石蒜碱调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8（cell counting kit-8,CCK-8）法分析细胞增殖抑制率,Western blot法分析GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1［GTPase activating protein（SH3 domain)binding protein 1,G3BP1］、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平。敲低或过表达G3BP1,观察其对细胞增殖抑制率以及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2~64 μmol/L石蒜碱抑制ECA109细胞增殖,石蒜碱48 h IC50为（16.21±2.35）μmol/L。4、8、16 μmol/L的石蒜碱能下调G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的水平。敲低G3BP1的表达能明显提高石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,促进石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）;上调G3BP的表达能明显下调石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,抑制石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）。体内实验显示,与模型对照组比较,25、50、100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,对裸鼠体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控G3BP1/TGF-β/Smad 信号通路有关。     

锌转运体1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响

目的： 检测锌转运体1(zinc transporter 1,ZnT1)基因在胶质瘤组织中的表达,初步探索ZnT1对U87细胞增殖、迁移和 侵袭能力的影响。 方法： 收集2015年10月至2017年1月中国医科大学附属第一医院神经外科收治的术前未接受过放化疗的 Ⅱ～Ⅲ期胶质瘤患者20例,采用Real-time PCR和Western blotting检测胶质瘤组织与瘤旁组织中ZnT1 mRNA和蛋白的含量。向 胶质瘤细胞系U87中分别转染ZnT1和si-ZnT1质粒,构建ZnT1过表达和低表达细胞系,MTT和Transwell实验分别检测ZnT1对 U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响。 结果： ZnT1 mRNA和蛋白在胶质瘤组织中表达显著高于瘤旁组织（均P<0.05）。成功构建 ZnT1过表达和低表达U87细胞系。与空白和空质粒对照组相比,转染12 h后,ZnT1过表达U87细胞的增殖（0.54±0.01 vs 0.45± 0.04、0.43±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著升高;而转染12 h后ZnT1低表达U87细胞的增殖（0.37±0.03 vs 0.45±0.01、0.44±0.03,P<0.01）、侵袭和迁移能力（均P<0.05）显著降低。 结论： ZnT1在胶质瘤组织中呈高表达,ZnT1可以促进 胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭。     

过表达程序性细胞死亡基因5 提高脑神经胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性

[摘要] 目的：探讨抑癌基因程序性细胞死亡基因5（programmed cell death 5 gene, PDCD5）对脑神经胶质瘤细胞增殖及替莫唑胺（temozolomide，TMZ）化疗敏感性的影响。方法：收集吉林大学第一临床医院神经外科2009 年1 月至2014 年12 月间收治的脑神经胶质瘤患者116 例。分别利用qPCR、WB及免疫组化方法检测神经胶质瘤细胞系U87、U251、稳定克隆U87-PDCD5 细胞、转染si-PDCD5 后的脑胶质瘤细胞以及原发性神经胶质瘤组织中PDCD5 mRNA及蛋白质的表达情况。MTT法检测过表达或敲降PDCD5 对胶质瘤细胞生长及TMZ化疗敏感性的影响。建立脑胶质瘤细胞系U87 裸鼠皮下荷瘤模型，随机分为对照组、TMZ组、PDCD5 组和TMZ+外源性PDCD5 重组表达载体联合组，治疗20 d 后断颈处死动物，切取瘤组织，测量瘤体积并称瘤质量。采用qPCR、WB 法检测移植瘤组织中PDCD5 的表达水平，分析PDCD5 联合TMZ 治疗对脑神经胶质瘤生长的影响。结果：PDCD5 mRNA和蛋白在U87 细胞中的相对表达量明显低于在U251 细胞中的相对表达量（均P<0.05）；在高级别脑神经胶质瘤组织中，PDCD5 mRNA和蛋白的表达明显低于低级别组织（均P<0.05）；U87-PDCD5 和U251 细胞对TMZ的敏感性均高于U87 细胞（均P<0.05），U87-PDCD5-siRNA、U251-siRNA 组细胞对TMZ的敏感性均明显低于对照组（均P<0.05）。比较裸鼠移植瘤的瘤体积和质量，对照组>TMZ组>PDCD5 组>联合组（均P<0.05）；各组移植瘤组织内PDCD5 mRNA及蛋白的表达水平趋势与之相反（均P<0.05）。结论：PDCD5 过表达可增强脑神经胶质瘤细胞对TMZ的化疗敏感性，而沉默PDCD5 表达作用则相反，PDCD5 与TMZ联合应用可更好地抑制脑神经胶质瘤裸鼠移植瘤的生长。     

CTNND1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究CTNND1调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,为胰腺癌精准治疗提供新理论依据。方法:通过生信分析验证CTNND1在胰腺癌和正常组织中的表达,免疫组织化学(IHC)和qPCR进一步验证。Transwell、划痕实验和细胞增殖试验用于研究CTNND1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测CTNND1对人胰腺癌细胞成瘤能力的影响。结果:在胰腺癌细胞中敲低CTNND1可以抑制胰腺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路以及增殖、迁移和侵袭能力。加入LiCl(Wnt/β-catenin特异性激活剂)能部分恢复CTNND1敲低胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。裸鼠皮下成瘤显示,敲低CTNND1抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论:敲低CTNND1能从体内外通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌的增殖、迁移和侵袭及皮下成瘤能力。     

S100A6在胶质瘤组织中表达及对U87细胞增殖和侵袭力的影响

摘 要：［目的］ 探讨S100A6在胶质瘤组织中表达及对U87细胞增殖和侵袭力的影响。［方法］ 选取2017年3月至2019年3月在郑州大学第五附属医院择期行手术治疗的胶质瘤患者105例,利用实时荧光定量PCR技术检测胶质瘤和癌旁组织中S100A6基因表达,培养人胶质瘤U87细胞,根据转染物的不同将细胞分为siRNA-S100A6组、siRNA-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测细胞中S100A6基因和蛋白表达,MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。［结果］ 胶质瘤组织中S100A6 mRNA相对表达量为1.95±0.16,癌旁组织中S100A6 mRNA相对表达量为1.33±0.13,两组差异有统计学意义（t=30.776,P<0.001）。与WHO分级Ⅰ～Ⅱ级相比,Ⅲ～Ⅳ级中S100A6mRNA表达量显著性升高（P<0.001）。与空白对照组和siRNA-对照序列组相比,siRNA-S100A6组细胞中S100A6 mRNA和蛋白表达量均降低（P均<0.001）,24h、48h、72h和96h细胞增殖活性被抑制（P<0.05）,划痕愈合率降低（P<0.001）,且侵袭细胞数显著性减少（P<0.001）。［结论］ S100A6在胶质瘤组织中呈高表达,且与胶质瘤恶性程度有关,特异性沉默U87细胞中S100A6基因表达可有效抑制细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力。     

SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:在TCGA及PROGgene在线数据库中分析SGPL1在神经胶质瘤临床肿瘤组织及正常神经组织中的表达差异,并分析其表达与神经胶质瘤预后生存的关系;在神经胶质瘤细胞系U251和U87中分别敲降和过表达SGPL1,通过RT-qPCR和Western blot实验分别检测SGPL1的mRNA和蛋白表达水平;用CCK-8法、细胞克隆形成实验检测SGPL1敲降和过表达后细胞增殖变化;通过流式细胞术和caspase3/7酶活性试剂检测分析细胞凋亡变化,Western blot实验检测caspase3、PARP及CyclinD1等凋亡相关蛋白的表达;ELISA检测细胞内S1P含量;RT-qPCR检测S1PR5的表达水平;RNA-seq分析SGPL1在神经胶质瘤细胞中调控的信号通路;Western blot实验检测SGPL1敲降和过表达后Phospho-p38-MAPK、Phospho-ERK、Phospho-STAT3及Phospho-NF-κB(p65)的表达变化。结果:TCGA及PROGgene在线数据库分析表明SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与神经胶质瘤患者的预后生存成负相关。在U251中敲降SGPL1后细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加;在U87细胞中过表达SGPL1后能显著促进细胞的增殖能力。SGPL1表达对S1P信号通路无明显影响;RNA-seq结果表明SGPL1在神经胶质瘤细胞内调控细胞增殖死亡信号通路,SGPL1敲降和过表达可影响p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号的变化。结论:SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与生存预后负相关。在神经胶质瘤细胞内SGPL1可调控p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号通路,其表达可影响神经胶质瘤细胞的增殖和凋亡,可能是一个潜在的肿瘤标志物和治疗的分子靶点。     

敲减lncRNA RP1-261G23.7抑制胶质瘤细胞增殖和迁移及其机制探讨北大核心

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP1-261G23.7对人胶质瘤细胞增殖及迁移的影响及可能的调控机制。方法:采用GEPIA数据库分析RP1-261G23.7在胶质瘤组织中的相对表达。采用qRT-PCR检测RP1-261G23.7在4种胶质瘤细胞系(U87MG、SNB-19、U251、LN382)中的相对表达。采用Lipofectamine3000向胶质瘤细胞U87MG中单独转染si-RP1-261G23.7质粒(si-RP1-261G23.7组)和si-NC对照质粒(si-NC组)。采用CCK-8实验和细胞划痕实验检测转染后U87MG细胞的增殖及迁移能力。采用生物信息学、qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验研究RP1-261G23.7和miR-525-5p表达的关系。Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白的表达。结果:与正常组织相比,RP1-261G23.7在胶质瘤组织中表达上调(P<0.01)。与人脑星型胶质正常细胞系(HEB)相比,RP1-261G23.7在四种胶质瘤细胞系中表达均上调(P<0.01),U87MG细胞中RP1-261G23.7相对表达量最高(P<0.01)。与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7显著抑制了U87MG细胞的增殖(P<0.05)和划痕愈合(P<0.01)。RP1-261G23.7能够直接互补结合miR-525-5p(P<0.01)。与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7表达显著促进了U87MG细胞中miR-525-5p的表达(P<0.01),NF-κB信号通路蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论:胶质瘤组织和细胞系中RP1-261G23.7表达明显上调,敲减RP1-261G23.7通过促进miR-525-5p表达、干扰NF-κB信号通路活化,抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖和迁移,可能为胶质瘤的靶向治疗开辟新的路径。     

5-Aza-CdR对人脑胶质瘤细胞miR-129-2表达水平及其生物学行为的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人脑胶质瘤细胞U87和U373中miR-129-2表达水平及细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法:以0.5 mmol/L的5-Aza-CdR处理人脑胶质瘤细胞U87和U373 72 h,采用RT-PCR法检测miR-129-2的表达水平,CCK-8法观察胶质瘤细胞增殖能力,Transwell试验检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:经5-Aza-CdR处理后人脑胶质瘤细胞U87和U373的miR-129-2表达水平显著上调,细胞增殖能力、侵袭迁移能力受到抑制。结论:5-Aza-CdR能使miR-129-2启动子去甲基化,使其表达上调,并能抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移能力。     

TGF-β1 shRNA对涎腺人黏液表皮样癌裸鼠颌下腺移植瘤的抑瘤作用及Ki-67、VEGF蛋白表达的影响

 目的 研究TGF-β1 shRNA对人涎腺黏液表皮样癌（Ms）细胞裸鼠颌下腺原位移植瘤成瘤能力以及对Ki-67和VEGF蛋白表达的影响。 方法 将Ms细胞、稳定转染空载体的Ms细胞、稳定转染TGF-β1 shRNA的Ms细胞分别接种至裸鼠颌下腺,观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤率,测量肿瘤体积、瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;免疫荧光法和免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和VEGF蛋白的表达。 结果 与未转染组、转染空载体组相比,转染TGF-β1 shRNA组裸鼠颌下腺原位移植瘤生长缓慢,瘤体体积和瘤质量显著降低(P< 0.01),瘤细胞中Ki-67和VEGF蛋白表达明显降低。 结论 TGF-β1 shRNA能显著抑制Ms细胞在体内的生长能力,其机制可能与下调细胞内Ki-67和VEGF水平有关。     

银杏叶提取物通过调控NF-κB信号通路抑制神经胶质瘤U87细胞增殖和侵袭

[目的]评价银杏叶提取物(EGb761)对神经胶质瘤U87细胞的生长与侵袭的影响,并进一步分析EGb761对U87细胞作用的分子机制。[方法]体外培养人神经胶质瘤U87细胞,给予不同浓度(0、100、200、400mg/L)银杏叶提取物干预(24h、48h、72h)后,采用CCK-8技术检测EGb761对U87细胞增殖的影响。Transwell小室和流式细胞凋亡技术分析EGb761对U87细胞侵袭和凋亡的影响;Western blot检测EGb761处理后U87细胞内NF-κB与cyclin D1、 iNOS和COX-2蛋白的表达变化。[结果]银杏叶提取物可有效抑制神经胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡;Western blot提示EGb761干预的U87细胞内NF-κB与cyclin D1、 iNOS、COX-2蛋白的表达均明显下调。[结论] EGb761抑制神经胶质瘤U87细胞的生长增殖和侵袭能力,其可能是通过NF-κB信号通路而发挥抗肿瘤作用的。     

白花丹醌通过E-cadherin增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的 探讨白花丹醌增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制。方法 CCK-8法检测白花丹醌、替莫唑胺、白花丹醌+替莫唑胺组对U251细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测对照组（DMSO）、白花丹醌、替莫唑胺和白花丹醌+替莫唑胺组U251细胞48 h的迁移能力;Transwell实验检测白花丹醌增强替莫唑胺对U251细胞侵袭的影响;蛋白质印迹法检测白花丹醌、替莫唑胺和白花丹醌+替莫唑胺组细胞中E-cadherin的相对表达量。结果 CCK-8结果显示白花丹醌（1.25 μmol/L）联合替莫唑胺（200 μmol/L）处理48 h后,U251细胞增殖抑制率为75.69%,明显高于单独应用白花丹醌（P=0.012）或替莫唑胺组（P=0.034）。细胞划痕实验显示白花丹醌联合替莫唑胺可以明显增强替莫唑胺抑制胶质瘤细胞迁移的能力（P=0.023）。Transwell实验结果显示联合用药后U251细胞的侵袭能力明显降低（P<0.05）。联合用药组E-cadherin蛋白表达含量明显高于单独用药组（P<0.05）。结论 白花丹醌联合替莫唑胺可以抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭、增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感度,且是通过E-cadherin蛋白表达实现的。     

MYEOV对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨骨髓瘤过表达基因MYEOV在人胰腺癌细胞中的表达情况及其下调对胰腺癌SW1990细胞增殖和迁移能力的影响。方法 构建慢病毒载体GV248，转染胰腺癌细胞株SW1990获得SW1990-sh1和SW1990-sh2两个实验组，以空白质粒转染作为阴性对照组，未干预细胞为空白对照组。qPCR和Western blot检测转染前后MYEOV mRNA与蛋白的表达水平；CCK-8法测定细胞增殖能力；划痕实验分析细胞迁移能力。qPCR检测TGF-β/SMAD通路中相关SMADs mRNA表达水平。结果 与正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6相比，MYEOV mRNA在6株胰腺癌细胞中表达水平明显增加（P<0.01）；但仅在PANC-1和SW1990细胞系中检测到低水平MYEOV蛋白表达。实验组中MYEOV mRNA和蛋白表达均明显下调。与对照组相比，SW1990细胞的增殖和迁移能力明显下降（P<0.001）。下调MYEOV能降低TGF-β通路中SMAD1、SMAD4、SMAD5和SMAD9 mRNA表达（P<0.01），而SMAD2、SMAD3和SMAD7 mRNA仅在SW1990-sh2组中表达下调（P<0.01）。结论 MYEOV在胰腺癌细胞系中转录水平高，MYEOV可通过TGF-β/SMAD通路促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力。     

结直肠癌组织中NEK2的表达及其对HCT116细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨中心体相关激酶2（NEK2）在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞HCT116增殖、侵袭及迁移的影响。方法 构建针对NEK2的小干扰RNA（si-NEK2）,脂质体法转染HCT116细胞。CCK8实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室实验检测敲低NEK2表达后细胞增殖、周期分布、侵袭和迁移能力的改变。Western blot检测敲低NEK2表达后相关蛋白表达水平的改变。结果 NEK2在结直肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（65.0% vs. 35.0%, χ²=14.593, P<0.01）,其表达水平与结直肠癌TNM分期、淋巴结转移和远处转移显著相关（均P<0.05）;NEK2蛋白及mRNA在结直肠癌细胞中的表达水平显著高于正常结直肠黏膜细胞（P<0.01）。敲低NEK2表达后,HCT116细胞出现明显的G₀/G₁期阻滞,细胞的增殖、侵袭及迁移能力均显著降低（P<0.01）,E-cadherin表达含量升高,N-cadherin、CDK4和cyclin D1表达含量降低。结论 NEK2在结直肠癌组织中高表达并与临床病理特征相关,下调NEK2表达可有效抑制人结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。提示NEK2在结直肠癌的发生发展过程中发挥着重要的作用,可作为潜在的治疗靶点。     

腺病毒介导的Hes1基因抑制肝细胞癌细胞的增殖与迁移CSCD

目的探讨Hes1基因对肝细胞癌细胞系Hep1-6细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法通过重组腺病毒载体介导Hes1基因在Hep1-6细胞系中过表达,随后测定细胞克隆形成率、增殖速率及体外迁移与侵袭能力的改变。结果Hep1-6细胞分别感染Ad-Hes1和阴性对照Ad-GFP后,感染Ad-Hes1的细胞系克隆形成数显著少于对照组(P<0.001);感染病毒6天后,CCK-8检测感染Ad-Hes1的细胞系在OD450 nm的吸光度值显著低于对照组(P<0.01);感染Ad-Hes1的细胞系24 h和48 h的划痕愈合率显著低于对照组(P<0.001);感染Ad-Hes1的细胞系在Transwell小室培养48 h后迁移进入Transwell下室的细胞数量显著低于对照组(P<0.001);感染Ad-Hes1的细胞系在铺有Matrigel基质胶的Transwell小室培养48 h后侵袭进入Transwell下室的细胞数量显著低于对照组(P<0.01)。结论Hes1有抑制Hep1-6细胞增殖、迁移与侵袭的作用。     

ZEB1-AS1在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 探讨ZEB1-AS1在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 qRT-PCR法检测195对子宫内膜癌-癌旁正常组织标本中ZEB1-AS1及ZEB1的表达量；分析ZEB1-AS1及ZEB1的表达量与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系；MTT、Transwell迁移实验、侵袭实验分别检测过表达ZEB1-AS1稳转细胞系增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果 ZEB1-AS1与ZEB1在子宫内膜癌中均高表达，且两者成正相关（P<0.05），两者分别高表达均可缩短患者生存期（均P<0.05）；ZEB1-AS1表达与患者肿瘤家族史、病理分级、病理分型、化疗、肿瘤分期、T分期、M分期和HPV感染相关（均P<0.05），ZEB1表达与患者肿瘤家族史、病理分级、肿瘤分期、T分期、N分期和M分期相关（均P<0.05）；过表达ZEB1-AS1可促进子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）。结论 ZEB1-AS1及ZEB1在子宫内膜癌中高表达，可促进子宫内膜癌转移和侵袭并提示不良预后。     

血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其初步分子机制。方法 MTT法检测血根碱对肺腺癌细胞活性的影响；利用划痕和Transwell小室实验分析血根碱对细胞迁移、侵袭的影响；RT-qPCR和免疫印迹法检测不同浓度血根碱对Wnt/β-catenin通路相关基因和核心蛋白的影响。结果 与空白对照组比，血根碱（1~10 μmol/L）呈浓度-时间依赖性地抑制人肺腺癌细胞的活力（P<0.05）；低浓度1 μmol/L作用48 h后，A549和H1975细胞的迁移和侵袭能力明显减弱（P<0.01）；血根碱（1、2.5、5 μmol/L）可显著下调Wnt/β-catenin通路中核心分子β-catenin及上游磷酸化GSK3β、DVL2蛋白表达，进而抑制下游靶基因TCF/LEF，CyclinD1的mRNA水平（P<0.05），并呈一定的浓度依赖性。结论 血根碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路起到抑制人肺腺癌细胞迁移、侵袭的作用。     

小白菊内酯对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究小白菊内酯（parthenolide,PTL）对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法:应用0、2.5、5、10、20 μmol/L的PTL处理甲状腺癌TPC-1细胞24 h,CCK-8法检测不同浓度的PTL对TPC-1细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell实验观察PTL对TPC-1细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9、TGF-β、Smad3、p-Smad3蛋白表达水平的变化。结果:CCK-8实验结果表明,PTL可抑制TPC-1细胞的增殖,并呈一定的浓度依赖性;划痕实验和Transwell实验表明,PTL可减弱TPC-1细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting结果显示,PTL可上调E-cadherin的表达量,下调N-cadherin、Vimentin、MMP-9、TGF-β、p-Smad3的表达水平。结论:PTL以浓度依赖的方式抑制甲状腺癌TPC-1细胞增殖;PTL可能通过下调TGF-β的表达和抑制Smad3的磷酸化,逆转上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的发生,从而降低甲状腺癌TPC-1细胞的侵袭、迁移能力。     

miR-205-5p/E2F1信号抑制经典Wnt/β蛋白通路调控脑胶质瘤细胞放射敏感性

目的 探索miR-205-5p/E2F1信号轴在脑胶质瘤U251、U87细胞放射耐受中的调控机制。方法 利用X射线逐步递增递间歇诱导方法照射U251、U87细胞,建立放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞。对两种细胞进行形态学、细胞运动、侵袭及增殖能力分析。通过荧光素酶基因检测系统及点突变技术分析E2F1基因对U251/TR、U87/TR细胞的调控机制。结果 放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞分别比251、U87细胞的增殖活力增强,运动、侵袭能力增强,X射线照射下细胞凋亡下降。miR-205-5p mimics转染能够下调U251/TR细胞E2F1因子表达,抑制细胞增殖、侵袭及运动,增加放射敏感性。miR-205-5p mimics转染协同E2F1下调是通过抑制细胞Wnt/β-catenin信号通路活性发挥抑制肿瘤作用,并降低细胞耐受。结论 逐步递增递间歇诱导方法能较好地建立U251/TR、U87/TR细胞。miR-205-5p/E2F1信号轴通过经典Wnt/β-catenin信号通路发挥抑癌作用,可以作为提高胶质瘤放射敏感性的治疗靶点。     

Sema6D对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成能力的影响及机制

目的 探讨沉默信号素蛋白6D(Sema6D)对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及促进血管形成能力的影响.方法 检测人骨肉瘤组织及细胞系中Sema6D的表达情况,脂质体法转染靶向siRNA后通过CCK-8、细胞划痕、Transwell、人脐静脉内皮细胞与肿瘤条件培养基共培养实验探究骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和体外促血管形成能...     

FOXK1对肝癌高转移细胞系Huh7侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨叉头框转录因子1(FOXK1)对肝癌高转移细胞Huh7侵袭和迁移能力的影响。方法 采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测40例肝癌组织及其癌旁正常组织FOXK1 mRNA的表达,qRT-PCR和Western blot检测正常肝细胞HL7702、肝癌细胞BEL7402和肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白的表达。小RNA干扰技术下调FOXK1表达后,qRT-PCR和Western blot检测肝癌高转移细胞Huh7 FOXK1 mRNA和蛋白的表达,Transwell实验检测其侵袭和迁移能力。 结果 qRT-PCR检测结果显示,肝癌组织中FOXK1 mRNA的表达高于癌旁正常组织(2.87±0.21 vs 1.35±0.11,P=0.004);qRT-PCR和Western blot检测结果显示,相比正常肝细胞HL7702,肝癌细胞BEL7402和肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.001)。下调FOXK1表达后,肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01),侵袭和迁移细胞数目明显减少(P<0.01)。结论 下调FOXK1表达能抑制肝癌高转移细胞Huh7侵袭和迁移能力。