恙虫病东方体的分离及外膜蛋白基因序列分析

目的 对福建省平潭岛的恙虫病病人、宿主动物和媒介恙螨进行现场调查和恙虫病东方体分离，并对其56kD外膜蛋白基因序列进行测定和分析．为有针对性的防制提供依据。方法 将病人血、鼠脏器、地里纤恙螨标本分别腹腔接种小白鼠分离东方体，小鼠腹壁刮液经Gimesa染色镜检；PCR扩增分离株的东方体56kD外膜蛋白基因片段．并进行测序及多序列比较和进化树分析。结果 其中1份病人血标本、1份鼠脏器标本及1份恙螨标本腹腔接种的小白鼠，12d后出现耸毛、弓背、厌食、腹部增大等典型东方体感染症状，解剖后见肝脾肿大或腹水，显微镜下清淅可见细胞浆内短杆状或球杆状东方体，共分离出Pt1、Pt2、及Pt33株东方体。3株东方体用设计的引物分别扩增出约1350bp特异性56kD基因片段。序列测定结果表明，此3株东方体之间56kD基因片段同源性大于99％。它们与Ot标准株Karp、Kato、GiUiam及地方株Kawassaki、Kuroki的同源性分别为93．8％，66．2％，85．1％，69．6％，84．2％。结论 从恙虫病病人、宿主及媒介均分离到恙虫病东方体，证实了平潭岛恙虫病春季恙虫病的存在，并从分子水平上证实该分离株与Karp株同源性较高。     

套式PCR应用于恙虫病东方体媒介、鼠类血块及脾脏标本的实验检测研究

目的 :检测恙螨幼虫体内及鼠类标本中恙虫病东方体携带情况 ,预测流行趋势 ,评价套式PCR反应的敏感性和特异性 ,以进一步开展分子流行病学研究。方法 :参照文献中恙虫病东方体Karp株Sta 58群特异性抗原基因序列 ,合成两对DNA引物 ;应用套式PCR检测现场鼠体表恙螨幼虫体内及鼠类标本的恙虫病东方体DNA ;PCR扩增产物通过 2 %琼脂糖凝胶电泳分析和12 %PAGE电泳分析 ,并用PGEM - 3Zf( ) /HaeⅢDNA作为核酸分子量参照物 ,证实扩增产物是恙虫病东方体Sta 58kDa群特异性抗原基因 88bp片段。结果 :从送检的 2 9份鼠血块和 112份脾组织中均检出阳性 1份 ;从 39份恙螨幼虫体内检出阳性 8份。实验感染小鼠后 3d ,其血块及脾组织均未检出恙虫病东方体 ;而在感染后 6和 9d ,能从血块及脾组织中检出恙虫病东方体。结论 :套式PCR具有很高的敏感性和特异性 ,是疫源地及现场流行病学调查的有效手段     

秋冬型恙虫病病人、恙螨、鼠东方体基因型研究

目的 了解秋冬型恙虫病流行季节黑线姬鼠、小盾纤恙螨、病人体内恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi，Ot)基因型的一致性。方法采用Nested PCR结合限制性内切酶片段长度多态分析(RFLP)技术对山东地区恙虫病流行季节病人、野外优势鼠种黑线姬鼠、鼠体外优势螨种小盾纤恙螨标本中Ot-Sta56基因型进行分析。结果 应用PCR／RFLP分析了12株分离自山东秋冬型恙虫病流行季节病人、黑线姬鼠、小盾纤恙螨体内的ot，2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及10份恙虫病人全血中的Ot-sta56目的基因，24份标本酶切图谱经与已知序列的ot内切酶图谱相比，与日本地方株-Kawasaki株具有相似的酶切图谱，但缺乏HhaⅠ的酶切位点；24份标本提取的Ot-DNA扩增产物分别经型引物扩增，均出现相应分子量的扩增片段，皆属日本地方株Kawasaki型。结论 秋冬型恙虫病流行季节病人、野外优势鼠种黑线姬鼠、鼠体外优势螨种小盾纤恙螨体内所分离的恙虫病东方体Sta56基因型是一致的，并在病人、黑线姬鼠、小盾纤恙螨间构成相互传播关系，这对当地恙虫病疫源地的维持有重要作用。     

珲春市恙虫病自然疫源地的流行病学调查

在恙虫病自然疫源地调查中,从捕获的黑线姬鼠、大林姬鼠脏器及其体外寄生的恙螨分离到4株恙虫病立克次体;居民、野鼠的血清恙虫病立克次体抗体阳性率分别为15.2%和16.4%。证实了该地区存在恙虫病自然疫源地。     

粤北山区域恙虫病自然疫源地的研究

目的了解粤北山区域是否存在恙虫病自然疫源地。方法采用分子生物学诊断技术结合间接免疫荧光方法调查粤北山区发热人群、宿主动物感染状况;采用荧光定量PCR技术对粤北山区域恙虫病病人的标本检测Ot-Sta56kDa基因片段,对阳性标本进行基因分型和序列分析,并与巢式PCR检测结果相比较。结果在660份发热人群血清标本中有224份检测到恙虫病东方体,阳性率为33.94%;在55份鼠类脾脏组织标本中有10份黄毛鼠(R.lossea Swinboe)检测到恙虫病东方体,阳性率为18.18%,有2份褐家鼠(R.norvegicus Berkenhout)检测恙虫病东方体,阳性率为3.64%,各调查点之间无显著性差异(P>0.05)。经荧光定量PCR和巢式PCR鉴定为Gilliam型和Kawasaki型,间接免疫荧光法也诊断为恙虫病东方体Gilliam型。从病人、动物宿主、地里纤恙螨选取4株粤北代表株,其同源性为100%,与Kawasaki型的同源性为96.25%;另有3份阳性黄毛鼠标本的核苷酸序列与TA686型的同源性为78.5%。结论从宿主动物、媒介、分子水平上证实粤北山区域存在恙虫病自然疫源地。     

秋冬型恙虫病自然疫源地的调查研究

１９８６年前，我国恙虫病仅知流行于浙江以南地区，主要属夏季型，以地里纤恙螨为主要媒介。我所于１９８６年１０月在南京发现有恙虫病的存在，１９８６～ｌ９９２年通过调查研究证明：南京和苏北的东台、海安、如东等７县市有恙虫病的流行；属秋冬型；以黑线姬鼠、社鼠、褐家鼠和大麝为主要储存宿主；以小盾纤恙螨为传播媒介；秋冬型恙虫病立克次体属弱毒株较难分离，接种标本的小白鼠经用环磷酰胺等处理后，已从鼠、恙螨和病人分离到１４株：血清分型属Ｇｉｌｌｉａｍ型；疫源地类型可分为平原型和丘陵型两型。     

小盾纤恙螨自然双重感染汉坦病毒和恙虫病东方体及叮刺传播的研究

目的 了解汉坦病毒(HV)和恙虫病东方体(OT)可否在小盾纤恙螨体内双重自然感染及通过叮刺传播的状况.方法 在肾综合征出血热(HFRS)和恙虫病混合流行区,将采集的3459只鼠体恙螨和用小黑板诱集的3265只游离恙螨,按1、5、10只螨数分组,每组叮刺6只小白鼠.15 d后取小白鼠肺和脾脏制成悬液,经脑内途径接种小白鼠传6代,每代均采用间接免疫荧光法(IFAT)和Giemsa法检测HV和OT病原体;取不同恙螨数的螨制成无菌悬液接种Vero-E6细胞传代,分离检测HV和OT病原体.采用PCR法检测HV-RNA和OT-DNA.结果 经传代后HV和OT双重感染鼠的检测情况为,HV单纯阳性鼠体螨5、10只组在第6代各检测到1只,OT单纯阳性鼠体螨10只组在第6代检测到1只,HV、OT双重阳性鼠体螨1只组在第5、6代均检测到1只,HV、OT双重阳性鼠体螨5、10只组在第6代各检测到1只.1、5、10只游离螨组叮刺小白鼠后,在第6代各检测到1只.Veto-E6细胞在第4代时,HV、OT双重阳性的鼠体螨5、10只螨组.各有1份检测到HV和OT双重阳性的感染细胞.传至第6代时,HV、OT双重阳性的鼠体螨1只螨组和游离螨1、5、10只螨组均检测到HV和OT双重阳性的感染细胞.经PCR检测到HV-RNA、OT-DNA.结论 小盾纤恙螨体内可自然双重感染HV和OT病原体,并可经叮刺传播.     

河北省恙虫病的病原学研究

目的：通过病人、宿主和媒介标本的病原学分析,阐明河北省恙病疫源地。方法：采集疫源地内病人血标本、鼠和恙螨标本,采用昆明种小白鼠传代分离法,脏器涂片Giemsa染色和脏器速冻切片用免疫荧光法镜检恙虫颊立克次体Rickettsia tsutsugamushi,Rt）,用PCR方法检测Rt核酸,用免疫荧光法检测性血清抗体和血清学分型。结果：捕捉鼠肝脾肿大率67．7％,血清抗体阳性率22．0％。96．9％的捕捉鼠肝脾酝酿、88．9％的病人血标本及小板纤恙螨标本引起实验鼠发病和死亡,实验鼠发病症状和体征符合恙虫病的感染,实验鼠脏器涂片和速冻切片均镜检到Rt,PCR方法检测到Rt核酸,病人血清分型为RtGilliam型。结论：从病原学进一步证实了河北省恙虫病病源地的存在。     

山东地区秋冬型恙虫病传播媒介的调查研究

目的：探讨山东地区恙虫病传播媒介。方法：1995年5月～2002年4月在山东恙虫病疫区捕鼠。观察鼠体外恙螨季节消长，分离恙虫病东方体(Ot)。结果：室内外共捕捉到的527只活鼠(黑线姬鼠335只，大仓鼠119只，黑线仓鼠6只，小麝鼩2只，褐家鼠63只，小家鼠2只)，从活鼠体外共检获15467只恙螨，其中太平洋无前恙螨最多5720只，其它螨数量依次为小盾纤恙螨4175只，临淮岗纤恙螨3090只，须纤恙螨1687只，泰山纤恙螨466只，脆弱无前恙螨329只。恙螨季节变化：小盾纤恙螨主要出现在9～12月，高峰在11月，是秋季鼠体外绝对优势种；须纤恙螨出现在10～翌年4月，高峰在12月，为冬季优势螨种，临淮岗纤恙螨5月出现，11月消失，高峰在8月，为夏季优势种；泰山纤恙螨主要出现在6～10月，数量较少，且起伏较大；太平洋无前恙螨、脆弱无前恙螨全部采自仓鼠，主要出现在4～12月，高峰期在7月。Ot分离：小盾纤恙螨共接种11批，分离到5株Ot；须纤恙螨、临淮岗纤恙螨和太平洋无前恙螨分别接种4批，分离到4株、2株和2株Ot。小盾纤恙螨是恙虫病发病季节疫区鼠体外优势螨种，季节消长与当地人群恙虫病季节分布基本一致；能自然感染、叮刺传播和经卵传递恙虫病东方体；被恙螨叮刺或悬液接种的小白鼠血清中能检测到特异性抗体，以上结果证明小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的传播媒介。血清学分型：除从临淮纤恙螨分离到的1株为Karp型外，其余分离株均为Gilliam型。从不同材料中分离到的Ot毒力相差不大，均属弱毒株，分离株与标准株间有交叉免疫保护能力。现场和实验室杀螨实验表明，小盾纤恙螨对敌敌畏和以二氯苯醚菊酯为主的杀虫剂均很敏感，且防治效果至少可维持1个月以上。结论：小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的主要传播媒介，同时其它螨种也有充当恙虫媒介的可能。     

深圳市南山区恙虫病宿主动物分布及感染状况

目的了解深圳市南山区恙虫病宿主动物分布及感染状况,及恙虫病传播媒介种类。方法采用笼补法捕鼠,计算鼠密度;采集鼠血,以荧光定量PCR法检测恙虫病东方体核酸;收集鼠耳恙螨,计算带螨指数。结果 2013—2015年,共布放鼠笼3 600笼次,捕获活鼠193只,鼠密度5.4%;其中褐家鼠150只(占77.7%),黄胸鼠39只(占20.2%),小家鼠4只(占2.1%)。带螨鼠9只,带螨率为4.7%,带螨指数为0.15;共检获恙螨29只,均为地里纤恙螨。收集鼠血标本130份,其中1份褐家鼠恙虫病东方体核酸阳性,阳性率0.77%。结论南山区鼠密度、带螨指数和鼠恙虫病感染率均较低,主要媒介为地里纤恙螨;应继续加强恙虫病的监测和防控工作。     

一起恙虫病暴发的调查分析

目的了解广州市白云区一起恙虫病暴发情况。方法采用《恙虫病个案调查表》对病例进行流行病学个案调查,并采用描述性流行病学方法进行分析。结果2006年6月25日至7月5日白云区某村共出现恙虫病病例12例,罹患率高达33.3%(12/36)。所有病例发病前均集体从事砍伐竹子的活动,病例临床表现除发热、焦痂、溃疡外,全部都有支气管炎或肺炎等并发症。本组病例初诊时大多误诊为支气管炎或肺炎。结论恙虫病暴发极为罕见,误诊率高,应进一步提高对该病的认识和诊治水平,加强宣传教育,积极开展灭鼠、灭螨活动,控制恙虫病的流行和发生。     

以肺炎为主要表现的恙虫病10例临床分析

目的探讨恙虫病立克次体肺炎的临床特征,诊断及治疗。方法对10例以肺炎为主要表现的恙虫病患者临床资料进行回顾性分析。结果10例恙虫病患者发病时间为：7月份2例,8月份6例,9月份2例;均有恙螨叮咬史;均有发热、胸闷、呼吸困难、咳嗽症状;分别于小腿、阴囊、肛门、腋窝、上臂、颈部发现焦痂或溃疡;行血液及部分骨髓培养均未检出细菌,使用多种抗菌药物治疗无效。均给予四环素及对症、支持治疗,其中2例因急性呼吸衰竭死亡,其他患者痊愈出院。结论恙虫病东方体作为立克次体肺炎的病因之一应得到重视,不明原因肺炎要考虑除外恙虫病。早期诊断和治疗是抢救成功的关键。     

175例恙虫病病例的临床和流行病学特征研究

目的了解安徽省恙虫病的流行状况和临床特征,为其防治提供科学依据。方法根据《恙虫病预防控制技术指南（试行）》病例定义,采用《恙虫病流行病学个案调查表》对175例恙虫病病例开展回顾性调查。结果 175例病例中,男女比1.08∶1,年龄最小2岁,最大82岁,平均（46.15±18.06）岁;病例以农民为主,129例（73.7%）;发病时间主要集中在10～11月;22例（12.6%）有外出史,117例（66.9%）有田间作业史。临床表现主要为发热175例（100.0%）、溃疡/焦痂115例（65.7%）、头痛148例（84.6%）、皮疹141例（80.6%）和淋巴结肿大56例（32.0%）等。结论安徽省恙虫病流行于秋收季节,以田间作业农民发病为主;多急性起病,有发热、特异性焦痂或溃疡、皮疹和淋巴结肿大等临床表现。     

沿海部队恙虫病防治工作的几点做法与体会

本文研究探讨了沿海部队做好恙虫病防治工作的几点做法与体会。总结出防治恙虫病应落实宣传教育线,加强行政管理,搞好环境防治几点体会。     

厦门市恙虫病例流行病学资料与临床表现

目的分析厦门市近年恙虫病患者流行病学资料和临床表现,提高确诊率。方法回顾性分析46例恙虫病住院患者的病历资料。结果患者多为成年人（91.3%）,多有野外活动史（84.8%）,发病季节2~11月。35例（76.1%）出现多脏器损伤,少数合并脑膜炎、胰腺炎及格-巴二氏综合征（GBS）等并发症;合并肾综合征出血热（HFRS）1例。OXk≥1∶160仅12例（27.9%）。入院当天确诊25例（54.3%）。结论恙虫病多发生于有野外活动史者;临床表现复杂,易误诊。详细询问流行病史、全面查体、完善检验是减少误诊关键。     

Orientia tsutsugamushi in eschars from scrub typhus patients

To verify the value of eschars for the diagnosis of scrub typhus and to characterize genotypes of Orientia tsutsugamushi in patients, we examined eschars and blood specimens of 7 patients from Shandong Province, People's Republic of China, for O. tsutsugamushi by polymerase chain reaction targeting the Sta56 gene. All 7 eschars and acute-phase blood samples were positive, while no specific DNA amplicons were obtained from the 7 convalescent-phase blood samples collected after antimicrobial drug therapy. The findings indicate that patients' eschars can be used for detection and genetic characterization of O. tsutsugamushi during the convalescent phase.     

Broad-coverage molecular epidemiology of Orientia tsutsugamushi in Thailand

Orientia tsutsugamushi, an obligate intracellular bacterium closely related to the genus Rickettsia, is the causative agent of scrub typhus, a major cause of febrile illness in rural areas of Asia–Pacific region. Scrub typhus is transmitted by the bite of infected mites of the genus Leptotrombidium. The region of the 56-kDa TSA gene spanning from variable domain I (VDI) to variable domain IV (VDIV) was sequenced and used for genotyping 77 O. tsutsugamushi samples from human patients confirmed with scrub typhus from 2001 to 2003 and 2009 to 2010 in different regions of Thailand. These sequences were also compared to previously published 56-kDa TSA sequences. Only 4 genotypes out of 8 previously reported in Thailand were identified, i.e. Karp, JG-v, TA763 and Kato, respectively. Two strains were not associated with known genotypes but were closely related to Taiwanese strains. The Karp genotype was confirmed as the predominant clade. The JG-v and TA763 genotypes, in contrast to other studies, also were found. The genotype TA716 was not found, except for one strain previously described.     

应用抗恙虫立克次体的单抗检测恙虫立克次体抗原

应用斑点ELISA技术,以辣根过氧化物酶标记的抗恙虫立克次体Karp毒株的单抗分别检测了恙虫病患者血清、恙虫立克次体保种传代的小鼠血清、恙虫病流行地区的野鼠血清以及恙螨中的恙虫立克次体抗原,结果表明本法是早期诊断恙虫病和进行该病流行病学调查的一种简便而有效的手段。     

62例小儿恙虫病临床特点及治疗分析

目的探讨小儿恙虫病临床特点,提高对小儿恙虫病的诊断及救治水平。方法回顾性分析了昆明市儿童医院2008年1月至2011年6月的62例恙虫病住院患儿的临床资料、治疗及转归情况。结果全部患儿均有发热、焦痂或溃疡,35例并发脑炎,29例出现肺炎,5例肺水肿的改变,41例血小板减少,31例白细胞总数升高,60例C反应蛋白升高。全部病例给予盐酸多西环素片及保护重要器官治疗,3例行机械辅助通气治疗,2例因多器官功能衰竭死亡,其余病例全部治愈。结论小儿恙虫病的临床表现形式多样,以发热、焦痂或溃疡为特征,早期发现、早期诊断、早期治疗,避免发展为严重恙虫病,引起严重并发症或者死亡。盐酸多西环素是治疗恙虫病的有效药物。