亡小体、细胞变性坏死。结论：DEHP对大鼠卵巢毒性明显,影响卵泡发育,引起颗粒细胞凋亡。     

毒物危害程度的综合分级方法探讨

毒物危害程度的综合分级方法探讨湖南省劳动卫生职业病防治研究所徐新云本文拟就评价毒物危害程度的指标及分级方法进行初步探讨。评价毒物危害程度的指标选择１９８５年我国颁布了中华人民共和国国家标准——《职业性接触毒物危害程度分级》ＧＢ５０４４—８５。该标准提...