姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的作用的研究以及p53表达的影响

目的：主要探讨姜黄素对人类宫颈癌Hela细胞中增殖作用的影响,以及细胞p53蛋白表达的影响。方法：本文通过不同浓度姜黄素干预人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测药物对Hela细胞的增殖抑制率;RT—PCR和Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白p53表达。结果：MTT发现姜黄素对人宫颈癌Hela细胞有一定的抑制作用,并呈时间一剂量依赖性;RT—PCR结果显示p53mRNA的表达增加;westernboltting显示p53蛋白的表达增加。结论：姜黄素可一直Hela细胞增殖,其机制可能是通过增加p53基因的表达而实现。     

稳定表达GRIM-19的Hela细胞株的建立及其对STAT3的抑制作用

目的:建立Grim-19基因稳定表达的人子宫颈癌Hela细胞株,探讨Grim-19及其对下游基因STAT3表达的影响。方法:将构建好的质粒采用脂质体法转染人子宫颈癌Hela细胞株,经G418筛选,得到稳定表达Grim-19的Hela细胞株,并分别通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western-blot)检测Grim-19及其下游基因STAT3的表达。结果:成功建立了高表达GRIM-19的Hela/Grim-19细胞株,并在mRNA与蛋白水平上均发现Grim-19在转染细胞中的高表达和其下游基因STAT3表达的明显下调。结论:上调子宫颈癌Hela细胞Grim-19的表达对STAT3的表达有抑制作用。     

银杏叶提取物对支气管哮喘大鼠肺组织IL-5 mRNA表达的影响

目的:探讨中药银杏叶拮抗支气管哮喘气道变应性炎症作用的分子机制.方法:采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法半定量地分析了哮喘大鼠肺组织IL-5mRNA表达水平的变化.结果:与模型组比较,各用药组肺组织IL-5 mRNA的表达明显降低(P<0.01或P<0.05),以银杏叶高剂量组更为显著(P<0.01).结论:银杏叶能显著降低支气管哮喘大鼠肺组织IL-5 mRNA的表达,从转录水平降低相关细胞因子含量,有效地改善哮喘气道炎症.     

沉默Dyrk1B基因对宫颈癌细胞生物学功能的影响

目的通过沉默在宫颈癌C4-1和Hela细胞Dyrk1B基因,观察Dyrk1B基因对宫颈癌细胞生物学功能的影响。方法应用慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默Dyrk1B基因作为沉默组,同时以空载病毒转染组为对照组。通过荧光显微镜观察2组转染效率,采用RT-PCR法检测Dyrk1B mRNA表达水平,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力以及对DDP的敏感性。结果慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞转染效率无差异,沉默组Dyrk1B mRNA表达均低于空载对照组,宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默组细胞的凋亡率较空载对照组增加,而宫颈癌C4-1细胞沉默组增殖较空载对照组降低,宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默组较空载对照组比较IC50值均降低。结论慢病毒转染宫颈癌C4-1和Hela细胞沉默Dyrk1B基因表达可增加凋亡率,而细胞增殖能力下降,并且提高宫颈癌C4-1和Hela细胞对顺铂的敏感性。     

下调FoxM1 mRNA对子宫颈癌细胞的增殖及侵袭能力的影响

目的探讨宫颈癌细胞中叉头框转录因子(Fox M1) mRNA表达下调对其增殖、侵袭能力的影响。方法采用RNA干扰技术(si Fox M1)下调子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha中的Fox M1 mRNA表达为干扰处理组,未经si FoxM1处理的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha作为对照组,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Westren-blot)检测转染24 h后两组Fox M1 mRNA、蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝染色观察两组转然后的细胞增殖能力,采用Transwell方法检测转染48 h后细胞的侵袭能力。结果 si Fox M1转染处理24 h后,干扰处理组的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha中的Fox M1 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组(P<0. 05); si Fox M1转染处理48 h后,干扰处理组的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha增殖能力均低于对照组(P<0. 05); si Fox M1转染处理48 h后,干扰处理组的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha中的穿透Transwell小室的细胞数均低于对照组(P<0. 05)。结论宫颈癌细胞中Fox M1 mRNA表达下调可以抑制肿瘤细胞的增殖及侵袭能力。     

实时荧光定量PCR检测人宫颈癌细胞赖氨酰氧化酶样-4基因的表达

目的:利用实时荧光定量PCR检测赖氨酰氧化酶样-4(Lysyloxidase-like 4,LOXL4)基因在Hela、ME180、HCC94人宫颈癌细胞中的表达情况.方法:提取3株体外培养宫颈癌细胞株的总RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR扩增,结合内参基因GAPDH及标准曲线比较LOXL4 mRNA在Hela、ME180和HCC94 3株体外培养的人宫颈癌细胞中的表达.结果:LOXL4基因在3株人宫颈癌细胞中均有表达,但表达水平存在统计学差异,以Hela的表达为参照(Ratio=LOXL4/GAPDH=1.00),ME180的表达水平为6.80E-3,HCC94细胞株表达丰度最低为5.62E-4.结论:建立了LOXL4基因在宫颈癌细胞表达的检测平台,为宫颈癌早期诊断及预测预后提供可借鉴的观察指标.     

核因子-kB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨核因子kB(NF-KB),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用.方法 应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NF-kB、p53、Bel-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理.结果 PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性.差异有显著性(P<0.05).RT-PCR结果显示NF-kB p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性.Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低.结论 铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NF-kB及D53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关.     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

MTA1基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的 MTA1基因是近年来发现的与肿瘤转移浸润有关的基因,该文探讨该基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应方法检测53例新鲜宫颈标本组织中MTA1 mRNA的表达水平,进行定量分析并与临床病理资料比较.结果 正常宫颈MTA1 mRNA表达量为0.456±0.430、宫颈上皮内瘤变0.716±0.146,宫颈癌1.217±0.416.晚期及有淋巴结转移的宫颈癌MTA1 mRNA表达量增加,差异有显著意义(χ2=7.9562,P=0.0187;t =-2.89,P=0.0409),与肿瘤分化程度无关(χ2=1.0358,P=0.5958 ).结论 MTA1基因表达与宫颈癌临床分期及转移有关,可能预示宫颈癌的浸润转移的分子指标.     

多西紫杉醇诱导人宫颈癌细胞凋亡对其放射增强作用的影响

目的探讨放射联合多西紫杉醇化疗治疗宫颈癌的作用机制,为其在宫颈癌治疗方面的应用提供实验依据。方法采用MTT方法检测0．5μmol／L、1．0μmol／L多西紫杉醇分别预先孵育Hela细胞24h后联合0,2,4,6,8Gy放射对Hela细胞增殖活性的影响;TUNEL法检测单纯放射组、单纯多西紫杉醇化疗组与联合治疗组细胞的凋亡情况,采用Western blot法检测检测单纯放射组、单纯多西紫杉醇化疗组与联合治疗组细胞中caspase-3蛋白及其裂解片段的表达情况。结果放射联合多西紫杉醇化疗对Hela细胞的抑制作用显著强于单纯放射组（P〈0．05）,在2Gy的6MVX线照射作用下,对Hela细胞的抑制率随着多西紫杉醇浓度的增加而增加（P〈0．05）。与单纯化疗和单纯放射相组比,多西紫杉醇联合放射处理的Heia细胞48h后,细胞凋亡指数明显增多（P〈0．05）,同时caspase-3酶原被降解,产生有活性的小片段增多。结论多西紫杉醇通过激活easpase-3诱导Hela细胞凋亡是其放射增敏机制之一。     

阿魏蘑菇提取物对肿瘤细胞p53表达的影响

目的 探讨新疆阿魏蘑菇提取物对体外培养的肿瘤细胞p53蛋白表达的影响，从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及流式细胞技术，观察阿魏蘑菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的4种肿瘤细胞p53蛋白表达的影响。结果 MTT实验结果显示，受试物对4种类型肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以0．1g／m1剂量组为明显；HT实验结果表明，经受试物处理后，4种类型肿瘤细胞均观察到细胞核固缩，DNA浓缩并向核膜靠拢形成浓染致密颗粒，并有典型凋亡小体出现。提示，受试物可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用；流式细胞仪检测结果显示，受试物处理后，4种类型肿瘤细胞p53蛋白表达水平均有不同程度的上调，尤其以醇提物作用24h后对Q3细胞p53蛋白表达水平的影响最为明显。结论 阿魏蘑菇提取物中的各组分可协同作用诱导肿瘤细胞促凋亡基因的表达，从而达到抗肿瘤的目的，有关阿魏蘑菇通过何种途径提高p53蛋白表达水平尚待深入探讨。     

人胰岛素基因在糖尿病大鼠体内的表达

目的研究人胰岛素基因表达质粒在体外转染鼠成纤维细胞(NIH3T3)后对糖尿病大鼠血糖的影响。方法采用壳聚糖转染法将重组的人胰岛素基因表达质粒转染鼠成纤维细胞(NIH3T3),转染后72h,经G418抗性筛选出阳性克隆并培养到第24d,用免疫组织化学方法检测胰岛素的表达,同时用ELASA法监测转染后24d的细胞培养液的胰岛素水平。并将阳性克隆大量扩增,注射至糖尿病大鼠腹腔内,并与转染空载体的对照细胞比较,观察在糖尿病大鼠体内的胰岛素表达及对血糖等变化的影响。结果转染PCMV.INS的NIH3T3细胞培养液的胰岛素水平明显高于未转染组(P<0.01)及PCMV转染组(P<0.01),未转染组与PCMV转染组细胞培养液的胰岛素水平无明显变化(P>0.05)。接受胰岛素表达载体细胞的糖尿病大鼠,血糖明显下降,体重逐渐恢复。结论人胰岛素基因能成功转染非胰岛β细胞,并表达目的基因使血糖水平下降说明基因治疗有望成为1型糖尿病的重要治疗手段,壳聚糖是一种很有前途的胰岛素基因载体。     

氟致人胎肝细胞DNA损伤及其对细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

目的　研究氟对L 0 2细胞DNA的损伤作用及其对细胞凋亡和p5 3表达的影响 ,并探讨p5 3表达与细胞凋亡之间的关系。方法　体外培养的L 0 2细胞分别接触 0、4 0、80、1 6 0 μg ml氟化钠 (对照组、A、B、C组 ) 2 4h后 ,检测L 0 2细胞DNA损伤率、细胞凋亡百分率和p5 3蛋白表达水平。结果　染氟各组细胞DNA损伤率均明显高于对照组 (P <0 0 5 )。与对照组相比 ,B组和C组细胞凋亡百分率明显升高 (P <0 0 5 )。B组和C组细胞p5 3蛋白表达量均显著高于对照组 (P <0 0 1 )。结论　氟可导致L 0 2细胞DNA损伤率上升 ,诱导细胞凋亡和p5 3表达 ,并且随着氟浓度的升高 ,细胞凋亡率和p5 3蛋白的表达量均随之升高     

RNA干扰技术沉默Livin基因联合顺铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的:采用RNA干扰技术阻断Livin基因的表达,并加入不同浓度的顺铂,研究其抑制Hela细胞Livin基因的效果及增强顺铂诱导宫颈癌细胞凋亡的效应。方法:采用脂质体转染法将pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72、pGenesil-1-HK转染宫颈癌Hela细胞,采用荧光定量RT-PCR、Western-blot检测转染前后宫颈癌Hela细胞Livin基因mRNA和蛋白表达的变化,并加入不同浓度的顺铂(3μg/ml、6μg/ml、9.9μg/ml),采用流式细胞术检测不同时间(24 h、48 h)的细胞凋亡率。结果:转染pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72后Hela细胞中Livin mRNA拷贝数明显减少,蛋白质表达水平显著降低;流式细胞术检测24h、48h凋亡率,干扰组细胞显著高于对照组,并随时间延长凋亡率增加;加入顺铂(3μg/ml、6μg/ml、9.9μg/ml)后流式细胞术检测24 h、48 h凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05),呈时间及剂量依赖性。结论:以Livin基因为靶向的RNA干扰技术可有效地抑制宫颈癌Hela细胞的Livin基因表达,并可增强顺铂诱导凋亡的效应,且具有时间和剂量依赖性。     

P~(53)基因对染尘肺泡巨噬细胞作用下成纤维细胞增殖的影响

采用脂质体介导的基因转移技术,将外源野生型Ｐ５３基因转染染尘肺泡巨噬细胞（ＡＭ）作用下的体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞（２ＢＳ）,观察其细胞增殖活力及羟脯氨酸含量变化。结果显示：转染Ｐ５３基因后,２ＢＳ细胞的增殖能力明显低于未转染Ｐ５３的对照细（Ｐ＜００５）,羟脯氨酸含量变化不明显。因此提示：野生型Ｐ５３基因对染尘ＡＭ作用下的２ＢＳ细胞增殖有一定抑制作用。     

重组腺病毒介导人野生型p53基因转染神经母细胞瘤细胞系的实验研究

目的 观察人野生型p53基因(wt-p53)转染对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.结果 以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒(Ad-GFP)转染SH-SY5Y细胞,通过流式细胞仪(FCM)判断转染效率.确定合适的感染倍数(MOI).分别以空病毒质粒(Ad)及携带wt-p53的腺病毒质粒(Ad-p53)转染SH-SY5Y细胞,即对照组和p53组;并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(空白组).采用Western blot免疫印迹法检测p53蛋白的表达.观察转染前后细胞生长情况,绘制生长曲线,通过FCM分析细胞周期分布及细胞凋亡情况.结果 检测结果 表明腺病毒对SH-SY5Y细胞有较高的转染率,100MOI为合适的转染倍数.Ad-p53转染SH-SY5Y细胞后,wt-p53基因得到了高效表达.与空白组和对照组相比,p53组细胞生长曲线上升减缓,生长速度减慢,细胞凋亡增加,G1期细胞比例增加(P<0.01).结论 wt-p53基因转染可以有效抑制SH-SY5Y细胞的生长,这为p53基因修饰的肿瘤疫苗用于神经母细胞瘤的临床治疗提供了体外实验依据.     

人IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的影响

目的 研究含人IL-21基因的重组腺病毒(Ad-IL-21)联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。方法 重组腺病毒Ad-IL-21于体外转染子宫颈癌Hela细胞,转染后6 h进行6Gy ¹³⁷Cs γ射线照射,用MTT方法和流式细胞仪测定Hela细胞的生长曲线、抑制率及细胞周期。结果 Ad-IL-21基因组、照射组和基因联合照射组对Hela细胞生长均具有抑制作用,联合照射组的抑制效应最强(44%),明显高于Ad-IL-21组和照射组。联合照射组Hela细胞出现明显的G1期阻滞,G1期细胞所占比例最高,达到88.9%,S期细胞最少(1%)。结论 IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌的抑瘤作用具有协同效应,有效地抑制肿瘤细胞的生长。     

“10-23”脱氧核酶对突变型p53基因表达的抑制作用

目的探讨"10-23"脱氧核酶("10-23"DZ)抑制突变型p53基因表达的效应。方法设计合成针对mp53(R273H,CGT﹥CAT)的"10-23"DZ:p53DZ7、p53DZ9、p53DZ11及硫代修饰物p53DZ11-s。在无细胞体系观察"10-23"DZ对p53RNA的切割效应。经脂质体将DZ转染进HT29结肠癌细胞株,RT-PCR检测各种DZ对HT29细胞mp53mRNA的影响;免疫细胞化学及ImageProPlus4.5图像分析系统检测mp53蛋白,观察各种DZ及ASO对mp53蛋白表达的影响。结果p53DZ11和p53DZ11-s在无细胞体系能有效切割mp53RNA,而对wp53RNA的作用弱。在细胞内p53DZ11-s在浓度为250nM时,能下调HT29细胞mp53mRNA水平和mp53蛋白表达。结论针对mp53的273突变点所设计的p53DZ11、p53DZ11-s在细胞外均能有效切割mp53RNA,在HT29细胞内p53DZ11-s也能抑制mp53mR-NA及mp53蛋白的表达。