Fas、Bcl-2与胎盘细胞凋亡的关系及在子痫前期发病中的作用

目的 探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨子痫前期的发病机制.方法 用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者20例,轻度子痫前期20例(试验组),同时选择同期正常晚孕妇女20例(对照组)做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测.结果 细胞凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达.Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组(P＜0.05);在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞(合体细胞滋养层及细胞滋养层)、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见.试验组细胞凋亡较对照组明显增多(P＜0.05).子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关(P＜0.01).结论 子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关.     

骨转移蛋白-7及其受体Ⅱ在重度子痫前期胎盘组织中的表达

目的检测早发型、晚发型重度子痫前期胎盘组织中骨转移蛋白-7(BMP-7)及其受体Ⅱ(BMPRⅡ)的表达情况,探讨其与重度子痫前期发病的关系。方法选取2014年9月-2016年1月在该院产科住院,临床确诊为早发型、晚发型重度子痫前期患者的胎盘组织作为研究对象,每组各30例;选取同期行择期剖宫产的正常相应孕周产妇的胎盘组织30例为对照组,分别采用qRt-PCR和Western Blot方法检测3组胎盘中BMP-7和BMPRⅡ中mRNA及蛋白的表达情况,免疫组化方法检测两者在胎盘中的表达定位。结果 BMP-7、BMPRⅡ的mRNA和蛋白表达水平在重度子痫前期胎盘组织中升高,且在晚发型重度子痫前期中升高更加明显,差异均有统计学意义(均P<0.05);BMP-7主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞层和绒毛外滋养细胞的细胞质,BMPRⅡ主要表达于胎盘绒毛滋养细胞和绒毛外滋养细胞的细胞膜。结论胎盘组织中BMP-7和BMPRⅡ的表达量增高有可能参与了重度子痫前期的发病过程。     

重度子痫前期胎盘细胞凋亡及其基因的表达

目的 探讨重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡情况及凋亡相关基因的表达.方法 选择重度子痫前期患者及正常以社会因素剖宫产者各12例,以TUNEL法检测胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率,免疫组化法检测Bcl-2、Bax和Fas的表达.结果 子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率明显高于对照组(F=22.65,P＜0.05);与正常对照组比较,Bax和Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达水平显著增加,差异有显著性(x2分别为4.1958、6.1714,均P＜0.05);Bcl-2在两组胎盘绒毛滋养细胞的表达无明显差异性.结论 子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率增加及促凋亡基因Bax和Fas的高表达导致胎盘缺血和缺氧,可能与重度子痫前期的病因及病理过程有关.     

子痫前期患者胎盘组织中Ang-2及HIF-1α表达及意义

目的:通过检测子痫前期患者及正常孕妇胎盘组织中Ang-2及HIF-1α的表达,探讨其与子痫前期发病的关系。方法:选择子痫前期患者52例,并随机选择正常晚期妊娠妇女20例为对照组。两组胎盘组织HE染色高倍镜下计数绒毛滋养细胞层增生细胞结节数和绒毛间质的血管数,采用免疫组织化学方法检测胎盘组织中Ang-2及HIF-1α的表达情况。结果:子痫前期患者胎盘绒毛滋养层细胞增生结节数与正常晚孕组比较数量明显增多,绒毛间质血管密度显著下降(P<0.05)。子痫前期组Ang-2在胎盘组织中的表达明显低于正常对照组(P<0.05),而HIF-1α的表达显著高于对照组(P<0.01)。HIF-1α的表达水平与滋养层细胞增生结节数呈正相关(rs=0.794,P<0.05),Ang-2表达与绒毛间质血管密度呈负相关(rs=-0.38,P<0.05)。结论:胎盘滋养细胞浸润能力下降致绒毛血管密度减少可能是子痫前期发病的重要原因,Ang-2和HIF-1α的异常表达可能参与此发病机制。     

Fas表达异常与重度子痫前期的关系研究

目的:探讨重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞Fas(又称APO-1,CD95)的表达及意义。方法:采用免疫组化法观察24例Fas在重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的表达,并与24例正常晚期妊娠胎盘比较。结果:Fas主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞浆及胞膜内。与正常对照组比较,Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达水平显著增加(P<0.05),差异有显著性。Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达与新生儿出生体重和胎盘重量均有明显相关性。结论:Fas在重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞中表达失衡,通过免疫途径诱导滋养细胞发生级联凋亡反应及滋养细胞对螺旋小动脉的浸润过浅,影响“血管重铸”过程,导致胎盘缺血、缺氧,可能与重度子痫前期的病因及病理过程有关。     

STOX1在正常妊娠及重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义

目的探讨STOX1在正常妊娠及重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法采用蛋白质印迹法(Western blotting)、逆转录PCR(RT-PCR)及免疫组织化学染色法测定晚期正常妊娠(42例)、重度子痫前期(30例)胎盘组织中STOX1基因的表达。结果 STOX1基因在正常晚期妊娠及重度子痫前期胎盘组织中均有提示;STOX1基因多见于绒毛的细胞滋养细胞与合体滋养细胞;与正常晚孕比较,重度子痫前期胎盘组织中STOX1 mRNA及蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论重度子痫前期存在STOX1基因及其表达增强,其异常表达可能参与重度子痫前期的发生发展。     

子痫前期患者离体胎盘细胞的凋亡及其临床意义

目的:探讨子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡情况及其临床意义。方法:选择重度子痫前期、轻度子痫前期患者及正常以社会因素剖宫产孕妇各12例,分别取胎盘组织进行培养,以流式细胞仪测胎盘细胞的凋亡率并进行比较。结果:子痫前期患者胎盘细胞的凋亡率明显高于正常孕妇(P<0.05);重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率高于轻度者,差异有显著性(P<0.05)。结论:子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率增加,并与病情的严重程度呈正相关。凋亡率的增加与子痫前期的病因及病理过程密切相关。     

子痫前期患者胎盘组织Fas／FasL的表达异常及意义

目的 比较子痫前期患者与正常孕妇胎盘组织中Fas/FasL的表达.探讨Fas/FasL系统的表达与子痫前期的关系.方法 采用免疫组化法检测30例正常妊娠晚期及60例子痈前期患者(其中轻度30例,重度30例)胎盘组织中Fas和FasL表达强度.结果 Fas/FasL主要表达于胎盘绒毛滋养细胞的胞浆及胞膜内,与正常对照组比较,Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达水平显著增加(x2=23.25,P＜0.05),差异有显著性;而FasL在重度子痫前期组的表达强度明显降低(x2=6.67,P＜0.05),差异有显著性.结论 Fas和FasL的改变与子痫前期相关,Fas/FasL的异常表达导致妊娠免疫耐受机制破坏可能是子痫前期发病的重要机制之一.     

RANKL在子痫前期胎盘中的表达及意义

目的探讨胎盘中RANKL的表达及与子痫前期的关系。方法选择2008年11月~2009年7月在四川大学华西第二医院产科住院分娩的正常妊娠妇女30例和子痫前期妇女60例(轻度和重度各30例)。采用免疫组织化学法检测胎盘组织中RANKL蛋白的表达强度。结果 (1)3组研究对象绒毛细胞滋养细胞及合体滋养细胞胞浆内均有RANKL蛋白的阳性表达;(2)各组胎盘母面与子面RANKL蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);(3)重度子痫前期组胎盘RANKL蛋白表达水平高于轻度子痫前期组及正常妊娠组,差异有统计学意义(P﹤0.001);而轻度子痫前期组RANKL蛋白表达水平也高于正常妊娠组,差异有统计学意义(P﹤0.001)。(4)子痫前期患者胎盘RANKL的蛋白表达与分娩前收缩压、舒张压及24h尿蛋白呈正相关。结论 RANKL在胎盘组织中的异常表达与其病情的严重程度密切相关。     

子痫前期和子痫患者胎盘和血浆PDGF-A表达及意义

目的比较正常妊娠和子痫前期、子痫患者胎盘组织血小板源性生长因子(PDGF)-A mRNA、PDGF-AA的表达和血浆PDGF-AA蛋白水平,探讨PDGF-A与子痫前期发病的关系。方法对子痫前期和子痫患者43例、正常妊娠20例,分别用RT-PCR检测胎盘绒毛组织PDGF-A mRNA表达水平,用免疫组化SABC法结合计算机显微图像分析软件,检测胎盘绒毛组织PDGF-AA蛋白的表达水平,用ELISA检测血浆中PDGF-AA蛋白表达水平。结果子痫前期、子痫组及正常妊娠组胎盘组织的PDGF-A mRNA和PDGF-AA蛋白表达,病例组均高于正常组,且与病情轻重呈正相关;病例组血清PDGF-AA蛋白水平均高于正常组,也与病情轻重呈正相关。结论子痫前期和子痫患者胎盘组织及血浆高度表达的PDGF-A可促进动脉粥样硬化形成,可能在子痫前期患者的胎盘血管病变中起重要作用,并参与子痫前期的发生和发展。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中HGF、MMP-9的表达及意义

目的:通过分析子痫前期患者胎盘与正常晚孕妇女胎盘组织中肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在妊娠期高血压疾病(HDCP)发病中的作用。方法:选择晚孕期正常组孕妇35例、子痫前期组71例(包括轻度子痫前期组37例;重度子痫前期组34例)作为研究对象。两组均在临产前行剖宫产术,胎盘娩出后30 min内取胎盘母面中央绒毛组织块约1×1×1 cm,避开钙化区及坏死区,留取胎盘组织。生理盐水充分清洗,10%中性福尔马林溶液固定24 h以上,常规石蜡包埋4μm连续切片。免疫组织化学SP法检测胎盘组织中HGF、MMP-9的表达强度,根据细胞内染色强度和阳性细胞数分级。应用SPSS12.0统计软件进行数据处理。结果:①正常晚孕组胎盘组织中HGF、MMP-9表达均呈强阳性,阳性表达率分别为71.43%、80.00%;轻度子痫前期组胎盘组织中HGF、MMP-9表达均呈阳性,阳性表达率分别为64.86%、72.97%;重度子痫前期组胎盘组织中HGF、MMP-9阳性颗粒均明显减少,阳性表达率为35.29%、32.35%。②子痫前期组胎盘组织中HGF、MMP-9表达与正常晚孕组比较均有明显差异(P<0.05);重度子痫前期组胎盘组织HGF、MMP-9表达与对照组比较均有显著差异(P<0.01);轻度子痫前期组胎盘组织HGF、MMP-9表达与重度子痫前期组比较也有显著差异(P<0.05);轻度子痫前期组胎盘组织HGF、MMP-9表达与对照组比较无明显差异(P>0.05)。③重度子痫前期组HGF和MMP-9的表达水平存在正相关性(r=0.5663P<0.01)。结论:正常妊娠胎盘绒毛表达HGF及MMP-9子痫前期病情严重程度和此两种因子的表达密切相关,提示可能因HGF和(或)MMP-9表达减少、滋养细胞侵袭受限而引起胎盘生理性血管重铸障碍,导致胎盘缺血,引起一系列子痫前期临床症状发生。     

IL-24、pY397FAK在子痫前期胎盘中的表达

目的:检测IL-24、pY397FAK在子痫前期胎盘中的表达及人类重组蛋白IL-24(rhIL-24)对TEV-1细胞pY397FAK蛋白表达的影响,探讨它们在子痫前期发病中的关系。方法:免疫组化SP法检测子痫前期组及正常足月组孕妇胎盘中IL-24和pY397FAK的分布与表达;Western blot检测不同浓度rhIL-24作用后TEV-1细胞的pY397FAK蛋白表达。结果:与正常足月组相比,子痫前期组胎盘组织中IL-24表达强度显著升高(P<0.05),pY397FAK表达强度显著降低(P<0.05)。当rhIL-24≥50ng/ml后,TEV-1细胞中pY397FAK蛋白表达逐渐降低(P<0.05),并呈一定的浓度依赖性。结论:胎盘组织中IL-24的异常升高导致pY397FAK磷酸化蛋白的产生减少,滋养细胞侵蚀能力下降,从而参与了子痫前期的发生。     

重度子痫前期胎盘的免疫组化改变与围产儿预后的关系

目的:研究重度子痫前期胎盘的免疫组织化学改变,探讨白细胞抗原CD146、CD31在胎盘组织中的表达及其与围产儿预后的关系。方法:20例重度子痫前期患者为研究组,孕周接近的无合并症的流产、早产的胎盘、孕早期流产的绒毛共20例为对照组。应用间接免疫组化法结合计算机辅助图像分析技术,分析胎盘组织白细胞抗原CD146、CD31的表达及对围产儿预后的影响。结果:对照组20例胎盘组织中间滋养层都有CD146的表达,但是没有CD31的表达。研究组20例标本中2例展示微弱的CD146着色,18例中间滋养层CD146染色为阴性,CD31在研究组标本的中间滋养层细胞上也没有表达,染色阴性,差异具有显著性。研究组围产儿死亡、HIE、新生儿窒息、SGA发生率均明显增高,脐动脉血流异常、胎心监护异常和妊娠图异常发生率明显增高,差异具有极显著性。结论:与正常妊娠比较,重度子痫前期胎盘CD146的异常表达,可能反应体内CD146的功能,为重度子痫前期的病因学提供重要线索,认为异常滋养层浸润(滋养层浸润过少过浅)是子痫前期发病的潜在因素;同时造成围产儿预后不良。     

Effect of glutamine on cell adhesion molecule expression and leukocyte transmigration in endothelial cells stimulated by preeclamptic plasma

OBJECTIVE: This study analyzed plasma glutamine (GLN) concentrations in women with preeclampsia. Also, in an in vitro study we evaluated whether GLN concentration was related to surface molecule expressions on endothelial cells (ECs) and polymorphonuclear neutrophils (PMNs) and the transendothelial migration of PMNs through ECs stimulated by preeclamptic plasma. METHODS: Blood samples were collected from 20 women with preeclampsia and 15 normal pregnant women for plasma GLN analysis. In the in vitro study, human umbilical vein endothelial cells and PMNs were treated with different concentrations (0, 300, 500, and 1000 microM) of GLN for 24 h. After that, we stimulated human umbilical vein endothelial cells for 3 h with plasma from patients with preeclampsia, and PMNs were allowed to transmigrate through ECs for 2 h. EC surface expressions of cellular adhesion molecules (CAMs) and integrin (CD11b) interleukin-8 (IL-8) receptor expressions on PMNs were measured by flow cytometry. The transendothelial migration of PMNs through ECs was also analyzed. RESULTS: Women with preeclampsia exhibited significantly lower plasma GLN concentrations than did normal pregnant women. The in vitro study showed that, compared with normal plasma, CAM expressions on human umbilical vein endothelial cells and PMNs were increased when preeclamptic plasma was stimulated. Among the groups with preeclamptic plasma stimulation, intracellular CAM-1 expression on ECs and CD11b and IL-8 receptor expressions on PMNs were lower with 500 and 1000 microM than with 300 microM of GLN. IL-8 production from ECs and PMNs was also lower with 500 and 1000 microM than with 300 microM of GLN. PMN transmigration was significantly higher with 300 microM of GLN than with the other GLN concentrations. CONCLUSIONS: Plasma GLN is depleted in women with preeclampsia. The result of this in vitro study showed that ECs and PMNs were activated after preeclamptic plasma stimulation. A low GLN concentration resulted in greater CAM expression and greater transendothelial migration of neutrophils. GLN administration at levels similar to or higher than physiologic concentrations decreased IL-8 and CAM expressions, and PMN transmigration decreased after stimulation with preeclamptic plasma.     

子痫前期患者胎盘整合素α1与β1及肿瘤坏死因子α的表达及其临床意义

目的:探讨整合素α1、β1与肿瘤坏死因子α在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测50例子痫前期患者(轻度20例,重度30例)胎盘组织中整合素α1、β1及肿瘤坏死因子α的表达;40例正常孕妇为对照组。结果:子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞整合素α1、β1的阳性表达率均明显低于对照组(整合素α1:58.00%和80.00%,P<0.05,整合素β1:56.00%和76.50%,P<0.05);肿瘤坏死因子α的阳性表达率明显高于对照组(肿瘤坏死因子α:80.00%和32.00%,P<0.05)。子痫前期组轻、重度患者整合素α1、β1及肿瘤坏死因子α表达的阳性率分别为整合素α1:75.00%和46.67%,整合素β1:75.00%和43.33%,并随病情程度加重而降低;肿瘤坏死因子α:65.00%和90.00%,并随病情程度加重而升高。整合素α1、β1的表达与胎盘重量及新生儿体重呈正相关。结论:胎盘表达整合素α1、β1与肿瘤坏死因子α异常引起滋养细胞浸润不足,可能是子痫前期的发病因素之一。     

缺氧对滋养细胞E-钙黏蛋白表达的影响

目的:了解在缺氧条件下,单层贴壁培养的滋养细胞系TEV-1中,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达在mRNA水平和蛋白水平变化情况,探讨缺氧环境对滋养细胞迁移能力的影响,深入了解缺氧环境诱发子痫前期发病的潜在分子机制。方法:体外贴壁培养的滋养细胞系(TEV-1),分别直接接种于24孔板进行细胞爬片和培养瓶内,分为常氧组和缺氧组。常氧组加新鲜DMEM/F12培养基,缺氧组加含终浓度为300μmol/L二氯化钴的培养基,然后在正常条件下(37℃,5%CO2)培养。两组细胞培养48 h后,分别收集细胞,采用Trizol法抽提mRNA,并进行RT-PCR,检测E-钙黏蛋白的mRNA表达水平;细胞爬片采用免疫组织化学法进行染色,检测E-钙黏蛋白的蛋白表达水平。统计数据分析两组差异性。结果:二氯化钴化学缺氧条件下培养后,滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白表达水平均较常氧对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧环境可能导致滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白的表达水平升高,由此降低了滋养细胞的迁移能力。这可能是缺氧造成胎盘浅着床、继而发生子痫前期的重要分子机制。     

水通道蛋白9 mRNA在子痫前期患者胎盘中的表达及其意义

目的:检测水通道蛋白9(Aquaporin 9,AQP9)mRNA在子痫前期患者胎盘中的表达,以探讨AQP9在子痫前期发病机制中的意义。方法:用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常妊娠(10例)、子痫前期(22例)剖宫产后胎盘中AQP9基因在转录水平的表达。结果:子痫前期组胎盘中AQP9 mRNA表达量较正常妊娠组显著升高(P<0.01)。结论:AQP9在子痫前期的发病中起着重要作用,可能与AQP9表达增加有关。     

孕晚期母亲铁状态对胎盘ferroportin1表达的影响

目的研究孕晚期母亲不同铁营养状态下胎盘ferroportin1(FP1)的蛋白定位、蛋白表达及其mRNA的表达。方法临床选择不同铁营养状态的孕妇,收集分娩时的胎盘。采用免疫组织化学方法测定FP1蛋白的定位,Western Blot测定蛋白表达量的变化,采用实时定量RT-PCR测定mRNA表达。结果FP1蛋白主要表达在人足月胎盘的合体滋养细胞(STB)胞浆;母亲不同铁营养状态下胎盘FP1蛋白和mRNA的表达均无明显变化。结论孕晚期胎盘FP1蛋白和mRNA的表达不受孕妇铁状态的影响。     

胎盘中HB-EGF mRNA表达水平与子痫前期发病的关系

目的:探讨胎盘中肝素结合生长因子样生长因子(HB-EGF)在子痫前期发病中的作用机制。方法:用RT-PCR方法检测20例正常胎盘、35例子痫前期患者胎盘中HB-EGF mRNA的表达水平。结果:在子痫前期患者胎盘中,HB-EGF mRNA明显低于正常妊娠胎盘,两者有显著性差异(P<0.05)。结论:胎盘中HB-EGF表达减弱严重影响了细胞滋养细胞的浸润。妊娠高血压疾病时,HB-EGF表达减弱,滋养细胞浸润能力减弱,以至螺旋动脉缺乏妊娠期生理性变化,导致子痫前期。HB-EGF表达减弱是子痫前期发病的一个重要影响因素。